用于中性粒细胞胞外诱捕网检测的试剂盒及检测方法
中性粒细胞胞外诱捕网促进肿瘤局部生长
·92·中性粒细胞胞外诱捕网促进肿瘤局部生长夏 杰，倪 浩，汤 静，胡 倩( 黄冈职业技术学院 医药学院，湖北 黄冈 438002)摘 要：中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的释放是新发现的中性粒细胞天然免疫手段。
近年来发现NETs 不仅执行针对病原体的免疫作用，还参与机体的某些其他病理过程，特别是在肿瘤的生长过程中发挥着重要作用。
NETs 的成分除了染色质DNA 外，还有包括各种组蛋白和胞内颗粒释放蛋白，许多研究证实这些蛋白质与肿瘤的发生、发展有关，如中性粒细胞弹性蛋白酶、基质金属蛋白酶9、白细胞介素8、粒细胞集落刺激因子等可通过降解胰岛素受体底物-1，促进血管内皮生长因子释放，启动NETosis 等多种途径促进肿瘤的局部生长。
关键词：中性粒细胞；细胞外诱捕网；肿瘤局部生长；免疫作用 中图分类号：R73-35+4 文献标志码：A 文章编号：1672-1047（2020）02-0092-04DOI:10.3969/j.issn.1672-1047.2020.02.22收稿日期：2020-03-06基金项目：黄冈职业技术学院科研项目“中性粒细胞胞外诱捕网在癌症病理过程中的作用”（2018C2022127）。
作者简介：夏 杰，男，湖北黄冈人，硕士，主治医师，讲师。
研究方向：生物化学、免疫学。
中性粒细胞是人体防御机制的第一道防线，是机体发挥天然免疫功能的主要细胞。
中性粒细胞缺乏的患者免疫功能严重缺失，往往在年轻时死于细菌或真菌感染。
然而中性粒细胞过度活化可导致大量活性氧和促炎细胞因子等细胞毒性介质的释放，可直接或间接损伤内皮细胞，导致细胞死亡[1]。
2004年，Brinkmann V [2]等发现了一种新的中性粒细胞防御机制，当病原体入侵时，中性粒细胞释放出网状结构的物质，将病原体捕获并杀灭。
这种网状结构称为中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps ，NETs)，其化学组成主要是染色质DNA 和蛋白质。
211105470_中性粒细胞胞外诱捕网通过诱导巨噬细胞M2型极化促进非小细胞肺癌增殖和侵袭
中性粒细胞胞外诱捕网通过诱导巨噬细胞M2型极化促进非小细胞肺癌增殖和侵袭①苏莹 马丽丽 柳江 韩忠诚 （新疆维吾尔自治区人民医院肿瘤科，乌鲁木齐830000）中图分类号 R734.2 文献标志码 A 文章编号 1000-484X （2023）03-0472-06［摘要］ 目的：探究中性粒细胞胞外诱捕网（NETs ）诱导巨噬细胞极化在非小细胞肺癌（NSCLC ）增殖和侵袭中的作用及其相关机制。
方法：采集28例NSCLC 患者肿瘤组织及其癌旁组织，通过免疫组化检测PAD4和Arg -1表达水平。
采用PMA/LPS 和PMA/IL -4极化THP -1细胞为M1和M2型巨噬细胞的过程中加入NETs 共孵育，qRT -PCR 检测巨噬细胞iNOS 、IL -6、TNF -α、Arg -1、IL -10和TGF -β表达水平。
将各组M2型巨噬细胞与A549细胞共孵育，CCK8检测A549细胞增殖变化，Transwell 检测细胞侵袭能力变化，qRT -PCR 和Western blot 检测细胞VEGF 表达水平变化。
结果：与癌旁组织比较，NSCLC 患者肿瘤组织PAD4和Arg -1表达水平升高。
在向M1型巨噬细胞极化过程中，加入NETs 后巨噬细胞iNOS 、IL -6、TNF -α表达水平降低，Arg -1、 IL -10、TGF -β表达水平升高。
在向M2型巨噬细胞极化过程中，加入NETs 后巨噬细胞Arg -1、IL -10、TGF -β表达水平升高。
与Control 组比较，M2组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF 表达水平升高。
与M2组比较，M2+NETs 组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF 表达水平升高。
结论：NETs 通过诱导巨噬细胞向M2型极化，促进NSCLC 增殖和侵袭。
［关键词］ 非小细胞肺癌；中性粒细胞胞外诱捕网；巨噬细胞；M2型极化Neutrophil extracellular traps promote proliferation and invasion of NSCLC byinducing M2-type polarization of macrophagesSU Ying ， MA Lili ， LIU Jiang ， HAN Zhongcheng. Department of Oncology ， People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region ， Urumqi 830000， China［Abstract ］ Objective ：To investigate the role of neutrophil extracellular trap （NETs ） induced macrophage polarization in pro⁃liferation and invasion of non -small cell lung cancer （NSCLC ） and its related mechanisms. Methods ：Tumor tissues and adjacent tis⁃sues of 28 NSCLC patients were collected and the expression levels of PAD4 and ARG -1 were detected by immunohistochemistry. The expression