琼脂糖凝胶电泳原理ppt课件
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琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
凝胶准备
胶床准备
铺胶
静置
胶床置于电泳槽中 加电泳缓冲液 拔梳子 上样
电泳 取出凝胶 拍照
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琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
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琼脂糖凝胶电泳结果分析
结果初步分析 数量分析：条带的宽度，
荧光的亮度。 质量分析：纯度
分子量
影响因素： DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其 分子量的对数成反比； 琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼 脂凝胶中，电泳迁移率不相同； DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的 电泳速度差别较大
⑵可提取大分子DNA 利用琼脂糖凝胶制成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大 的DNA片段，可以完全符合构建粘粒基因组文库的要求。
2、PCR产物在琼脂糖凝胶上进行的电泳检测。
3、琼脂糖在其他方面的应用 ⑴ 、琼脂糖在免疫扩散法中的应用。 ⑵ 琼脂糖在双链DNA探针. 的合成方法中的作用
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
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DNA变性
电泳前勿加热， 用20mM NaCl 缓冲液稀
释DNA。
DNA链巨大， 在脉冲凝胶电泳 常规凝胶 上个分析。 电泳不合 适。
电泳 配胶的缓冲 时 液与电泳 lad 的缓冲液 der 不是同时 扭 配制。 曲
同时配制，电泳 缓冲液高出胶 的1-2mm即可。
电泳时电压 电泳时电压不应
过高
超过2.0V/cm。
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凝胶电泳结果分析
常见问题 原因
DNA条 带模 糊
DNA降解 电泳缓冲液陈旧
对策
实验过程中应避免核酸酶 污染。
电泳缓冲液多次使用后， 离子强度降低，PH值上 升，缓冲能力减弱，从 而影响电泳效果。TBE 建议使用10就更换。
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所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过 20V/cm，温度<30℃， 巨大DNA链电泳， 温度<15℃，检查所 用电泳缓冲液的缓冲能 力，注意经常更换。
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
1、DNA的制备. ⑴ 适合分离大片段DNA. 琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚 丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大 片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用 脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段.
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不规 电泳条件不 则 合适 DN A 带 迁 移
DNA变性
电泳时电压不应
超过20V/cm，
温度<30℃，
巨大DNA链电
泳，
温
度<15℃，检
查所用电泳缓
冲液的缓冲能
力，注意经常
更换。
电泳前勿加热， 用20mM NaCl 缓冲液稀
释DNA。
带弱 DNA上样量 增加DNA上样量，
或 不够
聚丙烯. 酰胺凝
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
口腔1402
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琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、 RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶 作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛 作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同， 电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在 泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合 物的目的。 与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子 筛”和“电泳”的双重作用。
无
胶电泳比琼脂
DNA降解
实验过程中应避免核酸酶 污染。
DNA跑出凝胶
缩短电泳时间，降低电压， 增加凝胶浓度。
EB染色的DNA所用 应用短波长（254nm）的紫
光源不合适
外光源。
DNA带缺 DNA跑出凝胶 尖
分子大小相近的 DHale Waihona Puke BaiduA带不易分辨
缩短电泳时间，降低电压， 增加凝胶浓度。
增加电泳时间，核准正确 凝胶浓度
DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量
DNA含盐过高 有蛋白污染
电泳前通过乙醇沉淀去除 多余盐分。
电泳前酚抽提去除蛋白。
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有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白。
DNA变性
电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀 释DNA。
出现片状 拖带或涂 抹带
PCR扩增时出现涂抹 减少酶量或更换酶，减少 带、片状带或地毯样 dNTP浓度，适当降低 带，往往由于酶量多 Mg2+浓度，增加模板量， 或者酶的质量差， 减少循环次数。 dNTP浓度高，Mg2+ 浓度高，退火温度过 低，循环次数多。
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
凝胶准备
胶床准备
铺胶
静置
胶床置于电泳槽中 加电泳缓冲液 拔梳子 上样
电泳 取出凝胶 拍照
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琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
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琼脂糖凝胶电泳结果分析
结果初步分析 数量分析：条带的宽度，
荧光的亮度。 质量分析：纯度
分子量
影响因素： DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其 分子量的对数成反比； 琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼 脂凝胶中，电泳迁移率不相同； DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的 电泳速度差别较大
⑵可提取大分子DNA 利用琼脂糖凝胶制成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大 的DNA片段，可以完全符合构建粘粒基因组文库的要求。
2、PCR产物在琼脂糖凝胶上进行的电泳检测。
3、琼脂糖在其他方面的应用 ⑴ 、琼脂糖在免疫扩散法中的应用。 ⑵ 琼脂糖在双链DNA探针. 的合成方法中的作用
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DNA变性
电泳前勿加热， 用20mM NaCl 缓冲液稀
释DNA。
DNA链巨大， 在脉冲凝胶电泳 常规凝胶 上个分析。 电泳不合 适。
电泳 配胶的缓冲 时 液与电泳 lad 的缓冲液 der 不是同时 扭 配制。 曲
同时配制，电泳 缓冲液高出胶 的1-2mm即可。
电泳时电压 电泳时电压不应
过高
超过2.0V/cm。
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凝胶电泳结果分析
常见问题 原因
DNA条 带模 糊
DNA降解 电泳缓冲液陈旧
对策
实验过程中应避免核酸酶 污染。
电泳缓冲液多次使用后， 离子强度降低，PH值上 升，缓冲能力减弱，从 而影响电泳效果。TBE 建议使用10就更换。
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所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过 20V/cm，温度<30℃， 巨大DNA链电泳， 温度<15℃，检查所 用电泳缓冲液的缓冲能 力，注意经常更换。
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
1、DNA的制备. ⑴ 适合分离大片段DNA. 琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚 丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大 片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用 脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段.
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不规 电泳条件不 则 合适 DN A 带 迁 移
DNA变性
电泳时电压不应
超过20V/cm，
温度<30℃，
巨大DNA链电
泳，
温
度<15℃，检
查所用电泳缓
冲液的缓冲能
力，注意经常
更换。
电泳前勿加热， 用20mM NaCl 缓冲液稀
释DNA。
带弱 DNA上样量 增加DNA上样量，
或 不够
聚丙烯. 酰胺凝
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
口腔1402
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琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、 RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶 作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛 作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同， 电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在 泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合 物的目的。 与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子 筛”和“电泳”的双重作用。
无
胶电泳比琼脂
DNA降解
实验过程中应避免核酸酶 污染。
DNA跑出凝胶
缩短电泳时间，降低电压， 增加凝胶浓度。
EB染色的DNA所用 应用短波长（254nm）的紫
光源不合适
外光源。
DNA带缺 DNA跑出凝胶 尖
分子大小相近的 DHale Waihona Puke BaiduA带不易分辨
缩短电泳时间，降低电压， 增加凝胶浓度。
增加电泳时间，核准正确 凝胶浓度
DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量
DNA含盐过高 有蛋白污染
电泳前通过乙醇沉淀去除 多余盐分。
电泳前酚抽提去除蛋白。
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有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白。
DNA变性
电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀 释DNA。
出现片状 拖带或涂 抹带
PCR扩增时出现涂抹 减少酶量或更换酶，减少 带、片状带或地毯样 dNTP浓度，适当降低 带，往往由于酶量多 Mg2+浓度，增加模板量， 或者酶的质量差， 减少循环次数。 dNTP浓度高，Mg2+ 浓度高，退火温度过 低，循环次数多。