微生物限度检查标准程序(1)
微生物限度检查仪操作规程
微生物限度检查仪操作规程一、目的本操作规程旨在规范微生物限度检查仪的使用，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有使用微生物限度检查仪进行微生物检测的实验室。
三、设备准备1.检查仪器：确保检查仪器处于正常工作状态，且已经进行了日常的校准和验证。
2.试剂准备：准备好所需要的试剂和培养基，并按照说明书进行储存和使用。
四、操作流程1.样品准备-将待测样品进行预处理，如稀释、过滤等操作，以确保检测结果的准确性。
-按照要求取样品，确保样品的代表性，并且避免外部污染。
-将样品转移至无菌容器中，避免交叉污染。
2.检测操作-打开检查仪器的电源，确保所有参数显示正常。
-设置检测参数，包括样品体积、培养基类型等。
-在无菌条件下，将样品转移到培养基中，确保样品均匀分布。
-在培养基上绘制分类孔，确保每个样品有足够的空间生长。
-关闭培养皿，确保培养皿与培养基接触紧密，并有利于微生物的生长。
-将培养皿放入检查仪器中，确保培养皿的摆放位置正确。
-启动检查仪器，按照仪器的要求进行检测。
-检测结束后，关闭检查仪器，将培养皿取出并妥善处理。
五、数据分析与记录1.对于生长的微生物，根据标准方法进行鉴定，并记录鉴定结果。
2.对于未生长的微生物，根据标准方法进行计数，并记录计数结果。
3.对于得到的结果，根据相关标准进行数据分析，并判断样品是否符合微生物限度要求。
4.将检测结果和分析记录在相关的数据表格或文件中，确保数据的可追溯性。
六、设备维护与清洁1.检查仪器的日常维护工作包括：定期校准、保养和维修。
2.定期清洁检查仪器的内部和外部部件，确保检查仪器的清洁和卫生。
3.根据仪器的使用说明书，进行规定的维护和保养工作。
七、风险控制1.在操作过程中，严格遵守相应的操作规程和安全要求，确保个人和环境安全。
2.如发现异常情况或设备故障，应立即停止操作，并及时报告相关人员进行处理。
3.定期开展培训和教育，提高操作人员的专业知识和操作技能。
微生物限度检查法标准操作规程
1.目的建立微生物限度检查法的标准操作规程，规范微生物限度检验操作。
2.范围适用于QC生测室微生物限度检查的操作。
3.责任人微生物限度检验员、QC部负责人对本规程的实施负责。
4.依据《中国药典》2010版二部附录5.程序5.1.微生物限度检查法定义微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
5.2.微生物限度检查室环境要求微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
5.3.抽样5.3.1.供试品一般按批号随机抽样。
5.3.2.抽样量为一般检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
5.3.3.抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应选有疑问的样品，但因机械损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需再抽样检验。
5.4.供试品保存5.4.1.供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件而引起致死、损伤或繁殖。
5.4.2.供试品在检验之前，应保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。
5.5.检查前的准备5.5.1.用具的洗涤与灭菌5.5.1.1.试管：使用过的试管经消毒后，将培养基倒出，用清洁液洗刷，用水冲洗4-5次，倒立，晾干备用。
灭菌前，用棉塞塞上管口，牛皮纸包紧，扎紧。
5.5.1.2.吸管：使用过的吸管用清洁液浸泡数分钟后，用水冲洗4-5次，晾干，备用。
灭菌前，在吸管上端距0.5cm处塞入约2cm左右的适当疏松棉花，用牛皮纸裹紧。
5.5.1.3.研钵：使用过的研钵用清洁液洗刷后，用水冲洗数次，晾干备用。
微生物限度检测操作步骤
微生物限度检测是对产品中微生物数量进行定量或定性检测的过程。
以下是一般的微生物限度检测操作步骤：
1. 准备工作：
-清洁和消毒实验室设备、试剂瓶和工作台等。
-准备所需的培养基、培养基平板和培养基管等。
2. 样品处理：
-取得待检样品，确保样品的采集和保存符合规范和要求。
-如果需要，将样品稀释到适当的浓度，以便在培养基上形成可数的菌落。
3. 培养基制备和接种：
-准备所需的培养基，并按照说明书的要求进行制备。
-将适量的培养基倒入无菌平板或管中，并在适当温度下固化。
-在培养基表面均匀涂布待检样品，或将待检样品滴于培养基管中。
4. 培养和孵育：
-将培养基平板放置在恒温培养箱中，按照规定的时间和温度进行培养。
-监控培养过程中的温度和湿度，确保适宜的条件。
5. 菌落计数和鉴定：
-培养结束后，观察培养基上的菌落情况。
-使用显微镜进行菌落计数和鉴定，根据形态、颜色、大小等特征确定菌落类型。
6. 结果分析和报告：
-根据菌落计数和鉴定结果，判断样品的微生物限度是否符合规定的标准。
-撰写检测报告，将结果详细记录并汇总，包括样品信息、检测方法、结果和结论等。
以上是一般微生物限度检测的操作步骤。
