代谢组学方法及其研究进展(re)
细胞代谢组学研究及应用进展
细胞代谢组学研究及应用进展【关键词】细胞代谢组学;研究方法与应用;综述【摘要】细胞代谢组学作为代谢组学研究的一个新兴的方向,在病原体感染、肿瘤研究、药物作用机制及药物研发、毒性评价等多个领域都有所应用。
可解决基本的生物学问题,并允许观察细胞内的代谢现象。
现简要综述细胞代谢组学的主要研究方法及其应用方面的研究进展。
1.细胞代谢组学的研究方法细胞代谢组学实验一般可分为几个步骤:细胞增生培养或刺激、淬灭、代谢物提取、样品检测和数据处理。
1.1细胞淬灭细胞淬灭是指快速使细胞内的酶失活,阻止代谢物变化。
理想的淬灭技术应在不损害细胞、不造成细胞内代谢物泄漏的前提下确保胞内酶迅速失活。
Hounoum等考察3种细胞淬灭方式对NSC-34鼠神经元细胞的影响,分别为-40℃甲醇淬灭、-20℃甲醇淬灭及迅速冻存于-80℃后加入4℃甲醇淬灭。
实验结果显示-40℃甲醇是用于该细胞最为理想的淬灭方式;有研究发现甲醇会破坏细胞膜结构,从而导致无法控制的细胞内代谢物泄漏,故常在甲醇中加入缓冲液如HEPES及AMBIC以维持离子强度,避免渗透冲击。
而对于贴壁细胞,液氮冷冻被是停止其酶活性的最佳方法,Zhao等比较了液氮和75%甲醇(-80℃)2种溶液对副溶血性弧菌细胞的淬灭效果,结果发现75%甲醇(-80℃)淬灭时,细胞发生代谢物泄漏;液氮淬灭速度快,且不存在代谢物泄漏问题。
1.2代谢物提取代谢物具有不同的化学和物理性质,如大小、质量、极性、溶解性等,而细胞代谢组学要求找到一种合适的提取方式,尽可能多地把胞内所有代谢物定量提取出来。
因此,提取方法应该有效而没有选择性和破坏性。
提取过程应有效地从细胞中释放代谢物,避免潜在干扰,确保最小代谢物损失。
胞内代谢物通常单独用有机溶剂,或与水结合,或与其他有机溶剂结合,在不同温度条件下提取。
经典的酸性和碱性提取剂也可分别用来提取对酸、碱稳定的化合物。
对于悬浮细胞,常用含水甲醇、含水乙腈或纯甲。
代谢组学的研究方法和研究流程-PPT
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• 优点:能够对样品实现非破坏性、非选择 性分析。它是唯一既能定性, 又能在微摩 尔范围定量有机化合物的技术。
• 缺点:灵敏度相对较低, 不适合分析低浓 度代谢物。
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代谢组学的研究流程
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代谢组学研究流程
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代谢组学各分析流程技术
样品的提取
自动进样 样品预处理
化合物的分离
检测及鉴定
数据分析与可 视化,建模与 仿真
固相微萃取 固相萃取 亲和色谱
气相色谱 液相色谱 毛细管电泳
光谱 质谱 核磁共振 电化学
生物信息学 化学信息学 化学计量学 计算生物学
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2024/1/3
代谢组学的研究流程
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结束
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代谢组学的研究方法
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代谢产物分析4个层次
• 代谢物靶标分析。对个别特定组分分析。 • 代谢轮廓分析。对预设组分的分析。 • 代谢组学。特定样品中所有代谢物分析。 • 代谢指纹分析。比较代谢物指纹图谱。
2024/1/3
真正意义的代谢组学研究。 预处理和检测技术需满足高 灵敏度、高选择性和高通量 的要求。需要对获得的数据 进行解析。
Mass Selective Detector
MS
Mass Spectrometer
A B C D
Identification
• 优点:集色谱法的高分离能力和质谱法的结构鉴
定能力于一体 , 灵敏度高,可检测到大量低含量 的小分子代谢产物。
• 缺点:无法分析热不稳定性的物质和分子量较大
的代谢产物。
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代谢组学研究进展
代谢组学研究进展代谢组学是一门比较新的研究领域,它是在代谢物分析的基础上,利用生物信息学、系统生物学等方法研究代谢物的组成、变化规律及其与生理生化以及疾病等方面的关系。
在医学、生物技术、药物设计等领域中有着广泛的应用。
本文将简要介绍代谢组学的研究内容、技术手段以及进展情况。
代谢组学研究内容代谢组学的核心是研究代谢物,代谢物是细胞、组织或生物体内生物化学反应过程中产生的化学物质。
代谢组学主要研究代谢物在生理、病理以及环境相关因素下的变化规律,通过对代谢物的研究,揭示在不同生理状态下细胞的代谢活动和各种疾病的代谢紊乱机理,为检测、诊断、治疗、预防等方面的应用提供更加深入的理解。
代谢组学技术手段代谢组学技术手段有很多种,其中包括质谱法、核磁共振技术、色谱法、电泳法等。
其中,质谱法应用最为广泛,具有灵敏度高、精度高、分析速度快等优点,能够分析定量多种代谢物分子,不同代谢物之间的相关性,对大规模代谢组数据的处理和分析提供支持。
代谢组学在科学研究和临床实践中有广泛应用。
下文将从代谢组学在环境毒理学、代谢性疾病、肿瘤分子机制等领域的应用方面着重介绍。
1. 代谢组学在环境毒理学中的应用环境污染物对人类健康产生的影响是不可忽视的。
代谢组学可以对人类暴露于环境污染物后的内部代谢物的变化规律进行研究。
通过代谢组学的研究,可以揭示全身代谢系统在暴露于环境污染物后的代谢途径及代谢产物的分布,进一步探讨其毒性机制,为环境毒理学的研究和防治提供重要科学依据。
2. 代谢组学在代谢性疾病中的应用代谢物水平的变化与各种代谢性疾病如糖尿病、脂质代谢紊乱、肥胖症等紧密相关,代谢组学在这些疾病的研究中也扮演着重要角色。
利用代谢组学技术,可以对疾病代谢物谱系中的代谢物组成和变化规律进行快速、全面的分析,探索代谢物谱系与代谢疾病的发生和发展之间的关系,为疾病发生机制的研究提供了新的途径。
3. 代谢组学在肿瘤分子机制中的应用肿瘤代谢变化是肿瘤发生与发展中的一个重要角色,代谢组学研究也逐渐成为肿瘤研究的一个热点。
代谢组学研究进展
代谢组学研究进展代谢组学是研究生物体内大量小分子代谢产物(代谢物)的研究领域,是生物系统学的一个重要组成部分。
随着技术的不断进步,代谢组学在生物医学研究、疾病诊断、药物开发和环境监测等方面起到越来越重要的作用。
本文将就代谢组学研究进展进行探讨。
首先是代谢组学的技术进展。
随着质谱技术、核磁共振技术以及分子生物学技术的不断发展,代谢组学研究的实验手段得以不断提高。
质谱技术主要包括质谱仪的改进与发展,可以基于液相色谱、气相色谱和毛细管电泳等技术手段进行代谢物的分析与鉴定。
核磁共振技术可以提供代谢物的结构信息,通过分析代谢物的谱图可以推测其代谢产生途径与代谢通路。
此外,分子生物学技术如基因芯片与转录组学的发展,也可与代谢组学结合,从而揭示代谢物的转录水平与代谢调控的关系。
其次是代谢组学在生物医学研究中的应用。
代谢组学可为疾病的早期诊断与预测提供依据。
通过与正常人群进行代谢谱分析,可以获取与特定疾病相关的代谢物指纹。
例如,在癌症研究中,代谢组学可以发现潜在的生物标志物,用于癌症的早期诊断与治疗监测。
此外,代谢组学还可以研究药物在体内的代谢与作用机制,以及演化与环境因素对代谢的影响。
第三,代谢组学在药物开发中的应用。
药物代谢组学是一项重要的工具,用于研究药物在体内的转化与代谢通路。
通过代谢组学的研究,可以了解药物的生物活性与代谢反应之间的关系,从而优化药物设计与研发策略。
此外,药物代谢组学还可以为个体化用药提供依据,根据个体的代谢物谱分析结果,调整药物的剂量与给药方案,提高治疗效果与减少不良反应。
