氯霉素液质配标简要步骤
氯霉素溶液(Chloramphenicol,34mgml)
北京吉美生物技术有限公司
氯霉素溶液(Chloramphenicol,34mg/ml)
产品简介：
氯霉素（Chloramphenicol）是由大David Gottlieb从Streptomyces venezuelae分离出来的抑菌性广谱抗生素。
氯霉素的抑菌原理在于能阻断细菌核糖体50s亚基的肽酰转移酶从而抑制翻译，高浓度下能抑制真核DNA的合成，从而抑制细菌蛋白质生物合成。
临床上，主要用于治疗多种细菌感染，但因易导致造血系统的不良反应，应用大大受到限制。
Jimei Chloramphenicol solution在分子生物学中可以作为氯霉素抗性基因的筛选药物，不用于临床。
一般情况下，工作浓度为25~170μg/ml。
产品组成：
操作步骤（仅供参考）：
1、根据实验具体要求操作。
2、一般工作浓度为100~170μg/ml。
注意事项：
1、注意无菌操作，避免污染。
2、避免反复冻融，以免失效。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关产品：。
001氯霉素 (肉、蛋、鱼GBT22338-2008)标准溶液配制记录 - 副本
吸取氯霉素标准中间液【1mg/L】1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至10mL。现用现配。
4.氯霉素标准工作液:
分别吸取氯霉素标准工作液【100ppb】10μL、20μL、50μL、100μL、200μL、500μL、于1mL进样小瓶中，用甲醇定容至1mL。配制成浓度为1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L标准工作液。
标准溶液配制记录
GB/T 22338-2008
溶液名称
氯霉素标准储备溶液
配制日期
溶液浓度
100mg/L
溶质
氯霉素
标准品信息
氯霉素(农业部环境保护科研监测所，CAS:56-75-7，
Expiration Date 2020/5/1)标准品:纯度≥99.9%
溶剂
甲醇
配制人
使配制过程
1.氯霉素标准中间液【10mg/L】
吸取氯霉素标准储备液【100mg/L】1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至10mL。-20℃保存，有效期为3个月。
2.氯霉素标准中间液【1mg/L】
吸取氯霉素标准中间液【10mg/L】1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至10mL。-20℃保存，有效期为3个月。
原833-2氯霉素检验标准操作程序1
目的：规范氯霉素的检验操作，保证检验结果的准确性。
范围：氯霉素。
责任：质检员规定：1性状1.1置日光下观察本品的性状，鼻闻口偿其气味；观察在空气中的情况。
1.2观察本品在甲醇、乙醇，丙酮或丙二醇和水中的溶解情况。
1.3熔点按“熔点测定标准操作程序”检查。
1.4比旋度取本品，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释成每1ml中含50mg 的溶液，按“旋光度测定标准操作程序”检测。
2鉴别2.1取本品10mg，加稀乙醇1 ml溶解后，加1%氯化钙溶液3 ml与锌粉50mg，置水浴上加热10分钟，倾取上清液，加苯甲酰氯约0.1 ml，立即强力振摇1分钟，加三氯化铁试液0.5 ml与氯仿2 ml，振摇，观察水层反应颜色。
如按同一方法，但不加锌粉试验，观察反应现象。
2.2在含量测定项下记录的色谱图中，比较供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间是否一致。
2.3比较本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱。
3检查3.1结晶性取本品少许，按“附录IX D”检测。
3.2酸碱度取本品，加水制成每1 ml中含25mg的混悬浮液，依法检查（附录ⅥH）。
3.3干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，按“干燥失重测定标准操作程序”检查。
