心脏标志物检验及临床应用教学演示文稿

谷草转氨酶（ 谷草转氨酶（ASFra Baidu bibliotek） ）
I、原理：L-天门冬氨酸+а-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH +H+ MDH L-苹果酸+NAD+ 在AST催化下，L-天门冬氨酸的2个氨基转移到а-酮戊二酸上，生成产物草酰乙酸和L-谷 氨酸。草酰乙酸在苹果酸脱氢酶(MDH)催化下变成苹果酸，使NADH氧化成NAD+。在紫 外波长下，测定NADH吸光度下降的速率，它与AST催化反应产生草酰乙酸速率呈比例， 即可测出AST活性(U/L)。 II、方法：酶动力学法。 III、干扰因素：避免溶血，因为AST在RBC中的浓度较血浆中高约40倍。故溶血标本会 使结果假性升高；脂血：TG<11.4mmol/l对结果无明显影响。 IV、参考范围：男性:≤37U∕L；女性≤31U∕L。 V：临床意义：在人体的很多组织中均能发现丙氨酸氨基转移酶。其中，在心肌中的活 性最大，其次是脑、肝、胃黏膜、脂肪组织、骨骼肌和肾。 AST 存在于细胞的细胞浆 和线粒体中。组织轻度损伤时，主要AST 来自细胞浆（S-AST），少量来自线粒体（mAST）。严重的组织损伤时，则有更多m-AST由线粒体释放。所以，测定m-AST可判断疾 病的预后。AST 活力的升高是心肌梗死、肝病、肌肉受伤和器官伤害等的指标。AST上 升鉴于心肌损伤，因为AST在心肌中含量最为丰富，在各组织中其活性强度的顺序大致 为心＞肝＞肌肉＞肾。在AMI发生时，AST 6-12h内明显升高。个别患者其心电图正常， 但血清酶已有改变，故AST与其他酶同时测定有助于心肌梗死的诊断。AST在发病后 48～60h达峰值，3～5d可降至正常。升高的幅度与心肌损伤程度成正比，连续测定AST 对判断预后和观察病情亦有一定意义。
肌酸激酶（ ） 肌酸激酶（CK）B
IV、参考范围： 参考范围： 参考范围 0-250U/L （男性 39-308U/L） （女性 26-192U/L） V：临床意义 临床意义： 临床意义 a、心血管疾病：对AMI诊断有以下特点，能早期诊断，效率高，特异性强，可判断梗 死的部位，面积及预后，作为溶栓再灌注的指标。 急性病毒性或风湿性心肌炎时，CK 可轻度或中度升高。 急性或慢性充血性心力衰竭，高血压性心脏病，肺原性心脏病， 心衰性肝淤血，心肌病CK总活力正常，监测CK的变化可鉴别是否已并发心肌梗死。 b、 神经肌肉系统疾病：肌营养不良可引起CK增高，70%皮肌炎患者血清CK活力升高。 各种非营养性肌炎患者血清CK水平一般在正常值的5倍以下。先天性肌营养不良和眼肌 营养不良患者，其血清CK为正常的千倍左右。 c、 神经系统疾病：约半数脑血管病患者CK活力明显增高，脑膜炎，脑炎，肝豆状核变 性，急性精神病，巴比妥或外源性毒物中毒也可使CK升高。 d、 其他：多数甲功减退患者血清CK活力增高，甲亢患者血清CK活力降低，机械性损伤， 术后CK也可升高。 VI：危急值：＞ 危急值：＞ 危急值：＞1800U/L。 应对措施： 重新审核质控结果以及其他标本的测定情况等有无异常，并回顾历史结果。 核对标本信息，如需要则复检或向临床了解病人的情况。 确认结果无误后，立即向有关医生电话报告结果，同时作好通话记录，包括报告时间 和对方接受人。
心脏解剖纵切面图
心肌细胞一 旦受损，心 脏的功能就 会受到损害， 同时会有大 量的酶类及 蛋白类标志 物释放出来。
心肌标志物
酶类标志物 谷草转氨酶（ 谷草转氨酶（AST） ） 乳酸脱氢酶（ 乳酸脱氢酶（LDH） ） 肌酸激酶（ ） 肌酸激酶（CK） 肌酸激酶同工酶（ 肌酸激酶同工酶（CK-MB） ） α-羟丁酸（α-HBDH） 羟丁酸（ 羟丁酸 ） 蛋白类标志物 肌红蛋白 肌钙蛋白（ 肌钙蛋白（ cTnT,cTnI,cTnC ）
肌酸激酶同工酶（ 肌酸激酶同工酶（CK-MB）A ）