最后,代谢组学还应用于环境监测领域。
通过对不同环境样品中的代谢产物进行分析,可以评估环境的毒性与健康风险。
例如,通过代谢组学分析水体或土壤中的代谢物谱,可以评估其中可能存在的有害污染物,并指导环境管理与污染治理措施的制定。
综上所述,代谢组学在生物医学研究、药物开发和环境监测等领域都有广泛应用。
未来,随着技术的不断进步与代谢组学研究的深入,我们将能够更好地了解代谢物之间的相互关系,发现新的生物标志物,并加深对代谢调控机制的理解。
代谢组学研究的最新进展
代谢组学研究的最新进展近年来,代谢组学研究成为了生命科学领域中备受关注的新兴研究领域。
代谢物组成是细胞、组织和生物体内最基本的生物化学过程之一,它涉及到生物体对能量、物质和信息的处理、转化和调控等过程,在生物学、医学和营养学等方面具有广泛的应用前景。
本文将综述代谢组学研究的最新进展和成果。
一、代谢组学研究的基础代谢组学研究的核心技术是代谢组分析,它是以质谱和核磁共振(NMR)等技术为基础,对生物体内代谢物进行高通量和高灵敏度的检测和定量。
代谢组分析能够同时检测和鉴定数千种代谢物,为代谢组和生物体系研究提供重要技术支持。
代谢组学研究需要结合生物信息学、统计学和化学等多学科交叉,需要对代谢组分析数据进行预处理、质量控制、统计分析、生信注释和数据挖掘等工作。
随着计算机技术的飞速发展,代谢组学研究在数据采集和分析方面的技术不断提升,为代谢组学研究提供了更广阔的发展空间。
二、代谢组学研究的应用1、代谢组学在疾病诊断和治疗方面的应用代谢组学作为一种高通量代谢物组分析技术,在疾病的早期诊断、研究和治疗中具有很大的应用潜力。
例如,代谢组分析可以在个体水平检测临床标志物,帮助医生更准确地诊断和区分不同类型的疾病。
代谢组学可以在糖尿病、肝癌、冠心病、乳腺癌等疾病的早期诊断中发挥重要作用。
此外,代谢组学还可以用于分析药物代谢和毒性,帮助药物研发公司更好地评估药物的药效和安全性。
代谢组学在肝脏病理、肾脏病理、神经退行性疾病和肿瘤等领域的研究中也发挥着越来越重要的作用。
2、代谢组学在营养与健康领域的应用代谢组学作为一种研究营养与健康的新兴技术,可以帮助人们更好地了解人体代谢在不同生命状态下的情况。
代谢组学可以评估人体的营养状态,揭示营养素代谢途径和相关代谢物,为人们提供更科学和个性化的营养指导。
代谢组学还可以用于分析食物中的代谢产物,探索食物与健康之间的关系。
代谢组学在营养与健康领域的最新研究成果表明,食物中的特定代谢物(如白藜芦醇、咖啡因等)能够与健康相关联,提供了关于人类健康更深刻的认识。
代谢组学技术在药物研究中的应用与进展
代谢组学技术在药物研究中的应用与进展药物研发是一项非常复杂的工作,需要不断地进行试验和验证。
代谢组学技术作为一种新兴的技术,可以广泛应用于药物研究中,成为了药物研发领域的重要手段。
本文就代谢组学技术在药物研究中的应用与进展进行探讨。
一、代谢组学技术的概述代谢组学技术是使用高通量的分析手段,对体内代谢产物的种类和量进行定量和分析,并研究代谢产物在不同生物体系中的变化。
代谢组学技术包括代谢物谱学、代谢产物型谱学、代谢物组学等多个学科的交叉融合。
这些技术都是通过分析组织、血清、尿液、唾液等生物样本中的代谢产物,来了解生物代谢系统的状态和调节机制,为药物研发提供关键的信息。
二、代谢组学技术在药物研究中的应用1. 药代动力学研究药代动力学研究旨在了解药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄的过程,以及药物在体内的生物利用度、副作用等问题。
现在,代谢组学技术已被广泛应用到药代动力学研究中,可以对药物代谢的动态过程进行有效的监测,帮助研发人员确定药物的剂量和给药方案,减少药物的不良反应和副作用。
2. 新药筛选和评估新药筛选是药物研发过程中的重要环节之一。
代谢组学技术可以通过定量分析体内代谢产物的种类和量,了解新药所引起的代谢变化,发掘新药的代谢途径和可能的不良反应,从而评估新药的有效性和安全性,加速新药的研发过程。
3. 疾病诊断和监测代谢组学技术在疾病诊断和监测中也有广泛的应用。
不同的疾病会引起不同的代谢变化,代谢组学技术可以通过分析生物样本中代谢产物的种类和量,来评估疾病患者体内的代谢差异。
这种方法可以避免传统诊断技术的不足,为疾病的诊断和监测提供了更多的有效手段。
三、代谢组学技术在药物研究中的进展随着代谢组学技术的不断发展,药物研发领域对代谢组学技术的需求也越来越大,代谢组学技术在药物研究中的应用也越来越广泛。
在未来的发展过程中,代谢组学技术还将面临以下几个问题:1. 技术标准化代谢组学技术是一种多学科交叉融合的技术,不同的实验室、不同的研究群体使用的技术和方法并不相同。
代谢组学的研究方法和研究流程演示文稿
代谢组学的研究方法和研究流程演示文稿代谢组学是研究生物体在特定状态下代谢物的整体谱图和变化规律的科学,主要通过技术手段获取和分析生物体内的代谢物,以揭示生物体在生理和病理过程中的代谢调控机制。
下面将介绍代谢组学的研究方法和研究流程,并以演示文稿的形式展示。
(演示文稿开始)第一页:代谢组学的研究方法第二页:样本采集样本采集是代谢组学研究的第一步,选择合适的样本对后续研究至关重要。
常用的样本包括血液、尿液、组织以及细胞培养基等。
样本采集需要遵循一定的操作规范,以保证采集到的样本质量。
第三页:代谢物提取代谢物提取是将样本中的代谢物从复杂的基质中分离出来的关键步骤。
传统的提取方法包括有机溶剂法、热甲醇法和酶解法等。
近年来,也出现了一些新的提取方法,如固相微萃取和液滴吸取等,具有提取效率高、代谢物稳定性好的优点。
第四页:代谢物分析代谢物分析是对提取的代谢物进行检测和定量的过程。
常用的代谢物分析技术包括质谱分析、核磁共振等。
质谱分析可以分为液相色谱质谱联用(LC/MS)和气相色谱质谱联用(GC/MS)两类,核磁共振可以分为核磁共振波谱(NMR)和磁共振成像(MRI)等。
第五页:数据处理数据处理是代谢组学研究中非常重要的一步,对代谢物的谱图进行选取、分析和建模,以研究代谢物在各个生理状态之间的变化。
常用的数据处理方法包括主成分分析(PCA)、线性判别分析(LDA)、偏最小二乘回归(PLS-DA)等。
第六页:代谢组学的研究流程第七页:实验设计实验设计是代谢组学研究的重要环节,包括实验组和对照组的确定、样本数目的确定、实验周期的安排等。
合理的实验设计可以最大程度地减少实验误差,提高研究结果的可靠性。
第八页:样本采集样本采集根据研究目的和实验设计进行,合理选择适用的样本,并在采集过程中严格遵守操作规范,确保样本的质量。
第九页:代谢物分析代谢物分析是对采集到的样本进行代谢物提取和分析,通过质谱分析和核磁共振等技术,获取样本中代谢物的谱图信息。
生命科学中的代谢研究进展
生命科学中的代谢研究进展代谢是指生物体内发生的各种化学反应,包括能量产生、物质合成和分解等过程。
代谢的研究是生命科学的重要领域之一。
随着科技的不断进步,代谢研究方面也出现了一系列新的进展,这些进展不仅有助于深入了解生物体内代谢过程的机制,还能为药物研发和疾病治疗提供重要的指导意义。
1. 代谢组学的快速发展代谢组学是一种通过全面分析生物体内代谢产物的手段,来了解生态与生理等方面的生物信息学领域。
代谢组学通过测量生物组织、血液和其他体液中代谢产物的变化平台进行诊断和治疗研究。
近年来,代谢组学研究得到了极大的发展和进步。
一方面,随着质谱仪和核磁共振仪等科技的发展,代谢物谱图谱可以快速获得,并能很好地定量分析。
另一方面,随着数据挖掘和计算分析的进步,可以快速从大量数据中提取代谢物的共性和差异性,并进行归类分析和研究。
2. 代谢物的精准测定和可视化代谢物的精准测定是代谢研究的基础。
传统的代谢物分析方法主要采用高效液相和气相色谱等方法,但这些方法仅能检测到部分化合物。
而近年来,新兴的代谢物分析技术如中高分辨质谱仪、双源冷喷雾电离技术等的问世,使代谢物的测定更加精准,特别是对于微量代谢物的检测。
此外,代谢物的可视化也是代谢研究中的重要进展。
代谢物图谱、代谢通路图等可视化图表使复杂的代谢反应变得简单明了,为代谢研究提供了极大的帮助。
3. 代谢与疾病的关联研究代谢研究与疾病的关系日益密切。
