酶促反应动力学实验(精.选)
酶促反应动力学实验
生化教研室 朱欣婷
2.非竞争性抑制曲线图 非竞争性抑制曲线图
生化教研室 朱欣婷
[下次实验预习] 下次实验预习]
核酸的分类，以及在细胞中的分布情况。 1. 核酸的分类，以及在细胞中的分布情况。 核酸的组成。 2. 核酸的组成。 离心技术的定义及离心机的正确使用。 3. 离心技术的定义及离心机的正确使用。 实验六的实验原理及操作。 4. 实验六的实验原理及操作。
生化教研室 朱欣婷
思 考
1.米氏常数（Km）有无单位？为什么？ 1.米氏常数（Km）有无单位？为什么？ 米氏常数 2.本实验中能否不用计算反应速度， 2.本实验中能否不用计算反应速度，直接以各管 本实验中能否不用计算反应速度 测得的光密度代表各管中酶的反应速度行不行？ 测得的光密度代表各管中酶的反应速度行不行？ 为什么？ 为什么？ 3.如果不用本实验原理中所列的几种变换公式， 3.如果不用本实验原理中所列的几种变换公式， 如果不用本实验原理中所列的几种变换公式 是否还可以从实验结果求出Km值 如有应如何求？ 是否还可以从实验结果求出Km值?如有应如何求？ Km
生化教研室 朱欣婷
（一）底物浓度对酶促反应速度的影响
当底物浓度较低时,V随[S]的增大而急剧上升, 当底物浓度较低时,V随[S]的增大而急剧上升,两 ,V 的增大而急剧上升 者成正比关系.随着底物浓度继续增加, 者成正比关系.随着底物浓度继续增加,反应速度 增加,而幅度不断下降,若继续加大[S] [S]反应速度就 增加,而幅度不断下降,若继续加大[S]反应速度就 不再增加,达到一个极限值V 不再增加,达到一个极限值Vmax.
酶促反应动力学-精品医学课件
（3）酶与底物结合是通过一种称为诱导契 合模式进行的。
酶促反应动力学
概念：
• 研究酶促反应速率及其影响因素。 • 反应速率：单位时间内底物减少或产物
增加的速率，常用初速率来衡量。
初速率
产 酶促反应速率逐渐降低
物
0
时间
酶促反应的时间进展曲线
影响酶促反应速度的因素：
• 底物浓度[S] • 酶浓度[E] •T • pH 值 • 抑制剂 • 激活剂
• 加样量的准确性 • 温度与时间的准确性 • 分光光度计的校准和使用
➢ 开启电源，仪器预热20分钟。
➢ 波长调至测试用波长（510nm）。
➢ 将比色皿架处于空白管位置，打开试样室盖，选 择“T”档，调节“0”按钮，使数字显示为“0.00”。
盖上试样室盖，使光电管受光，调节透过率 “100%”按钮，使数字显示为“100.0”。
可逆性 非竞争性抑制
类型
反竞争性抑制 不可逆性
可逆性抑制作用的动力学比较
作用特点 无抑 竞争 非竞争 反竞争 制剂 性抑制 性抑制 性抑制
与I结合组分
E
E、ES ES
动力学参数
表观Km Km
Km
表观Vm Vm Vm
本次实验方案
底物：磷酸苯二钠 酶： 碱性磷酸酶AKP 抑制剂：磷酸氢二钠
v
v=Vm=K3[E]
V= Vmax [S]
Vm
Km + [S]
2
Km
[S]
底物浓度对酶促反应速度的影响
(二)米---曼氏方程 （Michaelis-Menten equation）
Vmax [S] V=
Km + [S]
1、米-曼氏方程解释： 当[S]Km时，v=(Vmax/Km) [S], 即v 正比于 [S] 当[S]Km时，v Vmax, 即[S]而v不变
酶促反应动力学实验.
酶动力学综合实验实验（一）——碱性磷酸酶Km值的测定【目的要求】1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响2.了解米氏方程、Km值的物理意义及双倒数作图求Km值的方法。
【实验原理】1、碱性磷酸酶：碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多。
其次为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织。
但它不是单一的酶，而是一组同功酶。
本实验用的碱性磷酸酶是从大肠杆菌中提取的。
2、米氏方程：Michaelis-Menten 在研究底物浓度与酶促反应速度的定量关系时，导出了酶促反应动力学的基本公式，即：错误！未找到引用源。
(1) 式中：v表示酶促反应速度，错误！未找到引用源。
表示酶促反应最大速度，[S]表示底物浓度，错误！未找到引用源。
表示米氏常数。
3、错误！未找到引用源。
值的测定主要采用图解法，有以下四种：①双曲线作图法（图1-1，a）根据公式（1），以v对[s]作图，此时1/2错误！未找到引用源。
时的底物浓度[s]值即为Km值，以克分子浓度（M）表示。
这种方法实际上很少采用，因为在实验条件下的底物浓度很难使酶达到饱和。
实测错误！未找到引用源。
一个近似值，因而1/2错误！未找到引用源。
不精确。
此外由于v对[S]的关系呈双曲线，实验数据要求较多，且不易绘制。
②Lineweaver- Burk作图法双倒数作图法（图1-1，b）实际工作中，常将米氏方程（式（1））作数学变换，使之成为直线形式，测定要方便、精确得多。
其中之一即取（1）式的倒数，变换为Lineweaver- Burk方程式：错误！未找到引用源。
(2)以错误！未找到引用源。
对错误！未找到引用源。
作图，即为y=ax+b形式。
此时斜率为错误！未找到引用源。
，纵截距为错误！未找到引用源。
把直线外推与横轴相交，其截距相交，其截距即为—错误！未找到引用源。
③Hofstee作图法（略）把（2）式等号两边乘以错误！未找到引用源。
，得：错误！未找到引用源。
(3)以v对错误！未找到引用源。
酶促反应动力学实验报告
酶促反应动力学实验报告酶促反应动力学实验报告摘要：本实验旨在研究酶促反应的动力学过程。
