食品安全与检测课件 3胶体金检测技术
实验四胶体金试纸条检测技术PPT
➢胶体金的质量判定标准
√质量好的胶体金： 溶液呈红色 ，胶体金颗粒为球 形 ，大小均一 ，无棱角。
√质量差的胶体金： 溶液呈紫色 ，大小不一 ，形状
各异。
□胶体金标记的原理： 胶体金在碱性条件下带 负电荷 ， 与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
□胶体金标记技术（ Immunogold labeling technique） 是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
二 、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体 ， 利用了微孔膜 的毛细血管作用 ， 滴加在膜条一端的液体慢 慢向另一端渗移 ， 通过抗原抗体结合 ， 并利 用胶体金呈现颜色（红色） 反应 ， 检测抗原/ 抗体。
□结果易于判定： 阴 、 阳性呈色很明显 ， 肉眼 很容易判断。
□特异性好： 因为该技术大多用单克隆抗体标 记 ， 这决定了它具有很好的特异性。
胶体金快速诊断技术的应用
□病毒性疾病： 传染性法氏囊病 、禽流感、 新城疫 、犬细小病毒 、猪瘟等。
□寄生虫疾病： 血吸虫病 、旋毛虫病 、囊虫 病 、恙虫病。
□细菌性疾病： 霍乱弧菌 、类鼻疽。
H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5A IV细胞 毒阳性结果 阴性对照
谢谢!
➢最常用的是双抗夹心法检测抗原
测定
□测定时将试纸条下端浸入液体 标本中 ， 下端吸免疫金复合物复溶， 并带动其向膜条渗移。
测定
□若标本中有待测特异抗原 ， 即 可与免疫金复合物中的抗体结 合 ， 此抗原抗体复合物流至测 试区即被固相抗体捕获 ，在膜 上显出红色反应线条（T） 。
胶体金检测常用方法
胶体金检测常用方法
胶体金检测是一种常用的生物分析技术，它利用胶体金颗粒的特殊性质，通过与生物分子的特异性相互作用，实现对生物分子的检测和定量分析。
目前，胶体金检测已经广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
胶体金检测的常用方法主要包括免疫层析法、免疫荧光法、表面增强拉曼光谱法等。
其中，免疫层析法是最常用的一种方法，它利用胶体金颗粒与生物分子的特异性相互作用，实现对生物分子的检测和定量分析。
该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点，已经广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
免疫荧光法是另一种常用的胶体金检测方法，它利用胶体金颗粒与荧光染料的特殊性质，实现对生物分子的检测和定量分析。
该方法具有灵敏度高、特异性强、多重检测等优点，已经广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
表面增强拉曼光谱法是一种新兴的胶体金检测方法，它利用胶体金颗粒与分子的表面增强拉曼效应，实现对生物分子的检测和定量分析。
该方法具有灵敏度高、特异性强、非破坏性等优点，已经广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
胶体金检测是一种常用的生物分析技术，它具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点，已经广泛应用于生物医学、环境监测、食品
安全等领域。
在未来的研究中，我们相信胶体金检测将会得到更广泛的应用和发展。
食品安全快速检测PPT课件
• 检测原理： • 本速测盒根据国家标准GB／T5009.34—2003《食品中亚硫酸盐的测定方
法》研制而成，食品中的亚硫酸盐和二氧化硫可迅速与本试剂反应生成紫色 产物，颜色越深，表示样品中二氧化硫或亚硫酸盐的含量越高，与标准色阶 比较，可以得出样品中亚硫酸盐的半定量结果。
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仪器特点：
1、十通道光路系统，同时快速检测十个样品。
2、大屏幕彩色液晶中文显示，人性化操作界面，读数准确、 直观。
3、测样速度快，测试时间最快仅需1分钟（反映时间自由 设置）。
4、灵敏度高，对甲胺磷、敌敌畏等农药的最低检出限优于 国家标准要求。
5、采用USB接口设计，方便数据的存贮和移动，并可随时 与计算机直接相连，实现数据查询、浏览、分析、统计、 打印和发布信息。
NC-800型农药残留快速测定仪
• 工作原理：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸脂类农药能抑制乙酰胆碱脂酶的活性，其抑制率与农药的浓 度正相关，利用这一原理，加入反应试剂-酶后用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率， 判断出被测样品中含有有机磷和氨基甲酸脂类农药残留情况。
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• 该仪器用于检测农产品的农药残留，广泛应用于蔬菜、水果、粮食、茶叶、水及土壤中有机磷和氨基甲酸 脂类农药残留的快速检测。适用于农业生产基地、农贸市场、超市、卫生防疫、环境保护等领域。
试剂盒组成（每盒可进行的实验次数：20次）。 1.检测液A：10ml/瓶； 2.检测液B：40ml/瓶； 3.标准工作液：根据需要提供； 4.塑料刻度吸管：3支（3ml）； 5.具塞试管：6支(10ml)； 6.试管架：1个(自备)
保存期：于阴凉干燥处避光密闭贮藏。保存期1年。