levels of iNOS ， IL -6， TNF -α， ARG -1， IL -10 and TGF -β in macrophages were detected by qRT -PCR when PMA/LPS and PMA/IL -4-polarized THP -1 cells were incubated with NETs. M2 macrophages in each group were co -incubated with A549 cells. Prolife -ration of A549 cells were detected by CCK8， invasion ability of A549 cells were detected by Transwell ， and expression level of VEGFwas detected by qRT -PCR and Western blot. Results ：Compared with adjacent tissues ， the expression levels of PAD4 and ARG -1 intumor tissues of NSCLC patients were increased. During the polarization to M1-type macrophages ， the expression levels of iNOS ， IL -6 and TNF -α in macrophages were decreased after co -incubation with NETs ， while the expression levels of ARG -1， IL -10 and TGF -β were increased. During the polarization of M2-type macrophages ， the expression levels of ARG -1， IL -10 and TGF -β in macrophages increased after co -incubation with NETs. Compared with Control group ， the proliferation ， invasion and VEGF expression levels of A549 cells in M2 group were increased. Compared with M2 group ， proliferation ， invasion and VEGF expression levels of A549 cells inM2+NETs group were increased. Conclusion ：NETs promote proliferation and invasion of NSCLC by inducing macrophage polarization to M2 type.［Key words ］ Non -small cell lung cancer ；Neutrophil extracellular trap ；Macrophage ；M2 type polarization世界卫生组织国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer ，IARC ）发布的2020年全球癌症数据显示，肺癌是目前威胁全球人类生命健康的第二大癌症［1］。
中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾病肾小球内皮细胞损伤中的作用和机制研究演示课件
在糖尿病肾病肾小球内
皮细胞损伤中的作用和
机制研究
汇报人：XXX
2024-01-09
目录
Contents
• 引言 • 中性粒细胞胞外诱捕网概述 • 糖尿病肾病肾小球内皮细胞损伤机
制 • 实验研究 • 中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾
病治疗中的应用前景 • 结论
01 引言
研究背景和意义
实验结论和讨论
中性粒细胞胞外诱捕网对糖尿病肾病肾小球内皮细胞 具有保护作用，能够减轻细胞损伤程度，降低炎症因
子表达水平，改善氧化应激状态。
中性粒细胞胞外诱捕网的作用机制可能与抑制炎症反 应、减轻氧化应激损伤等有关，为糖尿病肾病的治疗
提供了新的思路和方法。
进一步研究中性粒细胞胞外诱捕网在糖尿病肾病中的 具体作用机制和临床应用价值具有重要意义。
NETs通过激活GEnC表面的TLR4受体，触发NF-κB信号通路，导致炎症 因子（如TNF-α、IL-1β）和趋化因子（如MCP-1）的表达增加，进一步
招募和激活炎症细胞，形成正反馈循环，加重GEnC损伤。
此外，NETs还能够诱导GEnC发生氧化应激反应，导致细胞内ROS水平 升高，抗氧化酶（如SOD、CAT）活性降低，从而造成GEnC的氧化损伤 。
01
糖尿病肾病
糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）的一种严重并发症，以肾小球内
皮细胞（GEC）损伤为主要特征，导致肾功能逐渐丧失。
02
中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）
NETs是中性粒细胞在活化或凋亡时释放的一种网状结构，具有捕获和
杀死微生物的功能，同时也参与无菌性炎症的调节。
03
NETs与糖尿病肾病
近年来研究发现，NETs在DN的发生和发展中起重要作用，通过影响
Sartorius赛多利斯用于细胞分析的试剂和耗材
Sartorius赛多利斯用于细胞分析的试剂和耗材优化的试剂盒，以用于免疫肿瘤学分析、基于免疫的药物发现、细胞系开发及抗体发现。
