血红蛋白的提取和分离ppt课件
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血红蛋白的提取和分离PPT课件
血红蛋白的提取和分泳法
1、蛋白质特性的差异
(1)分子的形状和大小；
(2)所带电荷的性质和多少；
(3)溶解度；
(4)吸附性质；
(5)对其他分子的亲和力。
2、分离蛋白质的方法 (1)凝胶色谱法 ①概念：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大 小分离蛋白质的有效方法。 ②凝胶：微小的多孔球体，大多数是由多糖类化合物构 成，内含许多贯穿通道,如葡聚糖或琼脂糖。
③电泳常用方法 a.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子 在电场中的迁移速率因各种分子带电性质的差异、分子大 小和形状的不同而不同，从而得以分离。 b.聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入SDS作用：掩盖不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳 迁移率完全取决于分子的大小。（原理：SDS使蛋白质发 生完全变性，解聚成单条肽链，并与其结合形成蛋白质— SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质原有的 电荷量。测定的结果只是单条肽链的分子量）
以哺乳动物红细胞为材料，血红蛋白质的提取和分 离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
（一)样品处理及粗分离 1、红细胞的洗涤 (1)目的:去除杂蛋白； (2)过程：
(3)实验注意事项：为防止血液凝固，加入抗凝血剂柠檬 酸钠。生理盐水洗涤防止红细胞吸水涨破。低速短时 离心。如果离心速度过高和时间过高会使白细胞和淋巴细 胞一同沉淀，达不到分离的效果。④洗涤次数过少，无法 去除血浆蛋白,分层不明显⑤上清无黄色，表明细胞已洗净。
3、缓冲溶液 ①概念：在一定范围内，能够抵制外界的酸、碱对PH的 影响，维持pH基本不变的溶液。 ②缓冲溶液的配制 1～2种缓冲剂 调节使用比例控制pH范围
二、血红蛋白的提取和分离 血红蛋白由四条肽链组成，包括两条α-肽链和两条
1、蛋白质特性的差异
(1)分子的形状和大小；
(2)所带电荷的性质和多少；
(3)溶解度；
(4)吸附性质；
(5)对其他分子的亲和力。
2、分离蛋白质的方法 (1)凝胶色谱法 ①概念：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大 小分离蛋白质的有效方法。 ②凝胶：微小的多孔球体，大多数是由多糖类化合物构 成，内含许多贯穿通道,如葡聚糖或琼脂糖。
③电泳常用方法 a.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子 在电场中的迁移速率因各种分子带电性质的差异、分子大 小和形状的不同而不同，从而得以分离。 b.聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入SDS作用：掩盖不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳 迁移率完全取决于分子的大小。（原理：SDS使蛋白质发 生完全变性，解聚成单条肽链，并与其结合形成蛋白质— SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质原有的 电荷量。测定的结果只是单条肽链的分子量）
以哺乳动物红细胞为材料，血红蛋白质的提取和分 离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
（一)样品处理及粗分离 1、红细胞的洗涤 (1)目的:去除杂蛋白； (2)过程：
(3)实验注意事项：为防止血液凝固，加入抗凝血剂柠檬 酸钠。生理盐水洗涤防止红细胞吸水涨破。低速短时 离心。如果离心速度过高和时间过高会使白细胞和淋巴细 胞一同沉淀，达不到分离的效果。④洗涤次数过少，无法 去除血浆蛋白,分层不明显⑤上清无黄色，表明细胞已洗净。
3、缓冲溶液 ①概念：在一定范围内，能够抵制外界的酸、碱对PH的 影响，维持pH基本不变的溶液。 ②缓冲溶液的配制 1～2种缓冲剂 调节使用比例控制pH范围
二、血红蛋白的提取和分离 血红蛋白由四条肽链组成，包括两条α-肽链和两条
血红蛋白的提取和分离经典ppt课件.ppt
聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图
（A为正面，B为剖面） 1：样品胶pH6.7 2：浓缩胶pH6.7 3：分离胶pH8.9 4：电极缓冲液pH8.3
10
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
①琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需要事先 处理；电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。 ②测定蛋白质的相对分子质量常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳， 这是因为该方法分离蛋白质完全取决于分子的大小，而非所 带电荷的性质和分子的大小、形状。
实验操作