通过测量不同底物浓度下酶催化反应速率的变化，分析酶的催化特性和底物浓度对反应速率的影响。
实验结果表明，酶促反应速率与底物浓度呈正相关关系，但随着底物浓度增加，反应速率逐渐趋于饱和。
1. 引言1.1 酶的作用1.2 酶促反应动力学2. 实验方法2.1 材料准备2.2 实验步骤3. 实验结果与分析3.1 反应速率与底物浓度关系曲线3.2 酶活性计算公式及计算结果4. 讨论与结论4.1 反应速率与底物浓度关系解释4.2 实验误差及改进方案1 引言1.1 酶的作用酶是一类生物催化剂，能够加速生物体内化学反应的进行。
它们通常是蛋白质或核酸分子，并具有高度特异性。
在细胞内，酶参与调节代谢途径、合成新物质以及降解废物等重要生物过程。
1.2 酶促反应动力学酶促反应动力学研究酶催化反应速率与底物浓度、温度和pH等因素之间的关系。
其中，底物浓度是影响酶催化速率的重要因素之一。
当底物浓度较低时，反应速率随着底物浓度的增加而迅速增加；当底物浓度较高时，反应速率逐渐趋于饱和。
2 实验方法2.1 材料准备- 酶溶液：根据实验要求选择合适的酶溶液。
- 底物溶液：根据实验要求配置不同浓度的底物溶液。
- 缓冲液：用于维持实验环境中恒定的pH值。
- 试管或微孔板：用于进行反应混合和观察。
- 分光光度计：用于测量反应混合液的吸光度变化。
2.2 实验步骤1. 准备一系列不同浓度的底物溶液，并标明其浓度。
2. 在试管或微孔板中分别加入相同体积的酶溶液和不同浓度的底物溶液，混合均匀。
3. 将反应混合物放入分光光度计中，设置适当的波长并记录吸光度值。
4. 在一定时间间隔内，测量吸光度值的变化，并记录下来。
5. 根据实验数据计算反应速率。
3 实验结果与分析3.1 反应速率与底物浓度关系曲线根据实验数据绘制反应速率与底物浓度关系曲线。
实验结果显示，随着底物浓度的增加，反应速率也增加。
酶促反应动力学实验报告
酶促反应动力学实验报告引言酶是一类催化化学反应的蛋白质，它们在生物体内发挥着至关重要的作用。
酶促反应动力学是研究酶催化反应速度的学科，通过实验可以深入了解酶催化反应的机理和动力学参数。
本实验旨在探究酶促反应的动力学特性，并对实验结果进行分析和讨论。
材料与方法材料•酶溶液•底物溶液•缓冲液•反应容器•定量移液器方法1.准备反应溶液：将一定量的酶溶液、底物溶液和缓冲液按一定比例混合，制备出合适的反应溶液。
2.设定实验条件：调节反应温度、pH值等实验条件，使其与生物体内环境接近。
3.开始反应：在反应容器中加入一定量的反应溶液，并立即启动计时器。
4.定时取样：在不同时间点，用定量移液器取出一定体积的反应液体样品。
5.快速停止反应：在取样后立即向反应容器中加入适量的反应停止剂，使反应迅速停止。
6.测定反应产物：使用合适的实验方法，测定取样时刻反应液中的反应产物的浓度。
结果与分析初始速率测定在实验中，我们首先对反应体系的初始速率进行了测定。
通过在不同时间点取样并快速停止反应，我们测定了不同时间点的反应产物浓度，并计算出了初始速率。
观察速率与底物浓度的关系为了探究反应速率与底物浓度之间的关系，我们固定其他实验条件不变，改变底物浓度，观察反应速率的变化。
通过在不同底物浓度下进行实验，并记录反应速率的数据，我们建立了速率与底物浓度之间的关系曲线。
实验结果显示，速率随着底物浓度的增加而增加，但达到一定浓度后，速率趋于饱和，不再随底物浓度的增加而增加。
酶催化反应的动力学方程根据实验结果，我们可以得到酶催化反应的动力学方程。
一般来说，酶催化反应的速率与底物浓度的关系可以用Michaelis-Menten方程描述：V = (Vmax * [S]) / (Km + [S])其中V为反应速率，[S]为底物浓度，Vmax为最大反应速率，Km为米氏常数。
结论酶促反应动力学实验通过测定酶催化反应的速率与底物浓度的关系，探究酶催化反应的动力学特性。
酶催化反应动力学的测定实验报告
酶催化反应动力学的测定实验报告引言：酶是一类底物特异性高、效率高的蛋白质催化剂，对生命体的正常代谢过程具有重要的调控作用。
酶催化反应动力学是研究酶催化速率与底物浓度、温度等因素之间关系的实验方法。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶催化过氧化氢分解反应速率随底物浓度变化的关系，探究酶催化反应的动力学特性。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 过氧化氢酶储备液- 过氧化氢底物液- 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 酶抑制剂：肼，对苯二酚2. 实验仪器：- 分光光度计- 温度控制设备- 酶解反应体系3. 实验步骤：1) 预先配制过氧化氢酶催化反应所需的底物液。
2) 准备一系列不同浓度的底物液，如0.2%、0.4%、0.6%、0.8%和1.0%。
3) 将每种底物液分别加入试管中，保持温度一致，加入过氧化氢酶储备液。
4) 使用分光光度计，以固定波长对反应过程进行连续测量，并记录反应速率随时间的变化。
5) 通过计算反应速率与底物浓度之间的关系，确定酶催化反应的动力学特性。
结果与讨论：本实验通过测定过氧化氢酶催化过氧化氢分解反应在不同底物浓度下的速率，得到了一组反应速率与底物浓度之间的数据。
根据实验数据，我们绘制出反应速率随底物浓度变化的曲线图。
实验数据表明，反应速率随底物浓度的增加而增加，但随着底物浓度继续增加，反应速率逐渐趋于饱和。
这反映了酶催化反应中的酶与底物结合能力饱和的特点。
为了进一步验证实验结果的可靠性，我们进行了反应速率对时间变化的监测。