赛多利斯拥有各种各样的经过验证的特定应用试剂和耗材，旨在最大限度地提高免疫肿瘤学分析、基于免疫的药物发现、细胞系开发和抗体发现的效率。
活细胞分析系统搭配 IncuCyte试剂、细胞系和耗材使用，作为一套整体解决方案，应用广泛。
通过使用赛多利斯的检测试剂盒、活细胞标记试剂、预标记细胞系、专用微孔板、专用图像采集和分析软件，您能够实现实时定量的活细胞分析。
经验证的 MultiCyt 试剂盒专为 Intellicyt iQue Screener PLUS 设计，具有灵活的通量规格和免洗配方，不仅能够节省时间，提高可重复性，还能满足微量化测定需求。
IncuCyte试剂和耗材IntelliCyt 试剂和耗材细胞分析仪器●IncuCyte 活细胞分析系统能够直接在培养箱内对数天、数周及数月的细胞健康、运动、形态和功能进行实时成像和分析。
●全新的! Intellicyt iQue3流式细胞仪一款更快速、更智能的流式细胞仪，支持多路复用细胞表型，可帮助您在极短的时间内从样本中获取可执行的结果。
活细胞分析加速药物发现和开发活细胞分析系统搭配试剂、细胞系和耗材使用，作为一套整体解决方案，应用广泛。
通过使用赛多利斯的检测试剂盒、活细胞标记试剂、预标记细胞系、专用微孔板、专用图像采集和分析软件，无需从标准培养箱中取出，您便能够对一定时间内的各种细胞变化进行实时定量活细胞分析。
●细胞健康（细胞凋亡、细胞毒性、细胞增殖）●细胞球●免疫细胞杀伤●细胞迁移/侵袭●趋化作用●抗体内化●免疫细胞化学●吞噬作用●神经突动力学●血管新生●中性粒细胞胞外诱捕网致死（NETosis）通过使用赛多利斯的检测试剂盒、活细胞标记试剂、预标记细胞系、专用微孔板、专用图像采集和分析软件，无需从标准培养箱中取出，您便能够对一定时间内的各种细胞变化进行定量活细胞分析。
中性粒细胞胞外诱捕网研究最新进展
Ｃｈｉｎ Ｊ Ｌａｂ Ｄｉａｇｎ，Ｊａｎｕａｒｙ，２０１８，Ｖｏｌ ２２，Ｎｏ．１
中性 粒 细胞 胞 外 诱 捕 网研 究 最 新 进 展
崔 蕊 ，方 玲 ，谢 风 （吉 林 大 学 中 日联 谊 医 院 检 验科 ，吉 林 长 春 １３００３３）
当机 体受 到 病 原微 生 物 侵 害时 ，因为 巨噬细 胞 等 分泌 的炎性 因子 ，导 致 中性 粒 细 胞 大 量 聚集 在 感 染 部位 ，分 泌 形 成 ＮＥＴｓ结 构 中 富 含 的组 蛋 白、蛋 白肽 和抗菌 肽等 ，其 杀 伤 力强 于 中性 粒 细胞 吞 噬 引 起 的 杀 菌效 率 ，ＮＥＴｓ可 以对 多 种 病 原 微 生物 都 有 杀 灭 和清除 的作 用 ，但 是 人体 血 液 中存 在 可 以降 解 ＮＥＴｓ的脱 氧 核 糖 核 酸 酶 １（Ｄｎａｓｅ１），当 此 酶 缺 乏 时 ，大量 ＮＥＴ ｓ 会 聚集 ，ＮＥＴｓ中 的 多种 蛋 白酶 和抗 菌肽 可以导致 内皮 及上皮细胞 的损伤 ，而组蛋 白是造
＊通 讯 作 者
究证 明ｌ１ ］，巨噬细胞 、肥大 细胞 、嗜酸 性粒 细胞也可 产生 网状结构 ，在体 内发挥一定 的免疫作用 。 ２ ＮＥＴｓ的 免 疫 原 性
宿主 来源 或 者 某些 外 源 的 物质 如 细 菌 、真菌 等 均 可 以刺 激 中性 粒 细胞 产 生 ＮＥＴｓｌ】 ，比如 ：１２一豆 蔻 酸 一ｌ３一乙 酸 佛 波 醇 可 以 在 短 时 间 内 诱 导 产 生 ＮＥＴｓ，因此 ，它是体 外 实 验 常用 到 的 ＮＥＴｓ体 外 引 物 。血 清淀粉 样 蛋 白 Ａ 也 可 以诱 导 ＮＥＴｓ形 成［１ ， 一 些 炎 性介 质 也 可 以诱 导 ＮＥＴｓ的生 成 ［１ 。在 引 物诱 导 下 ，蛋 白激 酶 Ｃ在 活 化 后 可 以通 过 丝 氨 酸 ／ 苏 氨酸 蛋 白激 酶 ／丝 裂 素 活化 蛋 白激酶 激 酶 ／细胞 外 的信 号调节 激 酶信号 通路 磷酸 化烟 酰胺 腺 嘌呤二 核苷 酸磷 酸 氧化 酶 ，生 成 ＮＥＴｓ形成 所需 ＲＯＳ。烟 酰胺 腺 嘌呤二 核 苷酸磷 酸 氧化酶 等经 一 系列酶 促反 应 生 成 超 氧 化 氧 离 子 、过 氧 化 氢 （Ｈ２０２）、次 氯 酸 （ ＨＯＣ１）等 。ＨｏＣｌ是 刺 激 ＮＥＴｓ释 放 的关 键 ＲＯＳ 成 分口 。ＲＯＳ 和 自 噬 影 响 下 的 染 色 体 解 聚 是 ＮＥＴｓ形成 的 特 征 之 一 。ＮＥ、精 氨 酸 脱 亚 胺 酶 ４（ ｐｅｐｔ试ｙｌａｒｇｉｎｉｎｅ ｄｅｉｍｉｎａｓｅ ｔｙｐｅ ４ ＰＡＤ４）和髓 过氧 化物 酶 （ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ ）共 同参 与 这一 过 程 ，尤其 ＰＡＩＮ 可催化 ３／４的精 氨酸残 基瓜 氨酸化 ， 从而 减弱静 电吸引 ，造 成组 蛋 白结合 ＤＮＡ 的能 力下 降＿】 。而 ＮＥＴ的抗菌 策 略 主要 可 以分 为 ①将 表 面 带有 正 电荷 的病 原体 捕 获 ，限制其 扩散 ［１引。②ＮＥＴｓ 内含 有抗 菌 酶 及 组 蛋 白可 以杀 伤 病原 体 。③ＮＥＴｓ 内部 含有的 ＮＥ可分 解沙 门菌等 细菌的毒力 因子 。 ３ ＮＥＴｓ与临床 疾病 ３．１ ＮＥＴｓ与 感 染
中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应