3.4炽灼残渣按“炽灼残渣检查标准操作程序”检查。
3.5有关物质精密称取本品适量，按氯霉素每1mg加甲醇1 ml使溶解后，用流动相定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取氯霉素二醇物对照品与对硝基苯甲醛对照品适量，按氯霉素二醇物每10mg 加甲醇1ml使溶解，用流动相[定量稀释成每1 ml中含氯霉素二醇物1µg与对硝基苯甲醛0.5µg的混合溶液，作为杂质对照品溶液。
照含量测定项下的色谱条件，取杂质对照品溶液10µl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氯霉素二醇物峰的峰高为满量程的20%∽25%；精密量取供试品溶液与杂质对照品溶液各10µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
氯霉素含量的测定
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素含量测定原理：〈1〉
〈2〉再用紫外分光光度法测其含 量
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素标准溶液的配制 •准确称取氯霉素标准品0.05g,用丙二 醇溶液40%溶解至100ml,配成浓度为 500微克/ml的标准储备液. •或找到已知氯霉素含量的氯霉素注射 液作为标准液
氯 霉 素 注 射 液 PH 值 的 测 定
pH值 应为5.0～7.5 （中国药典1985年版二部附录33页）
氯霉素注射液PH值测定方案
•用PH计测定PH值
•Ph计的原理：是将一支电极与被测物质活度有 关的电极（称指示电极）和另一支电位已知且保 持恒定的电极（称参比电极）插入待测溶液中组 成一个化学电池，在零电流的条件下，通过测量 电池电动势，进而根据能斯特求出待测液ph值。
氯霉素注射液PH值和含量检测
选用0.1mol/L的乙酸和乙酸钠
可由上式得出V乙酸钠：V乙酸=1.77827 从而可以得出PH为5.5的标准缓冲溶液
同理可得
PH为6.8和7.2的缓冲溶液
氯霉素注射液PH值和含量检测
PH计的校正 1. 预热：开电源，预热30分 钟，连接电极有读数开关 开放的情况下调0。 2. 定位：由产品说明书知注 射液的PH为5.0-7.5，将电 极浸入PH为6.8的缓冲溶 液中，轻轻摇匀，待读数 稳定后，调定位旋扭使其 读数为6.8，重复2~3次
O2 N
H2NHN
H NH2 OH H OH HIO4
O2 N O
O2 N
NO2
O2N
NO2 N N H
NO2
p-nitrophenyl-2aminopropan-1,3-diol
p-nitrobenzaldchyde
国标法 测饲料中氯霉素
国标法测饲料中氯霉素
近年来，食品安全问题成为社会关注的焦点。
其中，饲料中禁用药物的检测也备受关注。
针对饲料中的氯霉素问题，国家相关机构出台了一系列检测方法和要求，其中最重要的就是国标法测量。
国标法是指按照国家标准所规定的方法和要求，对饲料样品中的氯霉素进行检测。
具体的步骤如下：
第一步：样品制备
样品制备是国标法检测的第一步。
饲料样品需要粉碎、混合均匀，然后按照国家标准要求用适当的溶剂进行提取，制备成为检测样品。
这个步骤非常关键，因为样品制备的质量直接影响到后续检测的准确性和可靠性。
第二步：检测操作
检测操作是国标法检测的核心步骤，主要是利用高效液相色谱（HPLC）对检测样品中氯霉素进行分离和检测。
具体的操作包括：
1. 选用适当的色谱柱和色谱条件进行分离；
2. 利用荧光检测器扫描样品，记录检测结果；
3. 根据样品的检测结果，计算出氯霉素的含量。
第三步：结果分析
结果分析是国标法检测的最后一步，主要是将检测结果解释出来，判断样品中氯霉素是否超过国家标准规定的限量。
如果检出样品中的氯霉素含量超出标准规定的限量，那么这批饲料会被认定为不符合国家要求，需要进行处理。
总的来说，国标法测量饲料中氯霉素是一种科学、标准化的检测方法，对维护饲料安全和保障动物健康具有非常重要的意义。
唯一需要注意的是，由于该方法需要专业设备和技术，所以应该由有经验的检测机构或实验室进行操作，以保证检测结果的准确性和可靠性。
HLB-牛奶中氯霉素的检测-0
