MPN法测定食品中大肠杆菌群数

合集下载

大肠杆菌的检测MPN计数法

大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。

MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。

一、MPN计数法简介MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。

它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。

二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处理，以避免污染和交叉感染。

2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。

每个稀释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。

3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN计数。

这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。

4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基是为了促进大肠杆菌的生长。

每个试管中接种的样品量为10ml。

5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。

根据统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。

6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆菌的最可能数。

三、MPN计数法的优势和局限性优势：1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于大肠杆菌，还适用于其他微生物。

2.该方法不需要昂贵的仪器设备，操作相对简单，可用于基层实验室。

3.MPN计数法可以提供微生物数量的范围，而非单一数值，对于初步估计和趋势分析具有一定的参考价值。

局限性：1.MPN计数法的主观性较强，结果会受到操作人员的影响。

因此，需要操作者接受专业培训并遵循严格的操作规程。

2.MPN计数法的准确性相对较低，尤其是在微生物数量较少的情况下，可能存在较大的误差。

肉制品中大肠菌群的检验—第一法大肠菌群MPN计数法(19页)

大肠菌群MPN计数法
一、样品的采集和处理
2. 采样用品采样箱、灭菌采样杯、灭菌塑料袋、有盖搪瓷盘、灭菌刀、
剪子、镊子、灭菌带塞广口瓶、灭菌棉签、温度计、编号牌（或蜡笔和纸）
大肠菌群MPN计数法
一、样品的采集和处理
3. 样品的采取和送检 1. 生肉及脏器的检样
如是屠宰场宰后的畜肉，可于开腔后，用无菌刀采取两腿内侧肌肉各 250g(或劈半后采取两侧背部最长肌肉各250g)，如是冷藏或销售的生肉，可用无菌刀取腿肉或其他部位的肌肉250g/只（头），检样采取后放入无菌容器内，立即送检；如果条件不许可时，最好不超过3h。送检时应冷藏，不得加入任何防腐剂。检样送往化验室应立即检验或放置冰箱暂存。
大肠菌群MPN计数法
三、培养基和试剂
月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤、煌绿乳糖胆盐（BGLB ）肉汤、无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液、1mol/L氢氧化钠（NaOH ) 、 1mol/L 盐酸（HCI ) 。
四、大肠菌群MPN计数检样程序
LST不产气（－）小导管里无气泡
LST产气（+）
大肠菌群MPN计数法
一、样品的采集和处理
例如:n=5,c=2,m=100CFU/g,M=1000CFU/g。含义是从一批产品中采集5个样品,
若5个样品的检验结果均小于或等于m 值(≤100CFU/g),则这种情况是允许的; 若≤2个样品的结果(X)位于m 值和M 值之间(100CFU/g<X≤1000CFU/g)，则这种情况也是允许的; 若有3个及以上样品的检验结果位于m 值和M 值之间,则这种情况是不允许的；若有任一样品的检验结果大于M 值(>1000CFU/g)，则这种情况也是不允许的。

大肠菌群检测MPN法与平板计数法比较

大肠菌群检测MPN法与平板计数法比较！GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中规定了大肠菌群计数的MPN法与平板计数法，那这两种方法怎么选择以及有什么区别呢？今天小编就跟大家安利一下~二者范围不同：GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》范围中规定：“本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数；第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。

”这里所说的含量高低通常以100CFU为准，即含量低于100CFU采用MPN 法，含量高于100CFU采用CFU法。

概念不同：•MPN（most probable number）法：即最近似数法，也称为最可能数法，是食品检验中常用的方法。

1915年，McCrady首次发表了用MPN法 (最大可能数法) 来估算细菌浓度的方法，这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。

•平板计数法 (colony forming units）：CFU 即菌落形成单位，样品经过处理培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数，从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落，以CFU/ml或CFU/g报告之。

•滤膜法（membrane filter method）：将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的菌落，依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的菌落总数。

•菌落：是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。

原理不同：•MPN法：利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。

因为细菌在样本内的分布是随机的，所以检测细菌时，可应用概率理论计算菌数，实验结果以MPN值表示，但MPN值并不能表示实际菌落数，实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点，MPN值是落在这个置信区间内概率最大的一点。

大肠菌群计数检验重点

杜第一法：确证大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。
第二法：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。
A
一般样品25ML（克）+225ML生理盐水=1：10，从10-1取样1ML，接种到3管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）中。
B
从10-1取样1ML+9 ML生理盐水=1：100，从10-2取样1ML，接种到3管LST中。
C
从10-2取样1ML+9 ML生理盐水=1：1000，从10-3取样1ML，接种到3管LST中。
溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。
01
胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。
01
分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。
01
原理
1 产气 2 不产气
大肠菌群是指一群在37°C培养24小时能分解乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
01
作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义
食品中大肠菌群数系以每100g（或mL）检样内大肠菌群最可能数（the most probablenumber-简称MPN）表示。
03
大肠菌群计数检验
旧国家标准
第二天

mpn法测大肠菌群实验报告

mpn法测大肠菌群实验报告 MPN 法测大肠菌群实验报告一、实验目的大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一。

