试剂的配制

附录1 生物实验室常用试剂的配制

一、检验酸碱性的试剂

1.酚酞试液取0.1g酚酞，溶解在100mL60～90%的乙醇溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。酚酞试液在碱性溶液中呈红色。

2.甲基橙试液甲基橙是橙黄色粉末或晶状鳞片。取0.1g甲基橙溶解在100mL蒸馏水里制成。当pH值由

3.1～

4.4时，颜色为红至黄色。

3.甲基红试液甲基红是红紫色晶体或红色粉末。把0.1g甲基红溶在100mL60%乙醇里制得。当pH值由

4.4～6.2时，颜色由红色至黄色。

4.麝香草酚酞（百里酚酞）试液把0.1g白色的麝香草酚酞溶解在100mL 90%乙醇里制得。当pH值由9.4～10.6时，颜色为无色至蓝色。

5.溴甲酚紫指示剂将0.1g溴甲酚溶于9.25mL的0.02mol/L氢氧化钠溶液中，加蒸馏水稀释至250mL制得。当pH值由

6.2～6.8时，颜色由淡黄色变为淡紫色，变色点在pH 6.7。

6.溴甲酚绿试液溴甲酚绿是黄色晶体或红棕色粉末。把0.1g溴甲酚绿溶于100mL 20%乙醇中，或把0.1g溴甲酚绿与2.9mL 0.05mol/L 氢氧化钠溶液研匀，用水稀释到100mL制得。当pH值由3.8～5.4时，颜色由黄至蓝色。

7.甲基紫（结晶紫）试液把0.1g深绿紫色的甲基紫溶解在100mL的水里制得。当pH值由0.13～0.5时，颜色由黄至绿；pH值由1.0～1.5时，颜色由绿至蓝；pH值由2.0～3.0时，颜色由蓝至紫。

8.甲酚红指示剂把0.1g深红色的甲酚红溶解于100mL 50%的乙醇中，或将0.1g甲酚红与5.3mL 0.05mol/L氢氧化钠研匀，用水稀释到100mL制得。当pH值由0.2～1.8时颜色由红至黄；pH值由7.0～8.8时，颜色由亮黄至紫红。甲酚红指示剂遇少量二氧化碳，能快速变色，反应灵敏，效果明显。

9.刚果红试纸（红色）把 0.5g峋果红溶解于1L水中，加入5滴乙酸，滤纸用温热溶解液浸透后，取出晾干。遇酸性溶液变蓝色。当pH值变化范围为

3.0～5.2时，颜色由蓝至红。

二、反应试剂

1. 鉴定葡萄糖的试剂

（1）班氏（Benedict）试剂

①在600mL蒸馏水中溶解173g柠檬酸钠和100g 无水碳酸钠，冷却后稀释到850mL。

②在100mL热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜。冷却后稀释到150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入上述柠檬酸钠一碳酸钠溶中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配。

（2）斐林氏（Fehling’s Solution）试剂

①取35g硫酸铜，溶解在400mL蒸馏水里，加蒸馏水到500mL。

②取85g氢氧化钾（或70g氢氧钠）和175g酒石酸钾钠，溶解在400mL蒸馏水里，加水馏水到500mL。

上述两种溶液要分别保存，使用时再等量地混和并搅拌。如溶液里有葡萄糖，加等量斐林试剂，煮沸，会产生红色的氧化亚铜沉淀。

2.鉴定淀粉用的碘液取2g碘化钾，溶解在10 mL蒸馏水中，再加1g碘，待溶解后用蒸馏水稀释到300mL，即成碘液。溶液在光亮处容易变成氢碘酸，

须保存在深色玻瓶里。

3.鉴定蛋白质用的双缩脲试剂分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液，待用。在3毫升待测中加入1 mL 10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。

4.鉴定脂肪的试剂苏丹IV乙醇饱和溶液。取0.2g苏丹IV，放入无水乙醇中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。过滤后倒进试剂瓶内密闭保存备用。苏丹Ⅲ溶液的配制是：0.1g苏丹Ⅲ粉末加入95%乙醇100mL，待全部溶解后便可使用。

5.提取植物DNA用的研磨液10.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris）的盐酸溶液(PH=8)2mL和8.67gNaCl、37.2g乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、20g十二烷基磺酸钠（SDS）混合溶解后，再用蒸馏水定容至1000mL。

研磨液中各种成分的作用Tirs/HCl：提供缓冲体系，DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。NaCl溶液：0.15mol/L，能很好地溶解DNA。EDTA：为DNA 酶的抑制剂，可防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。SOS：可使蛋白质变性，与DNA分离。

6.鉴定二氧化碳的试剂

（1）石灰水取饱和石灰水澄清液，密闭瓶内备用。

（2）氢氧化钡（Ba(OH)2）在蒸馏水中加氧化钡得氢氧化钡。氢氧化钡遇到二氧化碳，也会生成碳酸钡白色沉淀，使溶液浑浊。

（3）溴代麝香草酚蓝溶液取0.1g溴代麝香草酚蓝，溶解在100mL蒸馏水里，滴入少量0.1%氢氧化钾溶液，使它成为碱性溶液而呈蓝色。

本溶液 pH值变化范围是6.0（黄）至7.6（蓝）。待测物中如有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。

三、分离液

1.用于分离肌纤维的试剂

（1）马克凯郎（Maecallum）氏液也叫硝酸甘油溶液，取1份浓硝酸、2份甘油、2份水、混合制得。适于分离横纹肌和心肌组织。

（2）30%氢氧化钾溶液或30%氢氧化钠溶液肌肉小块浸泡时间0.5～1小时。

2.用于分离神经细胞的试剂

（1）甲醛一生理盐水溶液称取58.44g氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到1000mL，加入2g 40%甲醛溶液，可得甲醛一生理盐水溶液。

这种溶液也是很好的上皮细胞分离液，既分离迅速，又能保护纤细的上皮细胞纤毛。在上述溶液里，分离小肠和气管上皮组织需2h，口腔和皮肤上皮组织需3天。

（2）硼酸一生理盐水溶液在0.75%生理盐水中加入硼酸，使成为饱和溶液。可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位的神经组织。

3.用于分离神经纤维的试剂硝酸银溶液。取0.5g硝酸银，溶解在100 mL 水在即成。

4.用于分离植物根尖细胞的试剂

（1）盐酸乙醇溶液在1份95%乙醇中徐徐加入1份浓盐酸，即成盐酸乙醇溶液。密闭保存。（2）4%盐酸溶液。

5.用于分离植物纤维的试剂取10g氢氧化钠（或氢氧化钾），溶解在90mL