动物组织石蜡切片制作

方案一:病理石蜡切片的制作 方案一 病理石蜡切片的制作
(一)石蜡组织块制作 取材. 1.取材. 固定. 2.固定. 脱水,透明及浸蜡(具体步骤见表). 3.脱水,透明及浸蜡(具体步骤见表). 4.包埋
步 骤 (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10) 10) (11) 11) (12) 12) (13) 13)
实验1 实验1 石蜡切片的制做技术
70%酒精2-4小时. 70%酒精2 小时. 85%酒精2 小时. 85%酒精2-4小时. 95%酒精( 小时. 95%酒精(Ⅰ)2-3小时. 95%酒精(Ⅱ)1-2小时. 95%酒精( 小时. 100%酒精( 小时. 100%酒精(Ⅰ)1-2小时. 100%酒精( 0.5- 小时. 100%酒精(Ⅱ)0.5-1小时. 100%酒精:二甲苯( 0.5- 小时. 100%酒精:二甲苯(1:1)0.5-1小时. 二甲苯( 20—30分钟. 30分钟 二甲苯(Ⅰ)20 30分钟. 二甲苯( 10—20分钟. 20分钟 二甲苯(Ⅱ)10 20分钟. 浸蜡( 40分钟 分钟. 浸蜡(Ⅰ)40分钟. 浸蜡( 40分钟 分钟. 浸蜡(Ⅱ)40分钟. 组织包埋. 组织包埋. 蜡块整修.切片.贴好的切片置于60℃ 60℃恒温箱内 蜡块整修.切片.贴好的切片置于60℃恒温箱内 干燥2小时. 干燥2小时.
方案二 石蜡切片的制作
二,切片的步骤: 1,将蜡块固定于切片机头上的夹座内, 2,调整蜡块组织切面恰好与刀口接触,旋 紧刀架 3,根据需要调整切片厚度. 4,修整切片,直到切出完整的最大组织切 面后,再行切制. 5,切下的切片带,用毛笔从刀口向上挑起, 拉下切片带
方案二 石蜡切片的制作
三,切片的注意事项 切片质量的好坏,与技术熟练程度和切片机, 1,切片质量的好坏,与技术熟练程度和切片机, 切片刀的好坏有关外. 切片刀的好坏有关外. 切片机的各个零件和螺丝应旋紧, 2,切片机的各个零件和螺丝应旋紧,否则将会产 生震动. 生震动. 在摇动切片机时,用力要求均匀一致, 3,在摇动切片机时,用力要求均匀一致,不宜过 重过猛,否则造成切片厚薄不均.或空洞现象. 重过猛,否则造成切片厚薄不均.或空洞现象. 在夏秋季节进行切片时,应使用冰块加强冷却, 4,在夏秋季节进行切片时,应使用冰块加强冷却, 可保持石蜡的硬度,减少切片的褶皱. 可保持石蜡的硬度,减少切片的褶皱.
(二)石蜡切片制作
用切片机将石蜡包埋的组织块(蜡块)制成适宜厚度的切 用切片机将石蜡包埋的组织块(蜡块) 是目前在病理学科中最常用的一种制片方法. 片,是目前在病理学科中最常用的一种制片方法.切片厚 度为一般4~6μm 4~6μm. 度为一般4~6μm. 切片前的准备】 【切片前的准备】 切片前应先修块, 1,修切蜡块 切片前应先修块,即切去组织周围过多的 石蜡,一般留下约2mm宽度的蜡边为宜. 2mm宽度的蜡边为宜 石蜡,一般留下约2mm宽度的蜡边为宜.注意蜡块不能留 得太窄,在切片时易损坏组织;蜡边不能留得太多, 得太窄,在切片时易损坏组织;蜡边不能留得太多,否则 影响展片.室温过高时, 影响展片.室温过高时,可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间. 一定时间. 2,切片用品准备 切片刀: (1)切片刀:预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片. 次性切片. 载物片:载物片经清洁液,95%乙醇处理后备用 乙醇处理后备用. (2)载物片:载物片经清洁液,95%乙醇处理后备用. 展片仪:加入温水,接通电源,调整温度. (3)展片仪:加入温水,接通电源,调整温度. 其他用品:准备好毛笔,记号笔,镊子,冰块等. (4)其他用品:准备好毛笔,记号笔,镊子,冰块等.
