H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性
温阳散郁法对小鼠H_22肝癌细胞凋亡及增殖关系的实验研究
Tian2 Hua2 Fen
kirilowi) [ J ]. Asian Pac J Allergy I mmunol, 1986, 4 ( 2 ) :
收稿日 期 : 2008 2 022 29;修回日期 : 2008 2 062 23
(编辑 陶 珠)
文章编号 : 1001 - 6910 ( 2008 ) 09 - 0011 - 04
实验研究
温阳散郁法对小鼠
H22 肝 癌 细 胞 凋 亡 及 增 殖 关 系 的 实 验 研
郭勇义
(郑州市中医院 , 河南 郑州 450007)
究
摘要 目的 :探讨《 内经 》 “ 阳化 气 ,阴成形 ” 理论与 细胞凋亡 之间的相应性 ,以为 临床运 用提供 理论 依据 。方 法 : 以 中医 理论为指导 ,以 H 22肝癌瘤株小 鼠为研究对 象 ,采 用 H22小鼠 腹水瘤移植法建模 ,将 75 只昆明种小鼠随机分为模型 对照 、 温阳散郁 、 阴阳双补 、 单纯 温阳 、 单纯 滋阴 等 5 组 ,各组 以相 应药物灌胃 , 连续 7 d; 第 8 天处死 动物取瘤体 称重 , 计算抑 瘤率 ;石 蜡切片 用免疫 组化法 测 B ax蛋白 、 PCNA; 采 用原位 缺口末端标记法测定 凋亡细胞 ,得 出凋 亡指数 。结果 : ① 温 阳散郁组平均瘤重低于 模型组 ; ② 经 秩和检 验 , 温阳散 郁组
参考文献 :
[ 1 ] Shaw PC, Chan WL, Yeung HW , e t al . Minireview: trichosan2 thin2 ap r otein with multiple phar macological prope rtie s[ J ]. Life
Hale Waihona Puke [ 2 ] Leung KN, Yeung HW , Leung S O. The i m munomodula tory and antitumor ac tivity of pr ote in 111 2 120. [ 3 ]W ong YF, W ong W SF, Chen XG, et al . Eva luation of tri2 chosanthin against xenografts of human chorioca rc inoma ce lls[ J ]. Med Sc i R es, 1990, 18 ( 1 ) : 952 96. [ 4 ]M artin SJ, Lennon SV, Bonha m AM, e t a l . Induction of ap 2 optosis (p rogrammed cell death) in human leuke m ic HL 2 60 ce lls by inhibition of RNA or p r ote in synthesis[ J ]. J I mmu 2 nol, 1990, 145 ( 6 ) : 1859 2 1867. [ 5 ] Da rzynkie w icz Z, B runo S, De l B ino G, e t al . Feature s of apop totic ce lls m ea sured by flow cytometry [ J ]. Cytome try, 1992, 13 ( 8 ) : 795 2 808. [ 6 ] Vaux DL , Stra sser A. The molecula r biology of apop tosis[ J ]. P roc Natl A cad Sc i USA, 1996, 93 ( 6) : 2239 2 2244. isolated fr om trichosanthin 2 an abo rtifac ient ( Trichosanrhes
肝细胞癌患者外周血Th22细胞检测及临床意义
肝细胞癌患者外周血Th22细胞检测及临床意义郝猛;施珍;刘晓峰;孙午【摘要】目的探讨肝细胞癌患者外周血Th22细胞表达水平及其临床意义.方法抽取52例肝细胞癌患者、38例慢性乙型肝炎患者、32例健康对照者外周血标本,采用流式细胞术检测Th22细胞水平,ELISA法检测IL-22水平,分析肝细胞癌组Th22细胞、IL-22与肿瘤标志物AFP、CEA、CA199的相关性.结果外周血Th22细胞和IL-22水平在肝细胞癌组、慢性乙型肝炎组显著高于健康对照组(P<0.05),肝细胞癌组略高于慢性乙型肝炎组(P>0.05);肝细胞癌患者外周血Th22细胞和IL-22水平存在正相关(r=0.342,P<0.05),而外周血Th22细胞、血浆IL-22水平与肿瘤标志物AFP、CEA、CA199均无相关性(P>0.05).肝细胞癌组HBV阴、阳性患者间Th22细胞和IL-22水平比较均具有统计学差异(P<0.05).结论 Th22细胞在肝细胞癌外周血中呈高水平表达,且与乙型肝炎病毒携带可能相关,但与血清肿瘤标志物无相关性,提示该细胞可能参与了肝细胞癌的发生和进展.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2017(035)004【总页数】4页(P499-501,542)【关键词】肝细胞癌;Th22细胞;IL-22;相关性【作者】郝猛;施珍;刘晓峰;孙午【作者单位】九江市第一人民医院/南昌大学附属九江医院检验科,江西九江332000;九江市第一人民医院/南昌大学附属九江医院检验科,江西九江 332000;九江市第一人民医院/南昌大学附属九江医院检验科,江西九江 332000;九江市第一人民医院/南昌大学附属九江医院检验科,江西九江 332000【正文语种】中文【中图分类】R446.62;R735.7肝癌是人类常见的恶性肿瘤，也是癌症患者死亡的主要病因之一。
流行病学研究证实肝癌发生率持续上升，我国原发性肝癌在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌，位居第二位；原发性肝癌90%以上为肝细胞癌(HCC），而乙型肝炎病毒(HBV)长期慢性感染是肝细胞癌的主要致病因素。
小鼠肝癌H22细胞克隆株的RAPD分析
【 键 词 】 小 鼠肝 癌 Ｈ ２ 克 隆 细 胞 株 ； 机 扩 增 多 态性 Ｄ Ａ Ｒ Ｐ ）遗 传 检 测 关 ２； 随 Ｎ （ＡＤ ； 【 图 分 类号 】Ｒ一３ 中 ３ 【 献 标 识 码 】Ａ 文 【 章 编 号 】１７－８６ ２０ ）３ １８０ 文 ６ １ ５ （０７０ － ２—３ ７ ０
ｆｕ ｌｎ ｅｌｓｒｉ ｓ ｏ ｒｃｏ ａ ｃ ｌ ｔａｎ ．Ａ ｌ ｂ ｎ ｒｆｌ ｒ ｂ ｅ ｖ ｄ ｆｒ ａｌｔ ｅ ｐ ｉ ｒ ｔ ｅ ｔｔ ｕ ｅ ｆｂ ｎｄ ｅ ｒｍｅ ａｙｎ ｌ ｍｕｔ ａ ｄ ｐ ｏ ｅ ｗｅｅ ｏ ｓ ｒｅ ｏ ｌ ｒｍｅｓ ｗｉｈ ｔ ｏｌ ｎ ｍｂ ｒｏ ａ ｓｐ ｒ ｐ ｉ ｉ ｈ ｈ ｅ ｉ ｒ ｖ ｒ ｉｇ ｆｏ ４ ｔ ０ ｍｏ ｔ ｒｍ ｏ １ ｓｌ ａ ｄ ｔ ｅｅ ｂ ｎ ｓｒ ｎ ｅ ｒｍ ０ ｐ ｔ ｋ Ｔ ｅ ａｔｒ ｔ ｎ ｘ ｉｉ ｄ ｉ ｈ ｕ ｏ ａ ｅｌｌ ｅ ｎ ｌｄ ｄ ｔｅ ｙ． ｎ ｈ ｓ ａ ｄ ａ ｇ ｄ ｆｏ ２ ０ｂ ｏ２ ｂ． ｈ ｅａｉ ｓｅ ｈｂｔ ｎ ｔｅ ｆ ｒｃ ｎ ｌｃ ｌ ｉ ｓｉ ｃｕ ｅ ｈ ｌ ｏ ｅ ｏ ｎ ｌｓ ｆｂ ｎ ｓ，ｓ ｉｔｏ ａ ｄ ｎ ｎｅ ｓｔ ｈ ｎ ｅ ｆｂ ｎ ｓ Ｃｏｎ ｌｓｏ Ｄｉ ｅｅ ｃ ｎ ｇ ｎ ｍｉ ｏ ｓｏ ａ ｄ ｈｆ ｆｂ ｎ ｓａ ｄ ｉｔｎ ｉｙ ｃ ａ ｇ ｓｏ ａ ｄ ． ｃｕ ｉ ｎ ｆ ｒｎ ｅ ｉ ｅ ｏ ｃ ＤＮＡｓｏ ｏ ｒｃ ｎ ｅｌｓｒ ｉｓ ｆｕ ｏ ａ ｃ ｌ ｔａｎ ｆ ｌ