具体的操作可能会因实验室和产品类型而有所不同，需要根据相关标准和方法进行调整和执行。
在进行微生物限度检测时，应严格遵守实验室的操作规程和安全要求，确保检测结果的准确性和可靠性。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程一、引言。
微生物限度检查是指在制药生产过程中，对原料药、辅料、中间体、制剂等药品进行微生物检查的一项重要工作。
微生物限度检查的目的是为了保证药品的质量和安全，防止因微生物污染而引起的药品变质和危害患者健康的风险。
本操作规程的目的是规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果准确可靠。
二、适用范围。
本操作规程适用于制药企业进行微生物限度检查的操作人员，包括检验员、操作人员等。
三、术语和定义。
1. 微生物限度，指药品中允许存在的微生物的最大数量，通常以菌落形成单位（CFU）或细菌总数来表示。
2. 微生物限度试验，是指对药品中的微生物进行检查的一种实验方法，包括细菌总数、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌等指标。
3. 标准菌株，指已经鉴定并保存在实验室中的具有代表性的微生物菌株。
四、操作流程。
1. 样品准备。
（1）取样品，按照规定的取样方法，从所检查的药品中取得代表性样品。
（2）样品处理，根据检测要求，对样品进行必要的处理，如稀释、均质等。
2. 培养基制备。
（1）准备培养基，根据检测要求，准备所需的培养基，包括琼脂培养基、液体培养基等。
（2）灭菌处理，对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，确保培养基的无菌状态。
3. 菌种接种。
（1）接种方法，根据检测要求，选择适当的接种方法，包括平板法、涂布法等。
（2）接种数量，根据微生物限度试验的要求，按照规定的接种数量接种标准菌株。
4. 培养条件。
（1）温度控制，根据不同的微生物菌种，控制培养的温度，通常为30-35摄氏度。
（2）培养时间，根据微生物限度试验的要求，培养一定的时间，通常为24-48小时。
5. 菌落计数。
（1）观察菌落，根据培养基上的菌落形成情况，进行菌落计数。
（2）结果判定，根据菌落计数的结果，判定样品中微生物的数量是否符合规定的限度要求。
五、质量控制。
1. 内部质量控制，每批次微生物限度试验前，进行内部质量控制，确保实验条件的稳定性和可靠性。
微生物限度检查
02
微生物限度检查的实验 步骤
实验前的准备
实验器材
准备所需的培养皿、培养基、吸管、显微镜等实验器 材，确保其清洁度。
实验环境
确保实验室内无菌环境，进行空气灭菌，减少室内微 生物数量。
实验人员
实验人员需穿戴无菌工作服、口罩和手套，避免交叉 污染。
实验操作步骤
样品处理
将样品进行稀释、搅拌、离心等处理，使微 生物充分分散。
接种
将处理后的样品接种到培养基上，用涂布器 均匀涂布，确保微生物分布均匀。
培养
将接种好的培养基放入恒温培养箱中，设定 适宜的温度和时间进行培养。
观察与计数
培养后观察菌落生长情况，计数并记录结果。
实验后处理
01
02
03
清理实验器材
实验结束后，对使用过的 培养皿、吸管等器材进行 清洗和消毒。
废弃物处理
将实验产生的废弃物进行 灭菌处理后，按照实验室 规定进行废弃。
实验记录
对实验过程和结果进行详 细记录，以便后续分析和 总结。
03
微生物限度检查的实验 结果分析
实验结果解读
微生物种类
根据培养出的菌落形态和染色特征，确定微生 物的种类。
微生物数量
通过计数法或比例法，测定微生物的数量，以 判断样品中微生物的污染程度。
随着技术的进步，微生物限度检 查正朝着自动化和智能化的方向 发展，以提高检测效率和准确性。
快速检测技术
新型的快速检测技术如免疫学、 生物传感器和质谱技术等正在不 断涌现，有助于缩短检测时间。
基因组学技术的应
用
基因组学技术如宏基因组学和比 较基因组学为微生物限度检查提 供了新的手段，有助于更深入地 了解微生物种群结构和功能。
微生物限度检查操作规程
更改历史微生物限度检查操作规程1.0 目的建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确2.0 范围适用于本公司采用微生物限度检查法测定的供试品。
3.0 职责质量部负责按本规程的要求执行微生物限度检查操作。
4.0 工作程序4.1 洁净区间的确认微生物计数检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全部过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品（即待检样品、产品）中微生物的检出。
4.2 培养基4.2.1 应使用按中国药典处方及规定的方法制备的培养基。
4.2.2 所用培养基可按中国药典规定的处方及制备方法自行配制，也可使用按中国药典规定的处方生产的脱水培养基进行配制；或购买商品化的预制培养基。
4.2.3 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存。
4.2.4 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
