植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
设计性实验 ——类胡萝卜素植物色素的色谱分离与仪器分析
类胡萝卜素植物色素的色谱分离与仪器分析设计人：丁永朴班级：农学112学号：113131206类胡萝卜素植物色素的色谱分离与仪器分析【实验目的】1.学习从天然产物中提取有机化合物的方法。
2.掌握从胡萝卜或番茄中分离提纯胡萝卜素和番茄红素的原理和方法。
3.学习紫外光谱（分光光度法）、薄层色谱法的原理及其方法。
【实验原理】胡萝卜素是最早发现的一个多烯色素。
后来又发现了许多在结构上与胡萝卜素类似的色素，于是就把这类物质叫做胡萝卜色素类化合物，或者叫做类胡萝卜素。
这类化合物大都难溶于水，易溶于弱极性或非极性的有机溶剂，因此又把这类物质叫做脂溶性色素。
番茄红素是胡萝卜素的开链异物体。
番茄红素在成熟的红色植物果实如番茄、西瓜、胡萝卜、草莓、柑桔等中含量最高，其中含量最多的是番茄。
CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3 123456789101112131415161718192015'14'13'12'11'10'9'8'7'6'20'19'18'17'16'5'4'3'2'1'番茄红素（Lycopene）β-胡萝卜素和番茄红素的分子式均为C40H56，分子量为536.85，β-胡萝卜素的熔点184℃，番茄红素的熔点174℃。
β-胡萝卜素和番茄红素是不饱和碳氢化合物，难溶于甲醇、乙醇，可溶于乙醚、石油醚、正已烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯等有机溶剂。
β－胡萝卜素的结构式根据β-胡萝卜素和番茄红素的上述性质，故可利用石油醚、乙酸乙酯等弱极性溶剂将它们从植物材料中浸提出来。
然后，根据它们对吸附剂吸附能力的差异，用柱色谱进行分离，用薄层色谱检测分离效果。
并根据它们在可见光区有强烈吸收的性质，用紫外-可见分光光度法进行测定，β-胡萝卜素的最大吸收峰为451nm，番茄红素的最大吸收峰为472nm。
植物生理指标测定方法
实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(张宪政，1992)一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。
二、材料、仪器设备及试剂试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、实验步骤称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。
把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。
四、实验结果按计算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71⨯OD663 – 2.59⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04⨯OD663 +20.29⨯OD645) V/1000*W按Inskeep公式叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63⨯OD663 – 2.52⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90⨯OD663 + 17.95⨯OD645) V/1000*W 注：1、叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用率【1】比如阳生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较大【2】阴生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较小2、丙酮-------熔点:-94℃；沸点:56.48℃；是一种无色透明液体，有特殊的辛辣气味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂.下一步实验方法比较【1】95%乙醇直接提取（√）【2】95%乙醇加热提取（冯瑞云，1985）【3】无水酒精和80%丙酮等体积混合提取实验二、不良环境对植物细胞膜的伤害（(张宪政，1992)）一、原理植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。
新鲜蔬菜中β-胡萝卜素的提取、分离、测定
新鲜蔬菜中β-胡萝卜素的提取、分离和测定
班级：临五一班（2小班）姓名：任依梦学号：5117119051
【实验目的】
●掌握从新鲜胡萝卜中提取、分离β-胡萝卜素的方法
●掌握应用紫外-可见吸收光谱法测定β-胡萝卜素的紫外光谱图
●了解共轭多烯化合物π→π*跃迁吸收波长的计算方法及共轭多烯化合物的紫
外吸收光谱特征
【实验原理】
简介胡萝卜素是维生素A的前体，具有类似维生素A的活性，有α、β、γ异构体，其中以β-胡萝卜素生理活性最强。
β-胡萝卜素的结构如下：
β-胡萝卜素是长链多烯化合物，它的π-π*跃迁吸收带处于可见光区，因此纯β-胡萝卜素是橘红色晶体。
提取胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂，故可用有机溶剂来提取。
分离采用柱层析法将提取液中β-胡萝卜素分离出来。
测定经分离提纯的β-胡萝卜素含量可以直接用紫外-可见分光光度法测定。
【实验步骤】
1.β-胡萝卜素的提取
20g新鲜胡萝卜+40mL1：1丙酮-石油醚混合溶剂研磨5min（研钵）萃取（分液漏斗）