方案二 石蜡切片的制作
1—6微米.制作大批的或是连续的切片.长期保存. 6微米.制作大批的或是连续的切片.长期保存. 切片前的准备: 一,切片前的准备: 恒温水浴锅首先预热至35℃ 40℃. 35℃—40℃ 1,恒温水浴锅首先预热至35℃ 40℃. 蜡块整修,暴露组织并修平,减少刀的磨. 2,蜡块整修,暴露组织并修平,减少刀的磨. 载玻片应事先洗涤干净,无油腻和不透明现象. 3.载玻片应事先洗涤干净,无油腻和不透明现象.涂粘片 剂. 将锋利的刀片,调整角度和位置, 20° 30°为佳. 4,将锋利的刀片,调整角度和位置,以20°-30°为佳. 备用小型毛笔,小型无钩镊子,铅笔. 5,备用小型毛笔,小型无钩镊子,铅笔.
【切片制作过程】 切片制作过程】 以使用旋转式切片机石蜡切片为例: 以使用旋转式切片机石蜡切片为例: 将切片刀装在刀架上,后将蜡块装在切片机固定装置上. 1.将切片刀装在刀架上,后将蜡块装在切片机固定装置上.调整蜡块与刀 至合适位置(刀刃与蜡块切面呈5 夹角)旋转式切片机切取组织, 至合适位置(刀刃与蜡块切面呈5°夹角)旋转式切片机切取组织,是由下 向上切,为得到完整的切片,防止组织出现刀纹裂缝, 向上切,为得到完整的切片,防止组织出现刀纹裂缝,应将组织硬脆难切的 部分放在上端(如皮肤组织,应将表皮部分向上.而胃肠等组织, 部分放在上端(如皮肤组织,应将表皮部分向上.而胃肠等组织,应将浆膜 面朝上). 面朝上). 左手执手笔,右手旋转切片机旋转轮.先粗切标本, 2.左手执手笔,右手旋转切片机旋转轮.先粗切标本,直到暴露出组织最 大切面(但对小标本不要修切得太多,以免将整个组织块修切掉). ).再连续 大切面(但对小标本不要修切得太多,以免将整个组织块修切掉).再连续 旋转切出蜡带,左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起, 旋转切出蜡带,左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起,右手用镊子夹起蜡带上 正面向上放入展片仪水盒内,展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整, 端,正面向上放入展片仪水盒内,展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整, 一般水温为45℃左右,待蜡片带中的组织展平后,即可进行分片和捞片. 45℃左右 一般水温为45℃左右,待蜡片带中的组织展平后,即可进行分片和捞片.对 于展片困难的切片经30%的乙醇初展后, 30%的乙醇初展后 于展片困难的切片经30%的乙醇初展后,再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水 盒内可使切片更易展平.在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块,减少 盒内可使切片更易展平.在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块, 切片刀与组织块在切片过程中产生的热时, 切片刀与组织块在切片过程中产生的热时,使石蜡保持合适的硬度以利于切 片. 3.捞起切片后,写上编号.捞片时注意切片的位置,一般切片的中心位于 捞起切片后,写上编号.捞片时注意切片的位置, 载物片右侧1/3 2/3交界处为佳 并注意整齐美观. 1/3与 交界处为佳, 载物片右侧1/3与2/3交界处为佳,并注意整齐美观. 烤箱60℃左右烘烤切片30min 对血凝块和皮肤组织应及时烤片, 60℃左右烘烤切片30min, 4.烤箱60℃左右烘烤切片30min,对血凝块和皮肤组织应及时烤片,烤片温 度应稍低;脑组织切片捞出后直立晾干,再烤片,否则产生气泡. 度应稍低;脑组织切片捞出后直立晾干,再烤片,否则产生气泡.
实验2 HE染色技术 实验2 HE染色技术
二甲苯Ⅰ脱蜡 10分钟. 二甲苯Ⅰ 10分钟 分钟. 二甲苯Ⅱ 10分钟 分钟. 二甲苯Ⅱ脱蜡 10分钟. 100%酒精Ⅰ2 Ⅰ2- 分钟. 100%酒精Ⅰ2-5分钟. 100%酒精Ⅱ2 Ⅱ2- 分钟. 100%酒精Ⅱ2-5分钟. 95%酒精1 分钟. 95%酒精1-2分钟. 90%酒精1 分钟. 90%酒精1-2分钟. 85%酒精1 分钟. 85%酒精1-2分钟. 自来水洗 片刻 蒸馏水 片刻 10—15 15分钟 苏木素 10 15分钟 自来水洗 1—2分钟 2 1%盐酸酒精分化 0.5—1 1%盐酸酒精分化 0.5 1分钟 蓝化10分钟—至数小时 10分钟 流水冲洗 蓝化10分钟 至数小时
实验1 实验1 石蜡切片的制做技术
试剂与器材:甲醛,酒精,二甲苯,苏木精,伊 试剂与器材:甲醛,酒精,二甲苯,苏木精, 中性树胶,双面刀片,蜡板,镊子,滤纸, 红,中性树胶,双面刀片,蜡板,镊子,滤纸, 200ml容量瓶 广口),玻璃标本缸,载玻片, 容量瓶( ),玻璃标本缸 200ml容量瓶(广口),玻璃标本缸,载玻片,盖 玻片,染色缸,毛笔,新鲜鸡蛋, 玻片,染色缸,毛笔,新鲜鸡蛋,甘油 空闲时间: 空闲时间:参观冰冻切片的制做 石蜡切片的制做程序(详细过程请查看讲义) 石蜡切片的制做程序(详细过程请查看讲义) 组织取材2毫米厚度,固定于福尔马林2小时. 组织取材2毫米厚度,固定于福尔马林2小时. 组织流水冲洗1 小时. 组织流水冲洗1-2小时.
