细胞融合技术
细胞融合技术的现状与问题
细胞融合技术的现状与问题
细胞融合技术的现状与问题
细胞融合技术是一种利用细胞的形态和内在特异性的过程，它将两种或两种以上不同特性的细胞联合在一起，从而实现共同的功能。
它可以帮助研究者了解蛋白质和基因之间的关系，以及发生在细胞内的各种过程。
最近，细胞融合技术已被用于研究细胞周期调控，细胞分化和细胞迁移等复杂细胞过程，以及蛋白质、基因表达调控的机理。
尽管细胞融合技术的应用已取得了一定的成功，但仍存在一些技术方面的问题。
首先，细胞融合技术的失效率很高，这是由于细胞融合过程中需要同时考虑到多种因素，如细胞类型、激素水平、膜通道状态等。
此外，细胞融合技术需要利用分子生物学技术实现，在实际操作中也容易出现失误，从而降低细胞融合的成功率。
其次，细胞融合对人体安全性也是一个问题。
细胞融合技术不仅改变了细胞的特性，还可能产生的毒性物质，并对人体的基因组造成改变。
此外，细胞融合技术还可能产生融合细胞，该细胞具有和原细胞不同的特性，可能会对正常细胞的生长和功能产生不利的影响。
最后，细胞融合技术的结果不够精准。
由于细胞融合技术的失效率较高，结果往往受到人为因素的影响，而且在大量细胞样本的分析中，失效的细胞数量也越来越大，从而降低了整体结果的精准度。
总之，细胞融合技术是一项强大而复杂的技术，它可以为细胞生物学研究提供有价值的信息。
但是，它也存在着一些技术方面的问题，
因此需要进一步开发和完善，以提高其有效性和安全性。
细胞融合技术(上课用)
隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生
出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗
体。
在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞 能无限增殖形成细胞群吗？ 什么样的细胞能够在体外无限增殖呢？ ——肿瘤细胞！
D 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就
不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂
种细胞因为可以利用淋巴细胞中的 S 途径合成DNA
而增殖。
②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交 瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养， 使每孔细胞不超过一个，再由这些单细胞克隆生 长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那 些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。 最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩 大培养。
小资料：
①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被
氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般 不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能
不断分裂增殖。
你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？
在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有
植物体细胞杂交
杂交的两个细胞
用纤维素酶、果胶酶处 理细胞壁
植 物 细 胞 融 合
原生质体Ａ、Ｂ
经离心、振 动、电刺激 用聚乙二醇 （ＰＥＧ） 诱导 再生细胞壁 （植物体细胞 融合完成的标 志）
融合后的原生质体 杂种细胞
细胞分裂 脱分化 再分化
植物 组织 培养
愈伤组织
杂种植株
白菜
细胞融合方法
细胞融合方法
细胞融合是一种重要的生物学技术，它可以将两个或多个细胞融合成一个细胞，从而产生新的细胞。
在生物学研究和生物技术应用中，细胞融合方法被广泛应用于细胞生物学、遗传工程、细胞治疗等领域。
本文将介绍几种常见的细胞融合方法。
电融合是一种常用的细胞融合方法。
在电融合中，通过施加高电压脉冲使细胞
膜通道扩张，从而使两个细胞融合成一个细胞。
电融合方法简单、快速，适用于多种类型的细胞，但对细胞的生存率有一定的影响。
化学融合是另一种常见的细胞融合方法。
在化学融合中，通过化学诱导剂或有
机溶剂的作用，使细胞膜通道扩张，从而促使细胞融合。
化学融合方法操作简便，对细胞的影响较小，但需要选择合适的化学诱导剂和浓度。
另外，还有一种常见的细胞融合方法是病毒介导的融合。
在这种方法中，利用
病毒载体将目标细胞融合蛋白导入到细胞内，从而促使细胞融合。
病毒介导的融合方法可以实现特异性的细胞融合，但需要对病毒载体进行严格的安全性评估。
除了以上几种常见的细胞融合方法外，还有一些新兴的细胞融合技术，如光融合、声波融合等，这些方法在特定领域具有潜在的应用前景。
总之，细胞融合方法在生物学研究和生物技术应用中具有重要的意义，不同的
融合方法各有特点，可以根据具体的研究目的和应用需求选择合适的方法。
随着技术的不断进步和创新，相信细胞融合方法将在未来发展出更多的新技术和应用。
细胞融合技术名词解释
细胞融合技术名词解释
细胞融合技术是一种将两个不同种类或同种类的细胞融合在一起的技术。
以下是细胞融合技术中常见的名词解释：
1. 融合体：由两个或多个细胞融合形成的合成细胞。
2. 臭氧化物：一种用于诱导细胞融合的化学物质。
3. 电融合：一种利用电流来促进细胞融合的技术。
4. 超声波融合：一种利用超声波来促进细胞融合的技术。
5. 筛选：选择出融合细胞中特定的目标细胞。
6. 核融合：将两个细胞的细胞核融合在一起的技术。
7. 免疫选择：利用特定的抗体或细胞表面标记选择出特定类型的细胞。