（ ｐ ｒ ｎ ｆＬ ｂ ｒｔｒ ｎｍａ ｆＨ ｂ ｉ ｄｃｌＵ ｉｅｓｔ，Ｓ ｉａｈ ａ ｇ０ ０ １ Ｄｅａｔ ｔ ａ ｏａｏｙＡ ｉ ｌ ｅ ｅ Ｍｅｉａ ｎｖ ｒｉ ｍｅ ｏ ｏ ｙ ｈ ｉｚｕ ｎ ５ ０ ７，Ｃ ｉａ ｊ ｈｎ ）
H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性的开题报告
H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性的开题报告一、研究背景和意义肝癌是目前全球常见的恶性肿瘤之一，也是我国癌症死亡率排名第二的癌症类型。
虽然早期诊断和治疗技术不断发展，但仍有部分患者尤其是晚期患者因为肝癌实验性肺转移而失去了治疗机会和生存机会。
因此，探究肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性具有重要的临床意义。
目前已经有一些研究探究过肝癌细胞接种数与实验性肺转移的关系，但是由于各项研究的研究对象和方案差异较大，因此对于每种肝癌细胞类型具体的接种数与实验性肺转移的相关性仍然不是非常清楚。
此外，还有一些关于肝癌细胞接种数与其他组织器官的转移关系的研究，但是是否能够推广到肝癌实验性肺转移上也需要进一步研究。
因此，本研究旨在探究H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性，为未来的临床治疗提供重要参考依据。
二、研究内容和方法1.研究内容本研究将H22小鼠肝癌细胞接种到小鼠体内，通过调整接种数量和时间，观察小鼠的肺转移情况，探究接种数量与转移程度的相关性。
同时，还将对不同时间内接种数量相同的小鼠的肺转移情况进行比较，以探究接种时间与转移程度的相关性。
2.研究方法（1）实验动物的选取选取理想的实验动物对于肝癌细胞接种数与实验性肺转移的研究非常关键。
本研究将选用雄性BALB/c小鼠，年龄8~12周，体重在20g左右。
全部实验动物将被分为两个组别，接种小鼠组和对照组。
（2）肝癌细胞接种将选用H22小鼠肝癌细胞培养，与PBS混合，制成50μl/~10^6的单细胞悬液，并注入BALB/c小鼠的耳静脉中。
（3）观察和记录观测小鼠肺转移情况，定期记录小鼠体重、存活率等实验结果。
通过HE染色对小鼠肺转移部位的组织形态进行检查，以确定是否存在肺转移。
（4）数据分析与统计采用描述性统计分析和方差分析方法，对实验数据进行统计学分析，以得出结论。
三、研究预期结果本研究将探究H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性，预期结果为：（1）肝癌细胞接种数与实验性肺转移程度呈正相关。
h22细胞
H22细胞一、H22细胞简介H22细胞是一种常用于肿瘤研究的细胞系，源自小鼠Hepatocellular Carcinoma（肝细胞癌）。
它具有快速生长速度和高度恶性的特点，被广泛用于体内外实验模型中。
H22细胞的研究有助于深入了解肿瘤的发生机制，为癌症的治疗提供重要参考。
二、H22细胞的特性H22细胞具有以下特性：1.快速增殖：H22细胞在适宜的培养条件下，具有高度的增殖能力，可以迅速形成细胞层。
2.恶性程度高：H22细胞具有恶性度高的特点，具有侵袭性和转移性。
3.稳定性：H22细胞在传代过程中能够保持相对稳定的遗传特性，适合长期培养和研究。
4.适应性广：H22细胞对不同培养基和培养条件具有一定的适应性，适合于不同类型的实验研究。
三、H22细胞在肿瘤研究中的应用H22细胞在肿瘤研究中具有重要的应用价值：1.肿瘤模型：H22细胞可以用于建立动物肿瘤模型，模拟肝细胞癌的生长和发展过程，为药物筛选和疗效评价提供可靠的实验基础。
2.肿瘤治疗研究：通过对H22细胞的培养和研究，可以探究潜在的抗肿瘤药物、新治疗方法和机制，为肿瘤治疗领域的研究提供重要参考。
3.肿瘤发生机制研究：通过研究H22细胞的生长、转移和侵袭机制，有助于深入了解肝细胞癌等肿瘤的发生发展机制，为肿瘤基础研究提供实验数据支持。
四、结语H22细胞作为一种重要的肿瘤细胞系，在肿瘤研究领域发挥着重要的作用。
通过对H22细胞的研究，不仅可以深入了解肿瘤的病理生理特点，还可以为肿瘤治疗和预防提供科学依据。
未来，随着技术的不断进步和研究的深入，相信H22细胞的研究将为肿瘤领域的发展做出更大的贡献。
小鼠肝癌原位移植模型的建立及其意义的研究
小鼠肝癌原位移植模型的建立及其意义的研究项亮亮;侯杰;王婕;焦成斌【摘要】目的:探讨用肝癌H22细胞建立小鼠肝癌原位移植模型.方法:将肝癌H22细胞注入小鼠腹腔内,建立异位移植模型;抽取腹水中癌细胞接种于小鼠肝实质内,建立原位移植模型.结果:移植后10d可扪及肿瘤生长,模型成功率94.4％;晚期自发转移率79.4％,腹水产生率35.3％,无自发消退;移植瘤保持甲胎蛋白(AFP)、异常凝血酶原(DCP)高分泌及γ-氨基酰转氨酶(γ～GT)同工酶阳性的特点;模型平均自然生存期28d.结论:小鼠肝癌原位模型成功率高,易于制作,生物学特征符合模拟人类肝癌在体内发生发展的全过程,可成为今后人类研究肝癌的重要动物模型.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2015(038)006【总页数】2页(P48-49)【关键词】肝癌;H22细胞;原位移植模型;小鼠【作者】项亮亮;侯杰;王婕;焦成斌【作者单位】佳木斯大学附属第一医院普外二科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院普外二科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院普外二科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院普外二科,黑龙江佳木斯154003【正文语种】中文【中图分类】R735.7肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一，因其发病率高、恶性程度高、死亡率高，素有“癌中之王”的称号[1]。
目前已有大量研究为肝癌临床的治疗提供基础依据，而肝癌动物模型一直是肝癌临床与基础研究工作的重要工具。
目前有关人肿瘤转移模型大多是用裸大鼠、裸小鼠,动物肿瘤则多数是用Wistar或SD大鼠建立的,而用小鼠建立原位肿瘤移植模型国内外报道较少。
小鼠作为一种更经济，易饲养，易获得的实验研究载体，在发挥其普遍应用性方面有着重大的作用。
小鼠肝癌原位移植模型作为一种新型的动物模型是否能更好地模拟人肝癌在体内发生、发展、侵袭及转移的过程，本实验将研究报道如下。
基于ERK介导C-Myc
doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2024.03.024基于ERK介导C-Myc/PD-L1协同作用探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22 肝癌荷瘤小鼠的抑瘤机制杨玉萍段永强白敏冯鑫周楠曹力仁李亚荣马兰（甘肃中医药大学，甘肃省实验动物行业技术中心，兰州 730000）中图分类号R735.7 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2024）03-0586-06［摘要］目的：探讨参芪抑瘤方联合顺铂经ERK介导C-Myc/PD-L1相协途径对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制。
方法：60只SPF级雄性昆明小鼠，采用随机数字表法取10只小鼠作为空白组，其余50只小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型，模型复制成功后将模型小鼠随机分为模型组、顺铂组［2.5×10−3 g/（kg·3 d）］、参芪抑瘤方低［13.515 g/（kg·d）］、中［27.030 g/（kg·d）］、高剂量［54.060 g/（kg·d）］联合顺铂［2.5×10−3 g/（kg·3 d）］组，每组10只，治疗13 d，末次给药24 h后，麻醉处死小鼠，测定小鼠肿瘤抑制率和脾指数、胸腺指数；HE染色观察小鼠肿瘤组织病理学变化；ELISA试剂盒检测肿瘤组织匀浆液中EGF、IFN-γ含量；IHC法和Western blot法检测肿瘤组织中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达；RT-PCR法检测肿瘤组织中ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表达水平。
结果：与空白组相比，模型组小鼠平均体质量和脾脏指数均降低（P<0.05）；与模型组相比，各治疗组肿瘤抑制效果明显，且参芪抑瘤方联合顺铂组以剂量依赖性方式抑制肝癌小鼠肿瘤生长，提高小鼠平均体质量和脾指数、胸腺指数，促进肿瘤细胞坏死，增加坏死面积，降低肿瘤组织中EGF和IFN-γ含量以及p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达和ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表达（P<0.05）；与顺铂组相比，参芪抑瘤方中、高剂量联合顺铂组治疗效果显著，差异具有统计学意义（P<0.05）。
H22昆明鼠肝癌原位模型的建立
鼠 中有 ９ ５只造模成功 ， ２ ２只小鼠 出现肝癌右叶转移。结论 ： Ｈ ２ ２昆明 鼠肝癌原住模 型成功率 高， 成本低 ， 值得推 广 ， 是非 常理
想 的研 究 肝 癌 的 实验 动 物 模 型 。
关 键 词 ：Ｈ ２ ２ ； 肝癌 ； 原位模型 ； 动 物 实验
中图分类号 ： Ｒ ７ ３ ５ ． ７ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ８— ０ １ ０ ４ （ ２ ０ １ ５ ） ０ １— ０ ０ ７ ８— ０ ２
肝膈 面实 质 内 ， 退 出针 头 ， 轻压针眼， 取 灼 红 的铁 丝
展、 侵袭 及转 移 的过程 ， 具有 极 高 的基 础及 临 床应用 价值 ， 尤其值 得 提 出的是在 本实 验造 模过 程 中 ， 笔者 充 分发 挥 了肿瘤 外科 的优 势 ， 采 用无 瘤操 作原 则 ， 有 效 的避 免肿 瘤 细胞 逃 逸及 种植 ， 与 以往 的各 种 造模
方法 比较 ， 有效 的避 免 了肿 瘤 细 道 ， 以 防止 肿 瘤 细胞 逃 逸 ， 发 生 腹 腔种 植 ， 将肝 左 叶轻 轻 送 回腹 腔 ， 查 无 活 动 性 出血 ， 取 １号丝 线 分 别 缝 合 腹 白线 及 皮 肤 ， 再 次消毒 ， 术 毕。
・
７ ８・
黑龙江医药科学 ２ ０ １ ５年 ２月第 ３ ８卷第 １期
Ｈ ２ ２昆 明 鼠肝 癌 原位 模 型 的建 立①
侯 杰， 罗 兰， 焦成 斌 ， 杨彦 民 ， 何其 勇 ， 张 晓丽 ， 刘伟 新
（ 佳 木斯 大学附属 第一 医院普外二科 ， 黑龙江 佳 木斯 １ ５ ４ ０ ０ ３ ）
白色 ， 质硬 ， 造模 成功 ， 成瘤率为 ９ ５ ％ 。病 理 学 观察
H22细胞全细胞抗原致敏树突状细胞的表型分析
H22细胞全细胞抗原致敏树突状细胞的表型分析发表时间：2012-08-22T15:40:23.873Z 来源：《医药前沿》2012年第4期供稿作者：冯钟煦刘剑勇（通讯作者）赵荫农张志明张春燕唐凯[导读] DC摄取H22抗原后细胞表面MHC-抗原肽复合物表达增多，并引发共刺激分子表达改变是DC致敏的可能机制。
（广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科广西南宁 530021）【摘要】目的研究H22小鼠肝癌细胞（H22细胞）全细胞抗原致敏树突状细胞(dendritic cell，DC)前后表面抗原CD11c、CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的变化，探讨H22全细胞抗原致敏DC的机制。
方法以粘附贴壁法由小鼠骨髓细胞获得单核细胞，加入GM-CSF和IL-4诱导单核细胞5天成未成熟DC，用冻融法制备的H22细胞全细胞抗原继续培养2天以致敏。
测定未致敏DC和致敏后DC的纯度（即CD11c的阳性细胞率），以及其中CD80、CD86、CD40、MHCⅡ表达率。
结果致敏DC表面抗原CD80、CD86、CD40和MHCⅡ的表达率分别为(57.55±7.32) %、(54.49±14.20) %、(46.79±8.25) %和(53.94±13.94) %]，未致敏DC表面抗原CD80、CD86、CD40和MHCⅡ的表达率分别为(20.01±5.22) %、(24.56±9.08) %、(18.06±5.13) %和(30.24±8.39) %]。
DC致敏后其表面抗原CD80、CD86、CD40、MHCⅡ表达率均明显升高，且差异有统计学意义（P<0.01）。
结论贴壁法可培养出较高纯度的DC。
反复冻融法制备的H22细胞全抗原可成功致敏DC，且致敏后DC表面抗原C D80、CD86、CD40、MHCⅡ的表达率均明显升高。
DC摄取H22抗原后细胞表面MHC-抗原肽复合物表达增多，并引发共刺激分子表达改变是DC致敏的可能机制。
美洲大蠊多肽PAP—2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究
美洲大蠊多肽PAP—2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究【摘要】本研究旨在探讨美洲大蠊多肽PAP—2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。
首先进行了美洲大蠊多肽PAP—2的提取和纯化工作，然后建立了荷瘤小鼠模型。
随后观察了PAP—2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用，并进行了机制探讨。
实验结果表明，PAP—2对H22荷瘤小鼠具有显著的抑制作用。
结论指出美洲大蠊多肽PAP—2可能具有潜在的抗肿瘤活性，展望未来研究方向为进一步探究其具体作用机制和临床应用前景。
这项研究的重要性在于提供了新的抗肿瘤治疗思路，具有较大的临床应用前景和意义。