2.柱层析
在层析柱中加入少许浸有石油醚的脱脂棉→加入一半层析柱高的石油醚→加入20g中性氧化铝→在氧化铝上面加一圆形滤纸→加入β-胡萝卜素提取液→用9:1（体积比）石油醚-丙酮溶液洗脱，进行层析
3.β-胡萝卜素的紫外-可见吸收光谱的测定
将层析分离得到的橙黄色试样稀释后加到1cm的比色皿中，以石油醚作空白试剂，用分光光度计测定400~600nm范围内的吸收
【实验结果】
β-胡萝卜素的吸收曲线。
类胡萝卜素的测定方法
类胡萝卜素的测定方法（高效液相色谱法）本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。
本方法最低检出量为：α-胡萝卜素为5ng/mL，β-胡萝卜素为 4.3ng/mL，γ-胡萝卜素为3.5ng/mL，番茄红素为2.7ng/mL，斑蝥黄素为1.0ng/mL。
1. 方法提要样品以丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离，在450nm 波长条件下进行HPLC分析检测，通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。
2. 仪器（1）高效液相色谱仪。
（2）冷凝回流皂化装置。
（3）旋转蒸发仪。
（4）离心机（5000r/min）。
3. 试剂本方法所使用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为重蒸馏水。
（1）丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂：取相同体积的丙酮、石油醚混匀。
（2）50% KOH甲醇-水溶液：称取250g氢氧化钾，用50mL适量水溶解后，用甲醇定容至500mL容量瓶，备用。
（3）无水硫酸钠（Na-2SO4）。
（4）二丁基羟基甲苯（BHT）。
（5）无水乙醇（C2H5OH）。
（6）流动相使用液：按乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）比例准确量取各溶剂，并充分混匀，经.45μm微孔膜过滤后使用。
（7）类胡萝卜素标样：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。
（8）标准溶液：准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量，先分别用少量的乙酸乙酯溶解，再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液（于-30℃冻箱保存），使用时再配成3.5~16.5mg/L的标准使用液。
4. 测定步骤（1）样品处理：a. 皂化提取法（如牛奶等脂肪含量较高的样品）：取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min，取上层油脂于250mL皂化瓶中，加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、0.1g BHT，65~75℃回流皂化30min，用石油醚反复提取皂化液，多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。
β―胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定
β―胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定一、实验目的1、学习从天然产物中提取有机化合物的方法。
2、学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算Rf 值的方法。
二．仪器和试剂仪器三角瓶（50ml）、分液漏斗（150ml）、蒸馏瓶（50ml）、普通蒸馏装置（或减压蒸馏装置）、漏斗、色谱柱、硅胶薄层板、量筒、烧杯、层析缸。
试剂胡萝卜、丙酮、石油醚（bp30~60℃）、硅胶（层析用，200~300目）、无水硫酸钠、石油醚（bp60~90℃）、丙酮：石油醚（1：9）（V/V）。
三．实验方案1、含类胡萝卜素石油醚溶液的制备将新鲜胡萝卜洗净、擦干,切去尾部，切碎。
称取碎鲜胡萝卜【1】10g于小研钵中,研碎。
碎胡萝卜移至50mL三角烧瓶中，每次用丙酮10mL萃取2次，再用石油醚（bp30~60℃）萃取固体两次，每次10mL。
把石油醚溶液加到丙酮液中。
在分液漏斗中将混合液与50mL饱和氯化钠溶液【2】振荡，分去下层，用蒸馏水洗涤上层液两次，每次50mL，分去水，用无水硫酸钠干燥石油醚液（约1h）,把混合液倒入50mL圆底烧瓶中，热水浴加热蒸馏，除去溶剂，得固体。
在制得的固体物加入3mL石油醚（bp60~90℃）拌硅胶1g，在通风橱内抽干，得黄色硅胶颗粒，待上柱。
2、装柱和分离取20cm*1cm色谱柱一根，垂直装置，以50ml三角烧瓶作洗脱液的接受器。
用镊子取少许脱脂棉【3】放于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂绵上盖一层厚0."5cm的海石砂（或用一张比柱内径略小的滤纸代替），关闭活塞，向柱内倒入石油醚（bp60－90℃）至约为柱高的3／4处，打开活塞，控制流出速度为1滴/s。
通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入层析硅胶。
用洗耳球轻轻敲打柱身，使填装紧密。
当装填到3/4时，再在上面加一层0."5cm厚的海石砂，操作时一直保持上述流速，注意不能使液面低于砂子的上层。
植物原花青素(OPC)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4295
