血型鉴定操作规程

血型鉴定操作规程

一．玻片法（仅适用于正定型）

1 .原理：

1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。

1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。

2 .标本采集：

用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。

3. 标本运送与储存：

采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。

4 .仪器与材料：

抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

5. 操作步骤：

5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域；

5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；

5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以

是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）；

5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开，

使其覆盖大约直径20mm的面积；

5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。

6. 结果判定：

6.1凝集或发生溶血为阳性结果；

6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果；

6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。

二、纸板法

1 .原理：

1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。

1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。

2 .标本采集：

用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。

婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢血。

3. 标本运送与储存：

采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下储存。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。

4 .仪器与材料：

抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、血型鉴定专用纸板、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

5. 操作步骤：

5.1 取洁净五孔血型鉴定专用纸板，做好姓名标记；

5.2 按纸板标识向每孔中分别加入相应试剂抗A、抗B、抗D血清各1滴以及受检者血清各2滴；

5.3 各孔中分别加入受检者红细胞适量及相应所需3-5％A型、B型试剂红细胞（自制或商品化试剂）并搅匀，使其覆盖直径15-20mm的面积；

5.4 轻轻旋转摇晃混匀，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块，边摇边观察；

5.5 3min以上记录结果。记录观察到的凝集程度或溶血程度。

6. 结果判定：

6.1凝集或发生溶血为阳性结果；

6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果；

6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。

三、试管法

1 .原理：

1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。

1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。

2 .标本采集：

用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。

3. 标本运送与储存：

采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下储存。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。

4 .仪器与材料：

抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、一次性试管、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

5. 操作步骤：

5.1 ABO血型正定型试验

5.1.1 取两支洁净试管，做好标记，按试管标记向试管中加入抗-A、抗-B 血清各1滴；

5.1.2 向每管中各加入1滴3-5％被检红细胞盐水（血清或血浆）悬液；

5.1.3 轻轻混合试管内容物，1000g离心15s；

5.1.4 结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块；

5.1.5 记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。用ABO反定型实验进一步验证正定型结果。

5.2 ABO血型反定型试验

5.2.1 取两支洁净试管，做好标记，向每管中各加2滴被检血清（或血浆）；

5.2.2 按试管标记向试管中加入3-5％A型、B型试剂红细胞各1滴；

5.2.3 轻轻混合试管内容物， 1000g离心15s；

5.2.4 结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块；

5.2.5 记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。与正定型结果进行相互验证；

5.2.6 如果反应较弱，可将试管于室温（或4℃）放置5～10min，以促进弱抗体的反应，再离心观察结果。如果反应还是很弱可以增加血清（或血浆）滴数，最多到6滴以加强反应。

5.3 RhD血型鉴定试验

5.3.1 取一支洁净试管，做好标记，加入抗-D血清1滴；

5.3.2 向试管中加入1滴3-5％被检红细胞盐水（血清或血浆）悬液；

5.3.3 轻轻混合试管内容物，1000g离心15s；

5.3.4 结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块；

5.3.5 记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。

6.1凝集或发生溶血为阳性结果；

6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果。

四、微柱凝胶法

1.原理：

ABO/RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

2 .标本采集及处理：

用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。3000rpm，离心3-5min。（婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。）