蛋清溶菌酶提取技术的研究
蛋清溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 了解溶菌酶的生物学特性及其在食品、医药等领域的应用价值。
2. 掌握从鸡蛋清中提取溶菌酶的方法和操作步骤。
3. 学习蛋白质分离纯化的基本原理和实验技术。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种能够水解细菌细胞壁中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。
它主要存在于鸟类和家禽的蛋清中，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过改变溶液的离子强度，使溶菌酶从溶液中析出。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、去离子水、硫酸铵、盐酸、pH试纸、玻璃棒、滤纸、烧杯、漏斗、电子天平、移液管、离心机、恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
2. 实验试剂：硫酸铵、盐酸、去离子水等。
四、实验步骤1. 鸡蛋清制备：将4-5个新鲜鸡蛋打破，分离出鸡蛋清，加入两倍体积的去离子水，搅拌拌匀，过滤杂质。
2. 盐析：向鸡蛋清溶液中加入适量硫酸铵，搅拌溶解，使硫酸铵浓度达到60%左右。
将溶液静置一段时间，使溶菌酶析出。
3. 沉淀分离：用滤纸过滤析出的沉淀，收集滤液。
4. 洗涤：向沉淀中加入少量去离子水，搅拌洗涤，去除杂质。
重复洗涤2-3次。
5. 离心：将洗涤后的沉淀转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
6. 蛋白质浓度测定：采用紫外可见分光光度计测定上清液中蛋白质浓度。
7. 溶菌酶活性测定：采用溶菌酶活力测定试剂盒测定溶菌酶活性。
五、实验结果与分析1. 蛋白质浓度测定：上清液中蛋白质浓度为1.5mg/mL。
2. 溶菌酶活性测定：溶菌酶活性为200U/mL。
根据实验结果，从鸡蛋清中提取的溶菌酶蛋白质浓度为1.5mg/mL，活性为200U/mL，说明本实验提取的溶菌酶纯度和活性较高。
六、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的蛋白质分离纯化方法，适用于溶菌酶的提取。
2. 在实验过程中，要注意控制硫酸铵的加入量，以免影响溶菌酶的活性。
蛋清溶菌酶提取技术的研究共3篇
蛋清溶菌酶提取技术的研究共3篇蛋清溶菌酶提取技术的研究1蛋清溶菌酶提取技术的研究概述在医学、食品、制药等行业中，蛋清溶菌酶（ovomucin）是一种重要的蛋白质，在不同领域中有不同的应用价值。
目前，提取蛋清溶菌酶的方法有多种，根据对目标产物的要求，选择合适的提取工艺是提高提取效率、降低成本，同时保证产品品质的关键。
传统的蛋清溶菌酶提取方法包括酸碱处理、物理打碎等方法，虽然能得到目标产物，但这种方法存在不少问题，例如操作复杂，产物纯度不高等。
近年来，一些新技术如超声波提取、微波提取等逐渐被应用到蛋清溶菌酶提取中，为蛋清溶菌酶提取研究带来了新思路和新突破。
酸碱处理法酸碱处理法是传统的蛋清溶菌酶提取方法，主要是通过对蛋清的酸碱性调节使得蛋清溶菌酶在溶液中释放。
酸碱处理法操作简单，但是由于酸碱处理对蛋清溶菌酶的结构影响较大，使其产物的纯度较低。
物理打碎法物理打碎法是另一种常用的蛋清溶菌酶提取方法，主要是通过机械力的作用使蛋清溶菌酶从细胞中释放。
其优点是成本低，但存在操作复杂、易受外界因素影响，同时产物纯度低的缺陷。
超声波提取法超声波提取法是一种新兴的蛋清溶菌酶提取技术，该方法通过超声波的力量使细胞壁破裂，从而使蛋清溶菌酶易于释放。
相比传统的提取方法，该方法具有操作简单，提取效率高，提取速度快，产物纯度优等明显优点。
微波提取法微波提取法是另一种新兴的提取技术，该方法主要是通过微波辐射使蛋清细胞壁被加热；随着温度升高，蛋清溶菌酶会逐渐释放。
该方法具有提取速度快、提取效率高等优点，但是同时由于微波剩余辐射等原因，该方法的应用还存在一些安全隐患。
总结综上所述，提取蛋清溶菌酶是目前相关行业中的重要问题之一，选择适合的提取方法具有重要的实际应用价值。
传统的方法虽然操作简单，但存在许多问题，因此越来越多的新技术被应用到该领域。
超声波提取、微波提取是比较新兴的技术，在提取效率，产物纯度等方面都具有很大的优势。
我们需要深入研究新技术在蛋清溶菌酶提取中的应用，不断探索新的提取方案，为相关行业的发展贡献力量提取蛋清溶菌酶是一个重要的问题，不仅在生命科学研究中有广泛应用，而且在食品工业、医药等领域也有着重要的应用价值。
蛋清溶菌酶的重组合成及生化特性研究
蛋清溶菌酶的重组合成及生化特性研究蛋清溶菌酶的重组合成及生化特性研究引言：蛋清溶菌酶（lysozyme，EC 3.2.1.17）是一种广泛存在于动植物体内的抗菌酶类蛋白质，能够降解细菌的细胞壁，是一种重要的天然防御分子。
由于其广谱抗菌活性和较低毒性，蛋清溶菌酶在医药、食品工业和农业等领域具有广阔的潜力。
为了进一步理解蛋清溶菌酶的生化特性和提高其生产效率，重组合成蛋清溶菌酶的研究变得尤为重要。
本文将探讨蛋清溶菌酶的重组合成过程及其生化特性的研究进展。
一、蛋清溶菌酶的基本结构和功能蛋清溶菌酶是由129个氨基酸残基组成的小分子蛋白质，具有单一的多肽链结构。
其主要作用是通过水解作用降解细菌细胞壁的β-(1,4)糖苷键，进而导致细菌细胞的破裂。
这种抗菌作用广泛应用于食品保鲜、医药领域及植物保护等。
蛋清溶菌酶还具有抗病毒、抗真菌等其他生物学功能，因此其研究领域也逐渐扩展。
二、蛋清溶菌酶的重组合成方法目前，蛋清溶菌酶的重组合成方法主要有两种，即基因工程技术和化学合成方法。
基因工程技术是在真核或原核表达系统中，通过大肠杆菌或酵母等主机细胞来重组表达蛋清溶菌酶。
该方法可以实现大规模高效生产，降低成本。
化学合成方法则是通过化学合成技术合成蛋清溶菌酶的氨基酸序列。
这种方法适用于小规模实验室制备研究，但在大规模应用方面存在一定的局限性。
三、蛋清溶菌酶的重组合成技术改进为了提高蛋清溶菌酶的生产效率和质量，研究人员进行了一系列的技术改进。
首先，通过优化基因序列和启动子的选择，可以提高蛋清溶菌酶的表达水平。
其次，通过调节培养条件、优化培养基成分，可以提高蛋清溶菌酶的产量。
此外，利用蛋清溶菌酶的浓缩纯化技术和离子交换层析技术，可以提高蛋清溶菌酶的纯度和活性。
四、蛋清溶菌酶的生化特性研究蛋清溶菌酶的生化特性研究对于揭示其抗菌机制和改进高效生产技术具有重要意义。
研究发现，蛋清溶菌酶的抗菌活性受到多种因素的影响，包括pH值、离子强度、结构和温度等。
鸡蛋溶菌酶提取实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡蛋溶菌酶的提取方法。
2. 了解溶菌酶的性质和功能。
3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质，主要来源于鸟类的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液等。
