实验八 (植保)微生物生理生化特性检测(糖发酵、氨化作用、甲基红试验等)
实验八 微生物生理生化试验共17页
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
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51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
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55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
微生物鉴定中常用的生理生化试验
一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（枯草杆菌，大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
实验十 微生物鉴定中常用的生理生化试验
实验十微生物鉴定中常用的生理生化试验实验十微生物鉴定中常用的生理生化试验摘要本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。
最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。
关键词微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验前言类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。
因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
一、实验目的1、大分子水解试验证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
2、糖发酵试验了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
3、IMViC试验了解IMViC的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶（endoenzymes）.许多细菌产生胞外酶(exoenzymes)，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下： 1、大分子水解试验：微生物对大分子如淀粉、蛋白质和油脂不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后才能被微生物吸收利用。
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
微生物生化试验
微生物生理生化试验摘要：本实验通过细菌对生物大分子物质的水解试验、糖发酵试验、IMViC试验几个生化反应证明不同细菌生理生化功能的多样性。
生物大分子物质的水解试验证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
糖发酵和IMViC在肠道细菌鉴定中的起着重要作用。
关键词：水解、糖发酵、IMViC、生理生化前言：微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。
淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变为深红色，说明胞外存在着脂肪酶。
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。
有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体；有些细菌只产酸不产气。
发酵培养基含有蛋白胨，指示剂（溴甲酚紫），倒置的德汉氏小管和不同的糖类。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色(pH5.2)。
气体的产生可由倒置的德汉氏试管中有无气泡来证明。
IMViC是吲哚(indol test)、甲基红(methy1 red test)、伏一普(Voges-Prokauer test)和柠檬酸盐(citrate test)四个试验的缩写，I是在英文中为了发音方便而加上的。
这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，多用于水的细菌学检查。
吲哚试验是用来检测吲哚的产生。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。
吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。
实验八 (植保)微生物生理生化特性检测(糖发酵、氨化作用、甲基红试验等)
实验八 (植保)微生物生理生化 特性检测(糖发酵、氨化作用、
3 试验材料
培养基—— 蛋白胨水培养基（吲哚试验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验）
菌种—— 大肠杆菌 产气肠杆菌
4 操作步骤
（1）接种与培养
▪ 将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支蛋白胨水培养 基（吲哚试验）。
▪ 将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支葡萄糖蛋白胨 水培养基（甲基红试验）。
▪ 37℃培养48小时。
吲哚试验是用于检测吲哚的产生，某 些细菌可产生色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨 酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨基苯甲醛 遇吲哚形成玫瑰吲哚（红色）。
甲基红试验是用于检测分解葡萄糖产 生有机酸如甲酸、乙酸、乳酸等，当细菌 分解糖产酸时，培养基中的甲基红指示剂 由橘黄（pH6.3）变为红色（pH4.2），即 甲基红反应。
甲基红试验等)
本次实验内容（4-5人1组） 一 糖发酵试验 二 好气菌的氨化作用试验 三 吲哚和甲基红试验
一 糖发酵试验
1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤
1 目的要求
▪ 了解糖发酵的原理。 ▪ 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 ▪ 巩固微生物接种技术
2 基本原理
不同细菌对糖的分解利用能力存在较大差 异，且产物不同，是常用的鉴别微生物的生化 方法。有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气 体；有些细菌只产酸不产气。若产酸，可根据 培养基特定的酸碱指示剂的特征性的颜色变化 检测；若产气，可从培养基中的杜氏小管中是 否有气泡观测。
微生物生理生化反应实验报告
微生物的生理生化反应一、实验目的1.掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的测定方法。
2.了解细菌代谢类型的多样性。
3.了解细菌生长现象及代谢产物在鉴别中的意义。