牛奶中氯霉素的检测参考方法：/产品名称：HPSW HLB 规格：60mg/3ml 【概述】氯霉素类抗生素，属于抑菌性广谱抗生素，常见的氯霉素类药物主要包括：氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等。
氯霉素类药物曾被广泛应用于动物疾病的治疗，但其毒害性较大，禽、蛋、肉等食品中的氯霉素残留会直接损害消费者的健康。
2019年12月27日，氯霉素被列入食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单。
【标液配置】甲砜霉素标准使用液(30μg/mL)，临用前用乙腈配置。
【样品提取】牛奶:取本品，取约5g ，精密称定，置具塞离心管中，加入1.5g 氯化钠，精密加入乙腈10ml ，涡旋，离心，5000转/分离心5分钟，取上清液置15ml 氮吹管中，残渣再加5ml 乙腈重复提取一次，合并上清液，45℃氮吹干，加4ml 甲醇水（2+8），加4ml 正己烷，涡旋，5000转/分离心2分钟，弃去正己烷层，水层待净化。
【净化】HPSW HLB （60mg/3ml ） （1）活化：5ml 甲醇，5ml 水（2）上样淋洗：取提取液过柱，弃去流出液。
用3ml 甲醇水（2+8）润洗氮吹管，洗液过柱，弃去流出液，吹干小柱。
（3）洗脱：用5ml 甲醇洗脱小柱，收集洗脱液。
45℃氮吹干，加甲醇-水（4+6）定容至1ml ，涡旋， 过0.22μm 有机滤膜，上机。
【参考仪器条件】 仪器：Waters UPLC色谱柱：Morphling WD -C18(4.6mm×250mm,5μm) 检测器：PDA ，检测波长：275nm流速：1.0ml/min 进样体积：10μL 柱温：35℃【实验结果】标准溶液图1样品图2加标图3【注意事项】 /【产品订购信息】。
氯霉素注射液的ph和含量测定
氯霉素注射液的ph和含量测定简介：氯霉素别名：左霉素，左旋霉素，氯胺苯醇，氯丝霉素试验氯霉素是一种抑菌类抗生素，由大卫·戈特利布（David Gottlieb）于1947年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，再于1949年合成并引入临床。
氯霉素注射液为抗生素类药。
有广谱抑菌作用。
用于伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、流感杆菌、布氏杆菌、脑膜炎球菌、链球菌、肺炎球菌等感染，对多种厌氧菌感染有效，亦可用于立克次体感染。
有引起粒细胞缺乏症及再生障碍性贫血的可能，有时可引起精神症状，长期应用可引起二重感染，新生儿、早产儿用量过大可发生灰色综合症。
分子式：C11H12Cl2N2O5 分子量：323.13《药典》规定氯霉素注射液中氯霉素含量0.125mg/ml，有效范围规定含量90%-110%，ph5.0-7.5.药理：。
氯霉素能控制细菌核糖体的肽酰转移酶从而抑制细菌蛋白质生物合成。
氯霉素可以通过阻止氨基酰tRNA与核糖体50S亚基A位点的结合来抑制核糖体活动及蛋白质合成。
虽然氯霉素与大环内酯都是以影响50S亚基来发挥作用，但氯霉素不属于大环内酯。
用途：氯霉素有着很广泛的活跃性，能有效对抗革兰氏阳性菌，包括大部份的抗药性金黄色葡萄球菌、革兰氏阴性菌及厌氧性生物。
它却不能对抗绿脓杆菌或肠杆菌属的品种。
而对于类鼻疽伯克氏菌，则只有一点效用，但经已由头孢他啶及美罗培南取代。
在西方，氯霉素的使用主要限制在外用上，这是因它有导致再生不良性贫血的风险。
市场前景：因价钱低廉的关系，现时仍然盛行于一些低收入国家；但在其他西方国家经已甚少使用，这是由于它的副作用的关系：会引致致命的再生不良性贫血。
现时，氯霉素主要是用在医治细菌性结膜炎的眼药水或药膏上。
实验目的：1.ph值的基本原学习直接点位学法测理.2.学会使用酸度计测定氯霉素注射液1.3.学习紫外分光光度法测定氯霉素含量的方法.实验原理：1.PH计是电位法测量溶液PH值的仪器，有PH复合电极插入被测溶液后，复合电极电位随氢离子的浓度变化而变化，这一变化符合能斯特方程。
氯霉素滴眼液实验报告
氯霉素滴眼液实验报告引言氯霉素滴眼液是一种常用的抗菌药物，广泛用于眼科疾病的治疗。
本次实验旨在观察氯霉素滴眼液对细菌生长的抑制作用，并探究不同浓度的氯霉素滴眼液对细菌抑制效果的影响。