（一）蛋白质提取和分离步骤 红细胞的洗涤
样品处理 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液
粗分离：透析—去除样品中分子量较小的杂质
纯化：用凝胶色谱法除去相对分子质量较大的
杂质
纯度鉴定 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
（二）操作过程
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时
相对分子质量较小 容易进入
凝胶内部的通道
相对分子质量较大
无法进入凝胶 内部的通道
只能在凝胶外部移动
路程较长 移动速度较慢
路程较短 移动速度较快
相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程 篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统
电泳槽
迷你双垂直电泳槽
卧式电泳槽
等电聚焦多用电泳槽
9
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
（A为正面，B为剖面） 1：样品胶pH6.7 2：浓缩胶pH6.7 3：分离胶pH8.9 4：电极缓冲液pH8.3
10
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
①琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需要事先 处理；电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。 ②测定蛋白质的相对分子质量常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳， 这是因为该方法分离蛋白质完全取决于分子的大小，而非所 带电荷的性质和分子的大小、形状。
实验操作
（一）蛋白质提取和分离步骤 红细胞的洗涤
样品处理 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液
粗分离：透析—去除样品中分子量较小的杂质
纯化：用凝胶色谱法除去相对分子质量较大的
杂质
纯度鉴定 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
（二）操作过程
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时
相对分子质量较小 容易进入
凝胶内部的通道
相对分子质量较大
无法进入凝胶 内部的通道
只能在凝胶外部移动
路程较长 移动速度较慢
路程较短 移动速度较快
相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程 篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统
电泳槽
迷你双垂直电泳槽
卧式电泳槽
等电聚焦多用电泳槽
9
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
5.3 血红蛋白的提取和分离 课件 (36张PPT)
科学家发现，猿猴细胞中的TRIM5α具有抗HIV-1的作用，它是 一种具有3个结构域的胞浆体蛋白质。此后，世界各地的很多科学 家开始研究TRIM5α蛋白的结构，但到目前为止研究有些进展。
研究TRIM5α蛋白的第一步是什么？ 分离和提纯TRIM5α蛋白。
如何分离和提纯蛋白质？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性 质和多少、溶解度、吸附的性质、对其他分子的亲和力等等，可以 用来分离不同蛋白质。
由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如内环境中的缓冲液： H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等。 ④本实验使用的是磷酸缓冲液(NaH2PO4 /Na2HPO4 ),目的是利用 缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能， 便于观察（红色）和科学研究（活性）。
例：相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为
2.顶塞制作：打孔→安装玻璃管；
3.底塞制作：打孔→挖凹穴→安装移 液管头部→覆盖尼龙网，再用100目 尼龙纱包好；
4.组装：将上述三者按相应位置组装 ，并在下端出口连接带开关的尼龙管 ，尼龙管放入收集器。
1.材料：
缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可 交联葡聚糖凝胶G-75；20mmol/L磷酸缓冲液
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
由于琼脂糖本身不带电荷， 各种分子在电场中迁移速度 决定于所带电荷性质的差异 及分子的大小、形状的不同
在凝胶中加入SDS，使蛋白质解 聚成单链，与各种蛋白质形成 蛋白质－SDS复合物，使其迁移 速度完全取决于分子的大小
（二）方法及原理 3.凝胶色谱法和电泳法
凝胶色谱法
电泳法
（2）原理：
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；