8. 原位杂交：一种分子生物学方法，用于确定细胞中某个特定基因或RNA的存在情况。
9. 基因融合：将两个不同基因的序列进行融合，生成新的融合基因。
细胞融合的方法
细胞融合的方法
细胞融合是一种重要的生物学技术，它可以将两个或多个细胞融合成一个细胞，从而实现细胞的杂交和重组。
细胞融合在生物医学研究、生物工程和生物技术领域有着广泛的应用，可以用于细胞治疗、基因工程、疾病模型的建立等方面。
下面将介绍几种常见的细胞融合方法。
1. 电脉冲法。
电脉冲法是一种常用的细胞融合方法，它利用瞬间高压电脉冲的作用使细胞膜通透性增加，从而使得两个细胞的质膜融合。
这种方法操作简单，融合效率高，广泛应用于细胞杂交、细胞治疗等领域。
2. 化学诱导法。
化学诱导法是利用化学物质诱导细胞融合的方法，常用的诱导剂包括聚乙二醇和聚乙烯醇。
这些化学物质可以破坏细胞膜，促进细胞融合。
化学诱导法操作简便，但对细胞的损伤较大，融合效率较低。
3. 病毒介导法。
病毒介导法是利用病毒作为载体，将两个细胞感染，使得两个
细胞的质膜融合。
这种方法融合效率高，但存在病毒感染的风险，
不适用于临床应用。
4. 融合蛋白介导法。
融合蛋白介导法是利用融合蛋白将两个细胞融合的方法，通过
融合蛋白的作用，促进细胞融合。
这种方法操作简单，融合效率高，适用于细胞杂交、基因工程等领域。
总结。
细胞融合是一种重要的生物学技术，可以实现细胞的杂交和重组，广泛应用于生物医学研究、生物工程和生物技术领域。
电脉冲法、化学诱导法、病毒介导法和融合蛋白介导法是常见的细胞融合
方法，它们各有优缺点，可以根据具体应用选择合适的方法进行细
胞融合实验。
希望本文介绍的内容对您有所帮助。
简述细胞融合的三种方法及其原理。
简述细胞融合的三种方法及其原理。
细胞融合是生物学研究中常见的技术手段，可以让不同细胞相互融合，产生新的细胞体系。
细胞融合有多种方法，其中比较常见的有三种：电穿孔法、聚合物法和化学法。
1. 电穿孔法
电穿孔法是一种通过电场刺激细胞膜使其短暂性通道的技术。
一个电场被施加在一个包含两种细胞的混合物上，这些细胞处于暂时开放的状态，此时它们可以聚集成一个共同的体系。
这种方法在体外胚胎发生的研究中被广泛使用，因为能够将精子和卵子结合在一起，形成合子。
2. 聚合物法
聚合物法通常被称为聚乙二醇融合法（PEG），PEG是一种高分子聚合物，将两种互不相容的细胞暴露在其下时可以使其互相融合。
这种方法通常被用于融合细胞膜不容易被电穿孔的情况下，比如人肝癌分裂后的肿瘤细胞。
PEG被认为是缓慢地溶解了细胞膜的存在，从而带来了细胞体中的融合。
3. 化学法
化学法将细胞膜表面使用特殊化学物质覆盖，从而形成一个融合机制。
这些成分
通常是两性离子基，如溴化锭离子（BR）和醋酸骨架体离子（ABT）是最常用的。
一旦细胞表面被包裹了这些化合物，它们会被带入一个电场环境并自行结合。
这种方法被广泛用于体外或体内制备混合细胞吸入无数的空气泡中，以用于非侵入性的支气管病变治疗。
以上三种方法是常用的细胞融合技术，尤其在生物学研究中，根据需要的实验目的选择不同的方法来获得合适的融合细胞。
细胞融合技术
细胞融合技术
细胞融合是一种令人兴奋的发展，它深刻地改变了生物学家们对细胞学的看法，提供了新的研究方式，可以增强研究领域的空间和视角，从而有助于更好地理解细胞的结构和功能。
细胞融合技术利用细胞中特定的蛋白，从而使两个不同的细胞可以融合在一起，并且可以将不同物种的细胞融合在一起。
研究人员们认为，细胞融合技术可以用于对不同物种细胞的生物学行为进行更细致的研究，可以使研究者更好地理解细胞的行为，从而有助于更好地了解细胞的特性。
此外，细胞融合技术还可以用于改变细胞的形状，尤其是将特定类型的细胞融合在一起可以改变其形状，从而改变细胞的功能。
另外，细胞融合技术也可以用于建立器官系统，科学家们可以通过将不同物种细胞融合在一起，形成拥有不同功能的细胞群，从而形成器官系统。
通过该技术，科学家们可以更好地模拟生物系统，同时更好地研究器官系统的特性和功能。
此外，细胞融合技术也可以用于治疗疾病。
近年来，科学家们已经成功地将不同物种的细胞融合在一起，从而实现更有效的癌症治疗。
研究人员们还可以使用细胞融合技术，将不同物种的免疫细胞融合在一起，从而改善患者的免疫功能，从而有助于获得更好的治疗效果。
因此，细胞融合技术是一个可以用于改变细胞的形状，建立器官系统，改善免疫功能和治疗癌症等多种目的的技术。
它为科学研究提供了新的空间，使科学家能够更好地理解细胞的结构和功能，并可以
借助这种技术来改善人们的生活质量。
因此，细胞融合技术的发展前景是非常广阔的，有很多方面都可以研究和开发，使其更好地发挥潜力，从而为人类健康、发展带来不可估量的福祉。
细胞融合技术及其在医药中的应用
细胞融合技术及其在医药中的应用
细胞融合技术是一种将两个或多个不同细胞融合成一个单一细
胞的技术。
这种技术被广泛应用于许多领域，包括生物学、医学和生物工程学。
它可以用于制造生物医药品、疫苗和治疗癌症等疾病的药物。
细胞融合技术的应用之一是生产单克隆抗体。
这种技术将人造抗原与B细胞融合，形成单克隆抗体，可以用于治疗癌症、自身免疫性疾病和传染病等。
此外，细胞融合技术还可以将肿瘤细胞与免疫细胞融合，产生“混杂”细胞，可以被用作癌症治疗的一种新型方法。
在生物医学研究中，细胞融合技术也被广泛应用于研究血液病和肿瘤等疾病的发生和治疗。
细胞融合技术可以将癌细胞与正常细胞融合，从而研究它们的生长和分化的差异，以及确定治疗的最佳方法。
总之，细胞融合技术在医药领域具有广泛的应用前景，可以为人类健康事业做出重要贡献。
- 1 -。
细胞融合技术的应用与原理
细胞融合技术的应用与原理1. 介绍细胞融合技术细胞融合技术是一种将两个或多个细胞融合在一起形成一个新的细胞的技术。
通过融合不同种类的细胞，可以实现细胞互补或新的细胞功能的产生。
细胞融合技术在生物医学领域有着广泛的应用。
2. 细胞融合技术的原理细胞融合技术的原理是通过人为干预，使得两个或多个细胞融合在一起形成一个新的细胞。
这种融合通常涉及到细胞膜的融合，使得两个细胞的质膜融为一体。
而细胞融合的方式可以通过物理或化学方法实现。