胶体金的检测原理
胶体金的检测原理胶体金是一种具有广泛应用前景的纳米材料，其特殊的光学性质赋予了它在生物医学、环境监测、食品安全等领域的重要作用。
而了解和掌握胶体金的检测原理，对于有效利用胶体金进行分析检测具有重要意义。
一、表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance，SPR）表面等离子共振是胶体金检测的基础原理之一。
当可见光照射到胶体金颗粒表面时，胶体金表面的电子会发生共振激发，形成表面等离子共振。
这种共振现象所产生的吸收峰位可通过紫外-可见吸收光谱仪进行测定，从而判断胶体金溶液的浓度和性质。
二、局域化表面等离子共振（Localized Surface Plasmon Resonance，LSPR）局域化表面等离子共振是指胶体金颗粒的局部区域在受到光照射时发生共振激发。
与表面等离子共振不同的是，LSPR可以通过胶体金颗粒的形状、大小和分布来调控共振峰的位置和强度。
因此，LSPR被广泛应用于纳米传感器、生物分子检测等领域。
三、表面增强拉曼散射（Surface Enhanced Raman Scattering，SERS）表面增强拉曼散射是胶体金在分析检测中常使用的技术之一。
胶体金表面的纳米结构可以增强拉曼信号，使得检测物质的拉曼散射信号更强，从而提高检测的灵敏度和准确性。
通过将目标物质与胶体金结合，可以利用SERS技术进行分析检测，广泛应用于生物分子、化学品等的定量分析和定性鉴别。
四、表面增强荧光（Surface Enhanced Fluorescence，SEF）表面增强荧光是指将荧光标记的目标物与胶体金结合后，在胶体金表面产生增强的荧光信号。
胶体金通过电磁场增强荧光的强度，从而提高检测的灵敏度和检测限。
SEF技术在生物医学领域的细胞成像、荧光探针的制备等方面具有广泛应用前景。
总结：胶体金的检测原理主要包括表面等离子共振、局域化表面等离子共振、表面增强拉曼散射和表面增强荧光等技术。
这些原理的应用使得胶体金在分析检测领域具备了敏感、快速、准确的特点。
食品安全与快速检测PPT课件
食品安全问题现状
当前，全球食品安全形势不容乐 观，各种食品安全事件频发，如 疯牛病、禽流感、三聚氰胺事件
等。
我国食品安全问题也时有发生， 如地沟油、瘦肉精、假酒等事件， 给人民群众的生命财产安全带来
了严重威胁。
食品安全问题产生的原因比较复 杂，包括环境污染、农药残留、 添加剂滥用、监管不力等多个方
。
快速检测技术原理
光学检测技术原理
基于光谱、色谱等光学原理，通过测量食品对光 的吸收、反射、散射等特性，对食品成分和污染 物进行分析和检测。
生物检测技术原理
利用生物酶、抗体、微生物等生物活性物质对食 品中的有害物质进行特异性识别和反应，通过测 量反应产物或反应前后某些特性的变化，对食品 中的有害物质进行检测。
03
食品安全标准与法规
国际食品安全标准
01
02
03
04
世界卫生组织（WHO）：制 定食品安全准则和指南，推动
全球食品安全标准的统一。
国际食品法典委员会（CAC）： 制定国际食品标准、准则和建 议，保障消费者的健康和权益。
食品添加剂联合专家委员会 （JECFA）：评估食品添加剂 的安全性，制定限量标准。
未来快速检测技术发展方向
快速、便携化
未来快速检测技术将更加注重便携性和快速检测，满足现场快速 检测的需求。
智能化
结合人工智能和机器学习技术，实现快速检测的自动化和智能化。
多组分检测
发展多组分检测技术，实现对食品中多种有害物质的快速、准确 检测。
加强国际合作与交流，共同保障食品安全
建立国际食品安全合作机制
食品安全标准与法规的执行与监管
食品安全监管部门
负责监督食品生产经营活动，确保企业遵守 食品安全法规。
食品安全检测技术PPT培训课件
针对食品安全事件应急处置的需要而发展起来的 一类检测方法，具有快速、简便、准确等特点。 常见的快速检测法包括免疫分析法、生物芯片法 、便携式光谱仪等。
02
食品安全检测技术方法
化学检测技术
原子吸收光谱法
高效液相色谱法
利用原子对特定光波的吸收特性，测 定食品中重金属、农药残留等有害物 质的含量。
现代食品安全检测技术
随着科技的不断进步，现代食品安全检测技术不断发展，出现了许多新型检测手段，如色谱分析、光谱分析、质 谱分析、生物芯片、免疫分析等。这些技术具有高精度、高灵敏度、高通量等优点，大大提高了食品安全检测的 效率和准确性。
食品安全检测技术的分类与特点
化学分析法
通过化学手段对食品中的有害物质进行分析和检 测，具有操作简便、快速准确等优点。常见的化 学分析法包括滴定法、分光光度法、色谱法等。
加强国际合作与交流
统一食品安全检测标准，促进全球食品安全水平 的提高。
建立完善的食品安全检测体系
整合各类资源，构建从农田到餐桌的全程监控体 系。
ABCD
加大研发投入
政府和企业应增加对食品安全检测技术的研发投 入。
加强人才培养与培训
培养具备专业知识和技能的食品安全检测技术人 员。
THANKS
感谢观看
发展
食品安全检测技术面临的挑战
检测标准不统一
全球范围内，食品安全检测标准存在 差异，导致跨国食品贸易中存在诸多 不确定性。
快速发展的食品工业
新型品和加工技术的涌现，对现有 检测技术提出了更高的要求。
复杂样品和高灵敏度需求
样品成分复杂，需要高灵敏度的检测 技术来准确测定。
检测技术的局限性
如免疫分析法、生物检测法等传统方 法，在某些特定污染物检测上存在局 限性。
胶体金介绍ppt课件-PPT课件
3、PVC板 PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。 PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
评价一个试剂的标准