结果显示，反应速率随时间的增加而逐渐减小，表明酶活性随着时间的推移会受到某种因素的限制，可能是酶活性的衰减或底物浓度的减少。
通过对实验数据的进一步分析，我们可以得到酶催化反应速率与底物浓度之间的动力学关系。
常见的动力学模型有米氏方程、麦克斯韦-伯尔赛方程等，它们可以描述酶催化反应速率与底物浓度之间的定量关系。
结论：通过本实验，我们成功测定了酶催化反应动力学特性。
实验结果显示反应速率与底物浓度之间存在一定关系，呈现出饱和曲线的特点。
酶促反应动力学实验的设计.docx0
酶促反应动力学实验的设计【实验目的】酶促反应动力学研究酶促反应的速度以及影响酶促反应速度的各种因素。
影响酶促反应的因素主要包括酶浓度、底物浓度、温度、pH、抑制剂和激活剂。
本实验的目的即是通过设计一定的实验方案，以分析研究各种因素对酶促反应速度的影响。
各实验小组可在以下实验项目中选择一项，通过检索参考文献资料，组织课堂讨论，设计完成实验方案，并通过具体实验操作以检验实验方案的可行性和正确性。
（一)温度对唾液淀粉酶活性的影响【实验原理】酶作为生物催化剂与一般催化剂一样呈现温度效应，酶促反应开始时，反应速度随温度升高而增快，达到最大反应速度时的温度称为某种酶的最适温度。
由于绝大多数酶是有活性的蛋白质，当达到最适温度后，继续升高温度，引起蛋白质变性，酶促反应速度反而逐步下降，以至完全停止。
酶的最适温度不是一个常数，它与作用时间长短有关。
测定酶活性均在酶促反应最适温度下进行。
常用恒温水浴保持温度恒定。
大多数动物来源的酶最适温度为37~40℃。
本设计性实验以人唾液淀粉酶为例，观察高温（沸水浴)、最适温度（37℃水浴)和低温（冰水浴)环境对酶活性的影响，并根据底物即淀粉水解的快慢来判断酶活性的高低。
淀粉经淀粉酶催化水解为葡萄糖的不同阶段，与碘试剂作用的颜色反应如下：淀粉（蓝色)→紫色糊精（紫色)→红色糊精（红色)→无色糊精（不显色)→麦芽糖（不显色)→葡萄糖（不显色)。
【实验试剂和器材】1. 试剂⑴ 1/15 mol/LpH6.8磷酸盐缓冲液（phosphate-bufferedsaline，PBS)：称取NaH2PO4·2H2O10.4 g，溶于1000 mL蒸馏水中，即为1/15 mol/L NaH2PO4液。
称取Na2HPO4·12H2O23.88 g，溶于1000 mL蒸馏水中，即为1/15 mol/L Na2HPO4液。
取1/15mol/LNaH2PO4液51 mL，加1/15 mol/L Na2HPO4液49 mL，混匀，即为1/15 mol/L pH 6.8磷酸盐缓冲液。
酶促反应动力学(有方程推导过程)
酶促反应动力学(kinetics of enzyme- catalyzed reactions)是研究酶促反应速度及其影响因素的科学。酶促反应的影响因素主要包括酶的浓度、底物的浓度、pH、温度、抑制剂和激活剂等。
01
酶促反应动力学
02
3.4 酶促反应动力学
酶浓度的影响
在一定温度和pH下，酶促反应在底物浓度大于100 Km时，速度与酶的浓度呈正比。 酶浓度对速度的影响机理：酶浓度增加，[ES]也增加，而V=k3[ES]，故反应速度增加。
，所以
(2)
将（2）代入（1）得：
(3)
当[Et]=[ES]时，
(4)
所以
将（4）代入（3），则：
01
Vmax指该酶促反应的最大速度，[S]为底
02
物浓度，Km是米氏常数，V是在某一底物浓
03
度时相应的反应速度。从米氏方程可知：
04
当底物浓度很低时
05
<< Km,则 V≌Vmax[S]/Km ，反应速度
〔E〕〔S〕
〔ES〕
〔E〕〔I〕
〔EI〕
ki
解方程①②③得： 〔ES〕=
〔E〕t
（1 + ）＋1
Km
〔S〕
〔I〕
Ki
又因vi＝k3〔ES〕,代入上式得： Vi＝
（1 + ）＋〔S〕
Km
〔I〕
Ki
Vmax〔S〕
〔I〕
Ki
很多药物都是酶的竞争性抑制剂。例如磺胺药与对氨基苯甲酸具有类似的结构，而对氨基苯甲酸、二氢喋呤及谷氨酸是某些细菌合成二氢叶酸的原料，后者能转变为四氢叶酸，它是细菌合成核酸不可缺少的辅酶。由于磺胺药是二氢叶酸合成酶的竞争性抑制剂，进而减少细菌体内四氢叶酸的合成，使核酸合成障碍，导致细菌死亡。抗菌增效剂-甲氧苄氨嘧啶(TMP)能特异地抑制细菌的二氢叶酸还原为四氢叶酸，故能增强磺胺药的作用。
酶促反应动力学实验报告
酶促反应动力学实验报告14301050154 杨恩原实验目的：1.观察底物浓度对酶促反应速度的影响2.观察抑制剂对酶促反应速度的影响3.掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值实验原理：一、底物浓度对酶促反应速度的影响在温度、pH及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。
在一般情况下，当底物浓度很低时，酶促反应的速度(v)随底物浓度[S]的增加而迅速增加，但当底物浓度继续增加时，反应速度的增加率就比较小，当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值(即最大速度Vmax)。
底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来表示(Michaelis-Menten方程)即：式中Vmax为最大反应速度，Km为米氏常数，[S]为底物浓度当v=Vmax/2时，则Km=[S]，Km是酶的特征性常数，测定Km是研究酶的一种重要方法。
但是在一般情况下，根据实验结果绘制成的是直角双曲线，难以准确求得Km和Vmax。
若将米氏方程变形为双倒数方程(Lineweaver-Burk方程)，则此方程为直角方程，即:以1/V和1/[S]分别为横坐标和纵坐标。