植物原花青素（OPC）含量检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4295规格：50T/24S可见分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体25mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1.试剂二：临用前加25mL提取液，充分溶解。
配制好的试剂二应尽快使用，2-8℃保存时间不超过一个月；2.标准品：10mg原花青素。
临用前加入1mL提取液，充分溶解得到10mg/mL标准液，2-8℃保存两周；3.工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合，现用现配。
用多少配多少。
产品说明：原花色素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。
在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。
技术指标：Oligomeric Proantho Cyanidins(OPC)VanillinH+Colored Compound(500nm)最低检出限：0.0622mg/mL线性范围：0.078-5mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、台式离心机、粉碎仪、超声清洗仪、30-50目筛和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛之后，称取约0.1g，加入1mL提取液，用超声提取法进行提取（功率300W，温度25℃，时间30min）；12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。
植物体叶绿素含量的测定实验报告
实验报告植物体叶绿素含量的测定摘要：本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取菠菜叶片中和番茄叶片中叶绿体色素，叶绿素a,叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm>649nm和470r1m。
根据分光光度计测定的吸光度值，从而计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a,叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm>649nm和470nm o根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验目的：扇握分光光度计法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。
实验材料：生物材料：菠菜叶片0.25g,自己培养的全素番茄苗叶片0.2g,缺磷番茄苗叶片0.2g；试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙；仪器：分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、小烧杯、IOm1量筒、50m1容量瓶、剪刀、滤纸、滴管。
实验步骤•1叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片0.25g,擦干，去中脉，剪碎放入研钵，加入少许石英砂和CaCo3，再加入95%乙醇3m1,研磨成匀浆，再加95%乙醇IOmI,静置IOmin,用漏斗滤去残渣，用乙醇反复冲洗研钵、残渣至无色；用容量瓶定容至50m1。
2.吸光度的测定取光径Icm比色杯，注入上述叶绿素提取液，以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照，在波长665、649、和47Onm下测定吸光度。
3结果计算依据下列计算公式，分别计算出叶绿素a、B的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
C a（叶绿素a）=13.95A≡-6.8Cb（叶绿素b）=24.96-9-7.32A665C T（叶绿素）=C a+C b=18.16‰+6.63MC xc（类胡萝卜素）=（IOOOA470-2.05C a-114.8C b）∕248色素浓度（mg∕1）χ提取液体积（1）X稀释倍数叶绿体色素含量样品鲜重（g）实验结果：菠菜叶片提取液吸光值:叶绿素叶绿素叶绿素总浓度1、测定叶绿素ab为什么选用红光波长？叶绿素吸收红光和蓝紫光，故有两个吸收峰，光合色素还有类胡萝卜素，只吸收蓝紫光，所以不能选蓝紫光区测定，否则被类胡萝卜素干扰，只能用红光。
三七地上部分中叶绿素和类胡萝卜素的含量测定
三七地上部分中叶绿素和类胡萝卜素的含量测定杨晶晶;曲媛;崔秀明【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2014(000)002【摘要】以不同产地的三七茎、叶和不同产地、不同生长年限的三七花为原材料，采用丙酮研磨法及紫外-可见分光光度法分析三七地上部分中叶绿素和类胡萝卜素的含量。
结果表明，三七茎、叶和花中均含有丰富的叶绿素和类胡萝卜素，不同样品中色素含量有明显差异，其中三七茎、叶中色素含量高于三七花，茎、叶和花中叶绿素含量的变化范围分别在2.12mg/g～4.48mg/g和0.73mg/g～1.55mg/g ，而类胡萝卜素含量的变化范围分别在0.24mg/g～0.53mg/g和0.08mg/g～0.17mg/g。