【关键词】美洲大蠊多肽PAP—2、H22荷瘤小鼠、抑瘤作用、提取和纯化、荷瘤小鼠模型、机制探讨、实验结果分析、展望未来研究方向、重要性和意义1. 引言1.1 研究背景肿瘤是一种危害人类健康的严重疾病，世界卫生组织统计数据显示，肿瘤已经成为影响人类寿命的主要因素之一。
肿瘤的发生与生长涉及复杂的细胞信号传导通路和调控机制，当前临床治疗肿瘤的方法主要是手术切除、放射治疗和化疗，然而这些治疗方法往往伴随着严重的副作用和复发率较高的问题。
美洲大蠊是一种常见的害虫，在传统中医药中被广泛应用。
研究表明，美洲大蠊体内含有多种具有抗菌、抗炎和抗肿瘤活性的生物活性物质，具有很好的药用价值。
美洲大蠊多肽PAP—2是一种具有抗肿瘤活性的生物活性物质，已经引起了科学家们的广泛关注。
本研究旨在探究美洲大蠊多肽PAP—2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其可能的机制，为发展新的肿瘤治疗方法提供理论和实验依据。
1.2 研究目的本研究旨在探究美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用机制，从而为开发新的抗肿瘤药物提供理论依据和临床应用价值。
具体目的包括：1. 研究美洲大蠊多肽PAP-2的提取和纯化方法，确保实验所用样品的纯度和有效性；2. 建立H22荷瘤小鼠模型，为后续的抗肿瘤实验奠定基础；3. 观察美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用，包括肿瘤体积、生长速度和生存周期等指标的变化；4. 探讨美洲大蠊多肽PAP-2的抗肿瘤机制，为其临床应用提供理论支持；5. 对实验结果进行详细的数据分析，评估美洲大蠊多肽PAP-2在抗肿瘤治疗中的潜力和优势。
四君子汤对小鼠H22肝癌细胞肺转移的作用
实验研究论著四君子汤对小鼠H 22肝癌细胞肺转移的作用吕祥1,2李柏2凌昌全2,3,4*易婷娇21上海中医药大学附属市中医医院上海2000712第二军医大学附属长海医院3第二军医大学4上海市高校中医内科学E 研究院摘要:[目的]探讨四君子汤(Sijunzi Decoction,SJ)对小鼠H 22肝癌细胞实验性肺转移的影响。
[方法]建立小鼠实验性肺转移模型,用药后观察两个不同时间点肺表面转移结节的大小、数目及转移程度;ELISA 法检测外周血中细胞间粘附分子1(ICAM 1)、白介素2(IL 2)的表达情况。
[结果]四君子汤(SJ)能降低肺转移率,优于替加氟(F T 207)及生理盐水(NS )组。
2周后SJ 组、FT 207组肺转移结节数目分别为6125和6222,均低于NS 组(7335)(P <005);胸腺指数FT 207组较NS组、SJ 组明显降低(P <001);血清中IL 2表达的量各组间无统计学意义(P >005),ICAM 1表达的量SJ 组明显低于其他组(P <001)。
4周后SJ 组肺转移结节数目为6327,明显低于NS 组(7832)和F T 207组(7735)(P <001);脾脏指数FT 207组比其他组明显降低(P <001);血清中SJ 组IL 2表达的量明显高于其他组(P <001),ICAM 1表达的量明显低于其他组(P <001)。
[结论]四君子汤能抑制小鼠实验性肺转移,其机制可能是提高机体的免疫能力,调节肿瘤细胞黏附分子表达,避免肿瘤细胞从原发灶的脱落,并抑制肿瘤细胞与基质和内皮细胞的黏附,从而阻止肿瘤细胞的转移。
关键词:四君子汤;肝癌;肿瘤转移;细胞间粘附分子1;白介素2中图分类号:R7357文献标识码:A文章编号:10055509(2010)06083903Eff e ct of S ijunz i Dec oction (S J)on He patoma 22Meta stasis in Mice Lv Xiang 1,Li Bai 2,Ling Changquan 2,e t al 1Shanghai Medical University Af f iliated H ospita l of C hine se Me dicine(200071);2S e cond Milita ry Medic a l Unive r sityAbstra c t:[Objective ]To observe the effec t of Sijunzi Dec oc tion (SJ)on H epatoma 22(H22)metastasis in mic e.[Methods]The mouse experim e ntal pulmonar y metastatic model was established and t hen t he mice were give n Sijunz i Decoction by intr agastric ad ministr ation.After two var ious times t he size and number and the aggr avation grade of metastatic nodes on lung sur fac e were ob serve d;ELISA method was used to detect the expr essions of ICAM 1and IL 2in per ipher al blood of mouse .[Results]Sijunzi De coction Group wa s significant ly better tha n other gr oups on decreasing the r a t e of metastat ic focus.After two weeks,number of me tastatic nodes on lung for SJ and FT 207groups was 6125and 6222respectively,t hose wer e lower compared with NS Group (7335);Thymus index numbe r s of F T 207group were lower obviously t han the other groups;expr e ssed qua ntit ies of ICAM 1in SJ group wer e m uch lower than the othe r s.After four weeks,number of metastatic nodes on lung for SJ group was 6327,t hat was lower obviously compared with group FT 207(7735)and NS group (7832);Spleen index numbers of F T 207gr oup was lowe r obviously tha n the other groups;To expr ess quantities of IL 2in serum,SJ gr oup surpassed the others obvi ously,those of ICAM 1were more lower tha n t he others.