溶菌酶具有水解细菌细胞壁的作用，能够有效抑制细菌生长，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的提取原料，通过酶解、离心、透析等步骤提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、NaCl、NaOH、丙酮、硫酸铵、蒸馏水等。
2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸、透析袋等。
四、实验步骤1. 酶解：将新鲜鸡蛋打破，取出蛋清，加入适量的NaCl溶液（浓度为0.5mol/L），搅拌均匀，置于恒温水浴锅中，温度控制在37℃，酶解1小时。
2. 离心分离：将酶解后的溶液以3000r/min的速度离心10分钟，收集上清液。
3. 盐析：在上清液中加入适量的硫酸铵固体，搅拌溶解，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
4. 透析：将沉淀用蒸馏水洗涤，去除杂质，然后将其放入透析袋中，置于蒸馏水中，透析24小时，去除小分子物质。
5. 浓缩：将透析后的溶液在50℃下减压浓缩，使蛋白质浓度提高。
6. 纯化：将浓缩后的溶液加入适量的丙酮，使蛋白质沉淀。
静置2小时，收集沉淀。
7. 干燥：将沉淀在50℃下真空干燥，得到溶菌酶粉末。
五、实验结果与分析1. 酶解过程中，蛋清逐渐变得透明，表明溶菌酶开始释放。
2. 离心分离后，上清液中溶菌酶浓度较高，下清液中含有其他杂质。
3. 盐析过程中，蛋白质沉淀较多，表明溶菌酶在硫酸铵溶液中具有较好的溶解性。
4. 透析过程中，透析袋中的溶液逐渐变得清澈，表明小分子物质已被去除。
5. 浓缩过程中，蛋白质浓度逐渐提高，有利于后续的纯化。
6. 纯化过程中，丙酮沉淀的蛋白质较多，表明溶菌酶在丙酮中具有较好的溶解性。
7. 干燥后，得到白色粉末，表明溶菌酶已被成功提取。
溶菌酶的制备实验报告
一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取、分离和纯化方法。
2. 掌握酶活性测定和蛋白质浓度测定技术。
3. 了解溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定方法。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种胞壁质酶，具有破坏细菌细胞壁的能力。
本实验采用鸡蛋清为原料，通过提取、分离和纯化等步骤，制备高纯度的溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡蛋清- 酶活性测定试剂盒- 蛋白质浓度测定试剂盒- 溶菌酶纯度鉴定试剂盒- 分子量测定试剂盒2. 实验仪器：- 低温高速离心机- 酶标仪- 荧光分光光度计- 凝胶电泳仪- 凝胶成像系统四、实验方法1. 溶菌酶粗提取（1）取一定量的鸡蛋清，加入适量的生理盐水，搅拌均匀。
（2）将混合液用低温高速离心机以4,000 rpm离心10分钟，取上清液。
（3）用酶活性测定试剂盒检测上清液中的溶菌酶活性。
2. 溶菌酶分离纯化（1）取上清液，加入适量的硫酸铵，使蛋白质沉淀。
（2）将混合液用低温高速离心机以4,000 rpm离心10分钟，取沉淀。
（3）将沉淀用生理盐水溶解，加入适量的G-25凝胶柱，进行凝胶过滤。
（4）收集洗脱液，用酶活性测定试剂盒检测洗脱液中的溶菌酶活性。
3. 溶菌酶纯度鉴定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入溶菌酶纯度鉴定试剂盒，进行电泳分析。
（2）观察电泳图谱，鉴定溶菌酶的纯度。
4. 溶菌酶分子量测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入分子量测定试剂盒，进行SDS-PAGE电泳分析。
（2）观察电泳图谱，计算溶菌酶的分子量。
5. 溶菌酶活性测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入酶活性测定试剂盒，进行酶活性测定。
（2）记录酶活性值。
6. 溶菌酶蛋白浓度测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入蛋白质浓度测定试剂盒，进行蛋白浓度测定。
（2）记录蛋白浓度值。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取上清液中溶菌酶活性为XX单位/mL。
2. 溶菌酶分离纯化洗脱液中溶菌酶活性为XX单位/mL。
3. 溶菌酶纯度鉴定电泳图谱显示，溶菌酶的纯度为XX%。
溶菌酶的提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取方法。
2. 掌握溶菌酶的分离纯化技术。
3. 了解溶菌酶的性质及其应用。
二、实验原理溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的胞壁质酶，具有水解细菌细胞壁肽聚糖的活性。
本实验通过利用溶菌酶在特定条件下的溶解度差异，对其进行提取、分离和纯化，并对其性质进行初步研究。
三、实验材料1. 鸡蛋2. 醋酸3. 硫酸铵4. 氯化钠5. 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）6. 透析袋7. 旋转蒸发仪8. 超速离心机9. 分光光度计10. 紫外-可见光分光光度计四、实验方法1. 溶菌酶粗提取（1）将鸡蛋打破，取蛋清，加入适量的醋酸，搅拌均匀，室温下静置30分钟。
（2）用滤纸过滤混合液，收集滤液。
（3）向滤液中加入硫酸铵，使蛋白质盐析，室温下静置30分钟。
（4）用滤纸过滤沉淀，收集滤液。
2. 溶菌酶分离纯化（1）向滤液中加入适量的氯化钠，使蛋白质复溶，室温下搅拌30分钟。
（2）用透析袋将溶液进行透析，去除小分子物质。
（3）将透析后的溶液进行超速离心，收集沉淀。
（4）向沉淀中加入适量的磷酸盐缓冲液（pH 7.0），使蛋白质复溶。
（5）用旋转蒸发仪将溶液浓缩至一定体积。
3. 溶菌酶性质研究（1）测定溶菌酶的蛋白浓度。
（2）测定溶菌酶的酶活性。
（3）测定溶菌酶的分子量。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取通过实验，成功从鸡蛋清中提取出溶菌酶，得到淡黄色的粗提液。
2. 溶菌酶分离纯化通过盐析、透析和超速离心等步骤，成功将溶菌酶从粗提液中分离纯化，得到淡黄色的纯化液。
3. 溶菌酶性质研究（1）蛋白浓度：根据比色法测定，溶菌酶的蛋白浓度为1.5 mg/mL。
（2）酶活性：根据溶菌酶对革兰氏阳性菌的溶解作用，测定酶活性为100 U/mL。
（3）分子量：根据SDS-PAGE电泳结果，溶菌酶的分子量为14.3 kDa。
六、实验讨论1. 本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的来源，具有良好的可行性和经济性。
2. 在溶菌酶的提取过程中，醋酸和硫酸铵的加入有助于提高溶菌酶的提取率。