将各点连线，在横轴截距为-1/Km，据此可算出Km值。
本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性，再根据1/v和1/[S]的倒数作图，计算出其Km值。
二、抑制剂对酶促反映的影响凡能降低酶的活性，甚至使酶完全丧失活性的物质，成为酶的抑制剂。
酶的特异性抑制剂大致上分为可逆性和不可逆性两类。
可逆性抑制又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制等。
竞争性抑制剂的作用特点是使该酶的Km值增大，但对酶促反映的最大速度Vmax值无影响。
非竞争性抑制剂的作用特点是不影响[S]与酶的结合，故其Km值不变，然而却能降低其最大速度Vmax。
本实验选取Na2HPO4作为碱性磷酸酶的抑制物，确定其抑制作用属于哪种类型。
实验步骤：实验一:底物浓度对酶促反应速度的影响1.取试管9支，将0.01mol/L基质液稀释成下列不同浓度：管号试剂2.另取9支试管编号，做酶促反应：管号试剂3.混匀，37 ℃水浴保温5分钟左右。
酶促反应的实验报告
酶促反应的实验报告酶促反应的实验报告引言：酶是一类生物催化剂，能够加速化学反应的速率，而不被消耗。
酶促反应在生物体内发挥着至关重要的作用，如消化食物、合成新的分子等。
本实验旨在探究酶促反应的特性和影响因素，以及酶的催化机制。
实验材料与方法：材料：新鲜的马铃薯、马铃薯切片、盐水、试管、试管架、盖玻片、显微镜、酶溶液、双氧水、试管夹、计时器。
方法：1. 准备马铃薯提取液：将新鲜马铃薯切成小块，加入适量的盐水中，搅拌均匀，过滤得到马铃薯提取液。
2. 酶促反应的观察：取一只试管，加入适量的马铃薯提取液，然后加入一滴酶溶液。
将试管倒置，用试管夹夹住，将试管倒置放置于试管架上。
3. 加入双氧水：用滴管向试管中加入适量的双氧水，开始计时。
4. 观察反应：观察试管内是否有气泡产生，以及气泡的数量和大小。
5. 记录数据：记录反应开始后每隔一段时间的气泡数量和大小。
6. 显微镜观察：取一滴反应液放在盖玻片上，放入显微镜下观察酶促反应的细节。
结果与讨论：在实验过程中，我们观察到酶促反应的现象非常明显。
随着时间的推移，试管内的气泡数量逐渐增加，并且气泡的大小也有所增大。
通过显微镜观察，我们可以看到气泡是由双氧水分解产生的氧气气泡。
酶促反应的速率受到多种因素的影响，如温度、pH值和底物浓度等。
在本次实验中，我们主要探究了温度对酶促反应的影响。
实验中我们分别将试管放置在不同温度下进行观察。
结果显示，随着温度的升高，酶促反应的速率也增加。
这是因为温度的升高会增加酶分子的动力学能量，使酶与底物之间的碰撞频率增加，从而加快反应速率。
然而，当温度过高时，酶的活性会受到破坏，导致反应速率下降。
此外，我们还观察到酶促反应在酸性和碱性条件下的变化。
在实验中，我们调整了马铃薯提取液的pH值，分别观察了在酸性和碱性条件下的酶促反应。
结果显示，酸性条件下酶的活性较低，反应速率较慢；而在碱性条件下，酶的活性较高，反应速率较快。
这是因为酶的活性受到pH值的影响，不同pH值下酶的构象发生变化，从而影响酶与底物的结合能力。
酶促反应动力学实验
A、B 、 管加好 后，置 于水浴 锅中预 温5min
预温后 将A、 、 B管混合 管混合 并开始 计时， 计时， 准 确反应 13min
显色 向每个试 管 中各加入 2ml
0.03175g /L碘液， 碘液， 碘液 观 察现象
（一） 操 实验器材 作 方 法
冰箱 试管架 管
恒温水浴锅 移液枪及枪头 胶头滴管 吸量管架
试管 吸量 烧杯
（一） 操 实验试剂 作 方 法
PH6.8的缓冲液 PH6.8的缓冲液 0．03175g/L碘液 03175g/L碘液
Na0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液 0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液 淀粉的0.5%
实验步骤
一、制管
管号 PH6.8的 缓冲液 （ml） A 含NaCl的 0.5%淀粉 液（ml） 稀释100 倍的唾液 （ml） 1（0℃） 2（室温） 3（37℃） 4（50℃） 5（70℃） 6（室温） 2 2 2 2 2 2 用2ml的 蒸馏水代 替
2
2
2
2
2
B
1
1
1
1
1
1
实验步骤
预温 混合反应并计时
酶促反应动力学实验
1 底物浓度对酶活性的影响 ——碱性磷酸酶Km值的测定 碱性磷酸酶Km ——碱性磷酸酶Km值的测定
酶促反应动力学实验
2.1 温度对酶活性的影响
实验原理
每种酶都有其最适温度， 每种酶都有其最适温度， 高于或低于此温度酶的活性都 降低。一般而言， 降低。一般而言，若酶处于过 高的温度环境中， 高的温度环境中，会使酶活性 永久丧失； 永久丧失；而若处于极低温度 的环境中只会使酶活性受到抑 一旦温度适宜， 制，一旦温度适宜，酶又会全 部或部分的恢复其活性。 部或部分的恢复其活性。
酶促反应动力学实验报告
酶促反应动力学实验报告酶促反应动力学实验报告引言：酶是生物体内一类高效催化剂，能够加速化学反应速度而不参与反应本身。
酶促反应动力学研究了酶催化反应速率与底物浓度、酶浓度、温度和pH等因素之间的关系。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶催化分解过氧化氢的速率，探究酶促反应动力学的基本原理。
实验方法：1. 实验前准备：准备所需试剂：过氧化氢溶液、过氧化氢酶溶液、缓冲液、辅助试剂等；准备所需仪器：分光光度计、计时器、试管、移液器等。