[Conclusion]Sijunz i Dec oc tion can inhibit the exper iment a l pulmonary met a stasis of mouse.T he m e chanism may be tha t Sijunz i Decoction may boost immune competence of or ganism and pr event the exu viations of tumor cells fr om pr imary car c inoma,inhibit the adhesion of tumor cells to extr a cellular matrix(ECM)and e ndothelial cells,and to pr ohibit the metastasis of tumor cells.Ke y wor ds:Sijunz i Decoction;hepatocellar carcinoma;neoplasma metastasis;ICAM 1;IL 2基金项目上海市教育委员会研究院建设计划项目(N 3)F j I y I f S M (N 3)肝癌的发病率在世界范围内具有逐渐增高的趋势,在我国是常见恶性肿瘤之一,预后较差,而且极易发生转移,肺为首选,一旦发生转移其平均生存期及其5年生存期明显下降。
熊果酸抗肿瘤对小鼠肿瘤生长和肺转移作用
熊果酸抗肿瘤对小鼠肿瘤生长和肺转移作用摘要：目的：探讨熊果酸抗肿瘤对小鼠肿瘤生长和肺转移的作用。
方法：建立60只荷H22肝癌小鼠模型，并将60只实验小鼠平均分为试验1组、试验2组，给予试验1组小鼠熊果酸灌胃，给予试验2组小鼠环磷酰胺灌胃，灌药周期均为两周，末次灌药24小时后，将两种试验小鼠处死，称量小鼠肿瘤病灶质量，对小鼠肿瘤病灶进行病理学检查。
结果：经称量得出试验1组小鼠肿瘤质量明显轻于试验2组小鼠（P<0.05），病学检查结果显示试验1组小鼠的肿瘤细胞数量明显少于试验2组小鼠（P<0.05），试验1组小鼠的肿瘤肺转移发生率为10.0%，低于试验2组小鼠的30.0%。
结论：熊果酸能够抑制荷H22肝癌小鼠肿瘤生长和转移。
关键词：熊果酸；荷H22肝癌小鼠；肿瘤生长；肺转移；作用肝癌是我国临床十分常见的一种恶性肿瘤疾病，具有治疗难度大、病死率高等临床特点，严重威胁患者生命健康[1]。
现阶段手术联合术后辅助放化疗是我国治疗肝癌患者的常用方法，但较长一段时间的临床应用发现，放疗和化疗在杀死肿瘤细胞的同时，也对机体正常细胞造成了不同程度的损害。
熊果酸是一种自植物中提取出来的五环三萜类化合物，近年来大量临床研究报道该种化合物具有良好的抗癌功效，且不良反应少[2]。
为进一步明确该种化合物在恶性肿瘤疾病治疗中的应用价值，我院开展了动物实验研究，现将研究过程及结果做出以下整理汇报。
1资料与方法1.1一般资料实验动物：60只SPF级雄性昆明小鼠，体质量20～25g，周龄6～8周。
1.2研究方法将生长良好的H22肝癌小鼠在无菌条件下解剖，吸取小鼠腹水，并在腹水中加入适量生理盐水进行稀释，调整成每毫升有2x107肿瘤细胞的混悬液，染色后检查存活肿瘤细胞数，确保存活细胞率大于99%。
建立荷H22肝癌小鼠模型，具体建立方法为在每只实验小鼠的腋窝下注射0.2ml肿瘤细胞混悬液。
培养一周后，将60只实验小鼠随机分为试验1组和试验2组，给予试验1组小鼠熊果酸（白色粉末；纯度98%，溶剂：花生油）灌胃，用量为150mg （kg•d），给予试验2组小鼠环磷酰胺（国药准字H20084188；生产单位：浙江海正药业股份有限公司）灌胃，用量为25mg（kg•d）。
h22细胞培养方法
h22细胞培养方法H22细胞是一种来源于小鼠肝癌的细胞系，广泛应用于肿瘤生物学研究中。
本文将介绍H22细胞的培养方法。
一、细胞培养基的配制1.1 选择适合的培养基：常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等，可以根据实验需要选择合适的培养基。
1.2 加入适宜浓度的胎牛血清(FBS)：通常在培养基中加入10%的FBS，以提供细胞所需的营养物质和生长因子。
1.3 加入适量的抗生素：为防止细菌和真菌污染，可加入适量的抗生素，如青霉素和链霉素。
二、细胞的传代与分裂2.1 细胞传代：当细胞达到80%～90%的密度时，可进行细胞传代。
首先用PBS缓冲液洗涤细胞，然后加入胰酶等消化酶，将细胞从培养瓶中剥离下来。
2.2 细胞计数与分裂：将细胞悬浮液放入细胞计数板中进行计数，根据需要的细胞数目，将细胞平均分配到新的培养瓶中。
三、细胞的培养条件3.1 温度：将培养瓶放入37℃的恒温培养箱中，维持细胞的正常生长温度。
3.2 湿度：保持培养箱内的湿度在90%以上，可通过在培养箱内放置一盘含水的容器来增加湿度。
3.3 CO2浓度：大部分细胞需要在含有5% CO2的环境中培养，可通过调节CO2气体的流速来达到合适的浓度。
3.4 传代时间：根据细胞的生长速度和实验需求，一般每2-3天进行一次传代。
四、细胞的检测与鉴定4.1 细胞形态观察：通过显微镜观察细胞的形态，判断细胞的生长状态和纯度。
4.2 细胞活力检测：常用的细胞活力检测方法有MTT法、CCK-8法等，可以评估细胞的活力和增殖能力。
4.3 细胞鉴定：通过免疫组化、流式细胞术等方法对细胞进行鉴定，确保细胞的来源和特性。
五、细胞冻存与解冻5.1 细胞冻存液的配制：将培养基中加入适量的冻存液，如DMSO，将细胞悬浮液与冻存液按一定比例混合均匀。
5.2 细胞的冻存：将混合液加入冻存管中，放入-80℃的冰箱快速冷冻保存。
5.3 细胞的解冻：将冻存管放入37℃水浴中迅速解冻，然后将细胞转移到预先准备好的培养瓶中进行培养。
高压氧暴露下肝癌(H22)固化瘤苗免疫的动物实验研究
Ａｎｉ ａ ｘ ｒｍｅ ａ ｔ ｄ ｎｉ ａｌｌｖ ｒｃ ｎ ｅ （ ２ ｏ ｔａ ｏｕ ｏｌ ｆｃ ｔｏ ｔ ｍ ｏｒ ｍ ｌｅ ｐｅ ｉ ｎｔ ｌｓ ｕ ｙ ｏｎ ａ ｍ ｉ ｅ ａ ｃ ｒ Ｈ２ ） ｆｕｌｒ ｓ ｎｄ ｓ ｉ ｉａ ｉｎ ｕ ｄｉ ｖ ｃ ｉ ｐ ｒ ａ ｉ ｘ ｇ ｎ ｃ ｎｄ ｔｏ ａ ｃｎｅｏｎ ｈｙ ｅ ｂ ｒｃ ｏ ｙ ｅ ｏ ｉｉｎ
和无毒副作用的综合治疗新模式。
关键 词 ： 高压 氧 ； 声 固化 瘤 苗 ； 疫 治 疗 ； 超 免 实验 研 究 中 图 分 类 号 ： ７ ５ ７ Ｒ ５ ． Ｒ ３． ； ４ ９ ６ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ １８ ４ （０ ６ １— ７５０ １ ７－３ ８ ２ ０ ） ９１ ３—３
Ｔｈｉ ｄ ｉ ｉａｒ ｅ ｃ ｒ Ｍ ｌｔ ｙ Ｍ ｄｉａｌＵｎｉ ｅ ｓ ｔ ， ｖ ｒ ｉｙ Ｃｈｏ ｎｇｑ ｎ ４ ００ ｉ ｇ ０ ３７， Ｃｈｉａ） ｎ
Ａ ｓ ａｔＯｂｅｔ ｅ Ｔ ｎ ｅ ｔ ａｅ ｔｅ ａ ｔ ｃｎ ｅ ｒｓ ｌ ｎ ｍｍｕ ｉ ｎ ｆ ｃ ｏ ｌ ａ ｏ ｎ ｏｉ ｉｃ ｔ ｎ ｔｍｏ ａｃ ｅｏ ｂｔ ｃ： ｊ ｃ ｖ ｏｉｖ ｓｉ ｔ ｈ ｎ ｉ ａ ｃｒ ｅ ｕｔ ａ ｄ ｉ ｒ ｉ ｇ — ｓ ｎ ｉｇ ｅｆ ｔ ｆｕｔ ｓ ｕ ｄ ｓ ｌ ｆ ａｉ ｕ ｒ ｃｉ ｆ ｚ ｅ ｒ ｄｉ ｏ ｖ ｎ
ＬＩＮｉｇ ． ＡＯ ｈ ｎ —ｉ ＬＪＱｉｒｉｇ ｎ ＬＩ Ｚ ｏ ｇｌ． — ｎ ｕ
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香贝养荣汤对肝癌小鼠肺转移的作用机制研究