2.1 物理融合法物理融合法是指利用物理手段促进细胞融合的方法。
常用的物理方法包括电融合、超声波融合、机械压力融合等。
这些物理方法可以通过破坏细胞膜及间质酶的作用，促进细胞融合的发生。
2.2 化学融合法化学融合法是指利用化学物质促进细胞融合的方法。
化学方法主要包括聚乙二醇融合、高铵盐融合等。
这些化学物质在一定的条件下可以改变细胞质膜的性质，使得细胞融合变得可能。
3. 细胞融合技术的应用细胞融合技术在生物医学领域有着广泛的应用，下面列举了几个常见的应用领域。
3.1 疾病研究细胞融合技术可以用于研究疾病的发病机制。
通过将正常细胞与病变细胞融合，可以模拟疾病的发展过程，并进一步研究疾病的关键因素和治疗方法。
3.2 细胞重编程细胞融合技术可以用于细胞重编程的研究。
通过将干细胞与其他类型的细胞融合，可以转化这些非干细胞为干细胞，并进一步应用于组织工程和再生医学领域。
3.3 抗肿瘤研究细胞融合技术可以用于抗肿瘤研究。
通过将癌细胞与免疫细胞融合，可以增强免疫细胞的抗肿瘤能力，并提高治疗效果。
3.4 物种转化细胞融合技术可以用于物种转化的研究。
通过将不同物种的细胞融合，可以创造出新的物种，探索生物进化和物种间的关系。
4. 细胞融合技术的前景与挑战细胞融合技术在生物医学领域具有广阔的前景，但同时也面临一些挑战。
4.1 生物伦理问题细胞融合技术涉及到对细胞生物学的深入理解和应用，同时也牵涉到生物伦理的问题。
3.细胞融合及单克隆抗体的制备
(3) 细胞融合： 50%PEG(400~1000), pH8.0, 37oC, 2min
3.融合细胞的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
4.抗体的检测
常用方法：
要求： ➢ 简便、快速、敏感; ➢ 在短时间内能检测大量样品
+3.6ml M
150ul/孔
E、F、 G、H
调细胞浓度为1-5х103cell/ml 取100个cell于7.2ml完全培养液 (M)中
2个cell/孔
1个cell/孔
0.5个cell/孔
6.杂交瘤细胞的鉴定
染 色 体 核 型 分 析
大规模培养——批量生产单克隆抗体
常用的大规模培养方法：
动物接种法 转瓶培养法
溶液能产生最多杂交细胞。 PEG溶液在pH6.0时细胞融合率最高。
PEG诱导融合的特点：其优点是融合成本低，勿 需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过 程不受物种限制。其缺点是融合过程繁琐，PEG 可能对细胞有毒害。
PEG的作用机理： Kao等认为，由于PEG分子具有 轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋 白质和碳水化合物等形成H键，从而在在质膜之间 形成分子桥，其结果是使细胞质膜发生粘连进而促 使质膜的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动 性，也使细胞的核、细胞器发生融合成为可能。
电融合的基本过程：
细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液
中时，电场通电后，电流即通过原生质体而不是通过 溶液，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶 极子，从而使原生质体紧密接触排列成串；
细胞融合实验原理
细胞融合实验原理细胞融合是一种重要的生物技术手段，通过将两个或更多的细胞合并成一个细胞，可以产生许多重要的应用，例如克隆动物、制备嵌合瘤细胞、产生单克隆抗体等。
细胞融合实验主要基于细胞的融合和细胞融合之后的细胞特性的分析。
细胞融合的原理主要涉及细胞融合的方法以及融合后的细胞和其代谢物的位置与功能的改变。
细胞融合的方法可以分为两种，一种是自发融合，即两个细胞自行发生融合；另一种是人工融合，通过外界因素的干预实现细胞融合。
自发融合在一些细胞类型中较为常见，例如肌肉细胞和骨骼细胞可以自发融合形成多核肌细胞。
而人工融合则需要借助一些特殊的处理手段来促进细胞融合。
例如，一种常用的人工融合方法是将细胞暴露在高渗溶液中，使其失去细胞膜的完整性，从而人为地促进细胞间融合。
细胞融合后，融合细胞中各个细胞器的分布与功能也会发生改变。
一般情况下，融合细胞会保留细胞的核和大部分质粒，但细胞质内质膜和内质网的结构会发生明显变化。
此外，融合细胞中一些特定蛋白质和酶的表达也会发生变化，这可能导致一些合成代谢通路的改变。
此外，融合细胞还可能表现出特殊的细胞功能，如一些肉毒杆菌通过与细胞融合后，能够在宿主细胞内产生神经毒素。
细胞融合之后的细胞特性改变的原理主要涉及细胞信号传导、基因调控和代谢通路的变化。
细胞融合后，细胞膜融合导致了融合细胞内外环境的混合，从而可能改变了细胞内的信号传导方式。
一些信号分子能够在融合细胞内传递，并调控一些关键基因的表达。
此外，一些速度快的信号传导通路，如离子通道、氨基酸转运体等，也可能在细胞融合后产生新的协同效应，从而使细胞的功能得以改变。
细胞融合还可能导致基因的调控发生变化。
融合细胞的两个源细胞可能具有不同的基因表达模式，它们在基因组和表观基因组上的差异可能导致融合后的细胞在基因表达方面与原始细胞不同。
此外，融合细胞的染色体也可能发生重排或增删等变化。
融合后的细胞还可能在代谢通路上发生变化。
融合细胞中可能出现新的代谢通路，这些代谢通路可能与源细胞的代谢通路不同。
细胞融合的优缺点和原理
细胞融合的优缺点和原理细胞融合是指两个或多个细胞融合成一个新的细胞的过程，通过融合可以将不同细胞的遗传物质和功能结合起来，产生新的细胞。
细胞融合在生物学研究和应用领域具有广泛的重要意义。
以下将探讨细胞融合的优缺点以及其原理。
一、细胞融合的优点：1. 跨种融合：细胞融合可以实现跨种或不同种细胞的融合，进而产生具有合并双亲特点的新细胞。
这对于研究物种之间的遗传差异和进化关系非常有意义，可以为物种起源和进化提供重要证据。
2. 细胞修复和再生：细胞融合可以促进细胞的修复和再生。