2. 实验步骤：(1) 预先调制一系列过氧化氢浓度的溶液，如0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L 等；(2) 在试管中加入一定量的缓冲液和过氧化氢酶溶液，使其浓度保持不变；(3) 在不同的试管中加入不同浓度的过氧化氢溶液，使其浓度逐渐增加；(4) 开始计时，记录下反应开始后一定时间内的吸光度变化；(5) 重复实验多次，取平均值。
实验结果：通过实验测得不同过氧化氢浓度下的吸光度变化数据，绘制出反应速率与过氧化氢浓度之间的关系曲线。
实验结果显示，随着过氧化氢浓度的增加，反应速率也随之增加，但当过氧化氢浓度达到一定值后，反应速率不再显著增加。
实验讨论：1. 底物浓度对酶促反应速率的影响实验结果表明，底物浓度对酶促反应速率有显著影响。
当底物浓度较低时，酶活性相对较低，反应速率较慢；而当底物浓度增加时，酶活性得到更充分的发挥，反应速率逐渐增加。
然而，当底物浓度达到一定值后，反应速率不再显著增加，这是因为酶的活性位点已经饱和，无法再催化更多的底物分子。
2. 酶浓度对酶促反应速率的影响实验结果还显示，酶浓度对酶促反应速率也有显著影响。
当酶浓度较低时，酶活性受限，反应速率较慢；而当酶浓度增加时，酶活性得到更充分的发挥，反应速率逐渐增加。
然而，当酶浓度达到一定值后，反应速率不再显著增加，这是因为底物浓度成为限制因素，酶浓度的增加无法进一步提高反应速率。
3. 温度和pH对酶促反应速率的影响温度和pH是酶活性的重要调节因素。
酶促反应动力学.
试剂
12 345
号号 号号号 管管 管管管
充分研碎至糊状，然后分批加入 少量磷酸缓冲液，边加边磨，总 共加入7ml，搅拌后离心约5分钟 （3000rpm）,将上清液倒入另一
0.25%琥 0.5 — 0.5 2 0.5
珀酸钠液 （ml）
试管钟备用，此即为含有琥珀酸 0.5%草酸 — 0.5 0.5 0.5 2
酶促反应动力学
生化试验设计
温度对唾液淀粉酶活性的影响——实验温水浴 沸水浴试 沸水浴试
管1
管2
试管3
试管4
管5
管6
1/15
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
mol/L的
ph=6.8
PBS
0.9%
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
NaCl
1%淀粉液 5ml
实验器材与试剂
器材:小白鼠，研钵，手术剪，手术镊子，2ml移液管， 10ml离心管，低速离心机
试剂 :pH7.4磷酸缓冲液
0.25%琥珀酸钠溶液
0.5%草酸钠溶液 0.01%甲稀兰溶液 生理盐水
实验步骤
1、肝糜液的制备： 用颈椎脱臼 法处死小白鼠，立即剖腹将肝脏 全部取出，用生理盐水洗净肝脏，
5ml
5ml
0.3%碘液 2ml
2ml
2ml
新鲜唾液
2ml
2ml
2ml
稀释液
1.全部试管均加相同的PBS和Nacl是为了营 造共同的环境，减少误差
2.加入碘的量比淀粉少是为了避免因碘 的量太大而掩饰溶液颜色的变化过程
3，加入的酶的量比淀粉少是因为避免酶 的浓度太高而导致反应太快，计时的误差变大
实验报告 生物体内酶的底物浓度与酶活性的酶促反应动力学研究
实验报告生物体内酶的底物浓度与酶活性的酶促反应动力学研究要点一：引言酶是生物体内一类具有催化活性的蛋白质，能够加速化学反应的进行。
酶活性受到多个因素的影响，其中底物浓度是其重要的一项。
通过研究底物浓度与酶活性之间的关系，可以深入了解酶的催化作用机制，并为生物医学领域的相关研究提供理论基础。
本实验旨在探究生物体内酶的底物浓度对酶活性的影响，以及酶促反应动力学的特性。
要点二：材料与方法1. 实验材料：- 底物：XXX（具体名称）- 酶：XXX（具体名称）- 缓冲液：XXX（具体名称）- 反应体系：XXX（具体组合）2. 实验步骤：- 步骤一：制备一系列底物浓度不同的反应液，如0.1M、0.2M、0.3M等。
- 步骤二：将相同体积的底物和酶溶液混合，使其反应起始。
- 步骤三：在一定时间间隔内，取样分析反应液中产物的浓度变化。
- 步骤四：记录数据并进行计算分析。
要点三：结果与讨论1. 数据记录：- 在不同底物浓度下，记录反应液中产物浓度的变化。
- 对每组实验数据进行统计和计算。
2. 数据处理与分析：- 根据实验数据，画出底物浓度与时间的曲线图。
- 对曲线图进行趋势分析，研究不同底物浓度下酶活性的变化。
- 利用动力学模型对实验数据进行拟合，获得酶促反应的速率常数和最大反应速率。
- 分析不同底物浓度下酶活性的酶促反应动力学特性。
3. 结果分析：- 根据数据处理和分析结果，得出底物浓度对酶活性的影响趋势，并解释相应的生物化学机制。
- 探讨不同底物浓度下酶活性的最适条件，并讨论相关生理环境中的底物浓度变化对酶活性的影响。
要点四：结论通过实验研究发现，生物体内酶的底物浓度与酶活性之间存在一定的关系。
随着底物浓度的增加，酶活性会呈现一定的变化趋势。
进一步的动力学分析表明，底物浓度对酶促反应速率常数和最大反应速率的值具有明显的影响。
因此，底物浓度是调控生物体内酶活性的一个重要因素。
要点五：实验意义与展望本实验的研究结果对于进一步了解酶活性的调控机制具有重要意义。
酶促反应动力学实验
混匀，37 ℃水浴保温5分钟左右。
8
酶液（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
pH10碳酸钠缓 0 10/16 10/14 10/12 10/10 10/8 10/6 10/4 10/2 冲液（ml）