香贝养荣汤对肝癌小鼠肺转移的作用机制研究周瑶1，黄剑阳2，唐毅31.长沙民政职业技术学院医学院，湖南长沙 410004；2.湖南中医药高等专科学校医学院，湖南株洲 412012；3.湖南中医药高等专科学校附属第一医院皮肤科，湖南株洲 412008摘要 目的 探究香贝养荣汤对肝癌小鼠肺转移的作用机制。
方法 选取于2021年3月—2022年3月建立的H22肝癌肺转移小鼠模型32只为研究对象，采用随机数表法分为数量相等的4组，分别为空白对照组、阳性药物对照组（顺铂组）以及香贝养荣汤高剂量组、香贝养荣汤低剂量组，各8只。
香贝养荣汤组灌胃给予对应剂量药物，空白对照组灌胃给予同剂量的蒸馏水，阳性药物对照组经腹腔注射予顺铂。
各组小鼠给药2周后，检测各组小鼠的肺内肿瘤转移数，流式细胞仪检测各组小鼠体内的淋巴细胞CD4+干扰素γ（interferon gamma ， IFN-γ）比例，Westernblot 检测各组小鼠CD45作用底物相关蛋白通路表达水平。
结果 香贝养荣汤组肺部转移病灶数目分别为（195±10）个、（201±18）个，少于空白对照组的（263±20）个，差异有统计学意义（P <0.05）。
香贝养荣汤组CD4+IFN-γ、CD45作用底物相关因子-STATI 水平高于空白对照组，差异有统计学意义（P <0.05）。
结论 香贝养荣汤能够改善肝癌小鼠肺转移情况，缓解小鼠病情，其作用机制可能与淋巴细胞的激活有关。
关键词 香贝养荣汤；肝癌；肺转移；淋巴细胞；作用机制中图分类号 R 737 文献标志码 Adoi10.11966/j.issn.2095-994X.2023.09.08.10Mechanism of Xiangbei Yangrong Decoction on Lung Metastasis of Hepatocellular Carcinoma MiceZHOU Yao 1, HUANG Jianyang 2, TANG Yi 31. Medical College, Changsha Civil Affairs Vocational and Technical College, Changsha, Hunan Province, 410004 China;2. School of Medicine, Hunan College of Traditional Chinese Medicine, Zhuzhou, Hunan Province, 412012 China;3. Department of Dermatology, theAffiliated First Hospital of Hunan College of Traditional Chinese Medicine, Zhuzhou, Hunan Province, 412008 ChinaAbstract Objective To explore the mechanism of Xiangbei Yangrong Decoction on lung metastasis of hepatocellular carcinoma mice. Methods 32 mouse models of lung metastasis of H22 liver cancer were established from March 2021 to March 2022 were selected as the study objects. The random number table method was divided into 4 equal groups : blank control group, positive drug control group ( cisplatin group ), Xiang⁃bei Yangrong Decoction high dose group, Xiangbei Yangrong Decoction low dose group, 8 in each group. Xiangbei Yangrong Decoction groupwas given the corresponding dose of drugs by intragastric administration, blank control group was given the same dose of distilled water by in⁃tragastric administration, and positive control group was given intraperitoneal injection of cisplatin. After 2 weeks of administration, the num⁃ber of lung tumor metastasis in each group was detected, the proportion of lymphocyte CD4+ interferon gamma (IFN-γ) in each group was de⁃tected by flow cytometry, and the expression level of substrate related protein pathway of CD45 in each group was detected by Westernblot. Results The number of lung metastasis lesions in Xiangbei Yangrong Decoction group (195±10) pieces and (201±18) pieces was less than that in blank control group (263±20) pieces, and the difference was statistically significant (P <0.05). The CD4+ IFN-γ ratio, signal transducers and transcriptional activator 1 levels of CD45 substrate-related factor phosphorylation in Xiangbei Yangrong Decoction group was higher than that in blank control group, and the difference was statistically significant (P <0.05). Conclusion Xiangbei Yangrong Decoction can improve* 论著 *收稿日期：2023-06-05；修回日期：2023-06-27作者简介：周瑶（1983-），女，硕士，副教授，研究方向为中药治疗肿瘤的药效及机制。
小鼠H22肝癌肺转移模型的建立及其意义