本次实验旨在采用MPN 法（最可能数法）准确测定样品中的大肠菌群数量，以评估样品的卫生状况，并为相关产品的质量控制提供科学依据。

二、实验原理MPN 法是基于统计学原理，利用一定数量的样品在特定条件下培养后，根据阳性管数来推算样品中大肠菌群最可能数的一种方法。

大肠菌群在特定的培养基中生长并发酵乳糖产酸产气，通过观察培养基的变化来判断是否存在大肠菌群。

三、实验材料与设备（一）实验材料1、待检样品：＿____2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤培养基3、煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤培养基（二）实验设备1、恒温培养箱：能够保持温度在 36℃±1℃。

2、无菌移液管：1mL、10mL 规格。

3、无菌培养皿4、超净工作台四、实验步骤（一）样品处理1、固体样品：称取 25g 样品，加入 225mL 无菌生理盐水，充分均质。

2、液体样品：用无菌移液管吸取 25mL 样品，加入 225mL 无菌生理盐水，混匀。

（二）初发酵试验1、用 10mL 无菌移液管吸取 10mL 样品匀液，注入 3 支装有 10mL LST 肉汤培养基的试管中，另用 1mL 无菌移液管吸取 1mL 样品匀液，注入 3 支装有 10mL LST 肉汤培养基的试管中，再用 1mL 无菌移液管吸取 1:10 的样品匀液 1mL，注入 3 支装有 10mL LST 肉汤培养基的试管中。

2、将接种后的 LST 肉汤培养基放入 36℃±1℃恒温培养箱中培养24h±2h，观察产气情况。

（三）复发酵试验1、对初发酵试验中所有产气的 LST 肉汤管进行转种。

用接种环从产气的 LST 肉汤管中分别取培养物一环，移种于 BGLB 肉汤管中。

2、将 BGLB 肉汤管放入 36℃±1℃恒温培养箱中培养 48h±2h，观察产气情况。

食品微生物学检验大肠菌群 MPN 计数法

注：用煌绿乳糖胆盐肉汤，称取40 g于1 000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15 min。
9
无菌生理盐水
氯化钠8.5 g
蒸馏水1 000ml
称取8.5ｇ氯化钠溶于1 000ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
磷酸盐缓冲液
磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0 g
磷酸氢二钾(K2HPO4)2.75 g
磷酸二氢钾(KH2PO4)2.75 g
月桂基硫酸钠0.1 g
蒸馏水1 000ml
pH 6.8±0.2
将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml。121℃高压灭菌15 min。
注：用月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，称取35.6 g于1 000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15 min。双料LST肉汤除蒸馏水外，其他原料加倍。
蒸馏水500ml
pH 7.2
贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1 mol/L氢氧化钠溶液调节，用蒸馏水稀释至1 000ml后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25ml，用蒸馏水稀释至1 000ml，分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min。
10
1 mol/L NaOH
如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。
未产气者为大肠菌群阴性。
3
复发酵试验
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种BGLB管中，36℃±1℃培养48 h±2 h，观察产气情况。
产气者，计为大肠菌群阳性管。
4
大肠菌群最可能数（MPN）的报告

食品微生物学检验大肠菌群计数和菌落总数的测定

食品微生物学检验大肠菌群计数和菌落总数的测定食品微生物学检验大肠菌群计数和菌落总数的测定摘要：菌落综述和大肠菌群超标是食品产品卫生指标中常见的质量问题，国家绝大多数食品都制订了菌落总数和大肠菌群的指标，并对其数量做了详细的规定。

菌落总数和大肠菌群是食品中的安全性指标，是影响产品质量问题的常见指标，在对食物进行检测的时候菌落总数以及大肠菌两项指标容易出现相应的检测问题{1】，为了熟悉和掌握大肠菌计数和菌落总数的测定的方法和技术，本次实验以未清洗的生菜为实验对象，用MPN计数法对大肠菌群进行计数，用平板倾注的方法培养微生物后观察获得的单菌落来测定菌落总数。

关键词：生菜；大肠菌MPN计数法；菌落总数；平板倾注一、前言：食品中菌落总数是指食品样检经过处理，在一定条件下（如培养基成分、培养温度和时间、PH值、需氧性质等）培养后，所得1mL （或1g）检样中形成菌落的总数。

菌落总数测定通常是用来判定食品被微生物污染的程度及卫生质量，测定结果反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生评价。

大肠菌群是需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胚杆菌。

该菌群主要来自于人和温血动物的肠道，需氧与兼性厌氧，不形成芽孢;在35~37℃条件下，48 小时内能发酵乳糖声酸产气，食品中大肠菌群数以每1mL(g)检样内大肠菌群最可能数（the most probable number,MPN）表示。