研究TRIM5α蛋白的第一步是什么？ 分离和提纯TRIM5α蛋白。
如何分离和提纯蛋白质？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性 质和多少、溶解度、吸附的性质、对其他分子的亲和力等等，可以 用来分离不同蛋白质。
由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如内环境中的缓冲液： H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等。 ④本实验使用的是磷酸缓冲液(NaH2PO4 /Na2HPO4 ),目的是利用 缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能， 便于观察（红色）和科学研究（活性）。
例：相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为
2.顶塞制作：打孔→安装玻璃管；
3.底塞制作：打孔→挖凹穴→安装移 液管头部→覆盖尼龙网，再用100目 尼龙纱包好；
4.组装：将上述三者按相应位置组装 ，并在下端出口连接带开关的尼龙管 ，尼龙管放入收集器。
1.材料：
缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可 交联葡聚糖凝胶G-75；20mmol/L磷酸缓冲液
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
由于琼脂糖本身不带电荷， 各种分子在电场中迁移速度 决定于所带电荷性质的差异 及分子的大小、形状的不同
在凝胶中加入SDS，使蛋白质解 聚成单链，与各种蛋白质形成 蛋白质－SDS复合物，使其迁移 速度完全取决于分子的大小
（二）方法及原理 3.凝胶色谱法和电泳法
凝胶色谱法
电泳法
（2）原理：
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；
《血红蛋白的提取和分离》课件
粗分离
通过离心或过滤去除细胞碎片 和杂蛋白。
鉴定
通过电泳、质谱等技术鉴定纯 度。
PART 04
血红蛋白的应用
血红蛋白在医学上的应用
诊断疾病
血红蛋白可用于检测和诊断各种贫血、血红蛋白病以及与血液相 关的疾病。
输血治疗
血红蛋白可用于制备红细胞输血制剂，为贫血患者提供治疗。
药物研发
血红蛋白作为药物载体，可用于药物的定向输送和释放。
感谢观看
KEEP VIEW
REPORTING
食品工业
血红蛋白可作为天然色素和营养强化剂，用于 食品加工和生产。
农业领域
血红蛋白可作为植物生长调节剂，促进植物生长和提高抗逆性。
PART 05
总结与展望
血红蛋白提取和分离的研究成果总结
血红蛋白提取和分离技术不断完善
随着科技的发展，血红蛋白的提取和分离技术不断得到优化，提高了分离效率和纯度。
血红蛋白结构与功能关系研究取得进展
血红蛋白在生物工程中的应用
生物传感器
血红蛋白可用于生物传感器制造，检测环境中的有害 物质。
生物燃料
血红蛋白可应用于生物燃料的合成，提高燃料的能量 转化效率。
生物制药
血红蛋白可用于药物的分离和纯化，提高药物的纯度 和产量。
血红蛋白在其他领域的应用
水体和土壤。
血红蛋白的提取
血红蛋白提取的方法和原理
血红蛋白提取的方法
硫酸铵分级沉淀法、离子交换法、层 析法等。
血红蛋白提取的原理
基于不同条件下蛋白质的溶解度不同 ，通过改变溶液的pH值、离子强度等 条件，将血红蛋白从其他蛋白质中分 离出来。
血红蛋白提取的实验材料和试剂
实验材料
血红蛋白的提取与分离.38436.ppt
第十六页，共六十三页。
思考：在血红蛋白整个实验室中用(zhōngyòng)的缓冲液是 什么？它的目的是什么？ 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的 PH环境，保证血红蛋白的正常(zhèngcháng)结构和功能，便 于观察(红色)和科学研究(活性)
第十七页，共六十三页。
〔五〕电泳(diàn yǒnɡ)：
第十九页，共六十三页。
3、类型(lèixíng)
琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳
4、实例(shílì)
①应用 十二烷基磺酸钠〔SDS〕—聚丙稀酰胺凝胶电泳 测定蛋白质分子量
②聚丙稀酰胺凝胶 由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在引发
剂和催化剂的作用(zuòyòng)下聚合交联成三维网状结 构的凝胶
一、根底知识 (一〕蛋白质 1、含量
(hánliàng)
占细胞干重的50％以上(yǐshàng)，细胞中含量最多的有 机物
2、组成(zǔ 元素 chénɡ)
C、H、O、N 3、相对分子质量
高分子化合物
第二页，共六十三页。
4、根本组成(zǔ chénɡ)单位
氨基酸
5、氨基酸通式(tōngshì)
H
R C COOH
第二十四页，共六十三页。
讨论：如何(rúhé)测定蛋白质的分子量？
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(diàn yǒnɡ)测定蛋 白质的分子量时，可选用一组分子量的标准蛋白同 时进行电泳(diàn yǒnɡ)，根据分子量的标准蛋白的 电泳(diàn yǒnɡ)区带位置，用电泳(diàn yǒnɡ)迁移 率和分子量的对数作标准曲线，可以测定未知蛋白 质的分子量。市场上有高分子量、次高分子量及低 分子量的标准蛋白试剂出售.