这为三七地上部分作为新资源食品提供数据支撑。
【总页数】4页(P63-66)【作者】杨晶晶;曲媛;崔秀明【作者单位】昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明 650500; 昆明理工大学云南道地药材研究开发中心，昆明 650500;昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明 650500; 昆明理工大学云南道地药材研究开发中心，昆明 650500;昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明650500; 昆明理工大学云南道地药材研究开发中心，昆明 650500【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.丹参地上部分抗动脉粥样硬化活性部位中齐墩果酸和熊果酸的含量测定研究 [J], 李彧;曾荣洁;欧惠根;陈建忠2.糖脂康中试产品中藻蓝素、叶绿素、类胡萝卜素含量测定 [J], 钱金袱;左绍远;张学清;杨云川3.不同方法对龙胆中地上部分有效成分的含量测定 [J], 江蔚新;安胜利;尹清永;杨红梅;江淼4.当归地上部分中绿原酸和金丝桃苷的含量测定 [J], 胡淑毅;刘东来5.三七地上部分提取总皂苷及人参皂苷Rb3工艺研究 [J], 胡庆普;焦家良;付翠花;朱姝;潘杰;杨炳治因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
分光光度法在胡萝卜不同颜色肉质根品种生育期内天然活性物质含量变化研究中的运用
化趋势，含量峰值153.14mg出现在7月下旬。整体来 看，4类胡萝卜品种的β-胡萝卜素含量均值分别为 95.82mg、139.58mg、19.47mg和113.61mg，品种C的 含量最低，其余3类品种的含量大体保持一致。在5% 与1%水平下，品种D与其余3类品种的差异均较为显 著。 2.1.2 木质部不同部位
·26· 试 验 研 究
中国农业文摘·农业工程 2021年第4期
分光光度法在胡萝卜不同颜色肉质根品种生育期内 天然活性物质含量变化研究院，新疆石河子 832000）
摘要：胡萝卜中的天然活性物质含量较高，其中的类胡萝卜素可发挥免疫、抗癌、抗氧化等作用，叶绿素有 助于补充人体血红蛋白、抑制细菌、促进消化、提升抗病力，花青素具有抗氧化、抑制肿瘤细胞生长等功 能。本文选取4类肉质根颜色分别为深红、紫、黄、鲜红色的胡萝卜品种作为研究对象，采用分光光度法针 对样本在各生育期内的β-胡萝卜素、叶绿素a和b、花青素含量变化进行测定。研究结果表明，在胡萝卜种 植后的第3-4个月期间，其β-胡萝卜素含量到达峰值，此时可优先选其韧皮部、上部提取β-胡萝卜素；在 胡萝卜生长的第45d、第110d将出现两个高峰，此时其叶绿素含量达到峰值；花青素含量则主要与胡萝卜的 肉质根颜色存在关联，肉质根颜色越深，则其花青素含量越高。 关键词：胡萝卜；肉质根；活性物质；分光光度法
实验七叶绿素ab含量的测定及植物光合强度的测定
3. 溶解 应在烧杯中溶解，不能在容量瓶中溶解。
思考：若量取的是浓硫酸需要稀释，应如何操作才 是正确的？
4. 转移 由于容量瓶瓶颈较细，为避免液体洒在外面，应用玻璃棒引流。
提问：将烧杯中的氯化钠溶液转移到容量瓶中，此时溶质是否完 全被转移到容量瓶中？应如何处理？
CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (mg / L)
叶绿素a、b含量：
C×提取液体积（20ml）×稀释倍数（10） (mg / g)
样品的重量（1g）
二、 植物光合强度的测定
光能
CO2+ H2O 叶绿体 (CH2O)+O2
测定干物质的积累 测定CO2的吸收 测定O2的释放
半叶法 红外气体分析仪法
演示LCPRO+光合作用仪
实验操作 分光光度法测叶绿素a、b含量
实验基本技能（二）
试剂的配制及化学试剂的规格
溶液配制的一般步骤：
计 称 溶 转洗定摇 装
算 量解
移涤容匀
瓶 贴
签
1. 计算
如：配制500mL 0.4mol/L NaCl溶液
需要称量的氯化钠的质量： n = cV = 0.4mol/L × 0.5L = 0.2mol m = nM = 0.2mol ×58.5g/mol = 11.7g
进气 泵
IARGA
Ce
参比室 排气
叶室
Co
光合速率：f （Ce –Co）/S
20世纪50年代国外设计制造出红外线C02气体分析仪
20世纪70年代我国制造出了红外线C02气体分析仪
美国LI-COR生产的LI-6400便携式光合作用仪 英国ADC公司生产LCPRO+ 便携式光合作用仪
植物类黄酮含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4291
植物类黄酮含量检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：UPLC-MS-4291规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶（自备）常温保存试剂一液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体4mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体30mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存标准品稀释液液体20mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、提取液：自备60%乙醇，常温保存；2、标准品：10mg芦丁。