实验材料与方法材料：- 氯霉素滴眼液- 细菌培养基- 紫外灯- 试管- 移液管方法：1. 准备不同浓度的氯霉素滴眼液：分别将氯霉素滴眼液与细菌培养基按照1:10、1:20、1:50、1:100的比例混合，制备成不同浓度的氯霉素滴眼液。
2. 制备试验组和对照组：取两个试管，分别加入相同量的细菌培养基。
试验组添加不同浓度的氯霉素滴眼液，对照组不添加氯霉素滴眼液。
3. 接种细菌：将试管加入已培养好的细菌液，轻轻摇晃使细菌与液体均匀混合。
4. 培养细菌：将试管置于恒温恒湿的培养箱中，在37摄氏度下培养24小时。
5. 观察细菌生长情况：在培养后的试管中观察细菌的生长情况，记录细菌的形态和数量。
6. 使用紫外灯观察：将试管放置在紫外灯下，观察细菌的荧光情况。
实验结果在对照组中，细菌呈现良好的生长状态，形态正常。
而在试验组中，随着氯霉素滴眼液浓度的增加，细菌的生长逐渐受到抑制。
当氯霉素滴眼液浓度达到1:100时，细菌的生长明显受到抑制，数量大大减少。
使用紫外灯观察时，对照组细菌无荧光反应，而试验组中浓度较高的氯霉素滴眼液处理后的细菌发出荧光，说明氯霉素对细菌产生了荧光反应。
结论通过本次实验可以得出以下结论：1. 氯霉素滴眼液具有抑制细菌生长的作用，随着浓度的增加，抑菌效果明显增强。
2. 氯霉素滴眼液对细菌的抑制作用可通过荧光观察加以验证。
实验分析与改进本次实验结果表明氯霉素滴眼液具有良好的抑菌效果，但仍存在以下几点需要改进的地方：1. 本实验采用的细菌培养基可能对氯霉素敏感度不同，可尝试使用不同种类的细菌培养基进行实验以获得更准确的结果。
2. 本实验仅观察了氯霉素滴眼液对细菌生长的抑制作用，未对不同细菌品种的敏感度进行进一步研究，下一步可以对不同细菌品种进行筛选，以获得更全面的结果。
氯霉素
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
千分之一比例加入LB中。
分子克隆实验手册氯霉素为脂溶性,通过弥散进入细菌细胞内,并可逆性地结合在细菌核糖体的50S亚基上,使肽链增长受阻(可能由于抑制了转肽酶的作用),因此抑制肽链的形成,从而阻止蛋白质的合成。
氯霉素溶液的配置和注意事项。
工作液、母液配制：一般常用的工作浓度为25μg/ml。
配制母液时，先用乙醇配成10 mg/ml，再用水稀释至1 mg/ml。
该母液应冻存，并在30天内用完。
注意事项：（氯霉素溶液应避光）（氯霉素溶液见光分解后会变黄，出现橘黄色沉淀）氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。
动物源食品中氯霉素,氟苯尼考,甲砜霉素前处理方法
10000rpm，4℃下离心5min
取出离心管，按顺序打开盖子放好，将上清液吸至梨形浓缩瓶
再加入10mL乙酸乙酯至离心管中重复提取一次
合并上清液至梨形瓶
50℃下减压旋转蒸发浓缩至干
1mL5%甲醇溶解震荡，过0.22μm水相滤膜，上机
三、注意事项
动物源食品中
一、试剂准备
标准储备溶液和内标溶液，用5%甲醇稀释至100ng/mL，4℃保存，有效期1个月。
检查：各种溶剂体积，内标物体积，定溶液体积
二、处理步骤
样品 称取5.00g于50mL离心管，加标样品加入50μL标液（含量为1.0μg/kg），震荡均匀
每个样品加入内标（ISTD）50μL（含量为5ng）
氯霉素液质配标简要步骤
氯霉素液质配标简要步骤氯霉素液质配标简要步骤⼀、仪器1. 20mL烧杯 52. 250mL烧杯 33. 10mL容量瓶8？4. 50mL容量瓶 25. 100mL容量瓶 36. 玻棒137. 电⼦天平 18. 药匙 49. 1mL移液枪 310. 10-100uL移液枪 1⼆、试剂1.氘代氯霉素内标物2.氯霉素、甲矾霉素和氟苯尼考标准物质:纯度＞99. 5%3.⽔150mL4.甲醇150mL三、配制1.标准储备溶液:100 ug/mL。
分别准确称取适量的氯霉素、甲矾霉素和氟苯尼考标准物质1g/纯度，⽤甲醇定容⾄10mL，该溶液于-18℃保存，可使⽤1年。
2.混合标准储备溶液：1ug/mL分别取1mL氯霉素、甲矾霉素和氟苯尼考标准储备溶液:（100 ug/mL），甲醇定容⾄100mL。
该溶液于-18℃保存，可使⽤半年。