4.2.5 供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
4.2.6 供试品的微生物计数方法、控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数或控制菌检查。
4.3 菌种及菌液制备检查所用的菌种及菌液制备见附件 1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
稀释剂、冲洗液及其制备的要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查。
4.4 培养基的适用性检查供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
微生物限度检查所用的培养基每批均应进行适用性检查，检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。
具体要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
4.5 方法适用性试验供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程⏹ 1. 目的：建立微生物限度检查的基本操作，为微生物检查人员提供正确的操作规程。
⏹ 2. 依据：《中华人民共和国药典》2010年版二部。
中华人民共和国卫生部《药品卫生检验方法》⏹ 3. 范围：本标准适用于QC化验室的微生物限度检查。
⏹ 4. 职责：QC微生物检验员对本标准的实施负责。
⏹ 5. 程序：⏹ 5.1. 定义：微生物限度检查法：微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
⏹ 5.2. 实验用具：⏹电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、75%酒精棉球、紫外灯（365nm波长）。
⏹ 5.3. 培养基：⏹ 5.3.1. 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、麦康凯琼脂培养基、枸橼酸盐培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基、蛋白胨水培养基、4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸（MUG）培养基。
⏹ 5.3.2. 培养基的管理、配置应符合检定菌、培养基管理规程、培养基配置规程。
⏹ 5.4. 试液：甲基红试液、а-奈酚乙醇试液、40%氢氧化钾溶液、靛基质试液。
⏹ 5.5. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液、PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。
⏹ 5.6. 供试品溶液的制备：取供试品（供试品如为固体，置研钵中研磨成细粉）放入试管中，加入适量的稀释剂制成1：10浓度的供试品溶液。
⏹ 5.7. 对照用菌液：控制菌检查均应作相应已知菌的对照试验，对照菌株为大肠杆菌[CMCC（B）44102]。
⏹ 5.8. 检查法：⏹除另有规定外，细菌的培养温度为30-35℃，霉菌的培养温度为23-28℃，控制菌的培养温度为35-37℃。
⏹ 5.8.1. 细菌、霉菌计数：⏹ 5.8.1.1. 平皿法⏹采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2～3个稀释级的供试液。
⏹取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程1、目的建立微生物限度检查操作规程，规范操作以保证结果的准确性。
2、范围适用于成品、原辅料、包材及纯化水的检验。
3、职责质检部负责制定本规程，质检部微生物限度检查人员负责本规程的具体实施。
4、工作程序4.1微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物标准时，应按规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
另外，本方法不适于活菌制剂的检查。
本试验应在洁净工作台高效层流保护下进行。
4.1.1计数方法计数方法包括平皿法、薄膜过滤法供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
4.1.2计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。
菌液制备按表1 规定程序培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3〜5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0. 9%无菌氣化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2〜8℃,在验证过的贮存期内使用。
阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程1 目的与适用范围本规程规定了微生物限度检查方法和操作要求。
本规程适用公司所需进行微生物限度的检查。
2 职责质量保证部负责本规程的实施。
3 内容3.1 引用标准：《中国药典》2010年版二部。
3.2 药品微生物限度检查法总则3.2.1 抽样3.2.1.1 供试品一般按批号随机抽样。
3.2.1.2 一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
3.2.1.3 抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应选有疑问的样品，但因机械损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。
3.2.2 供试品保存供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损伤或繁殖。
3.2.2.2 供试品在检验之前，应该保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。
3.2.3 检验3.2.3.1 供试品检验项目按《中国药典》2010年版二部微生物限度标准确定。
3.2.3.2 检验的全过程，均应严格遵守无菌操作，严防再污染。
3.2.3.3 除另有规定外，供试品制备成供试液后，应在均匀状态取样。
3.2.3.4 制成供试液后，应该在60分钟内注皿操作完毕。
3.2.4 培养3.2.4.1 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为36℃±1℃。
3.2.5 复检3.2.5.1 菌数测定不合格者应复检，控制菌检查以一次检出为准，不再复试，但应保留检出菌株一个月备查。
3.2.5.2 复试项目以不合格项目为准，作单项复试。
3.2.5.3 复试需另取同批号样品，复试2次。
3.2.5.4 复试报告，以3次测定结果的平均值报告。
3.2.6 检验报告3.2.6.1 检验报告以1g、1ml或10cm2为单位。
3.2.6.2 测定菌数报告，依3.10.2.4菌数报告规则报告。
微生物限度检查法
目的：规范药品微生物限度标准。
适用范围：药品微生物限度的检查。
责任者：操作员、化验员。
中成药、化学药品、生化药品的非灭菌制剂及药用原料、辅料，除另有规定外，皆按本法进行检验，并按中华人民共和国药典2000年版附录XIJ《微生物限度检查法》的规定判定检验结果。
检验方法总则1、抽样1.1 供试品采用随机抽样方法，按批号抽样。
1.2 抽样量一般应为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
1.3 抽样时，凡发现有异常或可疑的样品，应抽选有疑问的样品，但因机械损伤明显破裂的包装不得作为样品。
1.4 凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、发霉、虫蛀以及变质的药品，可直接判为不合格品，无需再抽样检验。
2、供试品保存2.1 供试品在检验前，应保存在阴凉干燥处（勿冷藏或冷冻），以防供试品中的污染菌因保藏条件引起致死、损伤或繁殖。
2.2 供试品在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。
包装已开启的样品不得作为供试品。
3、检验3.1 供试品检验项目按中国药典2000年版二部附录XIJ 《微生物限度检查法》确定。
3.2 检验的全过程必须符合无菌操作要求，严防再污染。
3.3 除另有规定外，供试品制备成供试液后，应在均匀状态取样。
3.4 供试品制成供试液后，应在1小时内注皿操作完毕。
4、检验量4.1 所有剂型的检验均需取自2个以上包装单位。
4.2 化学药品、生化药品的胶囊剂、片剂、颗粒剂等检验量为10g。
5、供试液的制备5.1 一般固体供试品称取10g，置研钵中，以100ml稀释剂（0.1mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水），分次加入研磨均匀，并转移至 250ml锥形瓶中，使成1:10供试液。
或者将供试品和稀释剂同置匀浆仪中，以转速3000~5000转／分，开机1~2分钟。
对吸水膨胀或粘度大的供试品，可制成1:20供试液。
5.2 胶囊剂供试液制备方法称取供试品10g置锥形瓶中，加入稀释剂100ml，于45℃水浴中振摇至溶，即为1:10供试液。
34 微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程1.目的：建立一个微生物限度检验标准操作规程。
2.范围：本公司的药品、原辅料、器具设备、工艺流程、生产环境和操作人员。
3.职责：微生物限度检验人员对实施本程序负责。
4.规程：4.1取样：按各《取样标准操作程序》，应随机抽取不少于检验用量（两个以上最少包装单位）的3倍量供试品。
每份供试品最低应取2个以上最少包装单位，膜剂不得少于4片。
4.2 培养基的制备：按“培养基制备标准操作规程”。