临用前加入1mL标准品稀释液配制成10mg/mL标准液备用，2-8℃保存四周。
产品说明：类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在470nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样本提取液在470nm处的吸光值，即可计算样本类黄酮含量。
Flavonoid+NaNO2+Al(NO3)3Red Chelate(470nm)技术指标：最低检出限：0.00666mg/mL线性范围：0.0097-1.75mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、烘箱、粉碎仪、30-50目筛、超声清洗仪、60%乙醇、台式离心机、研钵、蒸馏水、水浴锅/恒温培养箱。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛之后，称取约0.1g，加入1mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，温度60℃，提取30min。
12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。
植物类黄酮含量检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4292
植物类黄酮含量检测试剂盒说明书微量法货号：UPLC-MS-4292规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶（自备）常温保存试剂一液体2mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体2mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体15mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存标准品稀释液液体15mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、提取液：自备60%乙醇，常温保存；2、标准品：10mg芦丁。
临用前加入1mL标准品稀释液配制成10mg/mL标准液备用，2-8℃保存四周。
产品说明：类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在470nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样本提取液在470nm处的吸光值，即可计算样本类黄酮含量。
Flavonoid+NaNO2+Al(NO3)3Red Chelate(470nm)技术指标：最低检出限：0.00818mg/mL线性范围：0.0097-5mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、烘箱、粉碎仪、30-50目筛、超声清洗仪、60%乙醇、台式离心机、研钵、蒸馏水、水浴锅/恒温培养箱。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛之后，称取约0.1g，加入1mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，温度60℃，提取30min。
12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。
植物可溶性糖含量检测试剂盒使用说明(可见分光光度法)
植物可溶性糖含量检测试剂盒使用说明可见分光光度法货号：BC0030规格：50T/48S产品内容：试剂一：粉剂×2瓶，4℃避光保存；试剂二：10ml×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0mg/ml。
产品说明：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
检测原理为蒽酮比色法。
可用于可溶性单糖、寡糖和多糖的含量测定，具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、浓硫酸、研钵和蒸馏水。
操作步骤：一、样品中可溶性糖的提取：称取约0.1～0.2g样本，加入1ml蒸馏水研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，沸水浴10min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，常温离心10min，取上清液于10ml试管中，用蒸馏水定容至10ml，摇匀备用。
二、测定操作表：1.分光光度计预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2.调节水浴锅至95℃。
3.工作液的配制：在试剂一中加入5ml试剂二，充分溶解后使用，如较难溶解，可加热搅拌。
4.加样表（在EP管中反应)：试剂（μl）空白管测定管标准管样本200标准液200蒸馏水400200200工作液100100100浓硫酸100010001000混匀，置95℃水浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，于620nm处，分别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A测定管-A空白管。
类胡萝卜素检测试剂盒(比色法)
类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(比色法)简介：叶绿体是光合作用的细胞器，在光合作用研究中，常需要用提取的叶绿体展开下游研究工作。