家 兔 30min 30min 40min 40min 40min 30min 40min 40min 10min 5min 20min 30min 40min
注意事项
一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋;食管,胃, 一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋;食管, 肠等组织须将管壁横断面朝下包埋, 肠等组织须将管壁横断面朝下包埋,若在同一蜡块中包埋数块管壁组 织时,应平行横埋且黏膜面(内膜)的方向应一致,以便切片及观察. 织时,应平行横埋且黏膜面(内膜)的方向应一致,以便切片及观察. 同一蜡块包埋多个组织块时,组织的性质应相同,方向要一致, △同一蜡块包埋多个组织块时,组织的性质应相同,方向要一致,不 能把大小,厚薄差别悬殊的组织包埋在一起, 能把大小,厚薄差别悬殊的组织包埋在一起,组织块间的距离不能太 大. 皮肤,骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋. △皮肤,骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋. 神经,脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系. △神经,脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系. 包埋(尤其在室温较低的情况下)操作应迅速,防止组织块变凉, △包埋(尤其在室温较低的情况下)操作应迅速,防止组织块变凉, 蜡液凝结及出现气泡,组织块与蜡液不能很好凝固定在一起, 蜡液凝结及出现气泡,组织块与蜡液不能很好凝固定在一起,导致组 织与蜡分离. 织与蜡分离. 遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时, △遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时,不能将小标本放入 其他标本的管腔或空洞内. 其他标本的管腔或空洞内.
方案二 石蜡切片的制作Hale Waihona Puke Baidu
贴片: 四,贴片: 将单张切片,用镊子夹住蜡片的一边并提起, 1,将单张切片,用镊子夹住蜡片的一边并提起, 铺于恒温水中(光亮的一面朝下) 铺于恒温水中(光亮的一面朝下)立即用毛笔轻 轻拉展以切片无皱褶为最好. 轻拉展以切片无皱褶为最好. 待切片在恒温水内充分摊开展平后, 2,待切片在恒温水内充分摊开展平后,将载玻片 垂直插入水中轻靠切片,随即将玻片直立提起, 垂直插入水中轻靠切片,随即将玻片直立提起, 拨正切片位置. 拨正切片位置. 用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号, 3,用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号,字要 写得小而清楚,端正. 写得小而清楚,端正. 贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时, 60℃恒温箱内干燥 4,贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时,蛋 白质凝固后即可染色. 白质凝固后即可染色.
小 鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min 30min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min 30min
动物组织石蜡切片制作
动物学教研室 顾 勇
实验目的
制作实验动物的组织切片并染色,掌握动 制作实验动物的组织切片并染色, 物组织制片技术
实验用品
动物的组织. 1.动物的组织. 器材和仪器:切片机,展片仪,毛笔, 2.器材和仪器:切片机,展片仪,毛笔,载 玻片,盖玻片,烤箱,显微镜. 玻片,盖玻片,烤箱,显微镜. 试剂:60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 乙醇, 乙醇, 乙醇, 3.试剂:60%乙醇,70%乙醇,80%乙醇,90% 乙醇,95%乙醇 无水乙醇,二甲苯,石蜡, 乙醇, 乙醇,95%乙醇,无水乙醇,二甲苯,石蜡, 中性树胶. 中性树胶.
操作项目 操作项目 60%乙醇 60%乙醇 70%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅰ 乙醇 95%乙醇Ⅱ 95%乙醇Ⅱ 乙醇 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ 二甲苯Ⅱ 石蜡Ⅰ 石蜡Ⅰ 石蜡Ⅱ 石蜡Ⅱ 石蜡Ⅲ 石蜡Ⅲ