4.3 稀释剂的制备：称取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液14.63g，置1000ml三角瓶中，加纯化水1000ml，摇匀，加热溶解,于121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。
4.4检验量：除另有规定外，每份供试品最低应取2个以上最小包装单位，膜剂不得少于4片。
一般供试品的检验量为10g或10ml；中药膜剂为100cm2。
要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml 用于阳性对照试验）。
4.5 试验前的准备：4.5.1将所有已灭菌的平皿，三角瓶、吸管、量杯、研钵、稀释剂及供试品等移至无菌室的传递窗内，打开紫外灯消毒15min，风淋10s。
4.5.2开启无菌室紫外线灭菌灯20分钟。
4.5.3关闭紫外线灭菌灯，进入缓冲一室，用肥皂洗手，换工作鞋，除外衣；进入缓冲二室，穿戴无菌衣、帽、口罩，用消毒剂消毒双手，戴上手套，进入操作间。
4.5.4开启工作台，用乙醇棉球擦手及供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪刀将供试品启封。
4.6操作:4.6.1供试液的制备:4.6.1.1固体、半固体或黏稠性供试品: 取供试品10g,置灭菌研钵中,以100ml稀释剂分次加入研磨,混匀使成1:10供试液。
4.6.1.2液体供试品：取供试品10ml，置灭菌锥形瓶中，加入90ml稀释剂，充分摇匀，即为1:10供试液，也可取原液作为供试液。
4.6.1.3胶囊剂和空心胶囊供试品：取供试品10g，分离囊帽与囊身，同置灭菌锥形瓶中，加100ml稀释剂。
2015年版中国药典微生物限度检查法
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜 选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为 菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最 高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供 试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低 稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小 于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要，调节供试液 pH 值至 6 ～8。必要时，用同一稀释液将供试液进 一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也 可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株 试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕 白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培 养基 【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时
微生物限度检验操作规程
1 目的规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠2 依据《中国药典》 2015 版。
3 范围本标准适用于微生物限度检验。
4 责任中心化验室负责人：对本规程的实施负责。
中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作5 程序5.执行标准：《中国药典》 2015 版。
15.抽样：照《取样标准操作规程》进行26 内容6.需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数1计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（MPN法）。
检查时，按已验证的计数方法进行供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。
6.1.1 设备、仪器及用具6.1.1.1 设备微生物限度检测室、净化工作台、生化培养箱（30〜35°C）、生化培养箱（20〜25°C）、电热恒温水浴锅、烘箱、脉动真空灭菌柜、紫外灯等。
6.1.1.2 仪器及器皿显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液枪及吸头、薄膜过滤器等。
6.1.1.3 用具大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。
6.1.2 试液6.1.2.1 消毒液A ．0.1% 新洁尔灭溶液B. 75聽醇溶液6.1.2.2 稀释液、试剂及配制A. pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾 3.56g、无水磷酸氢二钠5.77g、氯化钠4.3g、蛋白胨1.0g，加纯化水1000ml,微温溶解，滤清，分装，121°C灭菌15分钟。