I、原理 原理： 原理 CK-MB 由2 个亚基组成，CK-M和CK-B二者都有酶活力。对样品 内加入抗CK-M 多克隆抗体，使CK-M 亚基酶活力抑制了99.6% ， 但是不影响CK-B 的活力。余下的CK-B 活力相当于CK-MB 活力的 一半，可以用CK-NAC方法测定总CK那样进行活力检测。因为CKBB 同工酶在血清中非常少，而CK-M和CK-B 的酶活力几乎一样， 所以将检测CK-B的活力乘以2，可以计算出CK-MB 的活力。 磷酸肌酸(CrP)+ADP CK PH6.7 肌酸(Cr)+ATP ATP+葡萄糖 HK 葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)+ADP 葡萄糖-6-磷酸+NADP+ G6PDH 6-磷酸葡萄糖酸+H+ +NADPH II、方法 方法：速率法（RATE）。 方法 III、干扰因素：溶血：Hb＞2mg/dl时有干扰。 脂血：甘油三酯＜22.6mmol/L没有明显干扰。 IV、参考范围 参考范围：0～24U/L 参考范围
肌钙蛋白（ 肌钙蛋白（cTnT） ）
I、测定原理 测定原理： 测定原理 将肝素化或EDTA抗凝的全血样本加到试纸上，利用两种不同标记的cTnT抗体（一种为 金标记，另一种为生物素标记）进行反应，如果样本中含有cTnT则与抗体形成固相免疫 复合物。血球被分离在一特定区域，血浆流向检测区，金标抗体与cTnT的复合物发生沉 淀，形成肉眼可见的沉淀线。多余的金标抗体继续移向质控点位置。质控线的出现表 明抗体的完整性和检测的有效性。如果未见质控线表明结果不可靠。 II、方法 方法：免疫渗滤法（全血快速定性试验）。 方法 III、参考范围：阴性 <0.1为临界值 IV、临床意义： a、不典型AMI患者，不出现胸痛或者心电图不出现Q波，此时诊断AMI有困难，酶学 诊断也是如此目前已有多种试验用于诊断AMI，有人将测肌钙蛋白T列入诊断AMI的“金标 准”，在心梗发病2-3小时即可升高，且特异性极高，诊断灵敏度为99.6%，10小时时 cTnTRA检验结果仍为阴性，说明该患者无心肌损伤。 b、诊断心梗，围手术期心梗及再梗塞。 c、诊断心肌炎 d、判断梗塞面积 e、判断溶栓再通 f、判断不稳定心绞痛UAP病人危险程度/ 发现小心梗。 g、心梗后治疗情况监测。 V、当我们遇到患者cTnT结果<0.1时，<0.1并不单单说明结果是阴性，它可能有两种情 况：1、早期心梗，肌钙蛋白结果才开始逐渐升高，过几个小时肌钙蛋白结果可能就会 变成阳性；2、患者经过治疗肌钙蛋白结果在逐渐转阴。
肌酸激酶（ ） 肌酸激酶（CK）A
I、原理： 原理： 原理 磷酸肌酸+ADP CK 肌酸+ATP D-葡萄糖+ATP HK ADP+葡萄糖-6-磷酸 葡萄糖-6-磷酸+NADP+ G-6-PD 6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+ 式中：CK=肌酸激酶 HK=已糖激酶 G-6-PD=葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 酶反应速度与样本中肌酸激酶的含量成正比，在340nm处，测定 NADPH吸光度上升的速率，可计算出样本中肌酸激酶的活力。 II、方法： 速率法 。 方法： 方法 III、干扰因素： a、乳糜达到1000mg/dl时影响小于4%。 b、胆红素＜40mg/ml时，对测定无影响。 c、溶血Hb＜200mg/dl时，对测定无影响。
α-羟丁酸（α-HBDH） 羟丁酸（ 羟丁酸 ）
I、原理 原理：α-酮基丁酸+NADPH+H+ HBDH α-羟基丁酸+NAD+ 原理 α-HBDH催化α-酮基丁酸还原为α-羟基丁酸，在此过程中，NADPH被氧化为NAD+，通过 在340nm处监测吸光度下降的速率，可计算出样本中羟丁酸脱氢酶的活力。 II、方法 方法：速率法。 方法 III、干扰因素：溶血有干扰，因为红细胞内含有a-HBDH活力大于血浆中。 IV、参考范围 参考范围：成年人：72～182U/L。 参考范围 V、临床意义 临床意义： 临床意义 α-羟丁酸脱氢酶活力表示LDH中能利用α-羟丁酸为反应底物的酶，主要为乳酸脱氢酶的 同功酶LDH1和LDH2的活力，α-HBDH主要来源于心肌、肾和红细胞。 早在20世纪60年代，α-HBDH对心肌梗塞诊断价值就已得到承认。实际上和LDH 是一样的，心梗时α-HBDH明显升高，但比LDH和AST更有特异性，且α-HBDH升高持续时 间比AST更长，达2周甚至更长。 最近的研究表明，和心脏有关的LDH同工酶活力和总LDH 活力比例的变化，可以 对近期心肌梗死的严重性和进展，有很好的指标。正常α-HBDH/LDH比值为0.67，急性 心肌梗死患者＞0.8，肝病患者＜0.6 VI、有时我们会见到这样的病历，LDH，α-HBDH轻度升高，其它三个酶正常，cTnT阳性。 我想可能是其它几个酶已经降到正常，而LDH，α-HBDH，cTnT维持时间较长，所以出现 这三项指标高而其它正常的现象。