叶绿体中所含的色素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合体，其中叶绿素又称叶绿体色素(Chlorophyll)。
类胡萝卜素是一种脂溶性且具有营养特性的化合物，给植物和动物提供天然色素，是重要的抗氧化剂，并有能力转换为必需维生素。
类胡萝卜素可预防细胞，组织和基因损毁，增强身体免疫系统，抵御感染，减少癌症风险，保护心脏。
Leagene 类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(比色法)检测原理是类胡萝卜素不溶解于水，而溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类胡萝卜素，根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比，即A=αCL，其中α为比例常数，当溶液浓度以百分比浓度为单位，层液厚度为时，α为该物质的吸光系数。
在本试剂盒情况下，叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在处有最大吸收波，根据经验公式可计算出叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量。
该试剂盒主要用于植物组织中叶绿素、类胡萝卜素的提取以及以分光光度计定量检测叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、研钵或匀浆器2、离心管3、滤纸或纱布4、比色杯5、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、类胡萝卜素提取：编号名称TP105950TStorage试剂(A): Carotenoid Assay buffer500ml RT 试剂(B): 提取粉剂3g RT 使用说明书1份①取菠菜或其他植物新鲜叶片，洗净，擦干，去中脉，称取剪碎的新鲜样品0.1g，置于研钵或匀浆器，加入少量提取粉剂)和Carotenoid Assay buffer，研磨或匀浆成液态。
叶绿素测定分光光度法
叶绿体色素含量的测定——分光光度法叶绿体色素含量的测定——分光光度法叶绿体色素溶液各组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。
因此，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度，根据经验公式即可计算出色素溶液中各色素浓度，不同溶剂所提取的色素吸收光谱有差异，因此，应使用不同的计算公式。
叶绿体色素的提取常用丙酮和乙醇有机溶剂。
叶绿体色素80 ％丙酮提取液中叶绿素a 和 b 及类胡萝卜素分别在663nm 、646nm 和470nm 波长下有最大吸收峰，而95 ％乙醇提取液中它们则在665nm 石49nm 和470nm 波长下具有最大吸收峰，据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式（见结果计算），计算出叶绿体色素丙酮（或乙醇）提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织（鲜重、干重或面积），求算出色素的含量。
[ 实验目的]掌握分光光度法对植物叶绿体色素提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度测定与计算方法，以及植物材料中各种色素含量的求算方法。
[ 器材和试剂]1 ．植物材料新鲜（或烘干）植物叶片，如菠菜叶片等。
2 ．实验器材分光光度计、天平、研钵、剪刀、漏斗、滤纸、棕色容量瓶、吸水纸、擦镜纸和滴管。
3 ．实验试剂80 ％丙酮（或95 ％乙醇）、石英砂和碳酸钙粉。
[ 操作步骤］1 ．色素的提取①称取新鲜（或干材料）的洗净擦于的植物叶片0.5g （或一定面积），去中脉、剪碎后放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2~3ml80 ％丙酮（或95 ％乙醇），冰浴中研磨至组织变白，再加丙酮10ml ，研成匀浆，暗处静置约10m in 。
②将提取液过滤到50 ml 棕色容量瓶中，用丙酮反复冲洗研体与研棒数次并用少量丙酮反复冲洗滤纸和残渣，直至无绿色为止，以使色素全部转移入容量瓶。
最后用丙酮定容至50 ml ，摇匀，并保存于暗处备用待测。
植物可溶性糖含量试剂盒(可见分光光度法)使用说明
植物可溶性糖含量试剂盒(可见分光光度法)使用说明货号：SH103规格：50管/48样产品简介：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
检测原理为蒽酮比色法。
可用于可溶性单糖、寡糖和多糖的含量测定，具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、沸水浴、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、浓硫酸、研钵和蒸馏水。
产品内容：试剂一：粉剂×2瓶，4℃避光保存；试剂二：10mL×1瓶，4℃保存；工作液的配制：临用前在每瓶试剂一中加入2.5mL试剂二。
充分溶解后使用，如较难溶解，可加热搅拌。
操作步骤：一、样品中可溶性糖的提取：称取约0.05g样本，加入0.5mL蒸馏水研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，沸水浴10分钟（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，常温离心10min，取上清液于10ml试管中，用蒸馏水定容至10ml，摇匀备用。
