间接抗人球蛋白试验标准操作规程

间接抗人球蛋白试验标准操作规程

(微柱卡式法)

一、目的

为规范抗人球蛋白（Coombs 试验）的技术操作，保证试验的结果的准确性，为临床诊断及治疗提供依据，特制定本规程。

二、使用范围

适用于输血科进行抗人球蛋白试验的操作。

三、职责

输血科技术人员负责抗人球蛋白试验的操作。

四、原理

利用抗人球蛋白血清可与体内已被不完全抗体或补体致敏红细胞产生凝集反应，可检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相合红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴类药物、青霉素等所致）。

五、试剂及材料

(一)试剂：抗人球蛋白检测卡（西班牙 Diagnostic Grifols,S.A公司生产）、IgG 抗D、正常人AB血清

(二)设备：戴安娜专用离心机（型号：DG SPIN）、戴安娜专用孵育器（型号：DG THERM）、微量移液器、离心机、试管等

六、标本要求：

(一)抽取受血者抗凝（抗凝剂为EDTA.K2）静脉血2-3ml,在3000r/min条件下离心5分钟备用。

(二)标本保存：血液样本必须密封，2-8℃保存7天。

七、操作步骤

(一)标本及其他试剂处理：

1、实验前将未开的抗人球蛋白检测卡放置于戴安娜专用离心机离心9分钟左右，取出待用

2、离心标本取血清备用（或准备已知抗体的血清）

3、配制1%已知抗原红细胞悬液（或1%受检红细胞悬液）

4、1%D阳性红细胞：任选3个O型D阳性红细胞混合，配成1%红细胞悬液

(二) 在抗人球蛋白检测卡上标明患者姓名、病房床号、阴性和阳性对照，撕掉卡上的封条

(三)按下表将各种反应物加入相应反应孔中。

间接抗人球蛋白试验操作步骤

反应物待测孔阳性对照孔阴性对照孔血清（已知或受检）25ul －－

1%红细胞悬液（受检或已知）50ul －－

IgG抗D血清－25ul －

1%D阳性O型红细胞悬液－50ul 50ul

AB型血清－－25ul

(四) 将卡放入37℃孵育箱15分钟，移出放入离心机9分钟，取出观察结果。

八、结果判定：

阳性对照孔凝集，阴性对照孔不凝集，待测孔凝集者为阳性，表示受检血清中有不完全抗体（或受检红细胞上有相应抗原），待测孔不凝集为阴性。如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因。

九、注意事项：

如受检血清中检出有不完全抗体，可将受检血清以盐水作倍量稀释后，按上法进行测定。