中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应赵宁;李勇;邵强;杨云;陈家泉;彭巍;胡世林;钱克俭;刘芬【摘要】Objective To observe the amplification effect of neutrophil extracellular traps (NETs) on inflammatory response ofalveolar macrophages induced by lipopolysaccharide (LPS). Methods Neutrophils were isolated and extracted from peripheral bloodof C57 BL/6 mice by using a mouse peripheral blood neutrophil separation kit. NETs were induced by PMA (100 nmol/L). Observa-tion of NETs by fluorescence microscopy and scanning electron microscopy. NR8383 rat alveolar macrophages were cultured invitro and divided into ⑴controlgroup:adding equal volume PBS;⑵NETs group:adding prepared (1.7×106 cell/ml) NETs;⑶LPSgroup: adding 1 mg/L LPS; ⑷LPS+NETs group:LPS combined with NETs co-stimulation. All groups were stimulated for 12 hours.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the contents of interleukin-1β (IL-1β) and tumor necrosis fac-tor-α (TNF-α) in the supernatant of cells. Results Fluorescence microscopy showed that the nucleus of neutrophils in the controlgroup was complete, and there was no extracellular co-localized reticular structure between DNA and NETs. DNA reticular struc-ture could be seen in PMA stimulation group and co-localized with NETs. Scanning electron microscopy also showed that thechromatin of neutrophils was released into extracellular structure, suggesting that the formation of NETs was successfully inducedby PMA.LPS and NETs were used to stimulate alveolar macrophages for 12 hours respectively, the contents of IL-1β and TNF-αin supernatant of alveolar macrophages were significantly higher than those in control group.The contents of IL-1β in supernatantof LPS+NETs group were significantly higher than those of LPS group (P＜0.05). There was no significant difference in TNF-α insupernatant between LPS +NETs group and LPS group (P＞0.05). Conclusion NETs can amplify LPS-induced inflammation inalveolar macrophages. NETs increased LPS-induced alveolar macrophage inflammatory factor release, suggesting that NETs canamplify LPS-induced alveolar macrophage inflammatory response.%目的观察中性粒细胞胞外诱捕网 (NETs) 对脂多糖 (LPS) 诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用.方法采用小鼠外周血中性粒细胞分离试剂盒分离提取C57BL/6小鼠外周血中性粒细胞.采用佛波酯 (PMA) (100nmol/L) 诱导中性粒细胞形成NETs, 采用荧光显微镜及扫描电子显微镜观察NETs.体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383, 分为⑴对照组:加入等体积PBS;⑵NETs组:加入制备好的 (1.7×106个/ml) NETs;⑶LPS组:加入1mg/L LPS;⑷LPS+NETs组:LPS联合NETs共刺激, 各组均刺激12h.采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测细胞上清液中白细胞介素-1β (IL-1β) 、肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 含量.结果荧光显微镜下观察示对照组中性粒细胞核形态完整, 无DNA与NETs的胞外共定位网状结构, PMA刺激组可见DNA网状结构, 且与NETs共定位;扫描电子显微镜下也观察到中性粒细胞染色质呈网状结构释放至胞外, 提示PMA诱导NETs形成成功.采用LPS、NETs分别刺激肺泡巨噬细胞12h, 细胞上清液中的IL-1β、TNF-α含量均较对照组显著升高, LPS+NETs组上清液中的IL-1β含量较LPS 组显著升高 (P＜0.05), 上清液中的TNF-α较LPS组相比差异无统计学意义 (P＞0.05).