B. 聚山梨酯80C. 无菌十四烷酸异丙酯D. pH6.8无菌磷酸盐缓冲液6.1.3 培养基胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基6.1.4 操作方法6.1.4.1 试验前准备6.1.4.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、移液枪吸头（ 1ml、 10ml）、量筒、稀释液、培养基等移至传递窗内。
每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。
微生物限度操作规程
微生物限度操作规程1.目的建立微生物限度标准操作规程，确保微生物限度检测的准确性。
2.范围适用于本公司纯化水，注射用水，饮用水，原辅料中微生物限度的检查。
3.定义微生物限度检查法系指检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数及控制菌检查。
4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版二部6.材料6.1.房屋、设备、实验用具6.1.1.房屋：微生物限度实验室。
6.1.2.设备100级洁净工作台，30～35℃培养箱，20～25℃培养箱，台式灭菌器，三联式不锈钢滤器。
6.1.3.实验用具：隔离服、洁净工作服、工作鞋、口罩、帽子、10ml刻度吸管、毛巾、吸耳球、记号笔、酒精灯、镊子、酒精棉、托盘、电子天平、药勺、镊子、量筒等。
6.2.试剂：pH7.0氯化钠–蛋白胨缓冲液（无菌稀释液）6.3.实验用培养基（灵敏度实验合格）6.3.1.营养琼脂平皿（Ф90mm），用于细菌计数。
6.3.2.玫瑰红钠平皿（Ф90mm），用于霉菌及酵母菌计数。
6.3.3.胰酪胨大豆琼脂培养基平皿（Ф90mm），用于沉降菌检测。
6.3.4.品红亚硫酸钠琼脂平皿（Ф90mm），用于饮用水、水源中总大肠菌群的选择分离和鉴别。
6.3.5.培养基制备好后置30～35℃恒温培养房中预培养24～48小时，若培养基确无菌落生长方可用于实验。
如预培养后暂不用，培养基保存于2～8℃最长不超过21天。
6.4.实验用消毒液：0.2%洗必泰消毒液；75%酒精；0.5％84消毒液。
7.流程图无8.程序8.1.抽、取样8.1.1.水样采集：采样前所用的容器应无菌，应在采样、实验的全过程中实行无菌操作，保证水质不受污染。
用水样采集袋（无菌）或的蓝盖采样瓶，每个取样点取样前应放水1分钟，一个水点至少取样 1000ml，取样后将瓶盖拧紧，进行下一步操作，防止微生物污染；8.1.2.纯化水取水样不小于10ml，注射水取水样不小于200 ml，饮用水取水样不小于10ml。
实验室生活饮用水微生物检测SOP(一)2024
实验室生活饮用水微生物检测SOP（一）引言概述：实验室生活饮用水微生物检测SOP是为了确保实验室饮用水的安全与卫生，检测水中的微生物污染情况，并采取相应的措施进行处理。
本文将详细介绍实验室生活饮用水微生物检测的步骤和要点。
正文：一、实验室生活饮用水微生物检测前的准备工作1. 准备所需的检测设备和试剂，包括培养基、平板计数器、显微镜等。
2. 清洗和消毒检测设备，确保设备的洁净和无菌。
3. 确保实验室供水管道的安全和干净，避免水源污染。
二、水样采集和处理1. 选择合适的水样采集器具，如钢质水样容器或无菌采样瓶。
2. 在采集水样前进行必要的洗手和佩戴消毒手套，以避免污染水样。
3. 选取水源合适的位置采集水样，尽量避免水源受到外界污染。
4. 采集水样后立即送至实验室进行处理，避免样品在运输过程中受到污染。
三、水样预处理1. 对水样进行过滤，以去除大颗粒物质和悬浮物。
2. 进行稀释处理，确保微生物数量在检测范围内。
3. 根据需要进行pH调节或添加抑菌剂，以保证后续检测的准确性和可靠性。
四、微生物检测方法1. 采用培养法进行微生物定量分析，包括总菌落计数和特定菌群检测。
2. 根据需求选择合适的培养基和培养条件，如温度、pH值等。
3. 加入样品到培养基中，进行平板计数或液体培养，并进行恰当的菌落计数。
4. 进行特定菌群的检测，如大肠杆菌、沙门氏菌等，采用相应的培养基和检测方法。
5. 采用显微镜观察法进行微生物形态和特征的检测，确保检测结果的准确性。
五、结果分析和处理1. 根据检测结果进行微生物数量统计和分析，比较检测结果与相关标准的符合情况。
2. 如发现微生物污染超过标准限值，及时采取措施进行处理和消毒。
3. 记录检测结果，并保留相关文件和数据，以备日后参考和审查。
总结：实验室生活饮用水微生物检测SOP的实施可以确保实验室饮用水的卫生安全。
通过准备工作、水样采集和处理、微生物检测方法的选择和结果分析处理，可有效地监测和控制实验室饮用水中的微生物污染，保障实验室工作人员的身体健康和实验室环境的卫生安全。
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微生物限度检查标准程序1. 目的：建立个微生物限度检查标准程序。
2. 范围：适用于各种原辅料、部分成品及验证的微生物限度检查的操作。
3. 职责：检验人员对本规程的实施负责。