3.中间浓度混合标准液：20ng/mL取1mL 1ug/mL的混合标准储备溶液，⽤⽔定容⾄50mL，4℃保存，可使⽤3个⽉。
4.氘代氯霉素内标标准溶液100ug/mL称取1g/纯度氘代氯霉素，⽤定容10mL。
5.内标标准储备溶液1ug/mL吸取100uL氘代氯霉素内标标准溶液（100ug/mL），甲醇定容⾄10mL 于-18℃保存，可使⽤半年。
6.中间浓度内标溶液20ng/mL吸取1mL氘代氯霉素内标标准溶液（100ug/mL），⽔定容⾄10mL 于4℃保存，可使⽤3个⽉。
7.基质混合标准⼯作溶液:根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，吸取⼀定量的中间浓度混合标准溶液(3.)和中间浓度内标溶液(6.)，⽤空⽩样品提取液配成系列浓度的基质混合标准⼯作溶液，内标浓度均为0. 3 ng/mL。
当天配制。
氯霉素(液-质)
附件3消毒产品中氯霉素（chloromycetin ）测定-液相色谱-串联质谱法Method for determination of chloromycetinin disinfestion product-LC-MS-MS method1 范围本方法规定了膏霜类消毒产品中氯霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于膏霜类消毒产品中氯霉素残留量的测定。
取样量为0.2g时，本方法氯霉素的检出限0.03mg/kg。
2 规范性引用文件3 原理试样中氯霉素用甲醇提取，提取液经0.45μm滤膜过滤，用C8柱分离后，用液相色谱-串联质谱仪测定，负离子扫描，离子对定性，峰面积定量。
4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。
4.1甲醇：农药残留级。
4.2标准品：氯霉素标准品购自北京利科生化科贸有限公司，纯度≥99%。
4.3标准溶液：准确称取适量的氯霉素标准品，用甲醇（4.1）配制成10.0mg/mL 标准贮备溶液。
准确量取上述标准贮备溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为500µg/mL的标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于4 C保存。
临用前，再根据需要用甲醇配制成不同浓度的标准使用溶液。
4.3 0.45μm滤膜。
5 仪器5.1 液相色谱一串联质谱联用仪：HP1100高效液相色谱仪(Agilent) - API 4000质谱仪(Applied Biosystems) ，电喷雾离子化源(ESIMS，NI/PI模式)。
5.2 分析天平：感量0.1mg和0.001g。
5.3实验室纯水机：Barnstead纯水机。
5.4涡旋振荡器：Scientific Industries 涡流振荡器。
5.5 具塞试管：10mL。
6 试样的制备与保存6.1 试样的制备取有代表性样品5g，搅拌均匀，制成实验室样品。
6.2 试样保存制备好的试样置于室温保存。
氯霉素的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习氯霉素的提取方法。
2. 掌握氯霉素的鉴定方法。
3. 了解氯霉素的理化性质。
二、实验原理氯霉素（Chloramphenicol）是一种广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用。
本实验通过氯霉素的提取和鉴定，了解其理化性质和提取方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 氯霉素原料- 95%乙醇- 0.1mol/L氢氧化钠溶液- 0.1mol/L盐酸溶液- 氯化钠- 硫酸铜- 氯化钡- 乙酸乙酯- 碘化钾- 淀粉- 水浴锅- 离心机- 烧杯- 玻璃棒- 滴定管- 酒精灯- 试管- 移液管- 容量瓶- 滤纸- 紫外可见分光光度计2. 实验试剂：- 95%乙醇（分析纯）- 0.1mol/L氢氧化钠溶液（分析纯）- 0.1mol/L盐酸溶液（分析纯）- 氯化钠（分析纯）- 硫酸铜（分析纯）- 氯化钡（分析纯）- 乙酸乙酯（分析纯）- 碘化钾（分析纯）- 淀粉（分析纯）四、实验步骤1. 氯霉素的提取（1）称取一定量的氯霉素原料，置于烧杯中，加入适量的95%乙醇，用玻璃棒搅拌至氯霉素溶解。