评价一个试剂好坏的标准有： 1、灵敏度 2、特异性 3、背景 4、吸样和上样 5、和对照试剂比较 6、市场反馈 7、检验机构的评价
结果判读
怀孕
与常规诊断方法相比
优点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。 简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 业人员，携带方便，可随时随地进行。 廉价：单个测试条成本极低 可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。 稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。 检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液， 因而适合各种检查 缺点 定量问题 灵敏度问题
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔
价格
最经济
3-5元
5-10元
>$5.0
（国外价格）
使用方法
1.试纸：将试纸条标： “MAX”一端浸入尿液，尿液液面请勿 超过标志线，待尿液爬至观察区后取出试纸条平放。3-5分钟 观察结果，10分钟后无效。 2.用吸管吸取尿液，加入4滴到检测卡的加样孔中，3-5分钟观察 结果，10分钟后无效。 3.将尿液滴加到试纸上或直接淋在检测笔的吸尿棒上，尿液爬上 后平放，10分钟观察。
《食品安全快速检测技术》教学课件—02快速检测技术分类
二、 酶抑制技术
酶抑制技术是利用有机磷和氨基甲酸酯 类农药抑制胆碱酯酶（ChE）的特异性生化 反一。
胆碱酯酶主要分为乙酰胆碱酯酶（ AChE）和丁酰胆碱酯酶（BChE），农药 对其抑制由于来源不同而有差异，对农残的 检测精度也因不同品种的农药产品而不同， 包括酶抑制率法、速测卡法和酶生物传感器 法。
• 注意事项
①本方法是生物化学反应，应尽可能避免一些物理和 化学因素对酶活性的影响。
②果蔬农药残留快速检测卡,是用对农药高度敏感的酶 和基质做成的卡片，可以快速检测蔬菜中有机磷和 氨基甲酸酯这两大类用量较大、毒性较高的农药的 残留情况，选用的酶对农药敏感，抗干扰性强，操 作简便，可以不需要配制试剂，不需要专业的技术 培训，任何仪器设备单独使用，也可配套农药残留 快速检测仪使用，提高检测效率。产品容易贮存， 携带方便，是做现场检测的最佳方法。
免疫学分析法常用于检测有害微生物、农药残留、兽药残 留及转基因食品。
✓ 优点是特异性和灵敏度都比较高，对于现场初筛有较好应用前 ✓ 不足是由于抗原抗体的反应专一性，针对每种待测物都要建立
专门的检测试剂和方法。
项目三 分子生物学检测技术
一、生物芯片
生物芯片包括蛋白质芯片（含免疫芯片 、受体配体芯片）、核酸芯片（含寡核苷酸 芯片、基因芯片）、有机分子芯片等。
基因芯片技术检测水和食品中常见致病菌具有 快速、准确、易于操作等优越性，值得推广应用。 采用基因芯片技术检测细菌及其毒素、真菌毒素、 病毒、支原体、依原体、立克次氏体等微生物战剂 。书中表1-6列举了部分DNA芯片在食品中应用。
3 液相悬浮芯片
Luminex悬浮芯片技术是美国Luminex公司开发的一种多 功 能 的 液 相 芯 片 分 析 平 台 ， 也 称 xMAP®(flexible MultipleAnalyte Profiling)、 MASA(Multi-Analyte Suspension Arrays ，多功能悬浮点阵) 或液体芯片(Liquid Chip)。它有机地整和 了有色微球(color-coded microspheres or beads)、激光技术 、最新的高速数字信号处理和计算机技术，集中了分子生物学 、免疫学、高分子化学、激光物理学、微流体学、计算机科学 等多门学科，使得Luminex悬浮芯片技术的检测特异性和灵敏 度得到了前所未有的发展。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用胶体金免疫层析技术是一种利用抗体对特定抗原的专一性识别来快速检测待检样品中是否含有目标成分的技术。
它的原理是利用胶体金颗粒的特性，在试剂纸上形成一条稀释液前进的前沿，当待检样品中含有目标成分时，会与胶体金颗粒上的抗体结合发生凝聚，导致胶体金颗粒的前进受阻，从而形成一条明显的测试线。
通过观察测试线的形成情况，就能够判断待检样品中是否含有目标成分。
这种技术具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性好等特点，因此在食品安全现场快速检测中得到了广泛应用。
胶体金免疫层析技术在食品中毒事件的现场快速检测中发挥了重要作用。
食品中毒事件往往发生突然，而且影响范围广泛，如果不能及时准确地检测出问题食品，后果将不堪设想。
胶体金免疫层析技术可以在现场迅速检测出食品中是否含有有毒物质，为食品安全问题的迅速处理提供了技术支持。
其敏感度高、操作简单的特点，使得它可以在最短的时间内完成检测，为食品安全事件的应急处理提供了重要的技术手段。
胶体金免疫层析技术在食品添加剂和农药残留快速检测中发挥了重要作用。
食品添加剂和农药残留一直是食品安全领域的一个难题，传统的检测方法往往需要耗时耗力，不能满足快速检测的需求。
而胶体金免疫层析技术可以在现场快速检测食品中是否含有添加剂和农药残留，为食品安全监管提供了一种快速、有效的手段。
通过这种技术，可以在生产现场、市场和餐饮场所等地方对食品进行快速检测，保障了广大消费者的食品安全。
胶体金免疫层析技术在食品质量追溯中也具有重要意义。
食品质量追溯是保障食品安全的一项重要工作，通过对食品的原料、生产过程、流通环节等进行追溯，可以找出食品质量问题的来源，防范和控制食品安全风险。