4.学习接种技术。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌。
1.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。
产酸后再加入溴甲酚紫指示剂后会使溶液呈黄色，且杜氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且杜氏小管中无气体。
2.甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。
大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
3.伏-普试验（VP）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成非酸性或中性末端产物，某些细菌产生丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被氧化成二乙酰，二乙酰与胍基作用，生成红色化合物，为阳性。
4.靛基质（吲哚）试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。
大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
5.硫化氢实验：某些细菌分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫酸铵亚铁等铁盐可与硫化氢反应生成不溶性硫化亚铁之黑色沉淀，为硫化氢实验阳性。
微生物生化鉴定
常用生化试验一．糖、醇发酵试验1.糖、醇发酵试验原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇的酶，所以分解糖、醇的能力个不相同。
有的能分解某些糖、醇类，有的则不能分解。
有的分解某些糖、醇类发酵产酸产气,有的仅产酸，而不产气。
根据这些特点，可鉴别细菌。
培养基：糖发酵试验应用的培养基种类很多，大致可分为液体，半固体，固体（高层、斜面）等几类。
可根据试验的要求和细菌的特性来选择。
2.乙酰甲基甲醇试验（V—P试验）原理：某些细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧，变为乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下,被空气中的氧氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色的化合物.故在培养基中加入少量含胍基的化合物，如肌酸、肌酐可增加胍基含量。
试验中加入的α—萘酚为催化剂,可加速此反应，使反应颜色增加，提高反应的敏感性。
大肠埃希菌不能将丙酮酸脱羧，故V—P试验呈阴性。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基3.甲基红试验（MR试验）原理：许多细菌如大肠埃希菌等，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再次被分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等，这样使培养基的PH降至4.5以下。
这时加入甲基红指示剂呈红色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醛、气体和水等)，则培养基的酸度仍在PH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基MUG葡萄糖醛酸苷酶试验原理：细菌的葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下，作用于4—甲基伞形酮—β—D葡萄糖醛酸甘(4—Methylumbelliferyl-β-D—glucuronide简称MUG）的β葡萄糖醛酸甘键，使其水解,释放的4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。
培养基：MUG培养基4.β-半乳糖苷酶试验原理：肠杆菌科细菌发酵乳糖，依靠半乳糖苷渗透酶和β-半乳糖苷酶两种不同的酶作用，能水解邻硝酸酚—β-D半乳糖苷(O-nitrophenyl—β-D-galactopyranoside,ONPG），而释放出黄色的邻硝酸酚。
细菌的生理、生化试验简介
细菌的生理、生化试验简介微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。
一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。
二、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培养5天。
然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。
立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。
阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。
培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。
淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。
三：V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
微生物鉴定中常用的生理生化反应
微生物鉴定中常用的生理生化试验郭森09级生命基地200900140029周二下午第五排摘要：本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。
最后基本上观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。
关键词：微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验前言：不同种类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。
因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
1 材料和方法1.1材料1.1.1菌种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，大肠杆菌（Esherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），普通变形菌（Proteus vulgaris），铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)。
1.1.2培养基固体淀粉培养基，固体油脂培养基，葡萄糖发酵培养基，乳糖培养基，蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基。
1.1.3溶液和试剂卢戈式碘液，甲基红指示剂，乙醚和吲哚试剂等。
1.1.4仪器和其他用品无菌平板，无菌试管，接种环，接种针和试管架等。