二、测定操作表：试剂（µL）空白管测定管样本200蒸馏水400200工作液100100浓硫酸10001000混匀，置沸水浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，用空白管调零，在620nm波长下读取吸光值。
注意：由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
可溶性糖含量计算：1、标准条件下测定的回归方程为y=1640x-0.07；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、可溶性糖（µg/g鲜重）＝(A测定管＋0.07)÷8.55÷样本鲜重（g/mL）。
3、可溶性糖（µg/mg蛋白）=(A测定管＋0.07)÷8.55÷蛋白浓度（mg/mL）。
胡萝卜素含量的测定
思考题：
• 1、高效液相色谱仪的组成与工作主要 流程？
• 2、高效液相色谱的特点？ • 进行哪些预处理？ • 4、色谱图中β-胡萝卜素吸收峰峰高、峰
面积与样品中β-胡萝卜素浓度和纯度有 何关系？
•
β-胡萝卜素含量测定原理
β-胡萝卜素为脂溶性维生素A的前体，存在于各 种动植物体内，可以直接用有机溶剂提取后进行 检测，然后利用反相色谱法分析。
3、. 实验仪器和材料
仪器： 高效液相色谱仪 紫外检测器等。
试剂材料：β-胡萝卜素； 乙酸乙酯； 正己烷； 色谱甲醇； 新鲜胡萝卜。
4、实验操作步骤：
• 式中 m：10g(mL)样品中β-胡萝卜素含量（mg）；
• m1：标样进样体积中β-胡萝卜素含量（mg）；
• m2：样品称样质量（g或mL）；
• A1：标样峰面积值；
• A2：样品峰面积；
• V1：样品进样质量（μL）；
• V2：样品定容体积（mL）。
实验注意事项
• 1、样品的预处理； • 2、流动相的过滤脱气处理； • 3、色谱条件的选择。
高效液相色谱 法测定 β—
胡萝卜素含量
实验指导
一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器材料 四、实验操作步骤 五、实验结果 六、实验思考题
1、实验目的
1、理解高效液相色谱法的目的和意义； 2、理解和掌握高效液相色谱法的原理和方法； 3、掌握高效液相色谱仪的操作。
2、实验原理
高效液相色谱仪的组成与工作主要流程如下图所示：
（1）标准溶液的配制：精确称取100mg的含量为30%的β-胡 萝卜素标准品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量 瓶中。进样时取1ml，稀释定容到100ml。
（2）样品的制备：取样品，捣碎成浆状，称取10g，加甲醇、 正己烷各10ml研磨。过滤后，滤液以及用乙酸乙酯洗 涤渣的滤液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕 色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。
植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4268
可见分光光度法植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4268规格:50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体×1瓶（自备）4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存溶液的配制：提取液：自备80%丙酮，将丙酮:蒸馏水（V:V）=4:1混合待用，提供一个125mL空瓶。
产品说明：类胡萝卜素(carotenoid)是一类重要的天然色素的总称，普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类的黄色、橙红色或红色的色素之中。
类胡萝卜素是体内维生素A的前体，同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、减轻心血管疾病及着色剂等作用。
植物的类胡萝卜素存在于各种黄色质体或有色质体内；如黄叶，黄色花卉，黄色和红色的果实和黄色块根等组织，样本通过溶剂萃取，分离提取类胡萝卜素，在440±10nm处有特殊吸收峰。
大部分高等植物和藻类微生物的叶绿体内也含有类胡萝卜素，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，而叶绿素a和叶绿素b既吸收红光又可吸收蓝紫光。
所以针对含叶绿体的组织，为排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卜素的干扰，根据经验公式先计算出叶绿素a和叶绿素b的含量，再进一步得出类胡萝卜素的含量；针对不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卜素的经验消光系数进行计算。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、1mL玻璃比色皿、天平、可调式移液枪、研钵/匀浆器、10mL离心管/试管、蒸馏水和丙酮。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、新鲜植物叶片（去掉中脉）或其他组织用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，称取约0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。