生物体内代谢过程的变化,不仅会影响生物体内各种生理活动,还与多个疾病的产生和发展有关。
代谢组学技术的发展,使代谢与疾病的关联研究成为可能。
例如,代谢组学研究表明,糖尿病患者血液中代谢物的模式与健康人存在差异。
研究发现,在糖尿病患者中,酮体、异谷胱甘肽、尿酸等代谢物的含量明显升高,而一些氨基酸和雌激素等物质的含量下降。
这些研究结果为糖尿病的诊断、治疗和预防提供了极大的帮助。
4. 代谢与药物的相关研究药物的代谢过程是众所周知的重要环节。
代谢组学研究进展
代谢组学研究进展代谢组学是一种研究生物体内代谢物的综合性科学方法,主要通过测量和分析生物体内代谢物的种类和相对含量来了解生物体代谢的状态和变化。
随着技术的发展,代谢组学在生物医学、农业、食品科学等领域取得了许多重要进展。
首先,代谢组学在生物医学研究中发挥着重要作用。
代谢组学可用于研究疾病的发病机制、诊断、治疗以及药物研发。
通过比较病理状态和正常状态下的代谢物谱,可以发现病态代谢的特征,从而有助于早期诊断和治疗。
代谢组学在肿瘤学研究中也有着广泛应用,可以通过代谢物的变化来了解癌症的发展和转移过程,并寻找特征性的代谢指标,为肿瘤的早期诊断和治疗提供依据。
其次,代谢组学在农业研究中也有着重要的应用。
代谢组学可以用来研究作物的营养需求、抗逆性和品质特性等。
通过代谢物分析,可以了解不同品种或基因型之间的代谢差异,并找到影响作物产量和品质的关键代谢途径。
此外,代谢组学还可以用于检测农产品中的残留农药和化学物质,保障食品安全。
另外,代谢组学在食品科学中也有着广泛应用。
通过代谢组学研究,可以鉴定食品中的活性成分和营养物质,了解其生物学功能和与健康之间的关系。
此外,代谢组学还可以应用于食品加工和储存过程中的品质控制。
通过分析食品中代谢物的变化,可以评估食品的新鲜度、鉴定可能导致品质变化的代谢途径,并提出改进措施。
最后,代谢组学在环境科学研究中也有着重要的应用。
代谢组学可以用于研究生物体对环境污染物的响应和代谢途径的变化。
通过分析代谢物的变化,可以研究生物体对环境污染物的适应机制,并评估环境的健康状况。
此外,代谢组学还可以用于环境污染物的监测和评估,为环境保护提供科学依据。
总之,代谢组学在各个领域的研究中都取得了重要的进展。
随着技术的不断发展,代谢组学将在未来发挥更加重要的作用,为人类健康、农业生产、食品安全和环境保护等领域提供更多的科学支持。
植物代谢组学的研究方法与进展
植物代谢组学的研究方法与进展植物代谢组学是一种较新的研究领域,其主要研究对象是植物代谢组。
通过代谢组学的方法和技术,可以全面理解植物生长发育、逆境响应等生物过程中体内的代谢物及其相互作用关系。
目前,植物代谢组学已经成为植物生物学和农业生产领域的研究热点。
本文将从代谢组学的定义、代谢组分析的方法与技术、代谢组学在生物学领域中的应用等方面展开论述,深入探讨植物代谢组学的研究方法与进展。
一、代谢组学的定义代谢组学定义为代谢谱分析,是一种通过测定生物体内代谢物的方法来研究代谢组的科学。
代谢指的是细胞和生物体产生的化学反应,可以分为两类:一类是物质合成,如凝固素的合成和修饰过程;另一类是分解反应,如丙酮酸代谢为乳酸或乙醇的过程。
代谢组学是一种全面研究生物代谢物谱的方法,通过利用高通量技术,大大提高代谢物多组分的检测速度和准确度,从而实现对代谢组的全面研究,揭示生物体内复杂的代谢过程。
近年来,随着技术的不断更新和发展,代谢组学也得以快速发展,尤其是在植物学领域中,代谢组学正在越来越广泛地应用于植物代谢物分析和代谢引导物筛选。
二、代谢组分析的方法与技术1.色谱色谱技术广泛应用于代谢组学研究中,主要有气相色谱(GC)和液相色谱(LC)两种方法。
气相色谱主要作为在线色谱技术扩展其分析能力,它可与多种检测技术组合使用,包括质谱检测、红外检测、光电离检测等,同时也具有局限性,如脂质物质检测能力差等。
液相色谱则主要通过逆相高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱(UPLC)等方法实现。
一些针对植物代谢物特性和选择性分析的方法,如氢氯酸胍衍生法和Dansylation法等,也被广泛使用。
2.质谱质谱技术是代谢组学分析中的主流技术之一,可以对纯化的代谢物或复杂的代谢谱进行高分辨率测量,进而确定代谢物的结构。
质谱技术的种类较多,包括四极杆质谱、飞行时间质谱、电离阱质谱等。
其中,飞行时间质谱普遍使用于较大的代谢物谱研究,而四极杆质谱是针对代谢物进行小分子谱分析的一种常用技术。
代谢组学的研究方法和研究流程演示文稿
代谢组学的研究方法和研究流程演示文稿代谢组学是研究生物体内代谢产物的全谱组分和相互关系的科学,主要应用于生命科学和医学领域。
下面是代谢组学的研究方法和研究流程的演示文稿。
研究方法:1.样本采集:首先,需要选择适当的研究对象,如人体组织、动物模型或细胞株。
然后,采集样本,如血液、尿液、组织、细胞等。
样本采集应该遵循严格的操作规范,以保证准确性和可重复性。
2.代谢分析:采集样本后,需要进行代谢分析。
常用的代谢分析方法包括质谱和核磁共振等技术。
质谱可以分析代谢物的质量和结构信息,而核磁共振可以提供代谢物的定性和定量分析。
3.数据处理:代谢组学研究会产生大量的数据,因此,数据处理是非常重要的一步。
通过使用统计学和生物信息学等方法,对代谢谱数据进行整理、标准化和归一化处理,以便于后续的数据分析和解释。
4.数据分析:在数据处理后,需要进行数据分析。
常用的数据分析方法包括差异分析、主成分分析和聚类分析等。
通过比较不同组间的代谢物丰度差异,可以找出与特定生理或疾病状态相关的代谢物。
5.代谢网络分析:代谢组学不仅关注代谢物本身,还研究代谢物之间的相互关系。
通过构建代谢物之间的相互作用网络,可以揭示生物体内代谢的整体结构和功能。
研究流程:1.问题定义:首先,需要明确研究的目的和问题。
例如,研究特定疾病的代谢异常机制,或者寻找新的生物标志物等。
2.实验设计:根据问题的定义,制定合适的实验设计。
包括选择适当的研究对象和样本,确定样本采集的时间点和条件等。
3.样本采集和处理:根据实验设计,采集样本,并进行适当的处理,如离心、冻存等。
样本的处理应按照规定的操作流程进行,以确保样本的质量和完整性。
4.代谢分析和数据处理:对样本进行代谢分析,获得代谢谱数据。
然后,对数据进行处理,如整理、标准化和归一化等。
5.数据分析和解释:根据实验设计和数据处理的结果,进行数据分析。
通过比较不同组间的代谢物丰度差异,找出与特定生理或疾病状态相关的代谢物。
代谢组学的研究方法与应用进展
代谢组学的研究方法与应用进展随着科学技术的不断发展,代谢组学作为一项重要的研究手段逐渐引起了人们的关注。
通过代谢组学分析,可以揭示生物体内代谢物的种类、含量以及相互之间的关系,为疾病的早期诊断、治疗以及个体化医学提供了新的思路和方法。
本文将重点介绍代谢组学的研究方法与应用进展。
一、代谢组学的研究方法1. 样品采集与预处理样品采集是代谢组学研究的基础,不同类型的样品对应着不同的研究目的。
例如,对于代谢疾病的研究,常用的样品包括血液、尿液和组织等。
而对于植物代谢组学的研究,则需要采集植物的叶片、根系或果实等样品。
预处理是样品分析之前的必要步骤,旨在去除杂质、稳定代谢物,提高测量的准确性。
常用的预处理方法包括样品提取、衍生化和洗脱等。
2. 代谢物分析技术代谢物的分析技术主要包括质谱、核磁共振和色谱等。
其中,质谱技术是代谢组学研究中最为常用和重要的技术之一。
质谱技术根据质量-电荷比对代谢物进行分析和鉴定。
常见的质谱技术包括质谱显微镜(MS)、气相色谱-质谱(GC-MS)和液相色谱-质谱(LC-MS)等。
其中,GC-MS适用于挥发性和半挥发性代谢物的分析,而LC-MS则适用于非挥发性和极性代谢物的分析。
3. 数据分析与处理数据分析与处理是代谢组学研究中的重要环节,旨在从海量的代谢组学数据中提取有用的信息。
常用的数据分析与处理方法包括多变量统计分析、主成分分析和聚类分析等。
二、代谢组学的应用进展1. 代谢组学在疾病诊断中的应用代谢组学已经被广泛应用于疾病的早期诊断和监测。
通过分析患者样品中的代谢物变化,可以识别出与疾病相关的标志物,为疾病的早期筛查和诊断提供依据。