结论 NETs增加LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症因子释放, 提示NETs可以放大LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2019(054)001【总页数】4页(P23-26)【关键词】中性粒细胞胞外诱捕网;肺泡巨噬细胞;炎症反应白细胞介素-1β;肿瘤坏死因子-α【作者】赵宁;李勇;邵强;杨云;陈家泉;彭巍;胡世林;钱克俭;刘芬【作者单位】南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院肿瘤科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006【正文语种】中文【中图分类】R-332中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是中性粒细胞受到炎症刺激后，细胞核内组分如解聚的DNA、组蛋白和颗粒蛋白等释放至细胞外形成的一种网状纤维结构[1]。
中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)与结直肠癌的研究进展
中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)与结直肠癌的研究进展发布时间：2023-03-10T01:11:26.371Z 来源：《中国医学人文》2022年5月5期作者：李扬何其勇程卓鑫李加成洪治国[导读] 中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞形成的一种网状结构，其中含有DNA和蛋白质。
NETs既在先天免疫反应中发挥着作用，还参与了自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮，以及其他非感染性病理过程，如血管炎、血栓形成、糖尿病、动脉粥样硬化、凝血障碍和癌症。
同时相关研究发现NETs参与了结直肠癌的进展和转移。
本文将主要关注NETs对结直肠癌的影响进行综述，为寻找治疗结直肠癌的潜在靶点提供参考。
李扬，何其勇[通讯作者]，程卓鑫，李加成，洪治国佳木斯大学附属第一医院佳木斯市（154002）【摘要】中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞形成的一种网状结构，其中含有DNA和蛋白质。
NETs既在先天免疫反应中发挥着作用，还参与了自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮，以及其他非感染性病理过程，如血管炎、血栓形成、糖尿病、动脉粥样硬化、凝血障碍和癌症。
同时相关研究发现NETs参与了结直肠癌的进展和转移。
本文将主要关注NETs对结直肠癌的影响进行综述，为寻找治疗结直肠癌的潜在靶点提供参考。
【关键词】中性粒细胞外诱捕网；结直肠癌；结直肠癌（CRC）在消化系统中是最常见的恶性肿瘤，在恶性肿瘤的病死率中已达第三位，是我国的发病率第一的恶性肿瘤。
中性粒细胞外诱捕网(NETs)是一种复杂的网状结构，能够捕获真菌、细菌、原生动物和病毒等。
一些研究调查了NETs在肿瘤中的作用，报告显示它们参与了癌症的免疫编辑、进展、转移扩散和癌症相关血栓形成。
NETs可以发挥抗肿瘤或促肿瘤活性。
NETs的一些成分如髓过氧化物酶(MPO)、蛋白酶和组蛋白可以杀死肿瘤并抑制肿瘤的生长和转移。
然而NETs蛋白酶还可以降解细胞外基质，促进癌细胞外渗和转移[1]。
中性粒细胞实训报告
一、实训背景中性粒细胞是白细胞的一种，主要作用是吞噬细胞和细菌，是人体免疫系统的重要组成部分。
近年来，中性粒细胞在癌症转移中的作用逐渐受到关注。
为了深入了解中性粒细胞在免疫系统中的作用及其与癌症转移的关系，我们进行了中性粒细胞实训。
二、实训目的1. 熟悉中性粒细胞的生物学特性及其在免疫系统中的作用；2. 掌握中性粒细胞的分离、培养和检测方法；3. 研究中性粒细胞在癌症转移中的作用及其相关机制。
三、实训内容1. 中性粒细胞的分离与培养（1）实验材料：中性粒细胞分离液、抗凝剂、淋巴细胞分离液、PBS缓冲液、胎牛血清、中性粒细胞培养液等。
（2）实验步骤：① 收集血液样本，加入抗凝剂；② 将血液样本与淋巴细胞分离液混合，离心分离得到单个核细胞；③ 将单个核细胞与中性粒细胞分离液混合，离心分离得到中性粒细胞；④ 收集中性粒细胞，用PBS缓冲液洗涤2次，加入胎牛血清和培养液，置于培养箱中培养。
2. 中性粒细胞的检测（1）中性粒细胞计数：采用血液分析仪检测中性粒细胞计数。
（2）中性粒细胞吞噬功能检测：将中性粒细胞与细菌混合，观察吞噬细胞数量和吞噬能力。
（3）中性粒细胞胞外诱捕网（NET）检测：采用ELISA方法检测NET蛋白水平。
3. 中性粒细胞与癌症转移的研究（1）建立小鼠肿瘤模型，观察中性粒细胞在肿瘤转移中的作用；（2）分析中性粒细胞与肿瘤细胞相互作用的相关分子；（3）研究中性粒细胞在癌症转移中的信号通路。
四、实训结果与分析1. 中性粒细胞分离与培养：成功分离和培养中性粒细胞，中性粒细胞计数为（2.5±0.5）×10^9/L。
2. 中性粒细胞检测：中性粒细胞吞噬功能良好，吞噬细胞数量和吞噬能力均高于正常值；NET蛋白水平为（50.2±2.1）ng/mL。
3. 中性粒细胞与癌症转移的研究：在肿瘤转移模型中，中性粒细胞数量与肿瘤转移程度呈正相关；中性粒细胞与肿瘤细胞相互作用后，相关分子表达水平发生变化；中性粒细胞在癌症转移中的信号通路涉及PI3K/Akt和NF-κB等。
中性粒细胞胞外诱捕网检测方法综述
ｇｒａｄｕａｌｌｙｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ．Ｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ，ｗｅｒｅｖｉｅｗ ｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆＥｚｒｉｎａｎｄｉｔｓｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ， ａｎｄｅｘｐｌａｉｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆＥｚｒｉｎｍｅｄｉａｔｅｄｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ． ＩｔｉｓｐｒｏｐｏｓｅｄｔｈａｔｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｔａｒｇｅｔｉｎｇＥｚｒｉｎｆｏｒｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔａｒｅａｐｒｏｍｉｓｉｎｇｗａｙｔｏａｃｈｉｅｖｅｇｒｅａｔｓｕｃｃｅｓｓｉｎｃｌｉｎｉｃ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｅｚｒｉｎ；ｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ；ｃｅｌｌｐｏｌａｒｉｔｙ；ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ；ｃｅｌｌｍｏｔｉｌｉｔｙ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓ
Ｔａｂ１ Ｐｒｏｆｉｌｅｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｔｒａｐｓ（ＮＥＴｓ）
ＮＥＴｓ组分
检测方法
优点
缺点
循环游离 ＤＮＡ 荧光染色法 （ｃｆＤＮＡ）
适用范围广
杂质标记物筛选 困难
免疫组化和激光 三维成像，清晰易筛 操作步骤繁琐精细 共聚焦显微镜法 选
管理局第四批全国 中 医 （临 床、基 础 ）优 秀 人 才 研 修 项 目 【国中医药人教发（２０１７）２４号】；江西省卫生和计划生育 委员会中医药科研基金项目（Ｎｏ２０１６Ａ０７７，２０１７Ｚ０１０） 作者简介：王玉婷（１９９４ －），女，硕士生，研究方向：免疫药理学； 李华南（１９７４－ ），女，博士，副教授，主任中医师，研究方 向：痛 风 的 现 代 中 医 药 诊 治，通 讯 作 者，Ｅｍａｉｌ：ｂｇｕｅｍｏｒｙ ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
2024中性粒细胞外捕获网(NETs)最简单的解释
2024中性粒细胞外捕获网（NETS）最简单的解释中性粒细胞外捕获网（NETs）是由中性粒细胞（一种白细胞）释放的一种特殊的结构，其主要作用是捕获和杀死细菌、真菌和病毒等微生物。
这个过程被称为“细胞外捕获网化“（NETosis）o下面是中性粒细胞外捕获网的主要特征和过程:结构特征：中性粒细胞外捕获网是一种由DNA纤维组成的结构，其中包含有嗜碱性蛋白、酶和细胞核蛋白等。
这些DNA纤维可以形成一种网状结构，类似于陷阱，可以捕获细菌等微生物。
过程：NETs的形成通常通过一种特殊的细胞死亡过程，即NETosis o在NEToSiS过程中，中性粒细胞释放其细胞核的DNA,并与细胞内的蛋白质结合，形成一个网状结构。
这个过程与传统的凋亡（程序性细胞死亡）和坏死（m港序性细胞死亡）不同，是一种独特的细胞死亡方式。
抗微生物作用：中性粒细胞外捕获网的主要功能是在感染发生时，通过捕获和杀死微生物来增强免疫防御。
NETs能够陷阱和消灭细菌、真菌和病毒，防止它们进一步传播。
以下是细胞外捕获网化的步骤：1.激活中性粒细胞：NETosis通常是在中性粒细胞被激活的情况下发生的。
激活可以由细菌、病毒、真菌、炎症因子等引起。
2.核膜解体：在NETOSiS过程中，中性粒细胞经历一种形式的核膜解体，使细胞核的DNA得以暴露。
3.DNA释放：经过核膜解体后，细胞核的DNA被释放到胞质中。
4.DNA结合蛋白：释放的DNA与细胞内的蛋白质结合,形成一个网状结构，其中包括嗜碱性蛋白、酶和细胞核蛋白等。
5.网状结构形成：形成的网状结构被释放到细胞外，形成细胞外捕获网。
6.微生物捕获和杀伤：细胞外捕获网通过陷阱和捕获微生物，然后通过网中的酶和其他杀菌蛋白,对微生物进行杀伤。
细胞外捕获网化是一种重要的免疫反应，有助于防御机体免受微生物的侵害。
然而，过度或不适当的NETosis可能与一些疾病的发生和发展有关,包括自身免疫性疾病、感染、炎症性疾病等。
中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对于抗磷脂综合征妊娠并发症的致病机制研究
中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）对于抗磷脂综合征妊娠并发症的致病机制研究中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）对于抗磷脂综合征妊娠并发症的致病机制研究摘要：抗磷脂综合征（APS）是一种自身免疫性疾病，常见的表现为经常性的血栓形成和/或反复流产。
虽然病因尚未完全阐明，但已经证明中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）向APS患者的病情发展起到了重要的作用。
本文旨在探索NETs如何导致APS患者出现妊娠并发症，以及NETs调控APS发展的分子机制。
关键词：中性粒细胞胞外诱捕网、抗磷脂综合征、妊娠并发症、病因引言：抗磷脂综合征（APS）是一种病因不清的自身免疫性疾病，常常伴随血栓形成和重复失败的孕产妇科病史。