（2）将溶解后的溶液转移至离心管中，以3000r/min的转速离心5分钟，取上清液。
（3）将上清液转移至另一烧杯中，加入适量的0.1mol/L氢氧化钠溶液，用玻璃棒搅拌至沉淀完全。
（4）将沉淀物过滤，用95%乙醇洗涤沉淀物，直至洗涤液无氯霉素为止。
（5）将沉淀物置于干燥器中干燥，直至恒重。
2. 氯霉素的鉴定（1）氯霉素的熔点测定取一定量的氯霉素固体，放入干燥的试管中，用酒精灯加热，观察氯霉素的熔点。
（2）氯霉素的紫外光谱分析将氯霉素固体配制成一定浓度的溶液，用紫外可见分光光度计测定其在特定波长下的吸光度。
（3）氯霉素的化学反应鉴定1）氯霉素与碘化钾的反应取一定量的氯霉素固体，加入适量的碘化钾溶液，观察是否产生沉淀。
2）氯霉素与硫酸铜的反应取一定量的氯霉素固体，加入适量的硫酸铜溶液，观察是否产生蓝色沉淀。
液质联用法测定水产品中氯霉素残留的技术研究
液质联用法测定水产品中氯霉素残留的技术研究作者：暂无来源：《渔业致富指南》 2017年第11期氯霉素（Chloroamphenicol，CAP）是一种有效的广谱抗生素，常用于动物各种传染性疾病的治疗，对多种病原菌有较强的抑制作用，人们经常使用氯霉素进行水体消毒和防治渔业病虫害，但由于氯霉素对人体产生严重的毒副作用，是多个国家禁止使用的兽用药物。
目前水产品中氯霉素的残留主要用GB/T20756-2006国家标准进行检测，本文在此标准的基础上进一步优化了前处理方法，提高了检测效率，并且能够达到规定的重现性和准确性。
具体通过液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/ MS），多反应监测扫描模式（MRM）和同位素内标法定量，直接对草鱼、鳜鱼、对虾等水产品中的氯霉素进行了检测。
一、实验材料1. 仪器AB QTRAP4500液相色谱-三重四级杆串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）、匀浆机、离心机、超声波清洗仪、垂直振荡器、氮吹仪等。
2. 材料草鱼、鳜鱼、对虾等水产品，均采自于养殖场和农贸市场，去皮去骨去内脏取可食部分切碎、混匀、冷冻，作为样品备用。
3. 试剂和药品甲醇（色谱纯）德国Merck（默克）公司；乙酸乙酯（分析纯）、正己烷（分析纯）、氢氧化铵（25%-28%）（分析纯）国药集团。
4. 标准品氯霉素（CAP）标准品德国Dr公司、氘代氯霉素（CAP-D5）BESTOWN北京振翔科技有限公司。
二、实验仪器方法1. 色谱条件色谱柱：Thermo C18柱（1.9μm×2.1mm ×50mm）；柱温40℃；进样量10.0μL；流动相乙腈和水，流速0.4mL/min，运行时间 6min。
2. 质谱条件采用电喷雾离子源（ESI），负离子扫描，多反应监测扫描模式（MRM）；雾化器、碰撞器为氮气。
质谱参数见表2。
三、实验步骤1. 标准溶液的配置氯霉素标准储备液（100.0μg/mL）用甲醇配置，氯霉素标准中间工作液（40.0ng/mL）用水稀释；氘代氯霉素标准使用液（20.0ng/mL）用水稀释。
氯霉素方法
附件3消毒产品中氯霉素（chloromycetin ）测定-液相色谱-串联质谱法Method for determination of chloromycetinin disinfestion product-LC-MS-MS method1 范围本方法规定了膏霜类消毒产品中氯霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于膏霜类消毒产品中氯霉素残留量的测定。
取样量为0.2g时，本方法氯霉素的检出限0.03mg/kg。
2 规范性引用文件3 原理试样中氯霉素用甲醇提取，提取液经0.45μm滤膜过滤，用C8柱分离后，用液相色谱-串联质谱仪测定，负离子扫描，离子对定性，峰面积定量。
4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。
4.1甲醇：农药残留级。
4.2标准品：氯霉素标准品购自北京利科生化科贸有限公司，纯度≥99%。
4.3标准溶液：准确称取适量的氯霉素标准品，用甲醇（4.1）配制成10.0mg/mL 标准贮备溶液。
