酶联免疫标记技术

酶联免疫标记技术

酶联免疫标记技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用于检测生物样本中特定蛋白质、抗体、荷尔蒙、抗原等的定量和定性方法。该技术利用酶与抗原-抗体复合物相互作用的原理，通过酶的催化作用将底物转化为可检测的产物，从而实现对目标分子的检测和测量。

ELISA技术通常分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA等不同类型，但它们的基本原理相似。以下是酶联免疫标记技术的基本步骤：

1．包被阶段（Coating）：将要检测的抗原或抗体吸附在固体表面上，如微孔板的底部或壁上。

2．阻断阶段（Blocking）：用非特异性蛋白质（如牛血清蛋白、鱼胶等）阻断未被包被的表面，以减少非特异性结合。

3．结合阶段（Binding）：将待测样本加入到包被的微孔板中，目标分子与包被的抗体或抗原发生特异性结合。

4．洗涤阶段（Washing）：使用缓冲液洗去未结合的样本成分，以减少背景干扰。

5．检测阶段（Detection）：加入与目标分子特异性结合的检测抗体，形成抗原-抗体复合物。

6．洗涤阶段（Washing）：再次使用缓冲液洗去未结合的检测抗体。

7．酶标记阶段（Enzyme Labeling）：加入与检测抗体特异性结合

的酶，如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）等。

8．底物加入阶段（Substrate Addition）：加入底物，酶催化底物产生可检测的产物。

9．测量阶段（Measurement）：使用光度计或荧光测量仪器测量产物的光学密度或荧光强度，从而定量目标分子的浓度。

ELISA技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便、成本较低等优点，因此在医学诊断、生物医学研究、药物开发等领域被广泛应用。