而胶体金免疫层析技术可以在食品的生产环节和流通环节进行快速检测，及时发现和排除问题食品，保障食品质量和食品安全。
这对于食品质量追溯和食品安全管理具有重大的意义。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用【摘要】这篇文章将讨论胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用。
首先介绍了胶体金免疫层析技术的原理，然后重点阐述了其在食品安全领域的优势，包括检测速度快、准确性高等。
接着详细探讨了胶体金免疫层析技术在食品添加剂、残留农药和毒素检测中的应用情况。
结论部分讨论了胶体金免疫层析技术在食品安全领域的前景，强调其将提高食品安全检测的效率和准确性，并呼吁未来进一步拓展这项技术在食品安全领域的应用。
通过本文的介绍和讨论，读者将更加了解胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的重要性和应用前景。
【关键词】胶体金免疫层析技术、食品安全、快速检测、食品添加剂、残留农药、毒素、效率、准确性、前景、拓展。
1. 引言1.1 胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用胶体金免疫层析技术是一种利用胶体金作为标记物，结合抗原与抗体特异性反应原理进行检测的快速、准确的方法。
在食品安全领域，胶体金免疫层析技术的应用可以帮助实现对食品中各种有害物质的快速检测，保障消费者的健康安全。
通过这项技术，可以在食品生产、加工、销售等各个环节进行实时监测，及时发现问题并采取措施，防止食品安全事故的发生。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用，不仅能够提高检测效率，缩短检测时间，还能降低检测成本，减轻工作人员的负担。
这项技术具有灵敏度高、特异性好、操作简便、结果可视化等优点，使其在食品安全现场快速检测中备受青睐。
未来随着技术的进一步发展和完善，胶体金免疫层析技术将在食品安全领域展现出更广泛的应用前景。
2. 正文2.1 胶体金免疫层析技术的原理胶体金免疫层析技术的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合原理。
胶体金是一种微小颗粒的纳米金，具有良好的生物相容性和生物学活性，抗体则是可以识别和结合特定抗原的蛋白质。
在该技术中，将富含抗体的胶体金颗粒与待检测样品中的抗原发生特异性结合反应，形成免疫复合物。
《食品安全检测技术》PPT课件
• 蔬菜，水果及烟草中的农药残留分析 • 畜禽，水产品中兽药残留及瘦肉精、三甲
胺含量分析 • 熏肉中的多环芳烃分析 • 食品包装袋中有害物质及含量的检测分析 • 饮用水中的农药残留及挥发性有机物污染
分析
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免疫分析技术
一、原理
基于抗原、抗体的特异性识别和结合反应的分析 方法，通过对抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、 放射性同位素标记等)，利用标记物的信号放大作 用,与现代测试技术相结合，对样品中特定的目标 物进行定性定量检测。
• 根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心E LISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及抗
体捕捉ELISA。
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间接法
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2.免疫传感器
• 原理：将高灵敏的传感器技术与特异性免疫反应
相结合的一种新型生物传感器。利用生物活性物 质（如酶、抗原、抗体、细胞、组织等）或分子 印迹聚合物作为传感器的识别元件，识别元件与 样品中的待测物质发生特异性反应,通过适当的换 能器将这些反应(形成复合物、发色、发光等)转 换成可以输出检测的信号(电压、频率等)。
二、特点
特异性强、灵敏度高、方便快捷、分析容量大、 检测成本低，可提供系列化的产品以及技术，产 品可以商业化。
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三、免疫分析检测技术分类
放射免疫分析
免
酶联免疫分析
疫
荧光免疫分析
传统免疫分析技术
分 析
免疫传感器
检
膜载体免疫分析
测
仿生免疫分析
技
术
流动注射免疫分析
免疫新技术
免疫-PCR技术
食品安全快速检测ppt课件
三、快速检测的时间概念
• 快速检测没有明确的时间限制，但基本上有一种共识，即： • 理化快速检验方法：包括样品制备在内，能够在两小时以内出具检
测结果，即可视为实验室快速检测方法。 如果方法能够应用于现 场，在30分钟内出具检测结果，即可视为现场快速检测方法。如果 能够在10几分钟甚至几分钟内得到检测结果，可视其为比较理想的 现场快速检测方法。
n 4.2 液体样品的检测：取1mL液体样品加入 到检测管中，操作方法与上相同，与标准色 板对比，该色板上的数值即为样品中亚硝酸 盐的mg/kg含量。液态奶属于乳浊液，具有 将近1倍的折色特性，所得结果乘以2即为样 品中亚硝酸盐的近似含量mg/L。
• 4.3 固体或半固体样品的检测： • 取均匀的样品（如香肠）1.0g 至10mL比色管中，加纯净水至10mL，
2016
食品安全快速检测
前言
• 民以食为天，食以安为先。食品安全关系着民生、关系到社会的稳定
与经济的发展，是任何时候都不能忽视的大事。
• 食品安全问题是一个全球性问题。当一个国家经济处于快速发展阶段