蛋清溶菌酶分离实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握溶菌酶的提取、分离纯化技术。
2. 掌握电渗析/超滤内在耦合（EDUF）技术在分离蛋白中的应用。
3. 分析实验过程中影响分离效果的因素，优化实验条件。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种天然碱性蛋白质，具有抗菌、消炎和抗病毒等功能。
溶菌酶广泛存在于鸡蛋清中，含量丰富。
本实验采用EDUF技术，利用溶菌酶与卵白蛋白（OVA）在特定pH条件下的荷电性及分子量差异，从鸡蛋清中分离提取溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、PVDF100超滤膜、氯化钠、磷酸缓冲液、溶菌酶标准品等。
2. 实验仪器：电渗析/超滤装置、电子天平、pH计、分光光度计、离心机、恒温水浴锅等。
四、实验步骤1. 预处理：将鸡蛋清用4层纱布过滤，去除杂质。
2. 调节pH值：将过滤后的鸡蛋清用1 mol/L的HCl溶液调节pH值至7.0。
3. 电渗析/超滤：将调节pH值后的鸡蛋清加入EDUF装置中，设置操作电压为5.0V，原料室和回收室料液流量均为50mL/min，进行电渗析/超滤。
4. 收集溶菌酶：将电渗析/超滤后的溶液用离心机离心，收集沉淀。
5. 纯化：将沉淀用磷酸缓冲液（pH值为8.0）溶解，通过离子交换树脂纯化溶菌酶。
6. 活性测定：采用分光光度法测定溶菌酶的活性。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶回收率：在操作电压为5.0V，采用PVDF100超滤膜，原料室和回收室料液流量均为50mL/min的条件下，溶菌酶的回收率可达21.05%。
2. 溶菌酶纯度：经纯化处理后，溶菌酶的纯度可达100%。
3. 溶菌酶活性：通过分光光度法测定，溶菌酶的活性为2.30U/mg。
4. 影响分离效果的因素分析：（1）pH值：溶菌酶在pH值为8.0时活性最高，因此在纯化过程中将pH值调节至8.0。
（2）操作电压：操作电压越高，溶菌酶的回收率越高，但电压过高会导致溶菌酶变性，因此选择5.0V为最佳操作电压。
（3）超滤膜材料：PVDF100超滤膜对溶菌酶的截留效果较好，因此选择该膜材料。
第七组 从蛋清中提取溶菌酶并分离纯化的实验方案
分子生物学实验设计方案蛋清溶菌酶的分离纯化·············蛋清溶菌酶的分子量鉴定···········组长：喻芳组员：蒙秋萍安贵杰何玉叶刘飞从蛋清中提取溶菌酶并分离纯化【实验目的】1. 掌握离子层析分离纯化溶菌酶的原理以及离子交换层析的操作方法2. 理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）测定蛋白质纯度与分子量的原理3. 掌握电泳原理以及SDS－PAGE垂直板电泳分离蛋白质技术【实验原理】溶菌酶（lysozyme）是由弗莱明在1922年发现的，它是一种有效的抗菌剂，全称为1,4-β-N-溶菌酶，又称作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁质酶。
活性中心为天冬氨酸52和谷氨酸35，是一种糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖（NAG）与N-乙酰胞壁酸（NAM）间的β-1，4糖苷键，相对分子质量14700Da，由129氨基酸残基构成，由于其中含有较多碱性氨基酸残基，所以其等电点高达10.8左右，最适温度为50O C，最适PH为6～7左右。
在280nm 的消光系数[%1cm1A]为13.0。
该酶活性可被一些金属离子Cu2+、Fe2+、Zn2+（10-5～10-3M）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制，能被Mg2+、Ca2+（10-5～10-3M）、NaCl所激活。
溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，鸡蛋(含量约为2%～4%)和哺乳动物的乳汁是溶菌酶的主要来源，目前，溶菌酶仍属于紧销的生化物质，广泛应用于医学临床，具有抗感染、消炎、消肿、增强体内免疫反应等多种药理作用。
鸡蛋的蛋清中含有丰富的上述物质，本文实验以鸡蛋蛋清为原料，对溶菌酶进行提取并分离纯化。
溶菌酶常温下在中性盐溶液中具有较高天然活性，在中性条件下溶菌酶带正电荷，因此在分离制备时，先采用等电点法粗分离，再用DE-52纤维素离子交换色谱和葡聚糖G50凝胶层析分离纯化，最后用SDS-PAGE鉴定。
提取溶菌酶的实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握溶菌酶的提取方法；2. 了解溶菌酶的分离纯化过程；3. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法；4. 学习溶菌酶纯度鉴定与分子量测定。
二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，主要存在于鸡蛋清中。
溶菌酶能够水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，导致细菌细胞壁破裂，从而起到杀菌作用。
本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、考马斯亮蓝G-250、邻苯二甲酸氢钾、苯酚、硫酸铜、氢氧化钠、无水乙醇等；2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平等。
四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取（1）取新鲜鸡蛋清，用4倍体积的0.1mol/L的NaOH溶液溶解；（2）将溶液搅拌均匀，置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用等体积的4倍体积的0.1mol/L的HCl溶液调节pH至4.5；（4）将溶液置于高速离心机中，以10000r/min离心30分钟；（5）取上清液即为粗提溶菌酶。
2. 溶菌酶的分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定（1）取粗提溶菌酶溶液，用硫酸铵饱和溶液进行盐析，调节硫酸铵浓度为0.5mol/L；（2）将溶液置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用高速离心机以10000r/min离心30分钟，取沉淀；（4）将沉淀用0.1mol/L的pH 7.0的磷酸缓冲溶液溶解，得纯化溶菌酶溶液；（5）测定酶活力和蛋白浓度，酶活力单位以每分钟产生1μmol的产物为1个单位，蛋白浓度采用考马斯亮蓝G-250法测定。
3. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）取纯化溶菌酶溶液，进行SDS-PAGE电泳分析；（2）根据电泳结果，计算溶菌酶的分子量；（3）根据纯化溶菌酶溶液的蛋白浓度和酶活力，计算溶菌酶的纯度。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取通过实验，成功提取了鸡蛋清中的溶菌酶，提取率为0.5%。
药用溶菌酶提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握药用溶菌酶的提取方法。
2. 了解溶菌酶的性质及其在医药领域的应用。
3. 通过实验操作，提高实验技能和科学思维。
二、实验原理溶菌酶是一种能够水解细菌细胞壁中肽聚糖的酶，具有广谱抗菌作用。
本实验采用酶法提取药用溶菌酶，通过优化提取条件，提高溶菌酶的提取率和纯度。
三、实验材料与仪器材料：1. 鸡蛋（新鲜）2. 0.1mol/L的磷酸缓冲液（pH 7.0）3. 1mol/L的NaCl溶液4. 5mol/L的醋酸溶液5. 95%乙醇6. 10%的硫酸铵溶液7. 0.1%的吐温-80溶液8. 2%的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）溶液仪器：1. 研钵2. 电子天平3. 电动搅拌器4. 离心机5. 超声波清洗器6. 药用溶菌酶纯度鉴定仪7. 分光光度计四、实验步骤1. 粗提取1. 将新鲜鸡蛋打入烧杯中，加入等体积的0.1mol/L的磷酸缓冲液（pH 7.0），充分搅拌。
2. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质充分溶解。
3. 将混合液以3000r/min离心10分钟，取上清液即为粗提取液。
2. 分离纯化1. 向粗提取液中加入等体积的1mol/L的NaCl溶液，充分搅拌，使蛋白质盐析。
2. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质沉淀。
3. 将混合液以3000r/min离心10分钟，取沉淀。
4. 向沉淀中加入5mol/L的醋酸溶液，使蛋白质溶解。
5. 向溶液中加入95%乙醇，使蛋白质沉淀。
6. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质沉淀。
7. 将混合液以3000r/min离心10分钟，取沉淀。
8. 向沉淀中加入10%的硫酸铵溶液，使蛋白质沉淀。
9. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质沉淀。
10. 将混合液以3000r/min离心10分钟，取沉淀。
11. 向沉淀中加入0.1%的吐温-80溶液，使蛋白质溶解。
12. 向溶液中加入2%的PVP溶液，使蛋白质沉淀。
13. 将混合液在4℃下放置2小时，使蛋白质沉淀。
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究蛋清是一种富含蛋白质的食品，其中含有一种叫做溶菌酶的酶类物质。
溶菌酶具有很强的抗菌作用，可以在食品加工和医药领域中发挥重要的作用。
因此，对蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究具有重要的意义。
一般来说，蛋清中溶菌酶的提取方法可以分为化学法和物理法两种。
化学法主要是利用酸、碱等化学试剂来提取溶菌酶，但这种方法存在一定的毒性和污染性，不太适合在食品加工中使用。
物理法则是利用高压、超声波等物理手段来破坏蛋白质的结构，使溶菌酶释放出来。
这种方法相对来说比较安全，但提取效率较低。
为了提高蛋清中溶菌酶的提取效率，研究人员提出了一种新的方法，即利用离子交换色谱技术来提取溶菌酶。
这种方法利用离子交换树脂将蛋清中的溶菌酶吸附在树脂上，然后通过洗脱的方式将溶菌酶从树脂上释放出来。
这种方法具有提取效率高、操作简单、无毒无害等优点，因此在实际应用中得到了广泛的应用。
除了提取方法的研究外，对蛋清中溶菌酶的定量测定方法也是非常重要的。
目前常用的定量方法有比色法、荧光法、酶联免疫吸附法等。
其中，比色法是一种简单易行的方法，可以通过测定溶菌酶与底物反应后产生的色素来确定溶菌酶的含量。
荧光法则是利用荧光染料与溶菌酶结合后产生的荧光信号来测定溶菌酶的含量。
酶联免疫吸附法则是利用特异性抗体与溶菌酶结合后产生的信号来测定溶菌酶的含量。
这些方法各有优缺点，可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
总之，蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究对于食品加工和医药领域具有重要的意义。
未来，我们可以继续探索新的提取方法和测定方法，以提高溶菌酶的提取效率和测定精度，为人类健康和生活带来更多的福利。
鸡蛋提取溶菌酶的方法
鸡蛋提取溶菌酶的方法鸡蛋白是一种丰富的蛋白质源，其中含有溶菌酶（lysosome），可以在细菌和真菌的溶解中发挥重要作用。
溶菌酶是一种具有溶菌、抗菌活性的酶类。
鸡蛋提取溶菌酶的方法主要包括以下几个步骤：1. 鸡蛋的分离：首先将新鲜的鸡蛋进行分离，只保留蛋清（蛋白质）部分，去除蛋黄。
2. 蛋清处理：将蛋清中的蛋白质与溶菌酶分离，可以采用酸碱沉淀法。
将蛋清加入适量的酸（如醋酸）中，使酸度下降到pH 4以下，随后使用碱（如氢氧化钠）中和酸性溶液，使溶液pH回升到中性左右。
这一过程中，溶菌酶会发生沉淀现象，可以方便地分离出来。
3. 溶菌酶的除杂：蛋清中可能还存在其他酶类或蛋白质，为了获得纯净的溶菌酶，可以进行一轮或多轮的洗涤与纯化。
例如，可以使用盐析法，通过逐渐增加溶液中的盐浓度来沉淀溶菌酶，然后用溶液洗涤沉淀物，最后得到纯净的溶菌酶。
4. 溶菌酶的浓缩与干燥：将纯净的溶菌酶溶液通过浓缩技术（如超滤或冷冻干燥）使溶液浓度增大，得到较为浓缩的溶菌酶溶液。
5. 溶菌酶的活性测定：对提取得到的溶菌酶进行活性测定，可以通过测定其对特定底物的溶解能力来评估溶菌酶的活性。
常见的测量方法包括显色法和滴定法等。
鸡蛋提取溶菌酶的方法相对简单，但有一些需要注意的注意事项：1. 鸡蛋的新鲜度对溶菌酶的提取效果有一定影响，新鲜的鸡蛋中溶菌酶的含量较高。
因此，在进行实验时应选择新鲜的鸡蛋。
2. 溶菌酶的活性与条件相关，如温度、酸碱度等。
在提取过程中需要控制好这些条件，以保证溶菌酶的稳定性和活性。
3. 提取得到的溶菌酶需储存于低温（通常-20C）下，否则易失活。
4. 鸡蛋中的蛋白质含量较高，在提取过程中需要留意对蛋白质的处理，避免产生其他影响或污染。
需要特别注意的是，提取溶菌酶并非只有上述方法，还可以根据实际需要结合其他技术和方法进行提取，例如离心、层析、电泳等。
总结起来，鸡蛋提取溶菌酶的方法包括鸡蛋的分离、蛋清处理、溶菌酶的除杂、溶菌酶的浓缩与干燥以及溶菌酶的活性测定等步骤。
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化
四、实验材料和方法
四、实验材料和方法
1、实验材料：新鲜鸡蛋、磷酸缓冲液（PBS）、乙酸乙酯、正丁醇、蛋白酶 抑制剂、透析袋。
四、实验材料和方法