2、加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL离心管或试管中。
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植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4330
规格:50T/48S
产品简介：
类胡萝卜素(carotenoid)是一类重要的天然色素的总称，普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类的黄色、橙红色或红色的色素之中。
类胡萝卜素是体内维生素A的前体，同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、减轻心血管疾病及着色剂等作用。
植物的类胡萝卜素存在于各种黄色质体或有色质体内；如黄叶，黄色花卉，黄色和红色的果实和黄色块根等组织，样本通过溶剂萃取，分离提取类胡萝卜素，在440±10nm处有特殊吸收峰。
大部分高等植物和藻类微生物的叶绿体内也含有类胡萝卜素，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，而叶绿素a 和叶绿素b既吸收红光又可吸收蓝紫光。
所以针对含叶绿体的组织，为排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卜素的干扰，根据经验公式先计算出叶绿素a和叶绿素b的含量，再进一步得出类胡萝卜素的含量；针对不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卜素的经验消光系数进行计算
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、1mL玻璃比色皿、天平、可调式移液枪、研钵/匀浆器、10mL离心管/试管、蒸馏水和丙酮。
产品内容：
提取液：自备，80%丙酮，即将丙酮:蒸馏水（V:V）=4:1混合待用。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。
操作步骤：
一、样本制备：
1、新鲜植物叶片（去掉中脉）或其他组织用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，称取约0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。
2、加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL离心管或
试管中。
3、用提取液冲洗研钵或匀浆器，将所有冲洗液转入10mL 离心管或试管中，用提取液定容至10mL，置于黑暗条件或者包上锡箔纸浸提3h （期间可以颠倒混合2次），观察底部组织残渣接近于白色则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至组织残渣颜色接近于白色。
二、测定步骤：
A、黄色或其他非绿色组织（不含叶绿体）类胡萝卜素含量测定步骤：
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至440nm，用提取液调零。
2、取上层浸提液1mL 于1mL 玻璃比色皿中，测定440nm 处吸光值，记为A 440。
B、新鲜植物叶片或其他绿色组织（含叶绿体）类胡萝卜素含量测定步骤：
1、分光光度计预热30min 以上，调节多波长至470nm、646nm 和663nm，用提取液调零。
2、取上层浸提液1mL 于1mL 玻璃比色皿中，测定470nm、646nm 和663nm 处吸光值，分别记为A 470、
A 646和A 663。
注意：若上层浸提液有残渣，可吸取1.2mL 上层浸提液置于1.5mL 棕色EP 管，常温下4000r/min 离心5min，再取上清液检测。
三、类胡萝卜素含量的计算
A、黄色或其他非绿色组织（不含叶绿体）类胡萝卜素含量的计算公式：
类胡萝卜素含量（mg/g 鲜重）=A 440÷（ε×d）×V 样总×1000÷W×F
=0.04×A 440×F÷W
V 样总：提取液总体积，0.01L；1000：单位换算系数，1g =1000mg；ε：类胡萝卜素经验消光系数，250L/g/cm；d：比色皿光径，1cm；F：稀释倍数；W：样本质量，g。
B、新鲜植物叶片或其他绿色组织（含叶绿体）类胡萝卜素含量的计算公式：
C a （mg/L）=12.21×A 663-2.81×A 646
C b （mg/L）=20.13×A 646-5.03×A 663
类胡萝卜素浓度：C c （mg/L）=（1000×A 470-3.27×C a -104×C b ）÷229
=4.367×A 470-0.014×C a -0.454×C b
类胡萝卜素含量（mg/g 鲜重）=C c ×V 提取×F÷W =0.01×C c ×F÷W
V 提取：提取液体积，0.01L；F：稀释倍数；W：样本质量，g。
注意事项
1.若不确定组织中有无叶绿素影响，可取样本提取液采用分光光度计在波长400-700nm 下进行扫描，看
波长640-670nm 之间有无波峰，有波峰则为有叶绿素，反之则无。
2.当A 超过1时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数F。
3.为了避免色素见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
4.提取液易挥发，操作时做好防护措施。
5.测定大量样本时，注意比色池中用来调零校正的比色皿中的提取液的液面位置，防止挥发造成误差。