4. 程序：4 ．1 总则：4．1 ．1 本法是指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。
4．1 ．2 供试品应随机抽样。
一般抽样量为检验用量（2 个以上最小包装单位）的 3 倍量。
4．1 ．3 检查全过程应严格遵守无菌操作，严防再污染。
4 . 1. 4除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30~35 C,霉菌培养温度为25~28 C,控制菌培养温度为36 士 1 C o4 ．1 ．5 检验结果的报告以1g 、1ml 或10cm 2为单位。
4 ．2 供试品的检验量每批供试品检验量一般为10g 或10ml 。
供试品须取自 2 个以上的包装单位。
4 ．3 供试液的制备按供试品的理化特性与生物学特性可采取适宜的方法制成供试液。
4．3．1 液体供试品取供试品10ml ，加入稀释剂90ml 中，混匀，作为供试液。
4 ．3 ．2 固体供试品称取供试品10g ，置0.9% 无菌氯化钠100ml 中，用匀浆仪或其它适宜办法，混匀后，作为供试液。
在制备过程中，必要时可加适量聚山梨酯80,并适当加温，但不应超过45 C。
4 ．3 ．3 含抑菌成份供试品供试品如干扰控制菌检验,可用下列方法处理后,依法检查。
4 ．3 ．3 ．1 稀释法将供试液种入较大量的培养基中，使该供试液稀释至不具抑菌作用的浓度。
4．3 ．3 ．2 离心沉淀集菌法取规定量的供试液，离心（每分钟3000转）30min，弃去上清液，留底部集菌液约2ml ，再稀释成原规定量的供试液。
如有不溶性药渣，可将离心（每分钟500 转）5min ，取全部上层液，再行集菌处理。
4 ．3 ．3 ．3 薄膜过滤法取规定量的供试液，置稀释剂100ml 中，摇匀，以无菌操作加入装有直径约50mm ，孔径不大于0.45um ±0.2um 微孔滤膜的薄膜过滤器内，减压抽干后，用稀释剂冲洗滤膜 3 次，每次50~100ml ，取出滤膜备检。
4．3．3．4 中和法凡含磺胺、汞、砷类或防腐剂的供试品，可用相应的试剂钝化活性因子，中和毒性后制成供试液。
4．4 对照用菌液控制菌检查均应做相应已知菌的对照试验。
对照菌株为大肠杆菌[CMCC （B）44 102] 。
取相应菌株的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物1 白金耳，接种置营养肉汤培养基内，培养18~20 小时，稀释至1:10 6。
对照菌的加入量为50~100 个。
4 ．5 检查法4．5 ．1 细菌、霉菌计数4．5 ．1 ．1 平皿菌落计数法4．5．1．1．1 取均匀供试液，进一步稀释成1:10 2、1:10 3等适宜的稀释级。
分别取连续三级10 倍稀释的供试液各1ml ，置直径约90mm 的平皿中，再注入约45 C的培养基约15ml，混匀，待凝固后，倒置培养，每稀释级应作2~3 个平皿。
营养琼脂培养基用于细菌计数，玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌计数。
在特殊情况下，前者同时点计霉菌菌落数，后者同时点计细菌菌落数。
4.5 .1.1.2菌数测定阴性对照试验取供试验用的稀释剂各1ml置于4个无菌平皿中，分别按细菌、霉菌计数用的培养基制备平板，培养，检查，不得长菌。
细菌培养时间为48h ,分别在24h及48h点计菌落数，一般以48h菌落数为准。
霉菌培养时间为72h ,分别在48h及72h点计菌落数，一般以72h菌落数为准。
菌落如蔓延生长成片，不宜计数。
点计后，计算各稀释级平均菌落数，按菌落报告规则报告菌数。
4 .5 .1.1. 3菌数报告规则细菌宜选取平均菌落数在30~300之间的稀释级，霉菌宜选取平均菌落数在30~100之间的稀释级作为报告菌数计算的依据。
如有1个稀释级在30~300(30~100 )之间时，将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告；如同时有2个稀释级在30~300 (30~100 )之间时，按下式计算两级比值：高稀释级的平均菌落数X稀释倍数比值=—低稀释级的平均菌落x稀释倍数当比值w 2时，以两稀释级的均值报告，当比值>2时，以低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告；如同时有3个稀释级的平均菌落数均在30~300之间时，以后2个稀释级计算级间比值报告；如各稀释级的平均菌落数均不在30~300之间，以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在300 (100 )以上，按最高稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释平均菌落数均小于30时，一般按最低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。
如当1:10 (或1:100 )稀释级平均菌落数等于或大于原液(或1:10 )稀释级时，应以培养基稀释法测定，按测定结果报告菌数。
4. 5. 1 . 2培养基稀释法取供试液(原液或1:10、1:100供试液）3份，每份各1ml ，分别注入 5 个平皿内（每皿各0.2ml ）。