APS患者的自身免疫反应导致产生抗磷脂抗体（APA），并且这些APA对于凝血酶生成具有高度亲和力，进而导致持续的微观循环障碍、大的动脉和静脉栓塞。
与此同时，APS患者也会出现一系列如发热、关节痛等症状。
尽管APS的病因尚未完全阐明，但自从2004年发现中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）后，研究表明NETs与APS的发病机制密切相关。
一、NETs和APS发病的关系s的定义和特点NETs是一种由中性粒细胞（neutrophil）排泄生成的感染性细胞死亡形式，具有避免病原体扩散、损伤感染部位外围细胞、促进过度的炎症反应等方面的生物学功能。
NETs通常由包含DNA、羟基磷灰石、组织蛋白酶、粘附性分子如聚糖结合蛋白等的核橘经过爆裂而产生。
NETs已经被证明能够抵御某些感染的基本防御方式之一，但也与多种自身免疫性疾病相关联。
s与自身免疫性疾病的关联许多先前研究发现，NETs与风湿性关节炎，系统性红斑狼疮和糖尿病等自身免疫性疾病相关联。
在APS中，NETs与病情恶化有关，因为它能够加剧感染性炎症和血栓形成。
研究已经表明，APS患者的NETs具有更高的DNA量、更高的组织蛋白酶活性和更高的DNA/RNA比值，因此贡献了更多的炎症介质（如乙酸、肿瘤坏死因子、白三烯B4、白介素-8等）释放。
中性粒细胞外诱捕网检测方法的研究进展
中性粒细胞外诱捕网检测方法的研究进展①马雪妮程龙许慧梅杨一蕃张德奎（兰州大学第二医院消化内科，兰州730030）中图分类号R392-3文献标志码A文章编号1000-484X（2021）24-3056-06［摘要］中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是中性粒细胞受到刺激后产生的以DNA为骨架，其间镶嵌多种颗粒蛋白、蛋白水解酶、抗菌肽、组蛋白等的网状结构。
研究表明，NETs在宿主稳态中发挥双重作用，既能保护宿主免受病原体的侵袭，也参与多种自身免疫/炎症性疾病、代谢性疾病、血栓、肿瘤等的病理生理过程。
因其组成部分的复杂性、释放类型的差异性及释放过程中的易降解性，准确检测NETs存在一定的困难。
本文就目前NETs在体内、体外及原位检测方法的研究进展进行综述。
［关键词］中性粒细胞外诱捕网；检测方法；进展Advances in detection of neutrophil extracellular trapsMA Xue-Ni，CHENG Long，XU Hui-Mei，YANG Yi-Fan，ZHANG De-Kui.Department of Gastroenterology，the Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou730030，China［Abstract］Neutrophil extracellular traps（NETs）is a kind of DNA-based skeleton released by neutrophils to the outside of cell，in which a variety of granular proteins，proteolytic enzymes，antibacterial peptides，histones and other network structures are em⁃bedded.Studies have shown that NETs play a dual role in host homeostasis，not only protecting the host from pathogens，but also par⁃ticipating in various autoimmune/inflammatory diseases，metabolic diseases，thrombosis，tumors and other pathophysiological pro⁃cesses.Due to the complexity of its composition，the difference of the types，and the uncertainty of the release process，there are cer⁃tain difficulties to detect NETs accurately.This article focuses on the current methods to detect NETs in vivo，in vitro，and in situ.［Key words］Neutrophil extracellular traps；Detection；Progress中性粒细胞是人外周血中最丰富的白细胞，约占白细胞总数的50%~70%，在先天免疫系统中扮演重要角色，是机体应对病原体入侵时的第一道防线，可通过吞噬作用、脱颗粒、产生活性氧等多种途径抵御外界病原体的入侵［1］。
中性粒细胞细胞外诱捕网的研究进展
细 胞细 胞外 诱 捕 网 （ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｒａｐｓ，ＮＥＴｓ）。该 机 制 主 要 通 过 活 性 氧 和 肽 酰 基 精 氨 酸 脱 亚 氨 酶 ４等
影 响 因 子刺 激 中 性 粒 细 胞 形 成 以 ＤＮＡ 为 骨 架 的 网状 结 构 ，内含 有 多 种 蛋 白 酶 ，能 非 特 异 性 捕 获 杀 伤 病 原 体 ，还 能
中 图 分 类 号 ：Ｒ３９２．１
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７１—７２３６（２０１８）０１ ０２０６ ０６
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｒａｐｓ
ＺＨＡＮＧ Ｋａｉ ，ＣＨＥＮ Ｈｏｎｇｙｕ ，ＬＩ Ｊｉａｏ。，ＢＡＯ Ｌｉ。，ＤＵＡＮ Ｐｉｎｇ ，ＪＩＡＮＧ Ｎｉｎｇ （１．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｉｓ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ
Ｚｏｏｎｏｓｉｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍ ｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０８６６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １００４４，Ｃｈｉｎａ）
中至 关 重 要 ，是 构 成 机 体 内抵 御 微 生 物 入 侵 的第 一 道 防 线 。 近 年 来 ，人 们 发 现 中 性 粒 细 胞 除 了经 典 的通 过 胞 吞 作
用 吞 噬病 原 微 生 物 、释 放 嗜天 青 颗 粒 及 产 生 并 分 泌 抑 菌 杀 菌 物 质 外 ，还 具 有 抵 抗 微 生 物 入 侵 的新 机 制 — — 中性 粒
中性粒细胞抗体的检测方法
中性粒细胞抗体的检测方法
中性粒细胞抗体的检测方法
可采集玻片凝集试验和试管凝集试验来检测凝聚的中性粒细胞，不像红细胞凝集试验，粒细胞凝集程序不需加抗球蛋白试剂，仅依赖中性粒细胞自身能量凝聚。
采用新生儿自身免疫性中性粒细胞减少症母亲血清进行凝聚试验，能分析中性粒细胞特异的靶抗原，包括NAl ／NA2，NBl／NB2，NCL，NDl，NEt，9a。
几种检测抗体的方法可用于检测抗完整中性粒细胞膜表面抗原的抗体。
125L葡萄球菌蛋白和125L抗人IgG能同时检测中性粒细胞表面的IgG。
用荧光素标记的抗人免疫球蛋白，以间接免疫荧光法也可检测中性粒细胞抗体。
临床可疑自身免疫性中性粒细胞减少患者的血清中，抗中性粒细胞抗体的阳性率约为35％。
阳性患者需做追加试验，用高速离心法去除免疫复合物，并且用Fc受体相应的单克隆抗体封闭免疫复合物，再检测抗中性粒细胞抗体。
抗中性粒细胞抗体也能与正常骨髓髓样前体细胞反应，严重的中性粒细胞减少症患者血清易与不成熟的髓样前体细胞反应，同时对成熟粒细胞也反应。
鉴定特异抗中性粒细胞靶分子技术包括：蛋白质印迹法、免疫沉淀法和抗原捕获法，抗原捕获法用单克隆抗体在聚丙乙烯珠或多孔反应板内固定中性粒细胞膜分子，这些固定的分子经血清孵育，抗免疫球蛋试剂检测特异抗体。
nets染色方法
nets染色方法
NETs染色方法是一种用于检测和观察中性粒细胞胞外陷阱（NETs）的技术。
NETs是由中性粒细胞释放的DNA网状结构，它们在感染和自身免疫性疾病中发挥重要作用。
NETs染色方法通常包括以下步骤：
1. **样本收集**：收集待检测的血液或组织样本。
2. **细胞分离**：从样本中分离中性粒细胞。
这可以通过密度梯度离心法、贴壁筛选法或磁珠分离法等方法实现。
3. **诱导NETs形成**：在分离的中性粒细胞中加入诱导剂（如佛波酯、钙离子载体或细菌产物），以刺激NETs的形成。
4. **染色**：使用特定的染色剂对NETs进行染色。
常用的染色剂包括荧光染料（如EthD-III、SYTOX Green、YOYO-1等），这些染料可以与DNA结合并发出荧光信号，从而可视化NETs的结构。
5. **观察和分析**：使用荧光显微镜或其他相关技术观察染色后的NETs。
分析NETs的数量、形态和分布情况，以及与周围细胞的相互作用。
6. **数据解读**：根据观察和分析的结果，解读NETs在疾病中的作用和意义。
需要注意的是，NETs染色方法的具体步骤和所用试剂可能因实验条件和目的而有所不同。
因此，在进行实验前，建议查阅相关的文献和资料，以了解详细的实验方案和技术要求。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
用于中性粒细胞胞外诱捕网检测的试剂盒及检测方法
中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs）
是一种重要的免疫反应机制，其通过释放DNA纤维形成的结构来捕捉和杀
灭病原体。
NETs在感染、炎症、肿瘤和自身免疫性疾病等疾病中发挥着
重要的作用。
因此，快速、准确检测NETs的能力对于疾病的早期诊断、
病情判断和治疗策略的制定至关重要。
为了满足这些需求，研究人员开发了用于中性粒细胞胞外诱捕网检测
的试剂盒和检测方法。
这些试剂盒主要包括特异性抗体、染料和相关的检
测试剂。
以下是一个使用试剂盒进行中性粒细胞胞外诱捕网检测的基本步骤：
1.血液或其他样本的采集：从受试者的静脉中采集血液样本，或者从
其他体液（例如尿液、唾液等）中采集样本。
2.缓冲液的制备：根据试剂盒的说明书，制备相应的缓冲液，用于稀
释和处理样本。
3.样本的准备：将采集到的样本转移到离心管中，离心以除去固体颗粒。
然后，将上清液转移到新的离心管中。
4.细胞抗原的处理：将特定浓度的抗体加入到上一步骤中的离心管中，与样品中的细胞抗原发生特异性结合。
5.染料处理：将染料加入到上一步骤中的离心管中，用于检测或标记
特定的细胞成分或结构。
6.洗涤：通过离心和上清液的去除，将非特异性的结合物洗涤干净，
以减少背景干扰。
7.信号检测：使用特定的检测试剂盒，对样品中的特定标记进行信号检测。
这可以通过光学显微镜观察、流式细胞仪读数或其他信号检测方法来完成。
8.数据分析：对得到的信号进行定量或定性分析，以获得有关样品中中性粒细胞胞外诱捕网的信息。
这是一个基本的流程，实际使用的试剂盒和方法可能会因不同的实验目的和要求而有所不同。
此外，还可以根据具体疾病的特点和临床需求进行优化和调整。
总的来说，中性粒细胞胞外诱捕网检测的试剂盒和方法在临床研究和诊断中起到了重要的作用，有助于提高疾病的早期诊断和治疗水平。