例如，在医学领域，细胞融合可以用于治疗某些疾病，如肝脏疾病、神经系统疾病等。
融合细胞可以提供健康细胞所缺乏的功能和物质，促进组织的修复和再生。
3. 基因改造和基因表达研究：通过细胞融合，可以将不同细胞的基因合并，进而产生带有新基因的细胞，用于研究基因功能和表达。
这对于我们理解基因在生命过程中的作用和调控机制非常重要。
4. 细胞间交流和协作：通过细胞融合，不同细胞之间可以实现共生共利。
融合的细胞可以通过交流和协作，共同完成一些复杂的功能和任务，如群体移动、集群防御等。
这对于理解细胞间相互作用和社会行为具有重要意义。
二、细胞融合的缺点：1. 遗传问题：细胞融合可能会导致遗传信息的混合，进而产生突变或异常。
一些遗传信息可能会被抑制或丢失，或者增加复杂的遗传变异。
这种不确定性可能导致融合细胞的功能异常或不稳定。
2. 过程复杂性：细胞融合是一个复杂的过程，需要特定条件和技术来实现。
这对于研究和应用者来说，需要耗费大量的时间和精力来解决融合过程中的技术问题和困难。
3. 伦理问题：细胞融合可能涉及对人类和动物的伦理问题。
例如，在干细胞研究中，细胞融合有时需要使用胚胎细胞或人类胚胎提取的细胞，这引发了胚胎伦理问题和争议。
三、细胞融合的原理：细胞融合可以通过物理和化学方法实现，具体原理如下：1. 物理方法：物理方法包括电融合、光融合和超声波融合等。
细胞融合技术
动物细胞融合
动物细胞融合
有 何 同 ？ 不 同 ？
植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较
细胞工程 实质内容 植物体细胞杂交 动物细胞融合
改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品 使后代具有双亲 改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品(使后代具有双亲 的特性) 的特性 细胞膜的流动性;细胞增殖 细胞膜的流动性 细胞增殖 物理法：离心、振动、 物理法：离心、振动、电激 化学法： 化学法：聚乙二醇 生物法： 生物法：灭活的病毒 获得分离的单个动物细胞 (胰蛋白酶处理 胰蛋白酶处理) 胰蛋白酶处理 ↓ 诱导融合 ↓ 动物细胞培养 (细胞产品 细胞产品) 细胞产品 主要用于单克隆抗体的制备 (杂交瘤细胞 杂交瘤细胞) 杂交瘤细胞
细胞膜的流动性;植物细胞全能性 理论基础 细胞膜的流动性 植物细胞全能性 诱导手段 物理法：离心、振动、 物理法：离心、振动、电激 化学法： 化学法：聚乙二醇 去细胞壁 (纤维素酶、果胶酶 纤维素酶、 纤维素酶 果胶酶) ↓ 原生质体融合 (获得杂种原生质体 获得杂种原生质体) 获得杂种原生质体 ↓ 植物细胞培养 (获得植株 获得植株) 获得植株 获得白菜-甘蓝等杂种植物 获得白菜 甘蓝等杂种植物
单克隆抗体
（三）单克隆抗体的应用
①诊断疾病（识别作用， 诊断疾病（识别作用， 如同位素标记单克隆抗 可诊断肿瘤、 体，可诊断肿瘤、心血 诊断乳腺癌单克隆抗体 管畸形等）优点：准确、高效、简易、 管畸形等）优点：准确、高效、简易、快速 ②用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗， （主要用于癌症治疗，也可运 载药物， 生物导弹” 载药物，如 “生物导弹”）
选择培养基上培养
专一抗体 检验阳性
多种杂交细胞
杂交瘤细胞有何特点？ 杂交瘤细胞有何特点？
细胞融合技术
细胞融合技术Cell fusion1.SP2/0的准备：生长状态良好的话，长满的一瓶T75细胞可以和两只小鼠脾细胞融合。
融合前处理：弃旧培养基，然后用空白1640洗，再用空白1640吹打离心，弃上清，加4ml空白1640重悬备用。
注：细胞要求死细胞尽可能少，最好无死细胞。
融合时SP2/0可以稍微过量。
2.滋养层细胞的准备：首先将小鼠处死浸泡在75%的乙醇中消毒，然后在生物安全柜中用过火的镊子和剪子从右后腿根部向左后腿根部轻轻的慢点将皮剪开（不要剪破腹膜），然后用镊子夹紧皮右手按住尾巴根部，向上用力撕扯到前爪（注：皮毛不要挨住腹膜）。
然后用镊子夹住腹膜提起，在中央部位见一个3-4mm左右的小口。
再用吸管用将空白的1640（不需预热）从小口注入腹腔，前后左右各吹打5下，吸出放在干净的15ml的离心管中，重复，直至10ml 1640用完【5管 10ml/管】。
然后将离心管带入细胞间1500rpm 5min ，弃上清，用手立即弹管底将沉淀重悬防止沉淀粘连，最后加1640+20%FBS混匀，加到96孔板中（3599）。
注：50ul/孔×40板×96=192ml,配制200ml备用。
用200ul枪头吸时，吸的时候按到2挡，打的时候按到1档，可以减少气泡产生。
注：一般一只小鼠的滋养层细胞可以铺10块96孔板3.小鼠脾B1淋巴细胞提取融合前一个星期对小鼠进行加强免疫，然后处死小鼠，75%乙醇浸泡消毒。
与取滋养层细胞一样现将皮剪开，然后在右侧将腹膜剪开1cm左右口，用镊子夹起脾脏（力度要控制好）。
轻轻将粘连的脂肪剥离，然后将脾脏放在滤网上，在平皿中将脾脏用2ML注射的推子后端碾磨成单个细胞，用空白1640冲洗，收集到15ml的离心管中，然后再缓慢一滴一滴的沿着管壁加到盛有2mlB淋巴细胞分离液中（可以看到明显的分层）然后RT ,1300g、20min离心，加速和降速都要缓慢，然后在生物安全柜中吸取中间的黄色云状物（边吸边缓慢转圈，可以多吸点），再将吸出来的黄色云状物离心，弃上清，用1ml空白1640重悬。
细胞融合-方法-应用
• 体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系 统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体 DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统。
6
第二节 细胞融合常用的方法
7
按促融剂的不同分为
• 生物法 • 化学法 • 物理法
18
聚乙二醇（PEG）诱导法的步骤