准确量取上述标准贮备溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为500µg/mL的标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于4 C保存。
临用前，再根据需要用甲醇配制成不同浓度的标准使用溶液。
4.3 0.45μm滤膜。
5 仪器5.1 液相色谱一串联质谱联用仪：HP1100高效液相色谱仪(Agilent) - API 4000质谱仪(Applied Biosystems) ，电喷雾离子化源(ESIMS，NI/PI模式)。
5.2 分析天平：感量0.1mg和0.001g。
5.3实验室纯水机：Barnstead纯水机。
5.4涡旋振荡器：Scientific Industries 涡流振荡器。
5.5 具塞试管：10mL。
6 试样的制备与保存6.1 试样的制备取有代表性样品5g，搅拌均匀，制成实验室样品。
6.2 试样保存制备好的试样置于室温保存。
抗生素操作 氯霉素(CAP)-------拜发
氯霉素（CAP）-------拜发一、前处理1.称样2g+ 4ml水+ 4ml乙酸乙酯溶解2.离心3.取上层1ml，氮气吹干（60度）4.加0.5ml buffer and vortex 缓冲液溶解5.50ul 分析二、点样A.50ul标准样品/样品B.加50ul酶结合物（红色冒：buffer=1:10）20-25度，1小时C.洗板D.加100ul显色剂，反应15分钟E.加100ul终止液（450NM度吸光度）（0 /25 /50/100/ 250/ 750ppb）稀释倍数1一、前处理（方法一）一、1、称1g样品加9ml提取液溶解、离心2、C18; 2ml甲醇过----5ml水过---5ml离心样液过柱---5ml水洗----吹干----2ml甲醇洗（地下用干净试管接）3、水浴吹干4、加5ml的SDB溶解液溶解50ul用于分析（10倍稀释系数）一、前处理（方法二）1、1g蜂蜜样品+4ml SDB缓冲液溶解2、静置后分层（或0.8ul滤膜过滤）、吸取1ml上层液体到4mlSDB液体中，混匀3、50ml用于分析（25倍稀释系数）二、点样A、100ul零标液于孔A1、A2 (省)B、50ul零标液于孔B1、B2C、50ul各标准稀释液于各孔（浓度0.25、0.5、1、2、10、20ng/ml）D、50ul各样品溶液于板孔E、25ul酶标、抗体于各孔（除去A1、A2）F、于2-8度下暗处反应1小时G、洗板H、100ul底物、室温30minI、100ul终止液、450nm读数提取液：1-庚烷磺酸钠10.1gNa3PO4.12H2O 11.4gH3PO4 调PH为2 定容1000mlSDB缓冲液；1.15g NaHPO40.2g KH2PO40.2g KCL30g NaCL0.5ml 吐温80 （PH7.4）定容1000ml一、前处理1、0.5g样品2、加4.5ml的8%甲醇的样品抽提缓冲液，混匀3、离心4、取上层水相50ul用于分析（抽提缓冲液;0.77gNaH2PO4、0.18GKH2PO4、8.94gNaCL溶解定容1000ml）二、点样A、100ul零标液于孔A1、A2 (省)B、50ul零标液于孔B1、B2C、50ul各标准稀释液于各孔（浓度0.157、0.316、0.625、1.25、2.5、5ng/ml）D、50ul各样品溶液于板孔E、25ul酶标、抗体于各孔（除去A1、A2）F、于2-8度下暗处反应1小时G、洗板H、100ul底物、室温30minI、100ul终止液、450nm读数磺胺（SAS）----绿诗源（0ppb/0.4ppb/1.2ppb/3.6ppb/10.8ppb/32.4ppb）一、前处理1、1g蜂蜜样+1ml 的0.5M的HCL溶解置于37度30min2、加入2.5ml的0.2M的NaOH (PH调至5左右)再加入4ml的乙酸乙酯混匀离心3、吸取上层2ml有机相于50度水浴吹干4、加0.5ml已稀释好的复溶液溶解5、取20ul用于分析（稀释倍数1）二、点样1、加标样/样品20ul+50ul酶标+80ul抗体25度室温反应40min2、洗板3、A液50ul+B液50ul 25度避光显色20-30min4、50终止液450nm/630nm0.5M 的HCL液： 