例如,在肿瘤相关代谢物的研究中,代谢组学可以通过鉴定患者体液中的特定代谢物,实现肿瘤的早期诊断和疗效评估。
2. 代谢组学在药物研发中的应用代谢组学在药物研发中的应用也备受关注。
通过比较药物治疗前后的代谢组学变化,可以评估药物的疗效和毒副作用,为个体化治疗提供依据。
代谢组学应用与研究进展
㊀㊀基金项目:全军试验技术研究计划重点项目(SYFD1500128)作者单位:100083㊀北京ꎬ安徽医科大学解放军第306医院临床学院普通外科(李鳌㊁崔彦)ꎻ100083㊀北京ꎬ中国人民解放军战略支援部队特色医学中心普通外科(孙宏伟㊁崔彦)通讯作者:崔彦ꎬ电子信箱:dryancui@aliyun.com代谢组学应用与研究进展李㊀鳌㊀孙宏伟㊀崔㊀彦摘㊀要㊀代谢组学(metabolics)作为系统生物学的重要组成部分ꎬ定量对生物体内广谱代谢产物进行分析和发现不同状态下代谢产物的变化ꎬ从而明确生物体不同代谢产物与相应生理㊁病理状态的关系ꎮ代谢组学研究经历了快速的技术进步ꎬ已广泛应用于生命科学各个领域ꎬ为诠释生命现象㊁探寻疾病机制㊁研发药物㊁发现生物学标志物等提供了强大的技术平台ꎮ随着代谢组学相关研究的不断深入以及环节升级与完善ꎬ有望成为指导人类疾病诊断和治疗的有效手段ꎮ本文就代谢组学的特点㊁研究方法㊁应用以及在应激损伤㊁疾病研究中的作用做一综述ꎮ关键词㊀代谢组学㊀创伤㊀药物㊀航天医学㊀生物学标志物中图分类号㊀R365㊀㊀㊀㊀文献标识码㊀A㊀㊀㊀㊀DOI㊀10.11969/j.issn.1673 ̄548X.2020.01.036㊀㊀英国研究者Nicholson等[1]基于磁共振(nuclearmagneticresonanceꎬNMR)分析基础于1999年首次提出代谢组学这一概念ꎮ代谢组学研究拥有组学研究的 终点 之称ꎬ近年来迅猛发展㊁被生命科学家寄予厚望ꎬ目前被用作发掘多种疾病包括肿瘤的诊断㊁治疗相关代谢标志物ꎬ阐释病理状态或揭示机体接受有关诊疗后的生物学表现ꎬ并用于评价药物毒性㊁揭示其作用机制和药物相关基因功能等研究[2]ꎮ本文将就代谢组学的特点㊁基础和临床应用的研究进展做一综述ꎮ一㊁代谢组学的特点与研究方法代谢组学(metabolics)主要应用于探究相对分子质量很小(<150)的分子物质ꎬ后者多为糖㊁脂质㊁蛋白质代谢过程的中间产物或最终产物ꎬ这些小分子物质不仅能够说明细胞内部的生理代谢变化ꎬ也表现出细胞接受环境污染物和药物等外界因素的影响[1ꎬ2]ꎮ相关研究涉及各个领域ꎬ分析技术也不断升级并逐渐完善ꎮ目前研究方法主要分为两类:(1)基于磁共振的起源技术:其具有不破坏样本的基础上快速准确分析的特点ꎬ缺点是不够灵敏ꎮ(2)色谱与质谱联用技术:包含气相色谱/质谱(GC-MS)联用和质相色谱/质谱联用(LC-MS)技术[3]ꎮGC-MS技术发展至今ꎬ已建立了全面的代谢库ꎬ因其对气体性小分子较敏感ꎬ分辨率高ꎬ在识别气性挥发性小分子中已作为首选技术[4]ꎮLC-MS适用于热不稳定㊁不易挥发且相对分子质量较大的物质[5]ꎮ代谢产物经过检测㊁分析与鉴定后ꎬ需进行后期数据分析处理ꎬ分析方法包括主成分分析(PCA)㊁非线性映射(NLM)㊁聚类分析(HCA)等非监督法(unsupervisedmethod)ꎬ并联用监督方法(supervisedmethod)最小二乘法(PLS-DA)㊁人工神经网络(ANN)等方法ꎬ其中应用最多的是PCA联合PLS-DA进行代谢物质的鉴定分析[6]ꎮ二㊁代谢组学在创伤修复与应激中的研究Sara等[7]进行热应激实验研究ꎬ代谢组数据显示肝脏糖原分解和糖异生升高ꎬ脂肪酸合成上调ꎬ肝脏代谢过程中的糖原切割葡萄糖-1-磷酸(G1P)中间体升高ꎬ包括葡萄糖-6-磷酸(G6P)和葡萄糖ꎻ脂肪酸除了肉豆蔻酸和棕榈油酸酯升高外ꎬ大部分脂肪酸水平均下调或未改变ꎻ作为肝脏主要能源的氨基酸ꎬ除了半胱氨酸外ꎬ在热应激状态下表现下调ꎮKalk ̄hof等[8]收集伤口液进行代谢组学分析ꎬ最终鉴定出超过600种蛋白ꎬ其中60个与伤口愈合过程相关㊁18种蛋白质参与体内平衡和血液凝固(伤口愈合阶段Ⅰ)㊁35种蛋白质与炎症或防御反应相关(伤口愈合阶段Ⅱ)㊁19种与蛋白水解和重塑(伤口愈合阶段Ⅲ和Ⅳ)相关ꎬ此外ꎬ还包括4种调控细胞死亡的蛋白质ꎮ研究结果显示ꎬ金属蛋白酶MMP-8和MMP-9㊁氧化应激标志物髓过氧化物酶(MPO)等可用作潜在伤口愈合的标志物ꎮ另有研究表明ꎬ小鼠肌腱损伤1周后ꎬ代谢产物和中间体的13C富集ꎬ糖酵解和乳酸合成通量以及三羧酸循环活性均显著增加ꎬ受伤4周后糖酵解和乳酸生成增加ꎻ使用丙氨酸脱氢酶激酶抑制剂(DCA)处861理1周及4周后乳酸生产均减少ꎬ伤口黏液㊁损伤肌腱的黏膜堆积和异位钙化减少ꎬ表明乳酸对于肌腱修复的重要性ꎬ可作为伤口修复的新靶点[9]ꎮJonscher等[10]进行搭载飞船(spacetransportationsystem-135)小鼠实验ꎬ发现肝脏脂滴中视黄醇含量明显减少ꎬ代谢组及基因组分析mRNA和代谢物变化ꎬ发现视黄醇丢失与过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)介导的通路激活以及肝星状细胞激活有关ꎻ结果还显示脂肪酸如ω-3脂肪酸㊁二十二碳六烯酸显著增加ꎬ胆汁酸如戊二酸上调㊁甘氨胆酸显著下调ꎻ代谢组学研究表明ꎬ长时间空间环境暴露对肝脏造成进行性应激性损害ꎮZheng等[11]将30只大鼠随机分为创伤脑损伤(TBI)组和假手术实验组ꎬ收集实验最初24h内大鼠血液样品进行GC/MS测量以评估急性TBI诱导的代谢变化ꎬ鉴定出血浆中45种代谢物ꎬ急性脑损伤组的脯氨酸㊁磷酸㊁β-羟基丁酸㊁半乳糖㊁肌酸酐㊁L-缬氨酸㊁亚油酸和花生四烯酸等发生显著变化ꎬ通过单变量和多变量统计分析表明ꎬ上述8种血浆中的代谢物可作为TBI诊断的潜在生物学标志物ꎮ近年来ꎬ研究发现ꎬ辐射暴露损伤小鼠的大部分代谢物在辐射暴露后的3个时间点都有不同程度减少ꎬ包含三羧酸循环(TCA)中间代谢物(富马酸㊁琥珀酸和氧戊二酸)㊁支链氨基酸(L-亮氨酸ꎬL-异亮氨酸)㊁瓜氨酸和马尿酸等ꎬ而一小部分代谢物包括草酸㊁磷酸㊁L-苏氨酸㊁L-天冬氨酸和饱和游离脂肪酸(肉豆蔻酸和棕榈酸)在辐射处理组中显著升高ꎻ这些代谢物在辐射暴露后尿液中的相应变化显示出剂量与时间的相关性ꎻ比较辐射组与对照组ꎬ尤其是在高剂量组ꎬ除了少量存在于尿液样本中的代谢产物之外ꎬ代谢产物水平整体下调ꎬ进一步分析表明ꎬ泌尿代谢物排泄水平可以用来评估核暴露的辐射剂量ꎬ并能揭示与辐射损伤有关的代谢紊乱[12]ꎮCheng等[13]通过过氧化氢(H2O2)处理肝癌细胞以模拟氧化应激ꎬ随后进行代谢组学分析发现ꎬ肝癌细胞中1ꎬ6-二磷酸果糖(G6PD)以及1ꎬ7-二磷酸七庚酮(S-1ꎬ7-BP)的水平显著升高ꎬG6PD活性缺乏降低二磷酸七庚酮的形成ꎬ推论二磷酸七庚酮是磷酸戊糖途径氧化应激反应过程中生成ꎬ结果显示ꎬ肝癌细胞经H2O2处理后显著增加了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)的表达并降低了ATP和NAD+的水平ꎮFuhrmanna等[14]研究发现ꎬ缺氧16h和72h后谷氨酸㊁α-酮戊二酸和异柠檬酸的水平降低ꎻ慢性缺氧导致柠檬酸盐显著增加ꎬ而马酸盐却减少ꎬ表明在慢性缺氧条件下复合物Ⅱ活性降低ꎬ电子转移黄素蛋白(ETF)升高ꎬ并且ETF-泛醌氧化还原酶的变化影响了线粒体呼吸功能ꎮ上述一系列研究表明ꎬ应激可以对生物体在细胞和分子水平的代谢产生影响ꎬ最终表现为代谢产物的变化ꎬ通过研究细胞及代谢组学变化ꎬ可以直观了解阐述应激对于生命活动的影响及作用机制ꎮ三、代谢组在疾病研究中的应用代谢组学在基础研究和临床应用中发挥了越来越重要的作用ꎬ已广泛用于各种生物体不同功能状态和疾病的研究[15]ꎮLi等[16]采用超高效液相色谱-四重飞行时间质谱(UHPLC-QTOF/MS)技术相结合ꎬ收集150例严重阻塞性冠心病(CHD)患者和150例血管造影正常对照的血样研究组学成分ꎬ发现105例CHD患者的代谢物发生显著改变ꎬ代谢组学鉴定发现棕榈酸㊁亚油酸㊁4-吡哆酸㊁磷脂酰甘油㊁肉毒碱和石胆酸这6种代谢物与CHD具有强相关性ꎮ另一项基于GC/TOFMS对30例2型糖尿病患