1. 将两种不同亲本细胞各取5×l06个混匀； 2. 离心沉淀，吸去上清液； 3. 加1ml 50%PEG溶液，用吸管吹打，使之与细胞接触1分钟； 4. 加9ml 培养液，离心沉淀，吸去上清液； 5. 加5ml 培养液，分别接种5个直径60mm平皿，每个平皿加
培养液至 5ml，37℃的CO2培养箱中培养； 6. 6—24小时后，换成选择培养液筛选杂交细胞。
3
• 细胞融合技术作为细胞工程的核心基础技 术之一，已在农业、医药、环保等领域取 得了开创性的研究成果，而且应用领域不 断扩大。
• 细胞融合技术不仅为核质关系、基因调控、 遗传互补、细胞免疫学、肿瘤发生、基因 定位、衰老控制等理论领域的研究提供了 有力的手段，而且被广泛应用于免疫学、 遗传学、发生生物学，特别是在单克隆抗 体及动植物远缘杂交育种等方面具有十分
程； 免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
23
电融合的基本步骤
• 细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶 液中时，电场通电后，电流即通过原生质体而不 是通过溶液，其结果是原生质体在电场作用下极 化而产生偶极子，从而使原生质体紧密接触排列 成串。
• 膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给予高频 直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从而导致两个 紧密接触的细胞融合在一起。
细胞融合方法
细胞融合方法细胞融合方法是一种将两个或多个细胞融合在一起的科学技术。
这项技术广泛应用于生物医学研究和生物技术领域，包括细胞研究、干细胞研究、胚胎发育以及生物制药等。
细胞融合方法通过将细胞膜和细胞质融合在一起，实现细胞间的基因、蛋白质和其他细胞组分的交换。
这种方法不仅可以研究细胞的功能和相互作用，还可以创建具有特定特征和功能的细胞。
1. 介绍细胞融合方法的背景和意义细胞融合方法的发展源于人们对于细胞间相互作用的好奇和对于创造具有特定特征细胞的需求。
通过将来自不同细胞的基因和蛋白质相互组合，研究人员可以探究细胞的功能、发育机制以及潜在的疾病治疗方法。
细胞融合方法也为生物制药领域带来了新的机会，可以用于生产具有特定功能的蛋白质或抗体。
2. 细胞融合方法的基本原理和技术细胞融合方法主要包括物理法、化学法和基因工程法。
物理法通过使用电脉冲、超声波或激光等物理手段，破坏细胞膜的完整性，使细胞融合。
化学法则是通过特定的化学药物破坏细胞膜，使细胞质混合。
基因工程法则是通过基因工程技术将目标基因导入到一种带有融合能力的细胞中，从而实现细胞融合。
3. 细胞融合方法在生物医学研究中的应用细胞融合方法在生物医学研究中有广泛的应用，特别是在细胞功能和相互作用的研究中。
通过融合不同类型的细胞，研究人员可以分析它们在发育、分化和疾病进程中的相互作用。
细胞融合也可用于修复损伤组织和生成新的组织工程。
4. 细胞融合方法在干细胞研究中的应用干细胞是一种具有自我更新和多向分化潜能的细胞。
通过细胞融合方法，研究人员可以将干细胞与其他类型的细胞融合，形成单个细胞具有多种分化潜能的合成细胞。
这种方法可以有效地增加干细胞的分化效率，并为再生医学和组织工程提供新的可能性。
5. 细胞融合方法在生物制药中的应用细胞融合方法在生物制药领域也有重要的应用。
通过将人类细胞与其他物种的细胞融合，可以生产具有特定功能的蛋白质或抗体。
这项技术被广泛应用于生物药物的生产和治疗疾病。
5细胞融合
原生质体融合细胞的再生愈伤组织
三、物理法--电融合法
1、原理：
交流电场使原生质体表面电荷偶极化，沿着电极 排列，形成串珠。高频直流脉冲使原生质膜击穿， 从而导致两个紧密接触的细胞融合在一起。
与PEG融合比较起来，电融合有三大优点：
一是不存在对细胞的毒害问题； 二是融合效率高； 三是融合技术操作简便。
1）亲本 2）同核体：同源原生质体的融合体
3）异核体：非同源的原生质体的融合体
4）多核体：含有双亲不同比例核物质的融合体
5）异胞质体：具有不同胞质来源的杂合细胞。
为什么要筛选杂种细胞？
A+B
A、B、A+A、B+B ； A+B
生长快
如何筛选杂种细胞？尚无特定规律可循
最简单的方法是利用双亲细胞形态和色泽上的差
+
-
桥梁
+
-
+
-
电荷重排
+
- +
融合
+
- + -
原生质体膜接触
原生质体纯化
PEG法诱导原生质体融合过程
Hale Waihona Puke 融合过程影响因素：
分子量：400—6000（通常：1000—4000） 浓度： 20—60% （通常：30—50%） 时间： 悬浮法 1—2 min 离心法 5—8 min pH： 偏碱为宜（pH7.4—8.0）
二、动物细胞的筛选方式
1）利用抗药性筛选： 利用动物细胞对药物敏感性的差异筛选杂种细胞。 亲本A：对氨苄青霉素敏感，对卡那霉素不敏感 亲本B：对卡那霉素敏感，对氨苄青霉素不敏感 杂种细胞可以在含有两种抗生素的培养基上生长
细胞融合方法
细胞融合方法一、前言细胞融合是指将两个或多个细胞合并成一个细胞的过程。
这种技术可以用于许多研究领域，如免疫学、生殖医学、基因工程等。
本文将介绍几种常见的细胞融合方法及其操作步骤。
二、电穿孔法电穿孔法是一种常用的细胞融合方法，它利用高压电场使细胞膜产生暂时性的孔洞，从而使两个或多个细胞融合在一起。
1. 材料和仪器- 细胞培养物- 无菌PBS缓冲液- 无菌的10%葡萄糖溶液- 无菌的0.1M肌酸盐缓冲液（pH7.4）- 无菌的钨丝电极- 电穿孔仪2. 操作步骤（1）将培养物中的细胞离心收集，并用PBS缓冲液洗涤2次。
（2）向10%葡萄糖溶液中加入相同体积的培养物，轻轻混匀。
（3）将混合液离心收集，用0.1M肌酸盐缓冲液重悬。
（4）将细胞悬液移至电穿孔仪的电池室中。
（5）在钨丝电极上涂抹一层细胞悬液，并将另一个钨丝电极放置在悬浮的细胞上方，使两个钨丝电极之间的距离为1-2mm。
（6）施加高压电场，通常为200-300V/cm，持续时间为数微秒至数百毫秒。