2、实验设备：高速离心机、真空泵、氮气仪、色谱柱。 3、实验方法： （1）鸡蛋卵清的收集：将新鲜鸡蛋打破，分离出卵黄和卵清， 收集卵清备用。 （2）粗提：将收集的卵清加入磷酸缓冲液（PBS），搅拌均匀 后进行高速离心，取上清液即为粗提液。 （3）沉淀：向粗提液中加入等体积的 乙酸乙酯，充分混合后静置分层，取下层沉淀。 （4）
鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与 纯化
目录
01 一、背景介绍
03 三、实验原理
02 二、研究目的 04 四、实验分析
07 参考内容
06 六、结论与展望
一、背景介绍
一、背景介绍
溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的天然抗菌酶，具有抗菌、抗炎、抗病毒 等多种生物活性。近年来，随着人们对食品安全和药物研发的度不断提高，从天 然生物资源中提取和纯化溶菌酶成为了一个热门领域。鸡蛋卵清作为一种丰富的 天然资源，具有较高的溶菌酶含量，因此成为了提取和纯化溶菌酶的重要来源。 本次演示旨在探讨鸡蛋卵清中溶菌酶的提取与纯化方法，以期为相关领域的研究 提供参考。
四、实验材料和方法
复溶：将沉淀物真空干燥后，加入适量正丁醇溶解，再加入透析袋中透析去 除小分子杂质。 （5）色谱分离：将透析后的溶液通过色谱柱进行分离，收集流 出液，检测其中溶菌酶的纯度和含量。 （6）鉴定：采用光谱分析、分子量测定 等方法对纯化的溶菌酶进行鉴定。
五、实验结果及分析
五、实验结果及分析
二、研究方法与技术
1、材料与设备
1、材料与设备
本研究采用新鲜鸡蛋作为原料，使用离心机、分光光度计、电泳仪等设备进 行实验。
鸡蛋清溶菌酶的提取纯化工艺研究
点沉淀相结合的方法可除去大部分杂蛋 白，去除
蛋清的粘度 ，使溶菌酶得到初步的分离和纯化 。 鸡蛋清 溶壁小球菌 ７ ４ ２ 大孔弱酸性阳离子 ２１ ．２预处理条件的确定 ． 清 整 ： 鱼 上清液 垫变 上清 交换树脂 羧甲其纤维素Ｃ ＭＣ 标准溶菌酶 （ 酶活 原蛋 垫 旦 叠登 力＞１０ ０ ０ ０单位／ ｇ 牛肉浸膏 蛋白胨 Ｎ Ｃ（ ｍ ） ａＩ 分 析纯）琼脂 其它试剂均为分析纯 １ 主要仪 器 ． ２ 超净工作 台 隔水式电热恒温培养箱 恒温振荡器
山 东 食 晶 发 苕 莩
２１．（ ０ １４总第１３ ６ 期）
鸡蛋清溶菌酶的提取纯化工艺研究
李书丰
（ 州职业 技术 学 院粮油 食 品系 山东 德州 ２３ ３ ） 德 ５ ０４
摘
要 ：以新鲜 鸡蛋 清为原料 ， 以溶壁小球 菌的茵悬液 为底 物检 测溶茵酶 的活 力。 根据 溶茵酶具有耐热性 、 电点较 高的 等
特点， 用１ ａ Ｉ 先 ％Ｎ Ｃ进行盐溶 ， 再采 用热 变性 （５Ｃ ３ ｉ ７ 。， ｍｎ 等电点沉淀 （．） ）和 ４５ 法除去蛋 清 中大量杂蛋 白， 然后 用７ ４ ２ 弱酸阳
离子树 脂从蛋 清液中吸 附提取 溶 茵酶 ， 起始 缓冲液为１ １ ｍ ｌＬ 、 Ｈ ．４ ／ ｏ ） ｐ ６６ 的磷 酸缓冲液 。 ５（ ／ 再用１％ （ ｉ） Ｏ溶液进行 ｏ Ｎ ｌ Ｓ
２１．（ ０１４总第１３ ６期）
一
山 东 食 晶 发 酵
失活 ，选择以下参数为最佳：
表 ２预 处理最佳条件
合 并洗 脱 峰 处 的洗 脱 液 ，浓 缩 ｌ倍 后 进行 真 ０ 空 冷冻 干燥 。
３ ． ２离子交换树脂的使用
７ ４ 孔 弱 酸 性 阳离 子 交 换 树 脂 的预 处 理 、 ２大 ２１ ．－ 验步 骤 ３实 ２１ ． 鉴别 质 量 ：鸡蛋 清 的稠 度是 最重 要 的指标 ．． １ ３ 转 型
溶菌酶分离技术实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握溶菌酶的提取和分离纯化方法。
2. 了解溶菌酶的生物学特性及其应用。
3. 熟悉实验室基本操作，提高实验技能。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的酶，具有水解细菌细胞壁肽聚糖结构，导致细胞壁破裂而使细菌死亡的作用。
本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，运用盐析、透析、凝胶过滤等方法对其进行分离纯化，并测定其酶活性。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 鸡蛋清- 盐酸、氢氧化钠、硫酸铵、氯化钠、硫酸铜、氢氧化钠、乙醇、丙酮、乙醚等- 溶菌酶标准品- 酶活性测定试剂盒2. 仪器：- 电子天平- 恒温水浴锅- 离心机- 漏斗、滤纸、烧杯、量筒、移液管、滴定管等- 紫外分光光度计- 显微镜四、实验步骤1. 溶菌酶粗提取（1）取新鲜鸡蛋清10g，加入50ml蒸馏水，搅拌均匀。
（2）加入10ml 0.1mol/L盐酸，调节pH至4.5。
（3）室温下搅拌30min，使溶菌酶充分溶解。
（4）加入10g硫酸铵，搅拌溶解，静置过夜。
2. 溶菌酶分离纯化（1）取沉淀物，加入50ml蒸馏水，搅拌均匀。
（2）加入10ml 0.1mol/L氢氧化钠，调节pH至7.0。
（3）透析：将溶液置于透析袋中，放入500ml蒸馏水中，室温下透析过夜。
（4）凝胶过滤：将透析后的溶液上柱，柱材料为Sephadex G-25，洗脱液为0.05mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0）。
（5）收集洗脱峰，用乙醇沉淀，室温下静置过夜。
（6）离心，收集沉淀物，加入适量蒸馏水溶解。
3. 溶菌酶酶活性测定按照酶活性测定试剂盒说明书进行操作，测定溶菌酶的酶活性。
4. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）SDS-PAGE电泳：将分离纯化的溶菌酶样品与蛋白质marker混合，进行SDS-PAGE电泳。
（2）凝胶成像分析：用凝胶成像仪观察电泳结果，计算溶菌酶的纯度。
（3）分子量测定：将溶菌酶样品与蛋白质marker混合，进行SDS-PAGE电泳，根据蛋白质marker的分子量计算溶菌酶的分子量。
蛋清提取溶菌酶技术
（+）加入氯化钠 按每 $,, (- 蛋清溶液加入 +. 氯 化 钠 的 比 例 ，白 蛋 清 溶 液 中 慢 慢 加 入 氯 化 钠 细 粉 ， 边 加 边 搅 拌 ，促 使 氯 化 钠 细 粉 及 时 溶 解 ，以 避 免 局 部 浓度过高或沉淀于容器底部，否则会引起蛋白质的 变性而产生大量的白色沉 !—乙酰胞壁质聚糖 水 解 酶 ，是 一 种 国 内 外 很 紧 销 的 生 化 物 质 ，广 泛 应 用 于 医 学 临 床 。具 有 多 种 药 理 作 用 ，能 抗 感 染 、消 炎 、消 肿 、增 强 体 内 免 疫 反 应 等 ，有 抗 菌 的 作 用 ，常 用 于 五 官 科 多 种 粘 膜 炎 症 ，皮 肤 带 状 疮 疹 等 疾 病 。是 优 良 的 天 然 防 腐 剂 ，可 用 于 食 品 的 防 腐 保 鲜 。尤 其 重 要 的 是 近年来溶菌酶已成为基因工程及细胞工程必不可少 的 工 具 酶 。随 着 生 物 工 程 的 发 展 ，提 取 溶 菌 酶 具 有 重 要的战略意义。
实验室技术手册：从蛋清中提取溶菌酶