者和30例健康对照者的非靶向血清代谢前瞻性研究分析ꎬ应用多变量数据分析识别代谢物ꎬ结果有54种代谢物被鉴定出来ꎬ其参与氨基酸㊁碳水化合物㊁脂质㊁膜转运和核苷酸的代谢途径ꎬ其中龙胆酸㊁柠檬酸㊁琥珀酸㊁2-羟基丁酸和3-羟基-1-脯氨酸在内的的代谢物与2型糖尿病之间高度相关ꎬ认为可作为潜在的生物学标志物[17]ꎮZhao等[18]采用超高效液相色谱-四重飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术分析75例原发性高血压以及健康对照者的尿液代谢产物ꎬ根据PLS-DA模式识别分析ꎬ筛选出其间存在显著差异的物质ꎬ涉及的代谢途径为氨基酸代谢㊁脂肪酸代谢类固醇激素㊁生物合成和氧化应激等ꎬ其中包括L-蛋氨酸在内的10种代谢物可作为潜在的生物学标志物ꎮ另有研究者应用代谢组学技术研究分析乳腺癌和健康对照组的血浆样品ꎬ发现血浆中不同浓度的代谢物达1269种ꎬ分析认为乳腺癌患者的这些异常代谢物主要通过合成必需生物分子提供所需能量和构建细胞生长所需构架起作用ꎬ并发挥信号转导分子的作用[19]ꎮFukumoto等[20]应用气相色谱/三重四极杆质谱法对鳞状细胞癌和黑色素瘤进行血清代谢组学研究ꎬ发现118种差异代谢物ꎬ在鳞状细胞癌组中具有显著差异的代谢物是甘油㊁4-羟基苯甲酸㊁癸二酸㊁岩藻糖和辛二酸ꎬ在黑素瘤组中ꎬ这些代谢物是谷氨961酸㊁癸二酸㊁辛二酸㊁4-羟基苯甲酸和苯丙氨酸ꎬ主成分分析显示可以将这两种皮肤恶性肿瘤群体与健康志愿者群体区分开来ꎮChen等[21]采用1H核磁共振光谱与拉曼光谱相结合分析高分化与低分化鼻咽癌细胞之间的代谢情况ꎬ筛选出18种特征代谢物ꎬ包括丙氨酸㊁谷氨酸㊁谷氨酰胺㊁异亮氨酸㊁赖氨酸㊁甲硫氨酸牛磺酸和苏氨酸在内的8种氨基酸在高分化和低分化鼻咽癌细胞间比较差异有统计学意义ꎮWang等[22]通过UHLC-MS代谢组学技术分析肺腺癌细胞的代谢改变ꎬ发现尿苷一磷酸(UMP)㊁尿苷二磷酸(UDP)㊁二磷酸腺苷(ADP)㊁苹果酸㊁丙二酰辅酶A㊁烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)㊁辅酶A等在内的22种代谢物表达异常ꎬ涉及核苷酸代谢㊁尿素循环㊁三羧酸循环和甘油磷脂代谢等途径异常ꎮ大量研究表明ꎬ代谢组学技术在多种疾病研究中的广泛应用正在大范围揭示一系列疾病的病理生理机制ꎮ四㊁代谢组学在药物研究中的应用代谢组学在评价药物毒性㊁揭示其作用机制和药物相关功能中具有独特作用ꎬ现已广泛运用于各种药物研究[2ꎬ4]ꎮWu等[23]采用使用模式识别分析ꎬ研究当归四逆汤的相关作用ꎬ发现模型和对照组之间可以明确分离ꎻ当归四逆汤在干预血瘀过程中调节了9种代谢产物ꎬ认为滋补血液对温暖经络的作用有关ꎬ同时表明ꎬ当归四逆汤对血瘀综合征的干预作用可能涉及调节花生四烯酸㊁甘油磷脂㊁胆汁酸生物合成和丙酮酸代谢等途径ꎮRyu等[24]应用顺铂处理小鼠ꎬ然后对其血液及尿液进行代谢组学分析ꎬ发现丙氨酸㊁葡萄糖㊁甘氨酸㊁胍基乙酸盐㊁乙酸盐和乳酸的尿浓度显著升高ꎬ而尿液代谢物中柠檬酸盐和马尿酸盐的浓度在顺铂处理后上显著降低ꎬ通过血清和尿1HNMROPLS-DA与血清生化及肾脏组织病理学改变的相关性分析ꎬ发现尿液1HNMR分析可用于预测/筛选顺铂肾毒性的可靠指标ꎮ另有研究者通过对肝癌细胞使用新型潜在抗癌药物Natrin培养后进行代谢组学研究ꎬ主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)揭示了肝癌细胞代谢受到Natrin作用影响ꎬ13种代谢物被鉴定为与Natrin诱导的细胞凋亡高度相关的潜在生物学标志物ꎬ部分代谢物对应了鞘脂代谢㊁脂肪酸生物合成㊁脂肪酸代谢㊁甘油磷脂代谢和糖鞘脂代谢等5种代谢途径ꎬ证明了Natrin的抗癌活性[25]ꎮYang等[26]用高脂饮食诱导血脂异常大鼠模型ꎬ中药黄精提取物(polygonatumkingianumꎬP.kingianum)灌胃14周ꎬ随后使用超高效液相色谱/质谱法对血清㊁尿液和肝脏样品中的代谢物进行分析ꎬ分别鉴定出19㊁24和38种潜在的生物学标志物ꎬ涉及苯丙氨酸㊁酪氨酸㊁色氨酸㊁谷氨酸㊁亮氨酸和异亮氨酸的生物合成以及色氨酸㊁酪氨酸㊁苯丙氨酸㊁淀粉㊁甘油磷脂㊁花生四烯酸㊁亚油酸㊁烟酸㊁烟酰胺和鞘脂的代谢ꎻ研究发现黄精提取物通过调节血清㊁尿液和肝脏样品中的内源性代谢物来减轻高脂饮食诱导的大鼠血脂异常ꎬ认为其有望成为治疗血脂异常和相关疾病的脂质调节剂ꎮ纵观国内外有关药物毒性实验和新药研发热点问题ꎬ代谢组学技术以其高敏感度㊁准确性和直观反映细胞生命活动的特性而提供了良好的技术平台ꎮ五㊁代谢组学在失重医学研究领域的应用基于代谢组学分析技术的高通量㊁高分辨率㊁高敏感度等特点ꎬ也拓展应用于航天航空失重医学研究领域ꎮXu等[27]在模拟微重力环境中饲养大鼠14天诱导抑郁模型ꎬ随后采用主成分分析和正交偏最小二乘判别法寻找大鼠尿液内源性差异代谢产物ꎬ多变量统计分析显示微重力处理的大鼠和对照大鼠的尿代谢谱之间存在明显分离ꎬ其中柠檬酸㊁草酸琥珀酸㊁肌酸㊁脯氨酸㊁苯乙酰甘氨酸㊁5-羟基吲哚乙醛㊁琥珀胆碱㊁脱氧尿苷㊁3-羟基马尿酸㊁谷氨酰胺和5-羟色氨酸等表达明显下调ꎬ而吲哚-模型组中3-乙醛㊁黄尿酸㊁牛磺酸㊁犬尿喹啉酸㊁马尿酸㊁5-羟基吲哚乙酸㊁2-苯基乙醇葡糖苷酸㊁2-异丙基-3-氧代琥珀酸和肾上腺素水平显著升高ꎬ这些生化改变涉及色氨酸㊁精氨酸㊁脯氨酸和苯丙氨酸代谢以及能量代谢ꎬ这为鉴别空间和重力引发的抑郁具有重要临床意义ꎮMichaletti等[28]应用UHPLC-HRMS技术分析失重环境培养的人成骨细胞ꎬ发现微重力环境下糖酵解加速ꎬ主要与戊糖磷酸途径相关ꎻ苹果酸脱氢酶减少诱导苹果酸-天冬氨酸穿梭逆转ꎬ导致ATP合成失调ꎻ脂肪酸β-氧化被抑制ꎬ促进甘油三酯生成和甘油梭减少ꎻ微重力促发氧化应激反应ꎬ氧化型谷胱甘肽和抗氧化酶显著降低ꎻ结论认为失重环境抑制成骨细胞功能ꎬ损害线粒体能量潜能和细胞能量状态ꎮ上述研究结果表明ꎬ代谢组学技术对促进航天航空失重医学发展具有重要意义ꎬ这方面的应用尚有限ꎬ有待深入研究ꎮ六㊁展㊀㊀望综上所述ꎬ代谢组学研究经历了快速的技术进步ꎬ已广泛应用于生命科学各个领域ꎬ为诠释生命现象㊁探寻疾病机制㊁研发药物㊁发现生物学标志物等ꎬ071提供了强大的技术平台ꎬ展现了崭新的理论视角ꎮ代谢组学研究方兴未艾ꎬ因数据采集时间和数据大小等因素ꎬ尚难以在高通量条件下执行单细胞代谢组学ꎬ技术稳定性和代谢物覆盖度等亦需进一步完善ꎮ随着代谢组学相关研究的不断深入以及环节升级与完善ꎬ有望成为指导人类疾病诊断和治疗的有效手段ꎮ参考文献1㊀NicholsonJKꎬLindonJCꎬHolmesE.Metabonomics:understandingthemetabolicresponsesoflivingsystemstopathophysiologicalstimuliviamultivariatestatisticalanalysisofbiologicalNMRspectroscopicda ̄ta[J].Xenobioticaꎬ1999ꎬ29(11):118l-11892㊀PinuFRꎬBealeDJꎬPatenAMꎬetal.Systemsbiologyandmulti-omicsintegration:viewpointsfromthemetabolomicsresearchcommu ̄nity[J].Metabolitesꎬ2019ꎬ9(4):E763㊀AlonsoAꎬMarsalSꎬJuliàA.Analyticalmethodsinuntargetedmetabolomics:stateoftheartin2015[J].FrontBioengBiotechnolꎬ2015ꎬ3:234㊀EverettJRꎬLooRLꎬPullenFS.Pharmacometabonomicsandperson ̄alizedmedicine[J].AnnClinBiochemꎬ2013ꎬ50(6):523-5455㊀AlderLꎬGreulichKꎬKempeGꎬetal.Residueanalysisof500highprioritypesticides:betterbyGC-MSorLC-MS/MS?[J].MassSpectromRevꎬ2006ꎬ25(6):838-8656㊀BjerrumJT.Metabonomics:analyticaltechniquesandassociatedche ̄mometricsataglance[J].MethodsMolBiolꎬ2015ꎬ1277:1-147㊀SaraFꎬJastrebskiꎬSusanJꎬetal.Chickenhepaticresponsetochro 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代谢组学和蛋白组学的研究进展