1.2方法1.2.1制作培养基1.2.1.1淀粉培养基分别取3g蛋白胨、1.5g NaCl、1.5g牛肉膏、0.76g可溶性淀粉和5~6.7g琼脂放入300ml蒸馏水中加热融化，最后总体积在250ml左右，121℃灭菌20min。
细菌生理生化实验
将以上培养基分装试管,培养基高度约为4~5cm ,1１5℃灭菌20miｎ。
试剂:甲基红:0、1g,９5%乙醇:３00mL,蒸馏水:200mL。
试验方法：
挑取新得待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于3６±１°C或30°C(以３0°C较好）３～5天,从第二天起,每日取培养液1ｍl,加甲基红指示剂１～2滴,阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阳性、即可判定结果。
测定得糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(1、5％)、半乳糖(1、5%)、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意：以上亦可用液体培养基。
接种与观察结果:
用1８～24h得幼龄菌种，用穿刺针接种于培养基中，适温培养1d,3ｄ,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。
挑取18~2４h待试菌培养物,以较大量穿刺接种于明胶高层约２/3深度。于2０～２2℃培养7~14天。明胶高层亦可培养于3６±1℃。每天观察结果,若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其就是否被细菌液化,如确被液化，即为试验阳性。否则为阴性。
（七)尿酶(Urease)试验
结果记录:阳性:+,阴性：-。
（五）菌膜形成试验
有些菌在液体培养基中能形成菌膜，利用这一特征可进行不同细菌得区别。
培养基配制方法:蛋白胨:5g;氯化钠:5g；牛肉膏:１０g;蒸馏水：1000mL;pH :7、2。121℃灭菌15~3０ｍin。
浙江师范大学微生物实验报告实验8 细菌的生理生化鉴定
实验8 细菌的生理生化鉴定1 实验目的1)了解微生物对大分子物质水解的原理和方法，了解糖发酵及IMViC的原理和方法。
2)鉴定未知菌对淀粉、明胶的水解能力。
3)鉴定未知菌糖发酵试验、IMViC 试验中的能力。
2 实验原理1)大分子物质的水解试验微生物不能直接利用大分子的淀粉、蛋白质和脂肪，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白为氨基酸等。
淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
明胶是由胶原蛋白经水解产生的蛋白质，在25°C以下维持凝胶状态，呈固体形式存在，在25°C以上明胶会液化。
有些微生物能产生明胶酶，水解明胶而使之液化。
石蕊在酸性条件下为粉红色，在碱性条件下紫色，被还原时为无色。
2)糖发酵试验糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。
有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。
大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖并产气。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。
气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。
3)IMViC试验吲哚试验是用来检测吲哚的产生。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。
吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。
大肠杆菌吲哚试验为阳性。
甲基红试验是用来检测葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色（pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红反应。
微生物检测生化鉴定方法
三糖铁（TSI）琼脂试验
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢 （变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸 ，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物， 故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。
甲基红（Methyl Red）试验
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步 分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量 酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
靛基质（Imdole）试验
某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反 应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化 合物。
枸椽酸盐试验 某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源， 将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于 指示剂的作用，培养基变为兰色。
尿素酶（Urease）试验
有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为 碱性，酚红呈粉红色。
1、未接种 2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性
ห้องสมุดไป่ตู้
slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
微生物生化反应： 生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来 鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。 糖酵解试验 淀粉水解试验 V-P试验 甲基红（Methyl Red）试验 靛基质（Imdole）试验 枸椽酸盐试验： 尿素酶（Urease）试验 三糖铁（TSI）琼脂试验
各种微生物生化试验方法原理
各种微生物生化试验方法原理通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反应，常用于细菌的鉴别。
1、糖类分解产物（1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP试验（V oges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为VP试验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。