肌酸激酶同工酶（ 肌酸激酶同工酶（CK-MB）B ）
V、临床意义 临床意义： 临床意义 CK-MB主要分布于心肌中，正常血清中大部分为CK-MM的活力，含有少量的CK-MB，不 超过总活力的5％。急性心肌梗塞胸痛发作后，血清中CK-MB上升，先于总CK活力升高， 24h达高峰值，36h内其波动曲线与总CK活力平行，至48h降至正常。一般认为，血清 CK-MB≥总活力的3％为阳性，最高值达12％-38％，若下降后的CK-MB再度升高，提示有 心肌梗塞复发。肌营养不良，CK-MB也可升高。 80年代出现的CK-MB一度被认为是AMI诊断的“金标准”，CK-MB和LDH1都曾被认为是 心肌特异的。目前的研究证明，CK-MB和LDH1并非心肌特异，因为在骨骼肌损伤修复 期，分化较差骨骼肌亦可大量表达CK-MB、LDH1。 90年代以来，肌红蛋白(myoglobin),肌钙蛋白T(cTnT),肌钙蛋白I(cTnl)相继出现，成为目前 优秀的MI Marker, 被临床广泛应用。据报道Myoglobin可在胸痛发作后1 h即可在血清中 出现，然而其组织特异性差，在骨骼肌损伤时也可大量释放入血。Myoglobin作为MI Marker的另一个缺点是诊断窗口期短，它在MI发生后4 h即回复到正常水平。cTnT和cTnI 是心肌钙蛋白的亚单位，具有高度的特异性，在MI发作的早期(3～6 h)即可在血清中出 现，而且持续时间较CK-MB长。 VI：有时出现CKMB>CK的情况，是由这种方法的检测原理造成的。在人体中正常情况下 CKBB很少，用抗体抑制M亚基，所以CKMM会失去活性，而CKMB活性失去一半。这样 测出的CK活性实际就是CKMB的一半，所以CKMB活性应该为测定的2倍。但如果CKBB存 在就会使结果偏高，即测定的CKMB活性=CKMB+2CKBB。如果CKBB>CKMM，由于结果 要乘2，也就是说2CKBB+CKMB>CKBB+CKMB+CKMM，即测定得的CKMB活性>CK活性。 所以CKMB>CK是可能的的，但CKMB>2CK是不可能的
心脏标志物检验及临床应用
主讲人：王美英
心肌的分布及其生理特性
心肌的分布及其生理特性： 心肌分布于心脏和邻近心脏 的大血管近段。心肌收缩具 有自动节律性，缓慢而持久， 不易疲劳。 心肌具有：自动节律性、传 导性、兴奋性和收缩性等生 理特性。传导性： 心肌细 胞具有传导兴奋的特性。正 常心脏的节律起搏点是窦房 结。它所产生的自动节律性 兴奋，可依次通过心脏的起 搏传导系统。而先后传到心 房肌和心室肌的工作细胞， 使心房和心室依次产生节律 性的收缩活动。
乳酸脱氢酶（ 乳酸脱氢酶（LDH） ）
I、原理 原理： 原理 L-乳酸+NAD+ LDH 丙酮酸+NADH+H+ 乳酸脱氢酶催化乳酸氧化为丙酮酸，同时NAD+还原为NADH，测试样品中LDH的活性， 可通过检测340nm波长处吸光度的上升速率而得出。 II、方法 方法：速率法。 方法 III、干扰因素： A、草酸盐或氟化物抑制LDH活性，故不能用作采血抗凝剂。 B、大气中的CO2被开瓶的试剂R1吸收，导致影响校准的稳定性。 C、红细胞内的LDH为血浆中的360倍，溶血可使LDH增加。 D、血小板的干扰，血小板溶解可使LDH活性增加，所以最好不用抗凝血。 E、下列药物导致体内LDH增加，别嘌醇、胺碘酮、雄性激素、合成代谢激素、阿斯 片林、水杨酸、卡托普利、卡马西平、氯丙嗪、顺铂、氯氮平、香豆素、达卡巴嗪、红霉 素、氟奋乃静、金盐、-甲基多巴、萘普生、对乙酰氨基酚、罂粟碱、青霉胺、派克昔林、 苯妥英、保太松、丙硫氧嘧啶、雷尼替丁、硫氮磺吡啶、替尼酸、丙戊酸、维拉帕米。 F、体育运动（肌肉活动）后，LDH会高于正常。 IV、参考范围： 男性 135～225U/L 女性 135～214U/L 儿童 120～300U/L 新生儿 225～600U/L V：临床意义：心肌损伤，心梗与其升高有密切相关，血液病患者LDH活性明显高于正 常，肿瘤患者LDH增高者占41%，急性肝炎或中毒性肝炎时，LDH活力可增高。