4.3ml浓盐酸加水定容100ml0.2M的NaOH液: 0.8g的氢氧化钠加水定容100ml硝基咪唑类--------北京望尔（0ppt/50ppt/150ppt/600ppt/2400ppt/9600ppt）一、前处理1、3g样+3ml碳酸盐缓冲液(配液1)充分溶解2、加9ml乙酸乙酯振荡，离心3、取上层有机相6ml+2ml乙酸乙酯+2ml 2M的氢氧化钠（见配液2）混匀，离心，4、取上层4ml置玻璃试管，吹干5、加入1ml正己烷涡动30S,加入0.5ml复溶工作液，涡动1min,离心6、出去上层，取下层50ul用于分析（稀释倍数0.5）一、前处理(减半)1、1.5g样+1.5ml碳酸盐缓冲液(配液1)充分溶解2、加4.5ml乙酸乙酯振荡，离心3、取上层有机相3ml+1ml乙酸乙酯+1ml 2M的氢氧化钠（见配液2）混匀，离心，4、取上层2ml置玻璃试管，吹干5、加入1ml正己烷涡动30S,加入0.5ml复溶工作液，涡动1min,离心6、出去上层，取下层50ul用于分析（稀释倍数1）二、点样A、标准品/样品50ul+50ul抗体工作液(4度冰箱保存)、混匀于4度反应1hB、洗板C、加100ul酶标二抗25度30minD、洗板E、加50ul底物A+50ul底物B 25度30minF、50ul终止液配液1: 1M碳酸钠缓冲液：0.5gNaHCO3+4.66g无水Na2CO3 定容500ml 配液2：2M氢氧化钠溶液：40gNaOH 定容500ml呋喃唑酮（AOZ）------粤尔一、前处理1、1g+4ml水+0.5mld的1M的盐酸溶液和100ul的衍生化试剂2、37度过夜孵育（大约16h）或56度水浴中孵育2h3、分别加入5ml 0.1MK2HPO4 和0.4ml 1M的氢氧化钠和5ml的乙酸乙酯，振荡，离心4、取上层2.5ml的有机层，56度吹干5、加1ml的正己烷溶解，加1ml已稀释好的复溶工作液充分混合03S,室温下离心6、取50ul下层有机相用于分析（二、点样A、标准品/样品50ul+50ul抗体工作液，25度反应1hB、洗板C、加100ul酶标25度反应30minD、洗板E、加50ul底物A+50ul底物B 25度30minF、50ul终止液配液：1、1M盐酸8.6ml的浓盐酸定容100ml2、1M氢氧化钠4g的氢氧化钠溶解定容100ml3、0.1M的K2HPO4 22.8g的K2HPO4.3H2O 定容1000ml。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
氯霉素液质配标简要步骤
一、仪器
1. 20mL烧杯 5
2. 250mL烧杯 3
3. 10mL容量瓶8？
4. 50mL容量瓶 2
5. 100mL容量瓶 3
6. 玻棒13
7. 电子天平 1
8. 药匙 4
9. 1mL移液枪 3
10. 10-100uL移液枪 1
二、试剂
1.氘代氯霉素内标物
2.氯霉素、甲矾霉素和氟苯尼考标准物质:纯度＞99. 5%
3.水150mL
4.甲醇150mL
三、配制
1.标准储备溶液:100 ug/mL。
分别准确称取适量的氯霉素、甲矾霉素和氟苯尼考标准物质1g/纯度，用甲醇定容至10mL，该溶液于-18℃保存，可使用1年。
2.混合标准储备溶液：1ug/mL
分别取1mL氯霉素、甲矾霉素和氟苯尼考标准储备溶液:（100 ug/mL），甲醇定容至100mL。
该溶液于-18℃保存，可使用半年。
3.中间浓度混合标准液：20ng/mL
取1mL 1ug/mL的混合标准储备溶液，用水定容至50mL，4℃保存，可使用3个月。
4.氘代氯霉素内标标准溶液100ug/mL
称取1g/纯度氘代氯霉素，用定容10mL。
5.内标标准储备溶液1ug/mL
吸取100uL氘代氯霉素内标标准溶液（100ug/mL），甲醇定容至10mL 于-18℃保存，可使用半年。
6.中间浓度内标溶液20ng/mL
吸取1mL氘代氯霉素内标标准溶液（100ug/mL），水定容至10mL 于4℃保存，可使用3个月。
7.基质混合标准工作溶液:
根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的中间浓度混合标准溶液(3.)和中间浓度内标溶液(6.)，用空白样品提取液配成系列浓度的基质混合标准工作溶液，内标浓度均为0. 3 ng/mL。
当天配制。