（7）将细胞培养物移至含有10%葡萄糖溶液的无菌培养皿中，并在37℃下孵育。
三、PEG法PEG法是另一种常用的细胞融合方法，它利用聚乙二醇（PEG）使细胞膜发生结构改变，从而促进细胞融合。
1. 材料和仪器- 细胞培养物- 无菌PBS缓冲液- 无菌的50% PEG 1500溶液- 无菌的10%葡萄糖溶液- 无菌的培养皿2. 操作步骤（1）将培养物中的细胞离心收集，并用PBS缓冲液洗涤2次。
（2）向无菌的50% PEG 1500溶液中加入相同体积的培养物，轻轻混匀。
（3）将混合液在室温下静置15-20分钟。
（4）向无菌的10%葡萄糖溶液中加入相同体积的混合液，轻轻混匀。
（5）将细胞培养物移至含有10%葡萄糖溶液的无菌培养皿中，并在37℃下孵育。
四、脂质体介导法脂质体介导法是一种利用脂质体作为载体将DNA或RNA导入细胞内的方法，也可以用于细胞融合。
该方法需要制备含有两种不同类型脂质的脂质体，使其与两个或多个不同类型的细胞发生结合并融合。
细胞融合技术综述
细胞融合技术姓名：王洋专业：生物化学与分子生物学学号：3117107细胞融合技术作为细胞工程的核心基础技术之一,已在农业、医药、环保等领域取得了开创性的研究成果,而且应用领域不断扩大。
细胞融合技术不仅为核质关系、基因调控、遗传互补、细胞免疫学、肿瘤发生、基因定位、衰老控制等理论领域的研究提供了有力的手段,而且被广泛应用于免疫学、遗传学、发生生物学,特别是在单克隆抗体及动植物远缘杂交育种等方面具有十分重要的意义。
随着细胞融合技术研究的不断深入,细胞融合技术的发展前景及其产生的影响将日益显著。
1细胞融合及其意义1.1细胞融合的概念所谓细胞融合就是指在外力(诱导剂或促融剂)作用下,两个或两个以上的异源(种、属间)细胞或原生质体相互接触,从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象称为细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)。
如取材为体细胞则称体细胞杂交(somatic hybridization)。
体细胞融合后可形成四倍体或多倍体细胞,由此形成的杂交细胞,其特性会有很大的变化。
1.2细胞融合的机理最近研究表明 ,细胞融合与病毒和细胞之间的融合以及细胞内的膜泡融合有许多相似之处 ,即带包被的病毒 (或细胞)通过转膜病毒蛋白介导与宿主细胞的细胞膜进行融合。
I类病毒融合蛋白包括流感病毒红血球凝集素( HA)和人类免疫缺陷病毒包被蛋白 ,它们都具有相似的结构域,即都具有a-螺旋结构。
病毒和细胞之间正是通过这些蛋白来完成融合过程 (伴随有构象的变化)的。
细胞内的膜泡融合也是如此 ,其相关融合蛋白包括 GTPases 及SNARE家族。
因此推测细胞融合采用相似的机理。
然而细胞融合蛋白并不全具有a-螺旋结构 ,提示a-螺旋并非融合所必需。
1.3细胞融合的意义细胞能不受种属的局限可实现种间生物体细胞的融合,使远缘杂交成为可能,因而是改造细胞遗传物质的有力手段。
它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限,扩大了遗传物质的重组范围。
细胞工程在细胞融合技术上的应用
细胞工程在细胞融合技术上的应用什么是细胞融合技术？细胞融合技术（Cell Fusion Technology）是指将两个或更多的细胞合成一个细胞的过程。
细胞融合技术可以用于许多领域，例如制造抗体、生成细胞材料、制造生物传感器等。
什么是细胞工程？细胞工程（Cell Engineering）是将生化和遗传工程技术应用于细胞中，以改变细胞的行为和特性。
细胞工程在医学、工业和农业等领域中有着广泛的应用前景。
使用细胞工程可以制造高质量的蛋白质和抗体、改善细胞的代谢和药物生产等。
细胞工程在细胞融合技术上的应用提高融合效率细胞工程可以通过调制细胞膜上的融合基因和表达融合蛋白等方式，提高细胞融合的效率。
例如，利用基因编辑技术将特定基因删除或过表达，可以降低融合细胞间的抵抗。
生成高质量的蛋白质细胞融合技术可以用于从细胞中提取高质量的蛋白质。
利用细胞工程技术，可以调制细胞膜上的表面蛋白，从而提高蛋白质的稳定性和产量。
此外，融合细胞后，可以通过表达高质量的蛋白质，进一步提高其产量和纯度。
生成特定细胞类型融合细胞可以保留两个母细胞的遗传物质，从而生成新的细胞类型。
此外，利用细胞工程技术，可以控制融合细胞的特性，如调节细胞的代谢和分化路径等，从而生成特定类型的细胞。
可以制造细胞材料细胞材料能够模拟天然生物组织，在培养皿中进行生物活动。
细胞工程可以制造的细胞材料具有良好的生物相容性，从而广泛地应用于组织工程学、药物筛选等领域。
细胞工程技术为细胞融合技术提供了重要的支持，可以在提高融合效率、生成高质量蛋白质、生成特定细胞类型和制造细胞材料等方面发挥重要作用。
不难看出，细胞工程和细胞融合技术的结合能够在各种领域中得到广泛的应用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（三）单克隆抗体的应用
①诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗 体，可诊断肿瘤、心血管畸形等。最广泛应用）
②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗， 也可运载药物，如 “生物导弹”）
小结
单克隆抗体
两个过程
动物细胞融合过程 动物细胞培养过程 一个新细胞——杂交瘤细胞
二次筛选—筛选杂交瘤细胞、能 “一二三” 产生所需抗体的杂交瘤细胞 三个优势——产量大、特异性 强、灵敏度高(理化性质单一) 的优势
（一）单克隆抗体概念
1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念