代谢组学和蛋白组学的研究进展代谢组学和蛋白组学是一种基础科学研究方法,主要是利用大规模定量分析生命体系中的代谢物和蛋白质等宏观分子,以期了解生物体内代谢物的生成和转化机制,以及蛋白分子在生物体中的功能。
随着科技的不断发展,这种研究方法的应用范围越来越广泛,有望在医疗和药物开发等领域取得重要突破。
一、代谢组学的研究进展代谢组学的研究基础是代谢通路的分析。
传统的代谢通路以酶的作用为基础,在研究中常常需要对酶的活性进行测定,但这种方法缺乏高通量和高灵敏度。
近年来,生物技术的进步,如DNA芯片、代谢物质谱、核磁共振等技术的发展,使得代谢组学研究的方式发生了变化。
著名脑科学家称赞测量蛋白质是“神经科学的最后的边界”,对于形式复杂的神经系统来说,这似乎是一个艰巨的任务。
一般而言,代谢组学的研究可以分为两类:有目的的代谢组学和非有目的的代谢组学。
有目的的代谢组学是指针对特定疾病或生理状态,通过调查特定的代谢通路或代谢物,找出与之相关的蛋白质和基因,以及与疾病或生理状态相关的代谢键,以期从认识代谢机制的角度解决不同疾病或生理状态。
非有目的代谢组学则是指在人群或药物处理实验中,通过大规模分析代谢产物,找出影响代谢产物水平的因素,如基因、酶活性、环境因素等,以期从全面掌握代谢机制的角度解决复杂代谢过程。
值得注意的是,有目的代谢组学研究中往往涉及到多个层级,包括基因表达、蛋白质表达、代谢产物表达和药物作用分析等,需要集成多种技术手段,如生物信息学、结构生物学和计算机仿真等,在调查和分析复杂代谢通路的过程中,需要协作进行。
二、蛋白组学的研究进展与代谢组学相比,蛋白组学的研究涉及到的生命体系更加广泛。
尽管作为生命体系中最本质的组成部分之一,蛋白质仍然是生命科学中最引人注目的对象之一。
蛋白组学的研究在分子生物学、生物医学工程、药物研发等领域具有重要的应用前景。
蛋白质是动植物细胞和微生物体内的主要功能性分子,同时也是细胞内最基本的重要组分之一,它们的结构、组成、功能和生理效应已成为科学家们探索生命起源和演化、以及认识生物过程的基础。
代谢组学研究进展
代谢组学研究进展一、本文概述代谢组学,作为系统生物学的一个重要分支,专注于生物体在特定生理或病理状态下所有低分子量代谢物的定性和定量分析。
这些代谢物是基因表达调控的最终产物,能够直接反映生物体的生理和病理状态。
随着生物技术的不断发展,代谢组学已成为疾病诊断、药物研发、环境科学等多个领域的研究热点。
本文旨在综述代谢组学的研究进展,包括其定义、研究方法、应用领域以及所面临的挑战和未来的发展趋势。
我们将简要介绍代谢组学的基本概念和研究范围,阐述其在不同领域的应用价值。
接着,我们将重点回顾近年来代谢组学在方法学上的突破,包括代谢物的提取、分离、检测以及数据分析等方面的技术进步。
在此基础上,我们将探讨代谢组学在疾病诊断、药物研发、营养学、环境科学等领域的应用实例和研究成果。
我们还将分析代谢组学研究中面临的挑战,如代谢物的复杂性、分析方法的灵敏度与特异性、数据处理和解释的难度等。
我们将展望代谢组学的未来发展趋势,包括技术方法的进一步创新、多组学整合分析的应用、以及代谢组学在精准医学和个性化治疗等领域的发展前景。
通过本文的综述,我们期望能够为读者提供一个全面而深入的代谢组学研究进展概览,为相关领域的研究人员提供有益的参考和启示。
二、代谢组学的研究方法与技术代谢组学,作为系统生物学的一个重要分支,专注于生物体系内所有小分子代谢物的定性和定量分析。
其研究方法与技术随着科技进步而日新月异,涵盖了从样本预处理、数据采集到数据分析的整个过程。
在样本预处理方面,代谢组学要求尽可能地保留生物样本中的原始代谢信息,同时去除干扰物质。
这通常包括样本的收集、存储、提取、纯化和浓缩等步骤。
近年来,一些新的样本处理技术,如基于液液萃取的代谢物提取方法,被广泛应用于提高代谢物的提取效率和纯度。
在数据采集技术上,代谢组学主要依赖于各种高灵敏度和高分辨率的分析仪器。
核磁共振(NMR)和质谱(MS)是最常用的两种技术。
NMR 以其无损、无需标记和可定量分析的特点,在代谢组学研究中占有一席之地。
代谢组学技术在生命科学中的应用与进展
代谢组学技术在生命科学中的应用与进展随着科技的不断进步,生命科学领域也在不断发展。
代谢组学技术就是其中之一。
代谢组学技术是一种对生物体内代谢产物的全面解析技术,它能够全面、高通量地分析生物体内的代谢物,并对代谢物在不同条件下的分布情况进行比较和分析,从而为生命科学领域提供了强有力的工具。
在本文中,我们将深入探讨代谢组学技术在生命科学中的应用与进展。
一、代谢组学技术的原理代谢组学技术的研究对象是生物体内的代谢产物。
它利用高灵敏度和高效性的分析方法,从血液、尿液、组织以及其他生物学样本中检测和鉴定各种代谢物质,包括小分子代谢产物、蛋白质和核酸。
代谢组学技术主要包括质谱分析和核磁共振技术,其中质谱分析是代谢组学技术中最常见的技术。
代谢组学技术分为非靶向和靶向两种。
非靶向代谢组学技术是对样本的全面型分析,使用的是质谱联用技术,对生物体内的不同类别的代谢产物进行检测,从而获取生物体代谢组的完整图片。
靶向代谢组学技术则是针对具体代谢物进行分析,采用的是靶向代谢产物检测技术,可以在具体代谢物中进行定量和定性分析。
通过这两种技术,可以全面、准确地测定生物体内代谢产物的数量和组成。
二、代谢组学技术在生命科学中的应用1. 代谢疾病的诊断和治疗代谢组学技术可以分析生物体内的代谢物,并预测疾病的发生和进展,因此在疾病的早期诊断、治疗和预防方面有着极大的应用潜力。
代谢组学技术可以应用于多种代谢性疾病的诊断和治疗,如糖尿病、肝病、肾病、心血管疾病等。
通过分析生物体内代谢产物的变化,可以追踪疾病的进展情况,并为治疗提供指导。
2. 药效学研究代谢组学技术可以应用于药物效果评估中,判断给定药物在生物体内的代谢方式、代谢产物和剂量,因此对药物研发和治疗效果的评估具有重要作用。
此外,代谢组学技术还可以应用于药物代谢环节中的其他环节,包括吸收、分布、代谢和排泄,对药物在体内的代谢过程进行全面的分析和评价。
3. 食品和环境毒理学研究代谢组学技术可以应用于食品和环境毒理学研究中,探索各种毒素发挥的毒理作用和代谢途径,包括食品中的化学和微生物毒素、环境污染物、医药产品和其他物质。
代谢组学研究现状和发展趋势
代谢组学研究现状和发展趋势代谢组学是指通过高通量代谢物测量技术和数据分析手段,研究生物体内代谢物组成及变化,对生物学过程进行全面深入的探索。
为了更好的理解代谢组学的研究现状和未来发展趋势,本文将从技术手段、应用领域和前沿研究三个方面进行阐述。
技术手段代谢组学的快速发展离不开现代高通量技术的支持。
目前广泛应用的代谢组学技术包括质谱技术、核磁共振技术、色谱技术、流式细胞术等。
其中,质谱技术是最常用的技术之一。
包括气相色谱质谱联用技术(GC-MS)、液相色谱质谱联用技术(LC-MS)等。
这些技术均具备高分辨率、高准确度、可定量和屏幕多个代谢物等优势。
在技术手段的发展上,代谢组学正在发展出一些新的技术工具,以解决传统技术存在的困难和不足。
例如,新兴的离子迁移谱(IMS)技术,通过离子迁徙速率和质荷比的测量,可以快速检测代谢产物、半定量和定量分析化合物等。
另外,光学波导谐振技术(OWAVE)也可用于代谢组学测量分析中,其灵敏度高、适用范围大,对于激素、生长因子等高分子化合物的测定和分析具有显著的优势。
应用领域代谢组学目前已广泛应用于生命科学研究中。
代谢组学研究的生物体系包括细胞、组织、器官和生物体等。