每 1 个平皿倾注营养琼脂培养基约15ml ，混匀，凝固后，倒置培养，计数。
每1ml 注入的5 个平板的菌落数之和，即为每1ml 的菌落数，共得3 组数据。
以 3 份供试液菌落数的平均值乘以稀释倍数报告。
如各稀释级平板均无菌落生长，或仅最低稀释级平均菌落数小于1 时，则报告菌落数为小于10 个。
4．5 ．2 控制菌（大肠杆菌）检查4．5 ．2 ．1 取胆盐乳糖培养基3 份，每份各100ml ，2 份分别加入规定量的供试液，其中 1 份加入对照菌50~100 个作阳性对照，第 3 份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照。
培养18~24h （必要时可延至48h ）。
阴性对照应无菌生长。
4 ．5 ．2 ．2 取上述3 份的培养物各0.2ml ，分别接种至5mlMUG 培养基管内培养，分别于5h 、24h 时，取未接种的MUG 培养基管作本底对照，将各管置365nm 紫外光下观察。
阳性对照管呈现荧光，MUG 阳性。
供试液的MUG 管呈现荧光，MUG 阳性；无荧光，MUG 阴性。
然后加数滴靛基质试液于MUG 管内，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。
4．5．2．3 当阴性对照呈阴性，阳性对照正常生长，供试液胆盐乳糖培养基培养液澄明，并证明无菌生长，判未检出大肠杆菌。
供试液MUG 阳性，靛基质阳性，判检出大肠杆菌；MUG 阴性，靛基质阴性，判未检出大肠杆菌。
4 ．5 ．2 ．4 如MUG 阳性、靛基质阴性，或MUG 阴性、靛基质阳性，均应取供试液胆盐乳糖培养基培养物划线于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板，培养18~24h ，如上述供试液培养物的分离平板无菌落生长，判未检出大肠杆菌。
或有菌落生长，应挑选2~3 可疑菌落作靛基质试验（I）、甲基红试验（M ）、乙酰甲基甲醇生成试验（V-P ）、枸橼酸盐利用试验（C）及革兰染色、镜检，按表 1 规定判定结果。
4．5．2．5 靛基质试验（I）取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，培养24h ,沿管壁加入靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。
甲基红试验（M ）取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48 士2h，于管内加入甲基红指示液数滴，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。
乙酰甲基甲醇生成试验（V-P ）取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48 士2h ,于每2ml培养液中加入a-萘酚乙醇试液1ml ,混匀，再加40%KOH溶液0.4ml ,充分振摇，在4h 内出现红色为阳性，无红色反应为阴性。
枸橼酸盐利用试验（C）取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48~72h，培养基斜面有菌落生长，培养基由绿色变为蓝色时为阳性，培养基颜色无改变为阴性。
结果判断见表1。
对与MUG-I反应不符的可疑菌株（见注①、②）,应重新分离培养，再作生化试验证实。
表1 MUG的结果判断注：①、②如①出现++--或②出现-+--，均应重新分离菌株，再作MUG-I 和IMVic 试验。
③革兰阴性杆菌。
5 .仪器和用具5 . 1操作台：检验操作在超净工作台内进行。
工作台设在半无菌操作室内，室内设有紫外线灯使室内灭菌，室内装有空调设备，控制室温在20~25 C。
5 . 2恒温培养箱：两台，各设定在35~37 C及24~26 C,分别作细菌和霉菌培养用。
5 ．3 高压蒸汽灭菌锅5. 4电热干燥箱：50~300 C。
5 ．5 扭力天平5 ．6 酒精灯5 ．7 玻璃器皿：培养皿、刻度吸管、三角烧瓶、毛细滴管、刻度离心管、试管等。
6 ．试液（试剂）6 ．10.9% 无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g ，加水溶解使成1000ml , 121 C 灭菌20 分钟。
6 . 2 95% 乙醇。
6 . 3 靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛5.0g ，加入戊醇（或丁醇）75ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml 徐徐滴入，边滴边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深；或取对二甲氨基苯甲醛1.0g ，加入95% 乙醇95ml ，充分振摇，使完全溶解后，取浓盐酸20ml 徐徐滴入。
6.4 a-萘酚乙醇试液取a-萘酚6.0g，加无水乙醇使溶解成100ml 。
6．5 甲基红试液取甲基红0.1g ，加入95%乙醇300ml ，使溶解后，加水至500ml ，即得。
6．6 40% 氢氧化钾试液取氢氧化钾40.0g ，加水使溶解成100ml 。