（3）甲基红试验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培养液PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。
（4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。
2、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验阳性。
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菌种——
土壤颗粒
大肠杆菌
枯草杆菌
4 操作步骤
（1）取牛肉膏蛋白胨液体培养基四支，贴好标签，分别接种 土壤颗粒、大肠杆菌、枯草杆菌，余下一支不接种作为
空白对照，在每支试管口悬挂一条经无菌水湿润的红色
石蕊试纸，并加好试管塞。 （2）将已经接种的培养管置于28--30℃培养5--7日。
甲基红试验是用于检测分解葡萄糖产 生有机酸如甲酸、乙酸、乳酸等，当细菌 分解糖产酸时，培养基中的甲基红指示剂
由橘黄（pH6.3）变为红色（pH4.2），即
甲基红反应。
3 试验材料
培养基—— 蛋白胨水培养基（吲哚试验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验）
菌种——
大肠杆菌
产气肠杆菌
4
（1）接种与培养
实验八
微生物生理生化特性检测
本次实验内容（4-5人1组） 一 糖发酵试验
二 好气菌的氨化作用试验
三 吲哚和甲基红试验
一 糖发酵试验
1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤
1 目的要求
了解糖发酵的原理。 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物接种技术
2 基本原理
2 基本原理
吲哚和甲基红试验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气ห้องสมุดไป่ตู้ 杆菌，多用于水细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌，但 在饮用水中超过一定数量，则表示受粪便污染，产气肠 杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分 开。
吲哚试验是用于检测吲哚的产生，某 些细菌可产生色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨 酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨基苯甲醛 遇吲哚形成玫瑰吲哚（红色）。
一 糖发酵试验
表1 糖发酵试验结果
试验菌种 发酵特性 葡萄糖 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 产酸 供试糖 蔗糖
产气 产酸 产气
产酸、产气
注：记录生长情况用符号表示： —：不生长； +：生长差； ++：生长一般； +++：生长良好
二 好气菌的氨化作用
表2 好气菌的氨化作用试验结果
检测 项目
接种 菌样
土壤颗粒
操作步骤
将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支蛋白胨水培养 基（吲哚试验）。
将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支葡萄糖蛋白胨 水培养基（甲基红试验）。
37℃培养48小时。
（2） 结果观察
▲ 吲哚试验
在培养48h后的蛋白胨水培养基中加入3--4滴乙醚，摇动 数次静置1--3min，待乙醚上升后，沿试管徐徐加入2滴吲 哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。
▲ 甲基红试验 在培养48h后的葡萄糖蛋白胨水培养基内加入甲基红试剂2 滴，培养基变红者为阳性，变黄者为阴性。（注意：甲基 红试剂加得过多，可出现假阳性现象。）
甲 基 红 试 验
大肠杆菌：+ 产气肠杆菌：-
阳性
阴性
对照
吲 哚 试 验
大肠杆菌：+
阳性
产气肠杆菌：-
伏 普 试 验
产气肠杆菌：+ 大肠杆菌：-
—
阳性
阴性
对照
表3 吲哚和甲基红试验结果 菌名 大肠杆菌 产气肠杆菌 空白对照 试验项目
吲哚试验 甲基红试验
试验结果记录（“+”表示阳性反应，“—”表示阴性反应）
实验报告
按实验内容分别书写。要求每个实验写出：
1 实验目的
2 实验原理
3 实验结果。
实验结果用表格形式给出，并对实验结果进行分析。 4 分析讨论
大肠杆菌
枯草杆菌
4 操作步骤
在试管外壁标明发酵培养基名称和接种细菌菌名。 取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草
杆菌，第三支不接做对照；
取蔗糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草杆 菌，第三支不接做对照。 将接种的和做对照的6支试管放置28~30℃培养2~3天。 观察各试管颜色变化及杜氏小管中是否有气泡。
表1 糖发酵试验结果
试验菌种 发酵特性 供试糖 葡萄糖 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 产酸 产气 产酸 产气 产酸、产气 蔗糖
注：记录生长情况用符号表示： —：不生长； +：生长差； ++：生长一般； +++：生长良好
二 好气氨化作用试验
1 目的要求 2 基本原理
3 试验材料
4 操作步骤
1 目的要求
枯草杆菌
大肠杆菌
空白对照
培养液 浑浊程度 红色石蕊试 纸变色程度
三
吲哚和甲基红试验
表3 吲哚和甲基红试验结果
菌名 大肠杆菌 产气肠杆菌 空白对照
试验项目
吲哚试验 甲基红试验
试验结果记录（“+”表示阳性反应，“—”表示阴性反应）
不同细菌对糖的分解利用能力存在较大 差异，且产物不同，是常用的鉴别微生物的 生化方法。有些细菌能分解某种糖产生有机 酸和气体；有些细菌只产酸不产气。若产酸，
可根据培养基特定的酸碱指示剂的特征性的
颜色变化检测；若产气，可从培养基中的杜
氏小管中是否有气泡观测。
3 试验材料
培养基—— 无菌葡萄糖发酵液体培养基 无菌蔗糖发酵液体培养基 菌种——
（3）结果检测：
观察各管红色石蕊试纸变色及培养液浑浊情况。
表2 好气菌的氨化作用试验结果
检测 项目 接种 菌样
土壤颗粒
大肠杆菌
枯草杆菌
空白对照
培养液 浑浊程度 红色石蕊试 纸变色程度
三 吲哚和甲基红试验
1 目的要求
2 基本原理
3 试验材料
4 操作步骤
1 目的要求
学习掌握吲哚和甲基红试验原理。 学习掌握吲哚和甲基红试验在肠道菌鉴定中的方 法及意义。
了解好气氨化作用的原理。 掌握通过氨化作用鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物的接种技术。
2 基本原理
不同微生物对含氮有机物分解能力及
代谢途径、最终产物不尽相同，这些特征
性生化反应可作为菌种鉴定的重要依据。
微生物可分解含氮有机物，最终产生氨气。
以酸碱指示剂试纸检测。
3 试验材料
培养基——