小鼠H22肝癌肺转移模型的建立及其意义赵方;胡明道;陈鹏【摘要】目的:建立小鼠H22肝癌肺转移模型,为后续研究肝癌的侵袭转移机制奠定实验基础.方法:复苏H22肝癌细胞,在培养皿中进行传代培养并计数,当细胞达到预定数目时,收集处于对数期细胞,用生理盐水洗涤2次,调整细胞浓度为1.0×107/ml,取0.5 ml细胞悬液在无菌环境下注射到小鼠腹腔进行体内传代培养,收集小鼠腹水瘤细胞,用生理盐水洗涤2次,细胞浓度调至2×107/ml,取50μl细胞悬液通过小鼠尾静脉注射到小鼠体内,14 d后人道主义处死小鼠,解剖取出小鼠全肺组织,病理组织学方法鉴定肿瘤组织,全肺连续切片,显微镜下计数肿瘤转移灶数目.结果:全部小鼠肺组织均肿瘤转移灶形成,肉眼可见成肺组织表面微小转移灶,病理鉴定为肝癌肺转移灶,小鼠肺部肿瘤转移灶数平均为23个.结论:成功建立了小鼠H22肝癌肺转移模型,为研究肝癌转移机制提供了理想的动物模型.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2017(030)016【总页数】3页(P2346-2348)【关键词】小鼠;H22;细胞;肝癌;肺转移【作者】赵方;胡明道;陈鹏【作者单位】昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科一病区,云南省昆明市650000;昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科一病区,云南省昆明市 650000;昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科一病区,云南省昆明市 650000【正文语种】中文【中图分类】R-33肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是临床上常见的消化细胞恶性肿瘤，每年新发肝癌病例和死亡病例中有50%以上发生在中国[1]。
2017年美国癌症协会发表癌症统计[2]，统计显示，过去25年之间美国总的癌症死亡率降了25%，但是肝癌的死亡率却仍在上升。
目前，手术治疗是当前治疗肝癌的主要方法，但预期效果不佳，后期仍有较大的转移复发率。
h22细胞形态
h22细胞形态H22细胞形态H22细胞是一种常用的小鼠肝癌细胞系，广泛应用于肝癌研究领域。
该细胞系的形态特征与其他肝癌细胞系有所不同，在细胞形态上具有一定的特点。
H22细胞为悬浮生长的细胞，细胞体积较大，呈多边形或不规则形状。
细胞质呈浅蓝色，富含胞浆和细胞器。
细胞质内可见到丰富的内质网、高尔基体和线粒体等细胞器。
细胞核位于细胞中央，通常为圆形或椭圆形，核质比较大，染色质呈颗粒状排列。
细胞核内含有明显的核仁，核仁呈深蓝色，大小均匀。
细胞质与细胞核之间具有明显的边界，形成清晰的细胞边界。
H22细胞生长迅速，繁殖能力强。
在培养基中，细胞呈单层或多层排列，细胞形态具有一定的多样性。
有的细胞形态规则，细胞间距均匀，呈薄片状排列；有的细胞形态不规则，细胞间距较大，呈散乱状分布。
这种多样性的细胞形态可能与细胞的分化状态和生长环境有关。
H22细胞具有较强的侵袭能力。
在体外培养条件下，H22细胞可以通过伪足的形成向周围环境蔓延。
伪足是细胞质向外突出形成的一种细胞结构，具有运动和吞噬功能。
H22细胞的伪足形态多样，有的呈长而细的突起，有的呈短而粗的突起，有的呈分枝状。
伪足的形成使得H22细胞能够穿过基底膜和间质组织，进一步侵袭周围组织和器官。
H22细胞的形态特征与其生物学行为密切相关。
细胞形态的改变可能反映细胞的分化状态、增殖能力、侵袭能力和转移能力等。
因此，研究H22细胞的形态特征对于了解肝癌细胞的生物学特性具有重要意义。
通过观察和描述H22细胞的形态，可以为进一步研究肝癌的发生机制和治疗提供参考。
总结起来，H22细胞具有多样的形态特征，包括细胞体积较大、细胞质富含细胞器、细胞核呈圆形或椭圆形、核仁明显等。
细胞形态的多样性可能与细胞的分化状态和生长环境有关。
此外，H22细胞具有较强的侵袭能力，可以通过伪足的形成向周围环境蔓延。
研究H22细胞的形态特征对于深入了解肝癌细胞的生物学特性具有重要意义。
通过进一步研究H22细胞的形态，可以为肝癌的发生机制和治疗提供新的思路和方向。
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H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性【摘要】目的：探讨H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性。
方法：昆明种小鼠尾静脉注射不同数量(1×107、7.5×106、5×106、2.5×106、1×106)H22细胞制作实验性肺转移模型，肉眼及镜下观察肺内肿瘤的有无、大小、转移程度及分布情况，血清ICAM1、IL2蛋白的表达情况。
结果：接种1×107细胞浓度组小鼠肺转移率、恶化程度及血清中ICAM1蛋白表达的量均高于其他接种组(P<0.01)，IL2蛋白表达低于其他接种组(P<0.01)，其中部分小鼠有脑转移。
结论：小鼠实验性肺转移的发生率、转移程度及血清中ICAM1、IL2蛋白的表达量与细胞接种数变化密切相关。
【关键词】肝癌;ICAM1;IL2;实验性肺转移Abstract：[Objective]To study correlation cell number of mouse H22 liver carcinoma with occurrence of the experimental pulmonary metastasis.[Method]The Kunming mouse experimental pulmonary metastatic model of different H22 liver carcinoma cell numbers was established by injecting tail vein;distribution，size and grade of metastatic nodes were observed by naked eye and microscope，expressing of ICAM 1 and IL 2 in blood serum of mouse was detected.[Result]Rate and grade of pulmonary metastasis and expressing of ICAM 1 in blood serum were higher for mouse of injecting1×107 cell number than other groups，and lower for expressing of IL 2 in blood serum obviously，some had brain metastases among these mice.[Conclusion]The rate and grade of mice experimental pulmonary metastasis and expressing of ICAM1，IL 2 are correlated with cell number.Key words：hepatoma;ICAM1;IL2;experimental pulmonary metastasis大量证据表明原发肿瘤早期阶段有恶性肿瘤细胞脱落到循环系统[1]，这些脱落的恶性肿瘤细胞可导致肿瘤复发和转移，外周血循环肿瘤细胞是一个恶性肿瘤扩散的表现，对这些肿瘤细胞的检测可以帮助对肿瘤转移特征的认识及帮助改善肿瘤分期、判断预后、指导治疗、监测治疗效果。
由此本实验探讨外周血循环H22细胞数与实验性肺转移的相关性。