用单个B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌 一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体 就叫做单克隆抗体。 2、怎样才能获得单克隆抗体？ 提示1：仅用细胞培养技术可行吗？ 提示2：什么样的细胞可以产生抗体？什么样的细 胞可以无限增殖？ 提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力 和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？
【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单 克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ A ） A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴 细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋 巴细胞 【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ D） A. B淋巴细胞 B．T淋巴细胞 C．骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞
原生质体Ａ、Ｂ
经离心、振 动、电刺激 用聚乙二醇 （ＰＥＧ） 诱导 再生细胞壁 （植物体细胞 融合完成的标 志）
融合后的原生质体 杂种细胞
细胞分裂 脱分化 再分化
植物 组织 培养
愈伤组织
杂种植株
白菜
甘蓝
白菜－甘蓝
•植物体细胞杂 交意义？p33
细胞融合技术可以避免 受精过程，在亲缘关系 较远的物种间实现基因 转移，创造出自然界没 有的新物种。
理论基础 细胞膜的流动性;植物细胞全能性 诱导手段 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 去细胞壁 (纤维素酶、果胶酶) ↓ 原生质体融合 (获得杂种原生质体) ↓ 植物细胞培养 (获得植株) 获得白菜-甘蓝等杂种植物
诱导过程
应用
【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ B ） A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动 【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ A） A. 具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖 C.可形成新个体 D.培养过程会贴壁 【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（ B ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞
杂交瘤细胞特点： 既能产生特异性 抗体，又能大量 增殖。
（二选）：选 能产生所需专 一抗体的杂交 瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内培养
获得产生相应 抗体的B细胞
BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）
√
（一选）选 择性培养基： 只有杂交瘤 细胞才能存 活
单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗 体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺 序是？
预习效果检测
１、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个 体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 不能，只能得到杂交细胞 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们 杂交或融合过程有什么影响？ 动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中 不须去除细胞壁和再生出细胞壁。 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的 方法有哪些？ 离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法
4．下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：
A B
(1)
C
(2)
D
纤维素酶和果胶酶 (1)若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用 _______________处理，除去 细胞壁 电刺激、振动、离心 ______；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是 ________________。融 合完成的标志是产生细胞壁 _______________. 植物组织培养 技术把D培养 (2)若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用______________ 成植株。 动物胚胎或幼龄动物的器官或组织 (3)若A、B是动物细胞，一般取自___________________________________, 然后 胰蛋白酶 使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的 用___________ 手段是________________ 灭活的病毒诱导 ，所形成的D称为__________ 杂种细胞 (4)若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前， 效应B细胞 小鼠已被注射了_____抗原 ，注射后小鼠身体产生了相应的__________ ，生成了 抗体和记忆细胞 _______________ 。图中B为_________________ 。 骨髓瘤细胞 (5)若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有______ 3 杂交瘤细胞 。从中选择出它的方法是 种，用来培养的D的细胞应该是_____________ 用特定的选择培养基 ________________培养，获得D后，常用的培养方法是______________ 培养基中培养 和 ________________ 小鼠腹腔内增殖 。
