广西一点红总生物碱的提取和抗菌活性研究(一)

广西一点红总生物碱的提取和抗菌活性研究(一)

作者：周吴萍韦媛媛李军生阎柳娟赖雪芬

【摘要】目的考察广西一点红总生物碱的分离提纯及其抗菌活性。方法通过95％乙醇回流提取一点红药材中的生物碱类物质，利用酸水提取法及有机溶剂萃取对其进行分离纯化，同时用化学检识法与薄层色谱法进行定性鉴别。采用滤纸片法研究一点红生物碱类物质的抗菌活性。结果一点红生物碱浓度在600～800 mg/ml时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及枯草杆菌中度敏感，随着药物(生物碱)浓度的增大，抗菌作用越明显。结论说明一点红生物碱类物质对供试菌有一定的抑菌活性。

【关键词】一点红总生物碱提取分离抗菌活性

Abstract：ObjectiveTo investigate the extraction and separation methods and antibacterial activities of the alkaloids in Emilia sonchifolia from Guangxi.MethodsThe alkaloids in Emilia sonchifolia were reflux extracted by 95% alcohol, and separated by acid water extraction and organic solvent extraction method, at the same time qualitative identification was performed by the chemical methods and the thin layer chromatography methods. To study the antibacterial activities of the alkaloids in Emilia sonchifolia by filter paper method. Results The result showed it was medium sensitive to Escherichia coli, Bacillus subtilis and Staphylococus aureus when the concentrations of the alkaloids were in the range of 600～800 mg/ml. The antibacterial function was more remarkable with the medicine concentrations increased. ConclusionThe alkaloids of Emilia sonchifolia has certain antibacterial activities against the selected microbes.

Key words：Emilia sonchifolia; Total alkaloids; Extraction-Separation; Antibacterial activity

一点红Emilia sonchifolia (Linn.) DC属菊科植物一点红的干燥全草，主产于广东、广西、福建、贵州、江西，具有清热解毒、活血散瘀的功效，用于治疗急性扁桃体炎、肺炎、急性阑尾炎、传染性肝炎、痢疾、尿路感染等疾病〔1〕。一点红是妇科临床常用药广西特产中成药花红片的主要原料药〔2〕，其主要含有黄酮类〔3〕，生物碱类〔1〕，甾醇类〔4〕等化学成分。据文献报道，一点红提取物有一定的抗氧化和抗炎作用〔5，6〕，并且对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和痢疾杆菌有一定抑制作用〔1〕。国内外仅对一点红的种植和临床应用方面有少量研究，对活性成分抗菌性能未见有相关报道，而生物碱常常是很多中草药的有效成分，具有抗炎抗菌的药理作用。故实验分离提纯一点红

总生物碱类物质，进行体外抗菌活性研究，为寻找一点红抗菌的活性成分提供一定参考，为有效利用广西草药资源提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

中药一点红干燥全草(由广西花红药业提供)，阳性对照硫酸链霉素粉针剂（购自柳州市中医院），甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、醋酸乙酯、环己烷等试剂均为分析纯。

供试菌种：大肠杆菌Escherichia coli，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，金黄色葡萄球菌Staphylococus aureus，以上菌种由广西工学院生物与化学工程系微生物实验室提供。培养基：营养琼脂粉，营养肉汤。

1.2 一点红生物碱的提取分离称取一点红药粉约100 g，加95%乙醇1 000 ml水浴回流提取2 h，减压抽滤得到提取液，药渣加入新溶剂反复提取3次，合并提取液，用旋转蒸发仪回收乙醇，挥干溶剂得到生物碱粗提物浸膏。浸膏加1%盐酸溶解，减压过滤，滤液用氯仿萃取至氯仿层无色，弃去氯仿层，水层用10%氨水调节pH值为9～11，用氯仿萃取3次，合并氯仿层(加入少量

K2CO3，脱水)，回收氯仿得到总生物碱提取物，干燥称重，计算提取率，产品于干燥器中保存。在提取与纯化过程中适时用生物碱检测试剂同时追踪检识生物碱。

1.3 生物碱的鉴别取出待测液各1 ml置于试管中分别做生物碱、黄酮及甾醇类物质的化学检识试验〔7〕。将所提得样品溶解于无水乙醇中，点样于硅胶G薄层色谱板上，分别采用环己烷－甲醇（9∶1）；醋酸乙酯－甲醇－氨水（9∶1∶0.3）及丙酮三个极性大小不同的展开系统对一点红生物碱提取物进行薄层色谱分离，用碘化铋钾试剂显色，电吹风吹干，观察现象。

1.4 体外抑菌实验

1.4.1 培养基的制备营养琼脂：称取33 g营养琼脂粉，加1 000 ml蒸馏水溶解，分装，包扎，于121℃，0.1MPa条件下，灭菌20 min。

生理盐水:称取0.9 g氯化钠，加100 ml蒸馏水溶解，于121℃,0.1 MPa 条件下，灭菌20 min。

1.4.2 菌悬液的制备取原菌种在无菌室的净化工作台上用接种环对每种菌轻刮取一环，划线接种于营养琼脂培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24 h，以平板培养计数法测定其生长浊度，然后将菌液稀释至106～108个菌/ml

备用〔8〕。

1.4.3 测试溶液的配制用10％的吐温溶液将提纯的生物碱样品配制为100，200，400，600，800 mg/ml的溶液作为待测液，同时用10％吐温配制浓