黄芩素脂质体的制备及体外释放的研究

黄芩素脂质体的制备及体外释放的研究

姚亚红,张立伟3

(山西大学分子科学研究所,山西太原030006)

摘　要:目的:研究黄芩素脂质体的制备方法。方法:采用逆相蒸发法、薄膜-超声法制备黄芩素脂质体,利用紫外光谱测定包封率以及浆板法测定体外释放曲线。结果:逆相蒸发制备的脂质体平均粒径179nm ,包封率和载药量分别为92.57%和23.24%;薄膜超声法平均粒径257nm ,包封率和载药量分别为60.02%和7.70%,在PH7.4磷酸盐缓冲液中体外释药符合Higuchi 方程。结论:逆相蒸发法操作简单,重现性好,制备的脂质体粒径小、包封率高,药物具有一定的缓释性。

关键词:黄芩素;脂质体;包封率;制备

中图分类号:R944.9 文献标识码:A 文章编号:1002-2392(2006)03-0031-03

收稿日期:2005-09-02

资助项目:山西省自然科学基金(20041102)

作者简介:姚亚红,女,(1979-),硕士研究生,研究方向为天然药物提取

与分离与药物制剂。

3通讯作者:张立伟,E -mail :lwzhang @ 。 黄芩素(baicalein )为黄酮类化合物,是唇形科植物

黄芩(Scutellaria baicalensis G eorgi )的主要有效成分之

一。具有抗菌、抗病毒、抑制炎症反应、保肝、利胆、利

尿、抗癌等作用,具有很好的临床应用价值[1]。但是黄

芩素水溶性差,且易被氧化。大量研究表明,脂质体有

包封脂溶性药物或水溶性药物的特性,药物被脂质体

包封后,保护了药物免受降解,增加了其在水中的溶解

度,且在体内呈现出与药物本身不同的特点。另外,脂

质体作为药物的载体,具有靶向性、缓释性,可增加疗

效,降低药物的毒副作用[2]。根据黄芩素的性质,本研

究以包封率为评价指标,探讨了黄芩素脂质体的制备

方法,并对其体外释放进行考察。

1　实验材料

1.1　仪器

K Q3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公

司);HP 8453UV 一ViS 吸收光谱仪(美国惠普公司);

透射电子显微镜(H -600-2日本日立公司);激光粒

度分析仪(ZET ASIZER 3000HS A ,Malvern InstrumentsC o.

L td ,UK );冷冻干燥机(ct60e Heto );旋转蒸发仪RE -

52A (上海亚荣生化仪器厂);TG L -16C 型台式离心机

(上海安亨科学仪器厂);FSH -2A 可调高速匀浆机(江

苏金坛医疗仪器厂)。

1.2　试剂

黄芩素为自制;蛋黄卵磷脂(E pc ,北京双旋微生物

培养机制品厂);胆固醇(Chol ,北京奥博星生物技术责

任有限公司);其它化学试剂均为分析纯。

2　方法和结果

2.1　黄芩素标准曲线的制作精密称取黄芩素10.4mg 置10ml 容量瓶中,用叔丁醇溶解并稀释至刻度。再分别吸取53、58、64、70、77、85、110、142μl ,用蒸馏水定容至10ml ,制成不同浓度的溶液,以蒸馏水为空白,测定各溶液在272nm 处的吸收值。结果表明,黄芩素在272nm 处的吸光度A 与其浓度C 呈良好的线性关系,线性范围为50～140Πml ,其线性回归方程为:C =0.73818+16.04372A (r =0.9998)。2.2　脂质体的制备2.2.1　逆相蒸发法　称取一定比例[3]的E pc 和Chol 溶于无水乙醚中,将适量黄芩素溶于10ml 磷酸盐缓冲液(P BS ,PH6.8)中。再将含有药物的P BS 与有机相混合,水浴超声处理,直至形成稳定的W ΠO 型乳剂,然后于旋转蒸发仪中减压蒸发除去乙醚,达胶态后再加入10mlP BS 水化,继续减压蒸发,即得淡乳黄色脂质体混悬液。2.2.2　薄膜-超声法[4]　称取同样比例的类脂溶于无水乙醚中,然后于旋转蒸发仪中减压蒸发除去乙醚,使类脂在圆底烧瓶内壁形成一层均匀薄膜。加入适量黄芩素磷酸盐缓冲液,水化脂膜,冰浴超声破碎一定时间,即得淡乳黄色脂质体混悬液。2.3　包封率和载药量的测定分别精密吸取2种不同方法制备的黄芩素脂质体混悬液1.0m1,进行离心(13000rpm ,30min ),取上清液于10ml 容量瓶,用蒸馏水和叔丁醇(2∶lv Πv )的混合溶剂定容。于272nm 处测定吸光度,代入标准曲线方程计算游离药物的量(W 游)。同时精密量取1.0ml 的混悬液于25ml 容量瓶中,同法处理,得总药物的量(W 总)。按下式计算包封率和载药量:包封率=(W 总-W 游)ΠW 总×100%;载药量=(W 总-W 游)ΠW 载×