实验室技术手册：从蛋清中提取溶菌酶各位看官，今天我们来聊聊如何在实验室里从蛋清中提取溶菌酶。
溶菌酶是一种能分解细菌细胞壁的酶，广泛应用于医药、食品等领域。
而我们从蛋清中提取溶菌酶，不仅可以研究其性能，还可以应用于实际生产中。
下面，就让我来为大家详细介绍这个实验的步骤吧。
第一步，将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。
这一步是为了确保蛋清和蛋黄均匀混合，提高提取效率。
第二步，将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。
这一步是为了提供一个适宜的pH环境，有利于溶菌酶的提取。
第三步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。
这一步是为了将混合液中的固体物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。
第四步，取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。
这一步是为了去除蛋清水溶液中的脂溶性物质，提高溶菌酶的提取纯度。
第五步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。
这一步是为了将混合液中的乙醚和脂溶性物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。
第六步，取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。
这一步是为了保存提取得到的溶菌酶，避免其降解。
总的来说，从蛋清中提取溶菌酶的实验步骤如下：1.将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。
2.将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。
3.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。
4.取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。
5.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。
6.取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。
这样，我们就成功从蛋清中提取出了溶菌酶。
蛋清溶菌酶提取工艺研究
蛋清溶菌酶提取工艺研究摘要从新鲜鸡蛋的蛋清中提取溶菌酶，通过控制温度、调酸和加盐，使溶菌酶得到分离和纯化，最后采用自然干燥的方法制成产品。
关键词溶菌酶；蛋清；提取溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，又称细胞壁溶解酶[1]，它作用于N-乙酰氨基葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1，4糖苷键[2]，能使某些细菌细胞壁中粘多糖成分分解，因而具有溶菌能力。
溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能，处理革兰氏阳性细菌可得到原生质体。
因此，溶菌酶是基因工程、细胞工程中细胞融合操作必不可少的工具酶，同时也是食品工业的防腐剂。
因此，开发溶菌酶具有良好的经济价值。
本文就蛋清溶菌酶的生产工艺进行了研究，现将有关结果报告如下。
1材料与方法1.1原料与试剂鲜鸡蛋（市售）、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、氯化钠、丙酮、724型阳离子交换树脂等，以上药品均为分析纯。
1.2主要仪器分光光度计（7230G型）、搅拌器（200～300rpm）、离心机（4 000rpm）。
1.3菌种藤黄微球菌（Micrococcus luteus），由本室保存。
1.4培养基1.4.1液体培养基。
牛肉膏0.5g，葡萄糖0.1g，氯化钠0.5g，蛋白胨1g，溶于1L水中，分装于三角瓶中，121℃灭菌15min。
1.4.2固体培养基。
牛肉膏5g，葡萄糖1g，蛋白胨10g，琼脂20g，置于1L 水中，加热溶解，分装于三角瓶中，121℃灭菌15min。
1.5酶活力测定方法[3]1.5.1底物的制备。
将微球菌接种于液体培养基扩大培养（28℃，24h），再接种于固体培养基培养（28℃，48h），用无菌水将菌体洗涤，4 000rpm离心10min，弃上清，再洗菌体数次，最后用少量无菌水制成悬液，冷冻干燥即得干菌粉。
取干菌粉5g，加入少量0.1mol/L的pH6.2磷酸缓冲液置于匀浆器或研钵中研磨2min，倾出并稀释至20～25mL，悬液的光密度OD450在0.5～0.7范围为宜。
从蛋清蛋壳中提取溶菌酶的关键技术
从蛋清蛋壳中提取溶菌酶的关键技术2010-03-01 点击数：327华南理工大学食品学院郑建仙鸡蛋清中溶菌酶的含量约为3.5％，是提取溶菌酶的方便来源。
但不同产地的鸡蛋，其蛋清中溶菌酶的含量有所不同。
工业上多采用直接结晶法、亲和色谱法、离子交换法、超滤和亲和色谱联合使用法等方法生产溶菌酶。
●直接结晶法在鸡蛋清中加入5%的NaCl，调节pH到10左右，加入溶菌酶晶种，在0℃—5℃静置结晶，分离蛋清，得到结晶物，经纯化后再进行重结晶。
●离子交换法溶菌酶是一种阳离子型蛋白质。
它由阴离子交换树脂吸附，使其从蛋清中分离出来，然后用0.3mol/L以上食盐水洗脱树脂，洗脱液经透析、超滤、冷冻干燥便得粉状产品。
●亲和色谱法利用酶与底物专一性结合形成复合物的特点，以羧甲基甲壳素（CM-CH）为底物专一性结合溶菌酶，然后用水和稀醋酸洗脱，洗脱液经透析、超滤、喷雾干燥或真空干燥便得粉状产品。
利用亲和沉淀从蛋清中分离溶菌酶也是溶菌酶制备研究的一个热点。
Stermberg等1974年报道了应用聚丙烯酸（PAA）形成PAA-溶菌酶聚电解质复合物。
Chern等于1996年应用pH敏感的亚微粒丙烯酸胶浆以及Eudragit L100作为溶菌酶的沉淀剂。
最近Vaigya等报道采用N-异聚丙烯酰胺与酸性单体的共聚物从蛋清中热沉淀溶菌酶，得到90％的收率。
他们认为使用共聚物从蛋清中热沉淀溶菌酶比使用pH敏感聚合物具有更多的优点，因为后者通常只有较低的得率。
●其他方法用水或稀酸将鸡蛋清稀释2.5—10倍，调整液体pH至2.5—7.0，在此弱酸性水溶液中加入少量钙并加热，使溶菌酶以外的蛋白质大部分凝固，从分离出的上清液和凝固物的洗净液中提取溶菌酶。
Owen等1997年报道，使用连续逆流、膨胀床吸附系统分离溶菌酶，该技术克服了一般填充床柱层析的一些存在问题，诸如填充材料的压实、沟槽的形成和由于上样溶液微粒引起的柱阻塞等。
Ghosh等报道，采用小型的中空纤维超率系统从蛋清干粉中分离溶菌酶。
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究
蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究一、引言蛋清是一种富含溶菌酶的天然源，溶菌酶具有广泛的应用价值，在医药、食品、环境等领域发挥着重要作用。
因此，高效提取蛋清中的溶菌酶，并开发可靠的定量测定方法具有重要意义。
二、蛋清中溶菌酶的提取方法研究进展2.1 传统提取方法1.直接破碎法–原理：将鸡蛋或鸭蛋直接破碎，通过离心等方法分离溶菌酶。
–优点：简单、快速。
–缺点：溶菌酶的提取率和纯度较低。
2.盐析法–原理：通过加入适量的盐类使溶菌酶沉淀，然后进行后续纯化。
–优点：提取率较高。
–缺点：纯化过程繁琐，提取时间较长。
2.2 新型提取方法1.超声提取法–原理：利用超声波作用下产生的微小气泡破坏细胞结构，释放溶菌酶。
–优点：提取效率高，提取时间短。
–缺点：对溶菌酶活性有一定影响。
2.酶解法–原理：使用特定酶解剂使蛋清中的蛋白质部分降解，释放溶菌酶。
–优点：提取效率高，对溶菌酶活性影响较小。
–缺点：酶解过程需要精确控制条件。
三、蛋清中溶菌酶的定量测定方法3.1 比色法1.基于物质的变化–原理：溶菌酶对某种物质具有催化作用，该物质的变化可以被检测器测定。
–优点：操作简单，成本较低。
–缺点：适用范围有限。
2.酶联免疫吸附法–原理：利用特异性抗体与溶菌酶结合，通过测定抗体与酶的结合程度来定量溶菌酶。
–优点：高灵敏度，高特异性。
–缺点：实验操作复杂。
3.2 光学测定法1.比色法–原理：溶菌酶具有特定的吸收光谱，在特定波长下可以测定其浓度。
–优点：操作简单，结果准确。
–缺点：需要专用仪器。
2.荧光法–原理：利用溶菌酶在特定条件下的荧光特性来定量测定其浓度。
–优点：高灵敏度，高选择性。
–缺点：试剂成本较高。
四、结论通过对蛋清中溶菌酶的高效提取方法和定量测定方法的研究，我们可以得出以下结论： 1. 新型提取方法如超声提取法和酶解法可以提高溶菌酶的提取率和提取效率。
2. 定量测定方法如酶联免疫吸附法和荧光法具有高灵敏度和高特异性。
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圈卜２溶菌酶对Ｎ一乙酰葡糖胺底聚物的分解机制 Ｆｉｇｕｒｅｌ－２ Ｔｈｅ Ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆＳｕｂｓｔｒａｔｅ ｂｙ Ｌｙｓｏｚｙｍｅ
在医药上，溶菌酶可与血液中的病毒结合，阻ｌｒ流感、腺病毒等的繁殖：能分解粘多糖， 有利于脓汁、痰液的排出：能清除坏死组织、增进抗生素的药效以及促进肠道有益细菌如乳酸 菌的繁殖等作＿｝｝ｊ。另外，它与抗生素联合虑用还可治疗支气管炎、肺炎、白喉、小儿急性肾炎 等多种疾病（缪辉南，１９８５）。蛀牙的主要原冈是口腔中存在突变链球曲，能把蔗糖合成为葡 萄糖和粘多糖物质。口腔中的细菌与这些物质粘合在一起，并相互凝聚沉积住才齿表面，牙垢 细菌在齿垢中厌氧发酵多糖产生多种有机酸，这些有机酸从牙齿表面的珐琅质中置换出钙，形 成虫牙。若在牙膏、漱口水、口腔清洁剂、口香糖中添加一定量的溶菌酶，Ｊｌ！ＩＪ可以杀，￡这些病 菌，达到防【ｒ虫牙的目的。同样，可用溶菌酶来制眼药水、润喉液。
（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）
研究生签名 导师签名
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年月 同 年月 同
中国农业大学碗．１。学位论文
第一章绪论
第一章绪论
１．１研究目的和意义
１．１．１溶菌酶
溶菌酶Ｅ．Ｃ ３ ２．１．７是糖苷水解酶，别名球蛋向Ｇ．胞壁质酶。Ｎ乙酰胞鼙质聚糖水解酶。 是一种碱性蛋白质，分子量１４０００－１５０００，等电点１１左右。可以溶解革兰氏附｜生曲的细的原因（Ｇｈｕｙｓｅｎ，１９６８）。溶菌酶发挥溶菌 作用的最适ｐＨ值在６．５左右（李宗孝，２００１），其最佳反应温度和进行溶苗作Ｈｊ的温度是一致 的，都要求在低于５００Ｃ范围内。商品溶菌酶是向色冷冻干粉或结晶，溶于水．不溶于丙酮、乙 醚，无臭、味甜。
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西◇ ＣＨ，ｆｌｌ－Ｉ
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豳卜１溶曹酶的分子结构示蠢图 Ｆｉｇｕｒｅ Ｉ－！Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆＬｙｓｏｚｙｍｅ
１．１．２溶菌酶的作用部位
显示溶菌酶溶菌机制的早期研究，主要是用显微镜进行观察的。当细菌细胞用酶处理时， 便出现暂时性膨胀，然后逐渐呈现透明状态。由于包裹细胞的多糖类物质发生变化，细胞通透 性增人，细胞的内含物扩散，可观察到溶菌现象。当时对微生物细胞结构的认识尚不清楚，精
Ｗａｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉａｌ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｏｎ ｒｅｓｉｎ ａｎｄ ｌｙｓｏｚｙｍｅ ｂａｓｉｃ ｇｒｏｕｐ，Ｗｈｉｌｅ Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｌｙｓｏｚｙｍｅ ａｎｄ ｅｇｇ ａｌｂｕｍｉｎ，３００００ Ｄａ ｈｙｐｅｒｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅ
薹地 研究生签名：
时间： 孑村年６月／胡
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ｕｉ打８疗ｉｔ增细．Ｈ．ｅａｔ拉ｅａ台玎ｅｎｔ ｒｅｓｉｎ ｅｘｃｈａｒ，￥ｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ
ｕ６｜ｆｚｅｄ ｔｈｅ ｄｉ疗备ｆｅｎｔ ６ｅｒ、ａｔｕｒａｔｉｃ，ｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｌｙｓｏｚｙｍｅ ａｎｄ ｅｇｇ ａｌｂｕｍｉｎ．Ｉｏｎ ｒｅｓｉｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｍｅｔｈｏｄ
中国农业大学 硕士学位论文 蛋清溶菌酶提取技术的研究 姓名：姜馗 申请学位级别：硕士 专业：食品科学 指导教师：郭顺堂
20050501
摘要
溶菌酶是糖苷水解酶，分子量１４０００Ｄａ～１５０００Ｄａ，溶菌酶能水解Ｎ一乙酰葡萄糖胺与Ｎ一乙酰 胞壁酸之间的Ｂ一１．４糖苷键，因此可以溶解革兰氏阳性菌的细胞壁而具有溶菌作瑚。溶苗酶的用 途很多，它可以作为防腐剂应用在食品、饮料中，在医学上可以用作杀菌剂。
ＫｅｙＷｏｒｄ：Ｌｙｓｏｚｙｍｅ ｈｅａｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｒｅｓｉｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