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4、原理
9
基础知识
（一） 凝胶色谱法
原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相 对（分子质量较小 ）的蛋白质容易进入 凝胶内部的通道，路程（较长 ），移动速 度（较慢 ），而（ 相对分子质量较大） 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能 在（凝胶外部 ）移动，路程（ 较短 ）， 移动速度（ 较快 ），相对分子质量不同 的蛋白质因此得以分离。
14
（二）、缓冲溶液 缓冲溶液－－洗脱剂 组成：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。
如H2CO3/NaHCO3，醋酸/醋酸钠， NaH2PO4/Na2HPO4等 作用：抵制外界酸碱对溶液pH的干扰，保持 pH与体 内环境基本一致。
15
基础知识
（三）电泳
16
基础知识
（三）电泳
阅读第65页的相关内容，回答以下问题： 1、电泳的概念； 2、电泳的原理； 3、电泳的种类； 4、SDS的作用。
10
11
• 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量
大的蛋白质
D
• A．路程较长，移动速度较慢
B
．路程较长，移动速度较快
• C．路程较短，移动速度较慢
D
．路程较短，移动速度较快
12
• 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中 的进行过程可表示为图中哪一个
•B
13
（二）、缓冲溶液 1、 之前在什么地方遇见过缓冲物质？ 2、 缓冲物质有哪些？作用是什么？ 3、 本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？
生命活动的主要承担者
2
3
血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚 铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二 氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。
4
血红蛋白的提取和分离
本课题的主要内容如下：
样品处理 及粗分离
方法原理
纯化
方法原理
凝胶色谱法
纯度鉴定
方法原理
电泳
5
一、基础知识: 样品处理及粗分离的原理: 1 、分离生物大分子的基本思路是什么？ 2 、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？ 3 、为什么不用鸡的血红细胞而用猪的血红细胞作为 实验材料？ 4 、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质？
3. 该化合物是由 __2_条__α__-_肽__链___和__2_条__β__-_肽__链__
构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和
CO2结合的_亚__铁__血__红__素__基团。
返回
22
1.洗 涤 红 细 胞
阅读思考：洗涤的目的是什么？
洗涤过程： 3g柠檬酸钠
吸出血浆 5倍体积生理盐水
血液 100mL
17
(三)电泳 1.电泳的概念 指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程.