单克隆抗体
设计方案：
一个只分泌一种特异性抗体的B淋巴细胞 能无限增殖的小鼠骨髓瘤细胞
杂种细胞
（二）、单克隆抗体的制备过程
注射特定 抗原蛋白
培养骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓Biblioteka 细胞融合多种杂交细胞
第 1次筛选目的：得到杂 在具有筛选作用的培养基上培养 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 该细胞继承双亲细胞 交瘤细胞（多种）。 专一抗体检验阳性 杂交瘤细胞有何特点？ 的遗传特性，既能产生专 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞
一.细胞融合技术
• 概念：两个或两个以上的同种或异种细胞 融合成为一个细胞的过程 • 阅读课本第30-31页内容，回答问题： 1.什么叫细胞融合技术？ 用人工方法诱导细胞融合，并在一定条件下使融合细胞 分化再生，形成新物种或新品种的过程。 2.常用的人工诱导细胞融合的方法有哪几种？哪一种重 复性强，对原生质体伤害小，方法简单，可控性强？ 物理法：离心、振动、电刺激（伤害小，可控性强） 化学法：用聚乙二醇（ＰＥＧ）诱导
灭活的病毒：仙台病毒、疱疹病毒等（适合动物）
一.细胞融合技术
细胞A
物理法 化学法 灭活的病毒
细胞B
仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒
杂种细胞
融合后形成的单核细胞称为杂交细胞
二 、 植 物 体 细 胞 杂 交 技 术 与 作 物 育 种
杂交的两个细胞
用纤维素酶、果胶酶处 理细胞壁
植 物 细 胞 融 合
预习效果检测
4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还 有其他方法吗？ 能 ， 还可以利用灭活的病毒（生物方 法）进行诱导 ５、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本 原理是否相同？ 相同，都是细胞膜的流动性
预习效果检测
6、为什么要用灭活的病毒？ 病毒一般对生物体是有伤害的。 丧失感染活性 物理或 仙台病毒 化学方法 保留融合活性 7、细胞融合有什么意义？ 突破了有性杂交方法的局限， 使远源杂交成为可能。
克隆上述杂交细胞
（只考虑两两融合） 培养液中细胞有几 种类型？融合细胞 几种类型？ 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细 胞
注射到小鼠体内
一抗体又能无限增殖。 第2次筛选目的：在杂 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 交瘤细胞中筛选出能产 生所需抗体的杂交瘤细 胞。 体外培养 特异性强，灵敏度高 单克隆抗体
三.动物细胞融合与单克隆抗体
读下面一段文字资料，思考以下问题：
长期以来，为了获得抗体，采用的是把某 种抗原反复注射到动物体内，然后从动物 血清中分离出所需抗体的方法。用这种方 法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的 特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们 发现，在动物发生免疫反应的过程中，体 内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异 性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性 质单一、特异性强的抗体。要想获得大量 的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁 殖，即克隆。
植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较
细胞工程 实质内容 植物体细胞杂交 动物细胞融合 改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品(使后代具有双亲 的特性) 细胞膜的流动性;细胞增殖 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 生物法：灭活的病毒 获得分离的单个动物细胞 (胰蛋白酶处理) ↓ 诱导融合 ↓ 动物细胞培养 (细胞产品) 主要用于单克隆抗体的制备 (杂交瘤细胞)
“太空婚礼”
2002年12月30日， 两场筹备了10年的“太 空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞 “新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原 生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和 骨髓瘤细胞，两批新人同时在 “产房”—电融合 仪内孕育新生命。 这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技 术 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术