它在人类健康、疾病预测和治疗方面的应用也越来越广泛,如癌症、心血管疾病、代谢性疾病、神经系统疾病等领域。
在癌症领域,代谢组学已被广泛应用于肿瘤的早期筛查、病理学分级、预后判断、评估疗效和监测治疗副作用等方面。
与此同时,代谢组学还为生长抑素剂治疗的糖尿病、心血管疾病的诊断和治疗、营养与代谢性疾病治疗提供了辅助手段,有望成为疾病管理与治疗的重要工具。
前沿研究在代谢组学研究领域,研究人员正致力于深入探索和研究代谢热点问题,如多元代谢通路之间的相互作用、多学科合作和数据互通等方面。
在这些问题的探索中,代谢组学与其他学科的融合成为必然趋势。
一方面,在代谢组学与脑神经代谢和认知功能研究中,已经取得了很大的进展。
例如,在研究失智症的代谢组学方面,已经发现血浆多元羟基磷脂酸代谢通路与疾病发生和进展相关,能够被作为失智症的生物标记之一。
代谢组学的研究方法和研究流程
代谢组学的研究方法和研究流程代谢组学是一门研究生物体内代谢物(代谢产物)的学科,主要通过高通量分析技术和生物信息学方法来研究生物体内代谢物谱系的变化以及代谢途径的调控。
下面将介绍代谢组学的研究方法和研究流程。
研究方法:1.采样与预处理:代谢组学研究的第一步是采集生物样本,包括血液、尿液、组织等。
采样完毕后,需要进行预处理,如去除杂质、蛋白质沉淀、离心等,以获得纯净的代谢物样本。
2.检测与定性:常见的代谢组学检测方法包括质谱和核磁共振等技术。
使用质谱技术时,可以通过气相色谱质谱(GC-MS)或液相色谱质谱(LC-MS)来检测和定性代谢物。
核磁共振技术(NMR)则可以用于测定溶液中的代谢物。
3.数据处理与峰识别:通过对检测到的代谢物进行数据分析和峰识别,可以得到代谢物的质谱峰图谱。
峰识别是根据峰形、相对分子质量和峰面积,对代谢物进行定性和定量的过程。
4.信息提取与统计分析:通过统计学方法,可以对代谢物的峰数据进行分析,找出差异显著的代谢物并进行注释。
此外,还可以应用多变量统计方法,如主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)等,寻找样本组之间的差异。
研究流程:1.定义研究目标:明确研究的目的和问题,例如研究代谢通路的变化、寻找生物标志物等。
2.采样与预处理:选择合适的样本类型及数量,并进行样本预处理,如去除蛋白质、除去杂质等。
3.代谢物分析与检测:选择合适的检测方法,如质谱技术或核磁共振技术,对样本中的代谢物进行定性和定量分析。
4.数据处理与统计分析:根据代谢物的峰数据,进行数据处理和统计分析,找出差异显著的代谢物,并进行生物信息学注释和功能富集分析。
5.结果解释与验证:根据数据分析结果,解释研究中发现的代谢物变化或代谢通路的调控。
进一步可以进行实验验证,如基因敲除、代谢酶活性测定等。
6.结论提出与研究应用:根据研究的结果,提出相关结论,并将其应用于生物医学、农业和食品科学等领域。
总结:代谢组学通过研究生物体内代谢物的变化和代谢通路的调控,可以深入了解生物体的代谢过程,并在诊断、治疗和监测疾病等方面发挥重要作用。
代谢组学研究进展及其应用
代谢组学研究进展及其应用概述代谢组学是研究生物体代谢过程的全面技术,它可以同时分析有机物质在生物体内的产生、转化和消耗过程,揭示生物体在健康与疾病进程中的代谢状态及生命活动的机制等方面的信息。
代谢组学技术的不断发展和推广,使得它在人类疾病、环境污染和食品安全等领域的应用成为了可能。
本文就代谢组学的研究进展及其应用进行探讨。
代谢组学的技术路线代谢组学技术路线主要包括样品采集、样品制备、代谢谱数据获取及分析、元数据整合及分析。
其中,样品采集要求准确、快速、高通量化;样品制备要求对生物样品的代谢物具有高效、有选择性的萃取;代谢谱数据获取及分析要求具有高通量、高分辨率、高灵敏度、高可靠性;元数据整合及分析则侧重于建立代谢物与生物学过程之间的关联,并挖掘有潜在的特殊生物标志物,从而加深对生物体代谢过程的认识。
近年来,液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)已成为代谢组学中最常用的代谢物分析方法之一。
与同时代的核磁共振技术(NMR)相比,液相色谱-质谱联用技术具有普适性更强、分析速度更快、灵敏度更高、分析范围更广等优点。
代谢谱数据处理方法种类多样,包括单样品代谢物分析和多样品代谢物分析等。
其中,单样品代谢物分析方法可以快速鉴别样品中全部化合物的代谢物谱图,鉴别代谢物组成成分及其相应数量,从而评估代谢物中组成物之间的关系;而多样品代谢物分析则是将所有代谢物的峰进行比较,研究它们的数量变化和化学结构,以揭示各样品之间的代谢变化情况。
代谢组学的应用代谢组学技术在医学、环境、食品等领域的应用日益广泛。
以下是代谢组学在不同领域的应用案例。
医学领域大量的代谢组学研究揭示了许多疾病与代谢障碍的关系,如心脑血管疾病、糖尿病、肥胖症以及肿瘤等。
部分代谢物作为生物标志物出现在体液中,其含量的变化可以提供关于疾病诊断、治疗、预后和评估药物疗效的重要参考信息。
以糖尿病为例,一项针对African American女性的代谢组学研究,发现三年后发生糖尿病的个体和不发生糖尿病的个体之间的基线代谢物组成有明显差异,而且,在正常空腹血糖水平下,峰叉式曲线图(peak-cliff)中存在差异代谢物,这些代谢物与糖尿病的发生密切相关。
代谢组学的研究进展
2.经典案例解析:与玫瑰花香气有关的基因
对比
功能 FC :1834克隆 比较表达丰 注释 GG:1039克隆 度高的基因
FC中香气物质合成相关的基因(推测)表达高。
2.经典案例解析:与玫瑰花香气有关的基因
2.经典案例解析:膜脂代谢
待发表论文(重要种子生理现象机制解析)
➢ 吸胀冷害,表型→ 基因型差异→ 组学解析→ 机制验证 ➢ 顽拗型种子,表型→ 组学解析→ 突变体→ 基因→ 蛋白
表达/细胞定位变化→ 应用
内容
1 代谢组学简介 2 经典案例解析 3 合作的探索√
结合思考,运用到烟草种子相关的研究
比较: FC vs GG & FC1 vs FC4 黄玫瑰有香气,从第四阶段开始。
2.经典案例解析:与玫瑰花香气有关的基因
问题的提出(生理) 代谢上的差异√
➢ 与香气有关的化合物的差异
查找导致代谢不同的原因 找到相关的基因 潜在的运用
2.经典案例解析:与玫瑰花香气有关的基因
→ 收集挥发物 →析 GC-MS 分
FC0592: a cultivar-specific and mature-petal-specific expression.
FC0592功能验证3: 离体证据 体外实验证明能催化香气合成反应
To determine whether FC0592 codes for a sesquiterpene synthase & what type sesquiterpene produced: - FC0592 was cloned into a vector to obtain a active combinant enzyme. - In vitro reaction:
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代谢产物的分 离、检测、鉴定
数据分析 与模型建立
代谢组学的研究方法
研究对象 单个细胞或细胞类 对生物体液和组织进行系统测量和分 型中所有的小分子 析,研究完整的生物体中代谢物随时 成分和波动规律 间改变的情况,确定生物标志物 根据不同的分析方法 采取不同的样品制备方法 GC, LC, CE - MS NMR
代谢组学的应用(3)
(3)农业和食品领域:
代谢组学技术通过促进植物基因功能组学的研究工作, 来加快农作物 加快农作物 品质改良的进程。 品质改良的进程 通过比较转基因生物和其野生型在代谢产物方面的差别, 来对转基因 对转基因 生物及其食品进行安全性评估。Roesnner 生物及其食品进行安全性评估 Roesnner 等人利用代谢组分析技术 对转基因植物进行了研究, 他们利用GS/ MS 分析技术对马铃薯块茎中 150 种化合物进行了定量和定质分析, 确定了过度表达葡萄糖激酶、 葡萄糖磷酸酶等不同基因之转基因植株的生物化学表现型。
什么是代谢组学?