2．凝胶电泳法： （1）原理：
①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团， 在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。
②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电 极移动。
③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本 身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现 样品中各种分子的分离。
知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：
1、含量
占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物
2、组成元素
C、H、O、N
3、相对分子质量 高分子化合物
4、基本组成单位： 氨基酸
结构简式：
种类：
R
5、氨基酸连接方式
脱水缩合
H C NH2
COOH
1
知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：
6、肽键
6
一、基础知识--蛋白质提取和分离原理 1、选用一定的物理或者化学方法分离具有不同
物理或化学性质的生物大分子。
2、形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸 附性质、亲和力等千差万别。
提取 分离 方法
凝胶色谱法
7
基础知识
（一） 凝胶色谱法
阅读并回答
（P64）
1、凝胶色谱法另一个名称是什么？
2、凝胶色谱法分离蛋白质的依据是什么？
泳
阳
结
极
果
20
血红蛋白的提取和分离
样品处理 粗分离 纯化
血液组成成分 1.洗 涤 红 细 胞 2.释放血红蛋白 3.分离血红蛋白
纯度鉴定
4.透析血红蛋白
跳转
21
阅读思考：
血液组成成分
1. 血液由_血__浆___和_血__细__胞___两部分组成。
2. 血细胞中_红__细__胞___细胞数量最多，红细胞的含 量最高的有机化合物是__血__红__蛋__白_____。
低速离心 2 min
Байду номын сангаас
血浆 红细胞
红细胞
搅拌10min
重复洗涤3次，直至上清液没有黄色
23
采集得到猪血
24
初次离心后的结果
25
3次洗涤后的结果
返回
26
2.释放血红蛋白
阅读思考： 1. 释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了
哪些物质？ 2. 为了加速释放过程，采取了什么措施？ ①目的分析： ②蒸馏水的作用是_____使__红__细__胞__大__量__吸__水__胀__裂_______。 ③加入甲苯的作用是___溶__解__红__细__胞__的__细__胞__膜_________。 ④充分搅拌的目的是___加__速__红__细__胞__的__破__裂___________。
27
(2)血红蛋白的释放： 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯，
置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破 裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。
CO NH
7、分子结构 氨基酸 脱水缩合 肽链 盘曲折叠
（n条）
蛋白质
8、蛋白质多样性的原因： (多样性的根本原因)
氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多 端；多肽链的空间结构千差万别
9 、蛋白质的鉴定方法 双缩脲试剂
10、生理功能
细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组织更新的
主要原料，具有运输、调节、免疫、催化等作用，是一切
18
(三)电泳
（2）类型： 琼脂糖凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS) （3）SDS作用
为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶 中加入SDS。
电
泳
阳
结
极
果
19
使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋 白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异
电
3、凝胶的实质是什么？
4、凝胶色谱法的原理是什么？
8
基础知识
（一） 凝胶色谱法
1、凝胶色谱法的别名：分配色谱法 是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
2、依据的特性 蛋白质分子量的大小。
3、凝胶实质
①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的通道；
②化学本质：多糖类化合物： ③实例：葡聚糖、琼脂糖：
9
基础知识
（一） 凝胶色谱法
原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相 对（分子质量较小 ）的蛋白质容易进入 凝胶内部的通道，路程（较长 ），移动速 度（较慢 ），而（ 相对分子质量较大） 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能 在（凝胶外部 ）移动，路程（ 较短 ）， 移动速度（ 较快 ），相对分子质量不同 的蛋白质因此得以分离。
14
（二）、缓冲溶液 缓冲溶液－－洗脱剂 组成：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。
如H2CO3/NaHCO3，醋酸/醋酸钠， NaH2PO4/Na2HPO4等 作用：抵制外界酸碱对溶液pH的干扰，保持 pH与体 内环境基本一致。
15
基础知识
（三）电泳
16
基础知识
（三）电泳
阅读第65页的相关内容，回答以下问题： 1、电泳的概念； 2、电泳的原理； 3、电泳的种类； 4、SDS的作用。
10
11
• 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量
大的蛋白质
D
• A．路程较长，移动速度较慢
B
．路程较长，移动速度较快
• C．路程较短，移动速度较慢
D
．路程较短，移动速度较快
12
• 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中 的进行过程可表示为图中哪一个
•B
13
（二）、缓冲溶液 1、 之前在什么地方遇见过缓冲物质？ 2、 缓冲物质有哪些？作用是什么？ 3、 本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？
生命活动的主要承担者
2
3
血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚 铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二 氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。
4
血红蛋白的提取和分离
本课题的主要内容如下：
样品处理 及粗分离
方法原理
纯化
方法原理
凝胶色谱法
纯度鉴定
方法原理
电泳
5
一、基础知识: 样品处理及粗分离的原理: 1 、分离生物大分子的基本思路是什么？ 2 、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？ 3 、为什么不用鸡的血红细胞而用猪的血红细胞作为 实验材料？ 4 、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质？
3. 该化合物是由 __2_条__α__-_肽__链___和__2_条__β__-_肽__链__
构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和
CO2结合的_亚__铁__血__红__素__基团。
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1.洗 涤 红 细 胞
阅读思考：洗涤的目的是什么？
洗涤过程： 3g柠檬酸钠
吸出血浆 5倍体积生理盐水
血液 100mL
17
(三)电泳 1.电泳的概念 指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程.