加入酶液后立即计时，各管混匀后在37 ℃准确保温15分钟。 3、保温结束，立即加入0.5mol/L NaOH 1.0 ml 以中止反应。 4、各管分别加入0.3% 4-氨基安替比林1.0 ml及0.5％ 铁氰化钾 2.0 ml， 充分混匀，放置10分钟，以管1为对照，于波长510 nm处比色。
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❖ 酶活性计算及Km值求取
1、在37°C下保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位，从标准曲线查出释放的 酚量（ug），以此计算处各管的酶活性（v）。
2、以1/v为纵坐标、1/S为横坐标，在坐标纸上作图，求出酶的Km值，并判断该 抑制剂属于何种类型。
Km＝？ 该抑制剂为？
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注意事项：
❖ 配制的各种试剂及反应液必须混匀。 ❖ 加酶液要准确快速，以保证各管酶促反应同时开
pH10碳酸钠缓 0 10/16 10/14 10/12 10/10 10/8 10/6 10/4 10/2 冲液（ml）
加入酶液后立即计时，各管混匀后在37 ℃准确保温15分钟。 3、保温结束，立即加入0.5mol/L NaOH 1.0 ml 以中止反应。 4、各管分别加入0.3% 4-氨基安替比林1.0 ml及0.5％ 铁氰化钾 2.0 ml， 充分混匀，放置10分钟，以管1为对照，于波长510 nm处比色。
实验原理
1、酶促反应的特性：高效性、高特异性、高不稳定性、可调 节性。
❖ 反应体系的条件必须严格控制。
酶促反应动力学实验
•淀粉经淀粉酶水解为葡萄糖的不同阶段，与碘试试剂作 用的颜色反应如下：
淀粉（蓝色）---紫色糊精（紫色）---红色糊精（红 色）---无色糊精（无色）---麦芽糖（无色）---葡萄 糖（无色）
2.实验步骤
•首先按如图所示在1到6号试管中加入试剂
3.实验结果记录
试管1 褪色时间 s
试管3
酶促反应动力学实验
实验目的
通过完成一定的实验方案设计，以分析研究 各种因素对酶促反应速率的影响，学习鉴定 温度，抑制剂等影响酶促反应速率的方法和
了解测定酶的Km值和Vmax值的方法。
（一）温度对于唾液淀粉酶活性的影响
1.实验原理
•酶作为生物催化剂，在酶促反应开始时反应速率随温度 升高而增快，达到最大反应速率时的温度称为某种酶的 最适温度。达到最适温度后，随着温度的升高酶促反应 速率下降。测定酶活性在最适温度下进行。本实验以唾 液淀粉酶为例，利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与 碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在不同温度 下的酶活性，并根据底物即淀粉水解的快慢来判断酶活
的烧杯收集过滤的备用。
酶提取 液 （ml）
磷酸缓 冲液 （ml）
0.2mol/L 琥珀酸 （ml）
0.02mol/ L琥珀酸 （ml）
0.2mol/L 丙二酸 溶液（ ml）
0.02mol/ L丙二酸 溶液（ ml）
•2、取试管5支，编号，再按图所示步骤操作：
试管1 1
1.5
0.5
—
__
—
甲基蓝 （滴） 3
试管5
4.实验讨论
实际意义:
•探究温度对酶的影响可方便提高酶活性,延长酶活有效期.
•生产或实验中可使酶处于最适条件下能提高产量和质量， 也可阻止一些不利生产的酶的繁殖，而将条件提升到适合 有益酶的条件，择优或者达到两个酶都有益的条件，起到
酶促反应动力学实验
“蛋白酶凝乳特性研究”1.实验目的通过研究胃蛋白酶、木瓜蛋白酶作用于脱脂乳的最适凝乳温度、最适pH值、以及金属离子对酶凝乳效果的影响，使学生掌握酶学研究的基本方法，从而掌握生物化工研究的一些基本理论和主要思路，为科研开发打下必要的基础。
2.实验原理胃蛋白酶、木瓜蛋白酶等具有很强的蛋白质催化特性，又具有良好的凝乳特性。
因脱脂乳含大量酪蛋白，木瓜蛋白酶的凝乳特性主要表现为随机切割精氨酶-苯丙氨酸的肽键，达到破坏蛋白质稳定的效果，进而发生凝乳。
奶酪的生产以前主要利用牛凝乳酶达到凝乳效果，但牛凝乳酶主要是从小牛的第四胃中提取得来，其来源受到极大的限制，通过研究蛋白酶、木瓜蛋白酶的凝乳特性并对其进行优化，一定程度地缓解凝乳酶来源的紧缺状态。
3.实验材料、仪器和试剂3.1实验材料优质脱脂乳3.2实验药品和器皿3.3试剂（1）配制浓度为100g/L的脱脂乳1000ml,混匀后待用。
（5组）（2）配制浓度为10g/L的木瓜蛋白酶液和浓度为2g/L胃蛋白酶溶液各500ml，混匀后待用。
（5组）（3）配制0.1mol/L NaOH和0.1mol/L的HCl溶液各1000ml,用于调节溶液pH 值。
（5组）4.操作步骤4.1木瓜蛋白酶（胃蛋白酶）凝乳活力的测定取 5mL100g.L-1的脱脂乳,在65℃下保温5min,加入0.5mL10g.L-1的木瓜蛋白酶液（或胃蛋白酶液）,迅速混合均匀,准确记录从加入酶液到乳液凝固的时间(s)。
把40min凝固1mL100g.L-1的脱脂乳的酶量定义为一个索氏单位(Soxhletunit),并以相对活性(RU)表示各因素的影响效果。
SU=（2400/T）×（5 / 0.5）。
式中:T为凝乳时间(s)RU(％)=（各因素下SU / 最大SU）×1004.2酶的最适凝乳温度的测定：分别在55,60,65,70, 75℃下测定酶凝乳活性。
4.3酶的热稳定性：酶液分别在55 ，60，65,70,75℃下处理10,30,60min后,测定酶的凝乳活性。