“代谢组学” = “代谢” + “组 学”
基因组学 genomics
DNA
转录组学 transcriptomics
mRNA
蛋白质组学 proteomics
Pr
代谢组学
研究一个细胞、组织或器官中,所有……的一门科学!
代谢组学的定义
代谢组指的是“一个细胞、组织或器官中, 所有代谢组分的集合,尤其指小分子物质”,而代 谢组学则是一门“在新陈代谢的动态进程中,系 统研究代谢产物的变化规律,揭示机体生命活动 代谢本质”的科学。它所关注的是相对分子质 量为1,000以下的小分子。
数据分析方法和模型建立(4)
(4)数据库及专家系统 现实情况下,代谢组学的数据是非常复杂的,特别是对病理生 对病理生 理过程的研究,预将代谢物的表达谱与时间相联系,则需要借助复杂 理过程的研究,预将代谢物的表达谱与时间相联系 复杂 的模型或是专家系统进行分析。 的模型或是专家系统 为了将基于NMR 的代谢组学用于药物的毒性筛选,伦敦大学的 皇家科学院实验室和Pfizer 等6 家制药公司于2001 年1 月启动了一个 为期3 年的关于药物毒性研究的研究小组(COMET) ,拟在药物的发现 到开发阶段用代谢组学的方法来评价药物的毒性,以缩短药物开发的时 间,减少损失,并试图建立一个用于药物毒性预测 预测的专家系统。该专家 预测 系统分为3 个独立的级别:正常/ 异常的判别、对未知样本进行数据库 中已知毒性或疾病的识别、病理学的生物标记物的识别。
1989年,Gartland等根据药物造成的靶器官(如肝、肾皮层或髓质毒) 损伤及程度分组,利用1HNMR对尿液进行分析,结合主成分分析 ( PCA) ,建立相应的毒理学研究模型 帮助判断新药的毒副作用与程 建立相应的毒理学研究模型,帮助判断新药的毒副作用与程 建立相应的毒理学研究模型 以及量效与时效关系。 度,以及量效与时效关系。Holmes等研究了HgCl2 (损伤近端肾小管) 以及量效与时效关系 和乙基溴(损伤肾髓质)两组肾损伤模型,观察了9天1H NMR谱的演变 情况。在肾损伤进展及恢复的过程中,尿中20种代谢物发生的改变,与 组织学的改变相一致,并存在规律性的时效关系。进一步相关分析的 基础上发现,HgCl2 的损伤是单一的直接损伤、具有可逆性;而乙基 溴则为双重损伤机制(直接损伤加上影响渗透压而造成肾乳头的间接 损伤) 、可逆性差。肝毒性研究方面亦有相类似的研究。 美国食品与药品管理局( FDA)已经接受代谢组学研究的结果作为新药 美国食品与药品管理局 已经接受代谢组学研究的结果作为新药 申报和注册的重要参考指标。代谢组学研究大大缩短了新药安全性研 申报和注册的重要参考指标 究的周期,它能够快速、有效地分析多条代谢通路,帮助定位靶组织 及判定毒副作用程度,寻找相应的生物学标志。主要采用的仍是NMR 技术,包括对各种体液、组织或组织提取液进行分析;在计算机基础上, 发展起来的数据分析模型更是发挥了巨大的推动作用。
(2)生物学研究领域:
作为基因型与表型之间的桥梁, 代谢组学将基因产物和基因关联起来, 作为基因型与表型之间的桥梁 代谢组学将基因产物和基因关联起来 实现基因 功能的鉴定。 功能的鉴定。转基因生物和敲除突变体(knockout mutants) ,往往没有明显的 表型变化。比如拟南芥中就有90 %的突变体是沉默型突变体,人们很难通过表 现型的变化来确定有关基因的功能。而转基因生物和敲除突变体中某些代谢产 物的含量却常常会发生变化。通过代谢产物水平变化的分析 就可以把它们与 通过代谢产物水平变化的分析, 通过代谢产物水平变化的分析 野生型区分开来。 野生型区分开来。 将代谢组学技术与功能基因组学手段相结合,通过代谢产物的变化能成功推断 推断 有关基因的功能。Metanomics 公司的成立就是一个典型的代表,其思想就是 有关基因的功能 遵循代谢组学的研究方法,在改变植物的基因后,进行植物的代谢分析或记录 代谢产物,进而寻找植物代谢过程中的关键基因,如能够让植物耐寒的基因等; Fiehn 研究小组的利用GC/MS 技术,通过对不同表型阿拉伯荠的433 种代谢产 物进行代谢组学分析,结合化学计量学方法(PCA、ANN 和HCA) 对这些植物的 表型进行了分类,找到了4 种在分类中起着重要作用的代谢物质 种在分类中起着重要作用的代谢物质:苹果酸(malic acid) 、柠檬酸、葡萄糖和果糖,结果与线粒体和叶绿体中的基因型结果一致。
数据分析方法和模型建立(5)
代谢组学分析离不开各种代谢途径和生物化学数据库 代谢途径和生物化学数据库。 代谢途径和生物化学数据库 现在主要的数据库有接连图数据库(Connections Map DB) , KEGG, EcoCyc , EcoCyc and metacyc , BRENDA , L IGAND , MetaCyc ,UMBBD , WIT2 , EMP 项目, IRIS , AraCyc ,PathDB , 生物化 学途径( ExPASy) , 互联网主要代谢途径( main metabolic pathways on Internet ,MMP) , Duke 博士植物化学和民族植物学数据库,Arizona 大学 天然产物数据库等, 其中IRIS , AraCyc 分别为水稻和拟南芥的有关数据 库。
数据分析方法和模型建立(3)
(3)有监督(supervised ) 学习方法 这类方法用于建立类别间的数学模型,使各类样品间达到最大的 这类方法用于建立类别间的数学模型 使各类样品间达到最大的 分离,并利用建立的多参数模型对未知的样本进行预测 并利用建立的多参数模型对未知的样本进行预测。 分离 并利用建立的多参数模型对未知的样本进行预测。在这类方法 中,由于建立模型时有可供学习利用的训练样本,所以称为有监督(有师) 学习。在这种方法中经常需要建立用来确认样品归类(防止过拟合) 的 确认集(validation set) 和用来测试模型性能的测试集(test set) 。 应用于该领域的主要是基于PCA、偏最小二乘法(partial least 、偏最小二乘法 应用于该领域的主要是基于 squares, PLS) 、神经网络 neural network ,NN) 的改进方法 常用 神经网络( 的改进方法, 的有SIMCA ( soft independent modeling of class analogy) 和偏最小 偏最小 二乘法显著性分析(PLS-discriminant analysis ,PLS-DA) 。 二乘法显著性分析 作为非线性的模式识别方法,人工神经元网络(ANN)技术也得到广 泛应用。
代谢组学的应用(4)
(4)医药领域:
药物安全性评价 细胞中代谢物和组织中代谢物处于生物体液的动态 平衡,机体中生物体液成分的变化反映了中毒或代谢损害而引起的细 胞功能异常。利用高分辨率的1H NMR 波谱可检测血浆、尿液、胆汁 等生物基质中的具有特殊意义的微量物质的异常成分,而且可以同时 对所有代谢物进行定量分析,且几乎不需要样品的前期准备,对任何 成分都有相同的灵敏度。1H NMR 谱所检测到的生物体液中的内源性 代谢物,完全依赖于动物体内的毒素类型;每一种类型的毒物和药物 都会在生物体液中产生特征的内源代谢物浓度和模式变化,这种特征 提供了毒性作用的机理和作用位置的信息,使先导化合物筛选更有效, 为新药临床前安全性评价提供可靠的技术支持与保障。因此,代谢组 学在毒物药物学的研究中发挥了极其重要的作用。
对比几个基本概念
研究对象 基因组学 genomics
核酸(A、T/U、C、G )
研究方法
以测序为主
转录组学 transcriptomics 蛋白质组学 proteomics 代谢组学
由20个氨基酸构成 代谢产物则以元素组成、 原子排列、立体结构和分 子特征来区分
差异显示、减法杂交、 DNA芯片技术等 同位素亲和标签、2D-MS技术
检测代谢产物的方法各 不相同
基因与蛋白质的表达紧密相连,代谢物则更多地反映了细胞所处的环境。正如 Billy David所言:“基因组学和蛋白质组学告诉你可能发生什么,而代谢组学则告诉你 已经发生了什么” 。
代谢组学研究过程
代谢组学研究过程包括:前期 的样品制备,中期的代谢产物分离、 检测与鉴定以及后期的数据分析与 模型建立三个部分。
代谢组学方法及其研究进展
2005.11.23.
代谢组学的历史
代谢组学的研究可以追溯至上世纪80 年代。 1985 年,英国帝国理工大学教授Nicholson的研究 小组利用核磁共振(NMR)技术分析大鼠的尿液, 并 于1999年,提出了代谢组学的概念。Nicholson教授 也由于其在代谢组学发展中的开拓性的贡献,而被 誉为“国际代谢组学之父”。
样品制备方法 代谢产物分离、 检测与鉴定方法 数据分析与模型 建立方法
归一化与滤噪、非监督学习方法、有监督学习方法、 数据库及专家系统; 模型建立
“Metabolite”+”genomics” metabonomics