2．凝胶电泳法： （1）原理：
①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团， 在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。
②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电 极移动。
③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本 身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现 样品中各种分子的分离。
知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：
1、含量
占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物
2、组成元素
C、H、O、N
3、相对分子质量 高分子化合物
4、基本组成单位： 氨基酸
结构简式：
种类：
R
5、氨基酸连接方式
脱水缩合
H C NH2
COOH
1
知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：
6、肽键
6
一、基础知识--蛋白质提取和分离原理 1、选用一定的物理或者化学方法分离具有不同
物理或化学性质的生物大分子。
2、形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸 附性质、亲和力等千差万别。
提取 分离 方法
凝胶色谱法
7
基础知识
（一） 凝胶色谱法
阅读并回答
（P64）
1、凝胶色谱法另一个名称是什么？
2、凝胶色谱法分离蛋白质的依据是什么？
泳
阳
结
极
果
20
血红蛋白的提取和分离
样品处理 粗分离 纯化
血液组成成分 1.洗 涤 红 细 胞 2.释放血红蛋白 3.分离血红蛋白
纯度鉴定
4.透析血红蛋白
跳转
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阅读思考：
血液组成成分
1. 血液由_血__浆___和_血__细__胞___两部分组成。
2. 血细胞中_红__细__胞___细胞数量最多，红细胞的含 量最高的有机化合物是__血__红__蛋__白_____。
低速离心 2 min
Байду номын сангаас
血浆 红细胞
红细胞
搅拌10min
重复洗涤3次，直至上清液没有黄色
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采集得到猪血
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初次离心后的结果
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3次洗涤后的结果
返回
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2.释放血红蛋白
阅读思考： 1. 释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了
哪些物质？ 2. 为了加速释放过程，采取了什么措施？ ①目的分析： ②蒸馏水的作用是_____使__红__细__胞__大__量__吸__水__胀__裂_______。 ③加入甲苯的作用是___溶__解__红__细__胞__的__细__胞__膜_________。 ④充分搅拌的目的是___加__速__红__细__胞__的__破__裂___________。
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(2)血红蛋白的释放： 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯，
置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破 裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。
CO NH
7、分子结构 氨基酸 脱水缩合 肽链 盘曲折叠
（n条）
蛋白质
8、蛋白质多样性的原因： (多样性的根本原因)
氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多 端；多肽链的空间结构千差万别
9 、蛋白质的鉴定方法 双缩脲试剂
10、生理功能
细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组织更新的
主要原料，具有运输、调节、免疫、催化等作用，是一切
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(三)电泳
（2）类型： 琼脂糖凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS) （3）SDS作用
为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶 中加入SDS。
电
泳
阳
结
极
果
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使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋 白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异
电
3、凝胶的实质是什么？
4、凝胶色谱法的原理是什么？
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基础知识
（一） 凝胶色谱法
1、凝胶色谱法的别名：分配色谱法 是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
2、依据的特性 蛋白质分子量的大小。
3、凝胶实质
①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的通道；
②化学本质：多糖类化合物： ③实例：葡聚糖、琼脂糖：