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酶动力学综合实验实验（一）——碱性磷酸酶值的测定【目的要求】1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响2.了解米氏方程、值的物理意义及双倒数作图求值的方法。
【实验原理】1、碱性磷酸酶：碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多。
其次为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织。
但它不是单一的酶，而是一组同功酶。
本实验用的碱性磷酸酶是从大肠杆菌中提取的。
2、米氏方程：在研究底物浓度与酶促反应速度的定量关系时，导出了酶促反应动力学的基本公式，即：(1)式中：v表示酶促反应速度，表示酶促反应最大速度，[S]表示底物浓度，表示米氏常数。
3、值的测定主要采用图解法，有以下四种：①双曲线作图法（图1-1，a）根据公式（1），以v对[s]作图，此时1/2时的底物浓度[s]值即为值，以克分子浓度（M）表示。
这种方法实际上很少采用，因为在实验条件下的底物浓度很难使酶达到饱和。
实测一个近似值，因而1/2不精确。
此外由于v对[S]的关系呈双曲线，实验数据要求较多，且不易绘制。
②作图法双倒数作图法（图1-1，b）实际工作中，常将米氏方程（式（1））作数学变换，使之成为直线形式，测定要方便、精确得多。
其中之一即取（1）式的倒数，变换为方程式：(2)以对作图，即为形式。
此时斜率为，纵截距为。
把直线外推与横轴相交，其截距相交，其截距即为—。
③作图法（略）把（2）式等号两边乘以，得：(3)以v对作图，这时斜率为，纵截距为，横截距为。
④作图法（略）把（2）式等号两边乘以[S],得：(4)以对[s]作图，这时斜率为，纵截距为。
（a）(b)本实验主要以双倒数法，即作图法来测定碱性磷酸酶值。
具体原理如下：本实验以碱性磷酸酶为例，用磷酸苯二钠为其作用物，碱性磷酸酶能分解磷酸苯二钠产生酚和磷酸，在适宜条件下（10.0，和60℃），准确反应13分钟。
在碱性条件下酚可与酚试剂生成蓝色化合物，以波长620比色。
在一定条件下色泽深浅与光密度成正比。
反应式如下：然后以光密度直接表示不同底物浓度时的酶反应速度，即以光密度的倒数作纵坐标，以底物浓度的倒数作横坐标，按作图法来测定碱性磷酸酶值。
【仪器与试剂】仪器：1.恒温水浴2.721型分光光度计试剂：1．酚试剂：称钨酸钠（W·2O）100g，钼酸钠（·2O）25g置1500磨口回流装置内，加蒸馏水700，85%磷酸50和浓硫酸100。
充分混匀，使其溶解。
小火加热，回流10h（烧瓶内加小玻璃珠数颗，以防溶液溢出），再加入硫酸锂（4）150g，蒸馏水50及液溴数滴。
在通风橱中开口煮沸15，以除去多余的溴。
冷却后定容至1000，过滤即成，此液应为鲜黄色，不带任何绿色。
置棕瓶中，可在冰箱长期保存。
若此贮存液使用过久，颜色由黄变绿，可加几滴液溴，煮沸几分钟，恢复原色仍可继续使用。
使用时用蒸馏水稀释一倍，最后酸度为1N。
2．2.5磷酸苯二钠基质液：称取625磷酸苯二钠（C6H542•2H2O），溶于1,000容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，加数滴夜溴以防腐，置冰箱内可保存一年之久。
3．碱性缓冲液（10.0）：称取无水碳酸钠 6.36g及碳酸氢钠3.36g，溶解于蒸馏水中，并稀释至1,000.4．碱性磷酸酶液：称取碱性磷酸酶1,加水3~4，冰箱内可保存五周左右。
【实验步骤】取6支试管按下表加入试剂：以6管为调零点，在620波长处比色。
【结果处理】1 将各管光密度和底物浓度记入下表2以1为纵坐标，1/[s]为横坐标，按作图，求出碱性磷酸酶的值。
【注意事项】1）加入碱性磷酸酶的量要准确2）保温时间要准确准确保温的方法：从第一管加入酶液开始计时，每隔1分钟向下一只试管加酶液,直至加完，到准确13分钟立即向第一管加酚试剂，以终止其反应，并每隔1分钟向下一只试管加酚试剂,直至加完止，这样保证每管准确保温13分钟。
【思考题】1）的意义及其影响因子2）为什么酶促反应速度以初速度表示3）为什么可直接代替V作图4）分析自己的实验数据实验（二）——温度对酶活性的影响【实验目的】了解温度对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。
【实验原理】每种酶都有其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。
一般而言，若酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久丧失；而若处于极低温度的环境中只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分的恢复其活性。
【仪器与试剂】仪器：1．冰箱 2.恒温水浴锅 3.试管和试管架4．吸量管及吸量管架 5.移液枪及枪头 6.胶头滴管7．烧杯试剂：1．6.8的缓冲液：量取15.45的0.2M磷酸氢二钠和4.55的柠檬酸混合摇匀即可。
2．0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液：0.5g可溶性淀粉和0.5g氯化钠，溶于100蒸馏水（需加热）。
3．0．03175碘液4．1M 溶液 5.1M 溶液 6.稀释100倍的唾液 7.冰水浴【实验步骤】1．制管和预温由于本实验对恒温反应要求较高，故每个温度梯度使用两支试管，分别标记为A管和B管，同时欲温底物与酶。
A管加入6.8的缓冲液和0.5%淀粉液；B管使用移液枪加入稀释100倍的唾液，相对应的两支试管置于设定的温度下预温5。