1 材料与方法1.1 实验材料鼠白介素2(IL2)定量ELISA试剂盒(美国Biosource 公司)，鼠细胞间黏附分子1(ICAM1)定量ELISA试剂盒(美国 R&D systems 公司);小鼠肝癌H22腹水型细胞株由长海医院中医科实验室提供。
1.2 实验动物昆明种小鼠，(20±2)g，雌雄各半，共100只。
由复旦大学实验动物中心提供。
许可证号：SCXK沪20020002。
1.3 实验方法1.3.1 小鼠肝癌H22细胞腹水瘤模型的建立收集指数生长期的小鼠肝癌H22细胞，调细胞浓度为2×107/ml，取健康雄性昆明种小鼠5只，无菌条件下每只腹腔接种细胞悬液0.2 m1，5～7天成腹水瘤模型。
1.3.2 小鼠肝癌H22细胞接种数对实验性肺转移率及转移程度的影响将小鼠随机分成5组，每组20只，雌雄各半。
取指数生长期乳白色小鼠肝癌H22腹水瘤细胞，台盼蓝染色，显微镜下观察细胞存活率>95%，常规细胞计数，用生理盐水依次调整浓度为：5×107/ml、3.75×107/ml、2.5×107/ml、1.25×107/ml、5×106/ml。
取上述细胞悬液，给予小鼠尾静脉注射，0.2 ml/只。
2W后取血脱颈处死全部小鼠，取全肺，用Bouin氏液固定24 h，然后用无水乙醇漂洗至黄色褪去，转移灶呈白色小点，用肉眼观察肺内肿瘤的有无、大小及分布情况，同时观察心、肝、脑、肾、脾、胸腺、肌肉、骨骼组织肿瘤分布情况，并取标本，10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，苏木素伊红染色，光镜下观察肿瘤组织分布、大小。
肺内肿瘤转移程度参照文献[2]进行分级：大体观察分级：Ⅰ级，单个小的转移灶1～5个(直径均在1mm以下);Ⅱ级，小的转移灶在肺内弥散分布，6～10个或单个中等转移灶(直径在1～2mm之间);Ⅲ级，小的转移灶呈广泛分布(几乎所有肺叶)，或存在几个大的转移灶(直径在2mm以上)。
②肺内转移瘤的组织学分级：Ⅰ级，在显微镜下见1～5个小转移灶，灶内偶见核分裂相;Ⅱ级，肺内有5～10个小转移灶;Ⅲ级，肺内广泛分布的小转移灶10个以上。
③淋巴结内瘤组织分级：Ⅰ级，淋巴结内的边缘窦内有成堆的癌细胞，形成小的转移灶;Ⅱ级，在淋巴结的边缘窦及中间窦内已形成明显的转移灶。
Ⅲ级，淋巴结的大部分由癌细胞所充满，转移灶内常见坏死。
1.3.2 小鼠血清ICAM1、IL2蛋白表达方法同1.3.1，接种2周后眼眶取血，离心后取血清，采用酶标免疫法检测小鼠血清ICAM1、IL2的表达，按照试剂盒操作说明书进行。
1.4 统计学处理应用 SPSS for Windows 11.0软件进行统计，结果表示x±s。
计量资料经正态性检验和方差齐性检验后，多组间比较采用方差分析;计数资料比较采用x2检验。
2 结果2.1 H22细胞接种数对实验性肺转移率及转移程度的影响在实验性肺转移模型中，随H22肿瘤细胞接种数的增加，小鼠实验性肺转移率随之增加，肺转移程度也随之逐渐加大即小鼠肝癌H22细胞接种数与肺转移率、肺转移程度呈正相关性，见表1。
表1 不同细胞接种数对小鼠肺转移率及转移程度的影响2.2 H22细胞接种数对血清ICAM1、IL2蛋白表达的影响在实验性肺转移模型中，当H22肿瘤细胞接种数的增加，小鼠血清ICAM1表达的量随之增加，而IL2表达的量随之减小，见表2。
表2 接种不同细胞数对小鼠血清ICAM1、IL2表达的影响3 讨论目前，原发性肝癌的发生率逐渐上升，肝细胞癌已排在世界肿瘤患者死亡率的第3位[3]，对于原发性肝癌患者手术切除仍是治疗的首选方法[4]。
近年来，研究表明实体瘤(如肝癌)患者的外周血中存在一定数量的肿瘤细胞，即使手术切除后和相对局限的病灶亦不例外[5]。
曾有研究手术、放疗、化疗反而会加速肿瘤细胞在外周血中的播散[6]。
在此研究基础上，拟假设恶性肿瘤的发生、发展和转移和外周血中的肿瘤细胞数有一定的关系。
本实验就此研究了小鼠实验性肺转移和接种到外周血循环H22肝癌细胞数的关系。
研究结果表明：外周血中接种的肿瘤细胞数与肿瘤转移呈正相关。
乳腺癌是最常见的伴有远处转移的恶性肿瘤之一，临床上常常可见分期很早的病例，术后也进行了正规化疗但仍有远处转移发生。
Beitsch等[1]为决定早期及晚期乳腺癌患者带有循环癌细胞的百分比，采用了免疫磁珠分选和流式细胞计数、细胞形态学、免疫细胞化学的方法进行了研究，结果为早期乳腺癌患者20ml血中平均有16个上皮细胞，转移性乳腺癌患者平均有122个肿瘤细胞，是通过细胞形态及免疫染色确定的。
对照血标本中每20ml血中有1.7个鳞状上皮细胞。
由此可见这方法能够确定循环乳腺癌细胞，且明确转移性乳腺癌比早期乳腺癌有更多的循环癌细胞，这方法能够筛选高危患者，决定是否需要辅助治疗及随访，早期发现乳腺癌的复发。
微转移病灶的存在是决定复发率和生存率的关键因素。
众多的研究提示有微转移者的预后明显差于无转移者。
早期准确地检测外周血肿瘤细胞对及时合理地进行综合治疗很重要，微转移检测阳性者可作为加强辅助化疗的选择性指标，有助于建立个体化的治疗方案，有利于提高患者生存率，降低肿瘤复发率。
因此我们在本实验中选择了IL2、ICAM1这两种代表性的细胞因子作为初步反映H22肝癌细胞肺转移程度的指标来预测肿瘤的发生、发展。
本实验观察了接种不同数量的H22小鼠肝癌细胞对肺转移率、肺转移程度及ICAM1、IL2表达的影响。
结果表明接种1×107细胞浓度组小鼠肺转移率及恶化程度均最高，其中有2只小鼠有脑转移，同时ICAM1蛋白表达明显较其他低浓度组高，而IL2蛋白表达低。
综上所述，细胞接种数量与实验性肺转移率及转移程度、ICAM1蛋白呈正相关表达，而与IL2蛋白则呈负相关表达。
由此我们可以推测通过检测外周血ICAM1、IL2这两种蛋白表达量的变化来判断肿瘤患者外周血肿瘤细胞量的多少，同时也反映肿瘤的恶化程度及其复发和转移情况，有待实验进一步研究。
【参考文献】[1] Beitsch PD，Clifford E.Detection of carcinoma cells in the blood of breast cancer patients[J].Am J Surg，2000，180(6)：446449.[2] 高进，钱书森，李宝贵，等.血卟啉激光治疗肿瘤后对肿瘤转移影响的实验研究[J].中华肿瘤杂志，1986，8(4)：256258.[3] Parkin DM，Bray F，Ferlay J，et al.Estimating the world cancer burden：Globocan 2000[J].Int J Cancer，2001，94：153156.[4] 吴孟超.中医药在肝癌防治中的作用、地位和存在的问题[J].中西医结合学报，2003，1(3)：163164.[5] Simone Mocellinl，Ulrich.Circulating tumor cells：the ‘leukemic phase’ Of solid cancers[J].Trends in Molecular Medicine，2006，12(3)：133139.[6] Ivy ,Winnine Yeo.Circulating timor cells mRNAs in peripheral Blood from hepatocellular carcinoma patients under radiotheraphy，surgical resection or chemotheraphy： a quantitative evaluation[J].Cancer Letters，2001，167：183 191.。