时，食品安全问题就彰显得尤为突出。以往食品污染，添加剂滥用， 不法分子唯利是图的掺杂造假以及极端分子的投毒作案等，致使局部 地区或全国范围内食品安全事件时有发生。
• 1 检测方法与表述形式 • 1.1 定性检测与表述：即快速地得出被检样品中是否含有有毒有害物质
，或其本身就是有毒有害物质。通常以阴性或阳性来表述。阴性表示 用本方法未检出要检测的物质。阳性表示检出了有毒有害物质。
• 1.2 限量检测与表述：即快速地得出被检样品中有毒有害物质是否超出
标准规定值或有效物质是否达到标准规定值。通常以合格或不合格来 表述。
• 注意事项： • 1 目前国内外所使用的农药残留测定方法（纸片法和分光光度法）的检
食品安全监测技术PPT学习教案
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气相色谱与质谱的联用-分析实例1
分析特征量 42中农药的线性范围:0.001～1.0μg/mL 样品的加标回收率：89%-94%, RSD < 10% 方法的最低检出限：0.001～0.005 mg/kg ( S/N = 3)
主要特点
灵敏度高，一般检出限可达ppb级 线性范围宽, 一般浓度范围跨越五个数量级 选择性高, 元素之间测定相互干扰少 操作快速, 并能进行多元素分析 有同位素信息 在一定质量数范围内, 仪器能提供稳定均匀的响应。
1906年Tswett 创立“chromatography”—“色谱法”新名词 ； 1907年在德国生物会议上第一次向世界公开展示显现彩色 环带的柱管； 1930年R.Kuhn用色谱柱分离出胡萝卜素。
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➢1935年Adams and Holmes 发明了苯酚-甲醛型离子交换树脂 ， 进一步发明了离子色谱 ➢1938年Izmailov 发明薄层色谱 ➢1941年Martin & Synge 发明了液-液分配色谱 ➢1944年Consden,Gordon & Martin 发明纸色谱 ➢1952年Martin & Synge 发明气-液色谱 ➢1953年Janak发明气-固色谱 ➢1954年Ray发明热导检测器 ➢1955年世界第一台商品化气相色谱仪 ➢1957年Martin & Golay 发明毛细管色谱 ➢1959年Porath & Flodin 发明凝胶色谱 ➢1960年液相色谱技术完善
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高效液相色谱与质谱联用-分析实例1
质谱条件
电离源模式: 电喷雾离子化 电离源极性: 正模式
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二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡 ，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1．在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡 和待检样本溶液恢复至室温。
2．从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地 使用。
3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂 直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
果风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位 置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电 风扇、空调的风直吹。
4.尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面 这主要是人手掌的 汗液中有钾、钠离子存在，影响NC膜上泳动时的毛细管作用。 5.尿样滴管不可混用，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体 都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组 成会产生干扰。 6.加样量为70-80μl左右（垂直加三滴）
2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围 在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子（AuCl2-)， 外层为H+，分散在溶液中。呈球形(小颗粒)或椭圆形 (大颗粒)。
胶体金
胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（goldsol），是金盐被 还原成原子金后形成的金颗粒悬液。
图1 金颗粒示意图
免疫胶体金快速检测技术
主要内容
一、免疫胶体金技术的发展历史 二、胶体金检测卡的基本原理及构造 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与注意事项 六、免疫胶体金技术的发展的方向
二、 胶体金的概念、原理及结构
1.胶体金概念及来源： 胶体金又称金溶胶，是由金 盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。
待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检尿样检测区不出现红色条带为阳性
阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。
四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围：
主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
层析方向
PVC底板
测试线 （T线）NC膜（硝酸纤维素膜）
➢胶体金免疫层析试纸条的构成
样品垫
金标垫
膜
吸收垫
衬板
胶体金免疫层析试纸条类型：
4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心)
4.1（以HCG检测为例）
4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）
（以吗啡检测为例）
4.3 免疫层析法检测的原理（应用proteinA金标）
试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动， 无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性， 从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。 因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。
3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如
如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常 粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴1~2滴。 7.以T线的条带为观测点,C线为质量控质线
由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测 时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就 可判定为阴性结果。
8. 如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测； 9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低
在溶液中金颗粒呈 圆形,表面带有负电 荷,由于静电的排斥 力,使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附 功能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白 质等（葡萄球菌A蛋条的构造
样品垫
胶体金垫 控制线（C线） 吸水滤纸
经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似 样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。
因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分瓶 封装样品，并于0 ~-4℃保存，尽快送到我中心进行确证检测。
五、常见问题及注意事项
1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温 2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用
4．结果应在5~10分钟读取，其他时间判读无效，根据示意 图判定结果。
A、阴性（-）：C、T线均出现。表示样品中不含有克伦 特罗或其深度低于检测限。
B、阳性（+）：检测T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓 度高于检测限。
C、无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已 失效，重新使用新卡。
（以HIV检测为例）
克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析
法的应用
采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶 颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦 特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑 制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA 偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相似）的结合，使检测线不 显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。
规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于 猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。
-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说 明检测卡有效。
如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带， 出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。