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Ｙ ７７４３８３
独创性声明
本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。
本研究比较了热处理法、离子交换法和超滤法从蛋清中提纯溶菌酶的效果，深入研究了适合 批量生产溶菌酶的方法。实验结果表明，热处理法得到的溶茁酶的纯度和收率远低丁Ｉ离子交换法， 且调ｐＨ值和热处理对溶簋酶的活性会有很大破坏，并造成了处理后的蛋消无法进行重复利用， 人人降低了实际生产价值。采用离子交换法，用０．２８ｍ０１／Ｌ氯化钠溶液可以将树脂吸附上的溶菌 酶充分洗脱，最佳吸附条件为：常温，树脂和蛋清的体积比为ｉ：６．１８，蛋清ｐＨ值为６，稀释２ 倍，搅拌吸附８０分钟，这时吸附到的溶菌酶的活性和收率是最好的，溶菌酶纯度可达到卣分之 百，最终得到的溶菌酶收率为８６．６％，活性为２００００Ｕ／ｍｇ。超滤法用３００００道尔顿的膜来纯化溶 菌酶，采用连续式方式将蛋清截留液稀释３倍效果较好，最后得到的溶菌酶纯度为１００％，收率为 ７３．１％，活性为１８５００Ｕ／ｍｇ。
ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｆｒｏｍ ｒｅｓｉｎ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ：ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；１：６．１ ８ ｖｏｌｕｍｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ
ｒｅｓｉｎ ａｎｄ ｅｇｇ ｗｈｉｔｅ；ｐＨ６ ｅｇｇ ｗｈｉｔｅ；２ ｔｉｍｅｓ ｄｉｌｕｔｉｏｎ；８０ ｍｉｎｕｔｅｓ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｔｉｍｅ．Ｕｎｄｅｒ ｓｕｃｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，Ｉｔ ｃｏｕｌｄ ａｃｈｉｅｖｅ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｙｉｅｌｄ ｏｆＬｙｓｏｚｙｍｅ，ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｙｉｅｌｄ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ２００００Ｕ／ｍｇ ａｎｄ ８６．６％．ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｒｌｆｙ ｏｆ Ｌｙｓｏｚｙｍｅ ｉｓ １００％．Ｗｈｉｌｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｗｉｔｈ ３００００Ｄｅ ｈｙｐｅｒｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅ，Ｌｙｓｏｚｙｍｅ ｃｏｕｌｄ ｇａｉｎ １００％ｐｕｒｉｔｙ，１８５００Ｕ／ｍｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ７３．１％ｙｉｅｌｄ．
目前已研究过的能溶解微生物细胞壁的溶菌酶可以分为细菌细胞壁溶菌酶、酵母和霉菌细 胞蹙溶菌酶二种。鸡蛋卵清溶菌酶属丁细菌细胞琏溶酶酶。卵清溶菌酶是内一Ｎ一乙酰壁酰胺酶 （Ｂ．Ｈ．ｃＨＩＡＮＧ，１９９３），其主要作用位点是细菌细胞壁１３－１．４糖苷键，溶菌酶的分子结构如图 １－１所示。
细菌细胞肇的主要成分为肽聚糖（Ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｃａｎ）。肽聚糖是由Ｎ一乙酰氮基葡萄糖 （Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ简称ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ一乙酰胞壁酸（Ｎ－ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｉｃ ａｃｉｄ简称Ｍｕｒ Ｎａｃ）和 一种小肽（Ｌ一丙氨酸、Ｄ一谷氨酸、二氨基庚．二酸、赖氨酸或其它氨基酸构成的四肽）构成的。
住食品、饮料中使用溶菌酶，集药理、保健和防腐＝个功能于一体，且做为一种天然蛋闩 质无任何副作用。溶菌酶的加入补充了人体内的１Ｆ特异性免疫网子，杀步Ｅ肠道内的腐败球菌， 维持肠道内菌群正常化，促进舣歧杆菌增殖，增强抗感染力。加入饮料中，如钙奶、乳酸饮料 中．也可起到防蛀牙、爽口的作用。特别是母乳化奶粉，对婴幼儿的成长十分重要。牛奶中的 溶曲酶含茸极少，而母乳中的溶菌酶含簧十分丰富（李桂英，１９９４）。为弥补奶粉的不足，可以 向其中添加适量溶菌酶，制成母乳化奶粉。溶菌酶的加入，可以加强婴幼儿的抗感染能力。
ａｎｄ Ｎ．ａｃｅｔｙｌ ｍｕｒａｍｉｅ ｍｉｄ，ＳＯ ｔｈａｔ ｉｔ ｃａｎ ｄｉｓｓｏｌｖｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｗａｉｌ ｏｆ ｇｒａｍ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ
ｅｘａｍｐｌｅ，ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉｏｌｙｚｅ．Ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｍａｎｙ ａｒｅａｓ，ｆｏｒ
中固农业人学瑚｝：学位论文
第一章绪论
制的溶菌酶在分解过程中是作用细胞质膜还是作用细胞壁多糖，未得到明确答案。其后经历了 相当长的探索阶段，到１９５１年，索尔顿（Ｓａｌｔｏｎ）等人用极近似自然形态的微生物，如巨人芽 孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、溶壁微球菌、藤黄八雹球菌（Ｓａｒｃｉｎａ ｌｕｔｅａ）等，成功地制备了 细胞壁，并观察了细胞壁在溶菌酶作用下完全溶解的情况，从而证明溶菌酶是细菌细胞壁的溶 解酶。后来，魏伯尔（Ｗｅｉｂｕｌｌ）采用不同的方法再次验证了这个结论。例如，他把对数增殖期 的巨大芽孢杆菌的细胞悬浮在Ｍｇ’商渗溶液中，再崩溶菌酶进行处理，发现菌体细胞形成裸褥 的圆形细胞。
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性（ｐＨ７．Ｏ）或酸性（ｐＨ５．０）条件Ｆ均能抑制它的生长。由于溶菌酶的安全性高，近来对用溶 菌酶进行食品防腐的需求与日俱增。
１．１．３溶菌酶的应用
自然界中，溶菌酶普遍存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的鼻涕、唾液、眼泪、尿、 血浆、乳汁、淋巴液及鼻黏膜、肠道、腮腺、白细胞、肺、肝、脾、肾的细胞中，以及植物界 中的卷心菜、萝ｈ、无花果、术瓜、大麦中，但以蛋清中含量晟丰富（李宗孝，２００１），约。々