100%,结果见表1。・

13・中医药学报2006年第34卷第3期

表1　2种方法制备的黄芩素脂质体各项指标

黄芩素脂质体

逆相蒸发法薄膜超声法平均粒径(nm )

179258粒径分布(nm )

150～23080～560平均包封率(%)

88.8660.02平均载药量(%)8.897.702.4　形态学与粒径分布的研究

2.4.1　形态的研究取少量黄芩素脂质体混悬液,

滴至专用铜网上,自

然挥干后,在放大5万倍的透射电镜下观察粒子形态

并拍摄照片,2种不同方法制备的脂质体结果见图1。

由透射电镜照片可见,制备的脂质体呈完整的圆球形

或椭圆形的小囊泡。图1　逆相蒸发法制备的黄芩素脂质体(×50000)

2.4.2　粒径测定　取脂质体少量,适量蒸馏水稀释

后,用激光粒度分析仪测定2种方法制备的脂质体的

平均粒径及粒度分布。由表1可明显看出,采用逆相

蒸发法制备的脂质体粒径小,分散性好,包封率高。由

此确定脂质体制备方法为逆相蒸发法。

2.5　不同药脂比对包封率的影响

固定药物的用量,选择不同的药物与类脂的比例,

其它条件不变。实验表明:当药物与类脂的比在1:4

左右时,包封率最高,载药量最大,见表2。

表2　不同药脂比制备的黄芩素脂质体的包封率(n =3)

药物:类脂(W ΠW )

平均包封率(%)平均载药量(%)1∶20

82.32 5.141∶10

88.868.891∶489.2321.38

2.6　不同比例的E pc 和Chol 对脂质体包封率的影响

加入胆固醇,可使脂膜固化,

减少脂质的流动性,

从而降低了药物的渗漏。为此,设计了不同比例的

E pc 和Chol ,并固定药脂比为1∶4。考察了其包封率和

载药量的变化,实验表明,随着胆固醇的增加,包封率

和载药量有明显的增大。结果见表3。表3　不同比例E pc 和Chol 制备的黄芩素脂质体(n =3)E pc ∶Chol (w Πw )平均包封率(%)平均载药量(%)6∶176.9518.584∶189.2321.382∶192.5723.241∶288.5621.36

2.7　分散方法对脂质体包封率的影响在形成稳定的乳剂时,不同的分散法对脂质体的

粒径和包封率均有影响。采用匀浆法和超声法测定其包封率,结果见表4。表4　不同分散法制备的黄芩素脂质体(n =3)分散法平均包封率(%)平均载药量(%)匀浆法

89.8122.36超声法92.5723.24

2.8　脂质体稳定性的考察

将制备的混悬液用适量蒸馏水稀释后,室温保存1个月,未见有沉淀聚集,而包封率降低了约10%。可见,药物有明显的渗漏。但是,将制备的脂质体混悬液加入冻干保护剂,冷冻干燥[5]后,放置1个月,几乎未见有渗漏。2.9　黄芩素脂质体的体外释放动力学研究[6]称取30mg 的黄芩素脂质体干粉,加2ml 蒸馏水溶解,置透析袋中,放在装有50m10.2M 的PH7.4磷酸盐缓冲液锥形瓶中,在(37±0.5)℃恒温下以浆板法测定体外释药性能(100rpm 搅拌,间隔1h 吸取外液3ml ,然后补加3mlP BS )。于272nm 处测定所取溶液的吸光度,以PH7.4磷酸盐缓冲液为空白。代入标准曲线方程,计算不同时间药物的释放量,结果:在PH7.4磷酸盐缓冲液中体外释药符合Higuchi 方程:Q =25.4525+8.69484t 1Π2,(r 2=0.942)见图2。图2　黄芩素脂质体的体外释放曲线3　讨论在黄芩素脂质体混悬液的制备过程中,对逆相蒸发法、薄膜-超声法进行了单因素考察,薄膜-超声法

制备的粒径大、包封率低、稳定性也较差,而逆相蒸发

法当控制水相与有机相在1∶3～1∶6时,重现性好,且

粒径小、包封率高。结果表明,逆相蒸发法更适合黄芩

素脂质体的制备;对逆相蒸发法进行了不同药脂比、膜

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23・AC MP 1Aug ,2006,V ol 134,N o 13