取12支洁净试管，参照下表加入试剂：*6号管为对照组（比色时作为0号管），置于室温，且淀粉液用蒸馏水代替2．混合A、B管将1号A管试剂迅速加入温度对应的B管中(为了最大限度保证酶的量)，此时为计时的起点（使用秒表），摇匀后放回对应温度继续水浴。
注意：转移A管试剂前需将其摇匀。
3．时间控制然后每隔1或2（时间自定）按上步操作依次把2、3、4、5、6号的A、B管混合，严格控制好时间。
4．中止反应准确反应13，向1号管加入2滴1M 溶液，立即混匀，中止反应，按上一步的顺序和时间间隔依次对各管进行操作，并移至试管架。
后再各用2滴1M 溶液中和每管。
5．显色在每管中各加入2 0.03175碘液并混匀，观察现象。
6．比色若不同温度梯度间现象差别不明显，则进行比色，通过光密度值来比较。
【结果处理】记录现象（或比较吸光度值），做出合理分析。
【注意事项】严格注意时间的控制及各物质的添加量。
【思考题】如果某同学（没有严格按照教案步骤）做出的实验结果为唾液淀粉酶的最适温度为70度，请分析他得出这样的结果的可能原因。
实验（三）——对酶活性的影响【实验目的】了解对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。
【实验原理】1对酶活性影响的机理：影响酶活性中心的某些必须基团的解离,而这些基团往往仅在某一解离状态时才最容易同底物结合或具有最大催化活性；影响可解离基团的底物和辅酶的荷电状态,从而影响酶对他们的亲和力；还可以影响酶活性中心的空间构象,从而影响酶的活性。
2.本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受的影响的情况。
淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解,从而得到各种糊精乃至麦芽糖,少量葡萄糖等水解产物。
碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色,即淀粉(蓝色)、紫色糊精(紫色)、红色糊精(红色)、麦芽糖及少量葡萄糖(黄色)。
【仪器与试剂】仪器：1、冰箱2、电炉3、恒温水浴锅4、试管架及试管5、移液管架及移液管试剂：1、0.2M磷酸氢二钠溶液：称取35.61g含2个结晶水的磷酸氢二钠，用水定容至1L。
2、0.1M柠檬酸溶液：称取21.01g含一个结晶水的柠檬酸，用水定容至1L。
3、唾液淀粉酶：将唾液分别稀释10倍、50倍和100倍，得三种不同浓度的酶液、4、0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液：0.5g可溶性淀粉和0.5g氯化钠，溶于100蒸馏水（需加热）。
5、0.1%淀粉液：0.1g可溶性淀粉，加到100蒸馏水中，加热溶解。
6、碘液：15g碘化钾和12.7g碘，加少许水使碘完全溶解后，再用水稀释至200。
7、1%氯化钠溶液。
8、0.1%硫酸铜溶液。
【实验步骤】（一）对酶活性的影响1、缓冲溶液的配制取六只洁净的三角烧瓶，按表1编号和加试剂：配制取六支洁净试管，编号后按表2操作：表2 对酶活性的影响【结果处理】记录现象（或比较吸光度值），做出合理分析。
【注意事项】充分摇匀，严格控制时间。
【思考题】酶的最适值受哪些因素影响？实验（四）——酶浓度对酶活性的影响【实验目的】了解酶浓度对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。
【实验原理】在适宜的条件下，若反应物浓度大大高于酶浓度时，反应速度随酶浓度增加而增加，两者间成正比。
但若反应底物浓度较低，而且酶的浓度足够高时，增加酶浓度，反应速度基本不变。
本实验采用唾液淀粉酶为例。
加入不同浓度的酶，并比较在同一适当时间后，以碘检验淀粉的含量从而确认其反应程度。
【仪器与试剂】仪器：1.恒温水浴锅2.吸量管3.试管与试管架试剂：1.含的0.5%淀粉液2.7.0的缓冲液3.分别稀释过10倍、50倍和100倍后的唾液【实验步骤】1.取3支洁净试管，按下表加入淀粉液，缓冲液，加毕放入37度恒温水浴锅中保温5分钟；2.保温后，快速加入不同浓度的稀释唾液，摇匀，立即放入37度恒温水浴中，并计时。
约3至4分钟后加入等量碘液一至两滴，立即摇匀后，记录各管的颜色。
【结果处理】记录现象，做出合理分析。
【思考题】实验（五）——离子对酶活性的影响【实验目的】了解离子对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。
【实验原理】酶的活性常常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。
是唾液淀粉酶的激活剂。
其它的阴离子，如、3-和对该酶也有激活作用，但较微弱。
而2+对唾液淀粉酶具有抑制作用。
激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的，并且常具有特异性。
就本实验，低浓度可以增加酶活性，高浓度的或者低浓度的2-等对酶活性没有影响。
激2+则会抑制酶活性，同时低浓度的、4活剂的作用机制是多种多样的，可能是作为辅酶或辅基的一个组成部分，也可以直接作为酶活性中心的构成部分。
【仪器与试剂】仪器：1.恒温水浴锅2.吸量管3.试管与试管架试剂：1. 1溶液2. 0.14溶液3. 0.1%淀粉液4. 100倍稀释唾液5.碘液【实验步骤】取3支洁净的试管，编号后按下表操作：【结果处理】记录现象（或比较吸光度值），做出合理分析。
【思考题】为什么加入淀粉后有试管内颜色显现为红色？（思考题可以总结起来出在最后面）最新文件仅供参考已改成word文本。
方便更改。