[2]二、实验材料与方法（一）实验材料1、实验器材高压灭局锅恒温培养箱电子天平2、实验材料及试剂未经清洗的生菜无菌生理盐水3、菌落总数的测定所用培养基及其配方平板计数琼脂（PCA）培养基胰蛋白胨5.0g 酵母浸膏2.5g 葡萄糖1.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000mL PH1.0±0.24、大肠菌群计数所用培养基及其配方越贵基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤，结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA），磷酸盐缓冲液，无菌生理盐水，无菌1mol/L氢氧化钠溶液，无菌1mol/L盐酸溶液。

大肠菌群测定—食品中大肠菌群的测定方法

培养特性：大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。
➢ 在普通营养琼脂上有3中菌落形态：
➢ 1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、
➢ 光滑、呈灰色，在生理盐水中易分散；
计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
•
接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml
以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠
杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。
• 置36±1℃温箱培养24±2小时，如所有发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。
4、大肠菌群最可能数（MPN ）的报告
➢ 根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见附录
B ) ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的 MPN 值。 ✓注意：当检样的量与表中的量有增加或减少时，
表内的数也应相应减少或增加。
大肠杆菌 0157显色培养基上的菌落
在伊红美兰乳糖琼脂（EMB）上
大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征
设备和材料
食品中大肠菌群测定
参考 GB4789．3-2010
➢主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属的Ⅲ亚属细菌组成。
3、大肠杆菌的生物学特性
基本形态
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.50.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。

大肠菌群计数MPN法

粪大肠菌群（Fecal colifoms）
一群在44.5 ℃发酵乳糖、产酸产气、IMViC生化试验为++--或-+--的革兰氏阴性无芽孢杆菌。分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。O抗原（菌体抗原，150个） K抗原（荚膜抗原，90个） H抗原（鞭毛抗原，50个）
月桂基磺酸盐胰蛋白胨（LST）
归纳总结
培养基主要成分作用
①胆盐可抑制革兰氏阳性菌。②煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。③乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。④发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
归纳总结
注意事项
目前很多产品大肠菌群标准要求单位为MPN/100mL（g），同2010版检测结果单位MPN/100mL（g）不一致。中华人民共和国卫生部公告 2009第16号正式公告：现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“MPN/100克或MPN/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》（GB/T 4789.3-2003）进行检测；以“MPN/克或MPN/毫升”、“CFU/克或CFU/毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》（GB/T 4789.3-2008）进行检测。
大肠菌群（Coliforms）
指在44.5℃培养24-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”，如NMKL。与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。

大肠菌群MPN计数法方法学验证报告

大肠菌群MPN计数法方法学验证报告摘要：大肠菌群MPN计数法是一种常用的微生物计数方法。

本报告通过实验验证了该方法的可靠性和重复性，详细描述了实验的步骤和结果。

实验采用了一种食品样品，通过连续的稀释和培养方法，最终得到了大肠菌群的MPN计数结果。

实验结果表明，该方法具有良好的可重复性和准确性，适用于大肠菌群的数量测定。

关键词：大肠菌群，MPN计数法，微生物计数，可重复性，准确性1.引言大肠菌群是一种食品安全和卫生检测中常见的指标微生物，其数量的测定对于判断食品卫生状况具有重要意义。

MPN计数法是一种常用的大肠菌群计数方法，通过连续的稀释和培养过程，根据培养皿中的菌落数目来估计原始样品中的大肠菌群数量。

本实验旨在验证大肠菌群MPN计数法方法学的可靠性和重复性。

2.实验材料与方法2.1实验材料-食品样品：取一定数量的食品样品。

-种植基质：使用大肠菌群选择性培养基质（如曼氏培养基）。

2.2实验方法1) 稀释：取一定量的食品样品（例如1 ml），分别加入到一系列稀释液中，并进行稀释。

最常用的稀释液有无菌蒸馏水、少量盐水等。

根据实验需要，通常选择稀释液的倍数为10倍至100倍。

2) 接种：从每个稀释液中取出一定量的液体（例如0.1 ml），分别接种到相应的培养基上。

通常，每个稀释液取3个平板培养皿进行接种。

3)培养：将接种过的培养皿在恒温培养箱中进行静置培养。

通常，培养温度为37℃，培养时间为24-48小时。

4)菌落计数：观察培养皿中的菌落情况，根据不同菌落数量，采用MPN计数法进行计算并进行统计分析。

3.实验结果与分析经过实验操作，得到了一系列稀释液和培养皿，培养皿中的菌落数目如下表所示：稀释倍数培养皿1培养皿2培养皿3123019521010302532100324根据MPN计数法的计算公式，通过将菌落数目带入公式，我们可以得到每个稀释倍数对应的大肠菌群数量估计值。

通过统计分析，得到大肠菌群的最可能数目为3.2×10^5个/g（或ml），估计误差为±0.5×10^5个/g（或ml）。

实验二食品中大肠菌群的检验

37℃ 培养24h
证实产气（阳性）结果与否
乳糖蛋白胨培养液
实验报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数，查
MPN检索表，报告每100mL（或g）大肠菌群的MPN。结果表示方法：120MPN/100mL（g）附表：大肠菌群最大可能数（MPN）检索表
注：
①本表采用3个稀释度：1ML(g)，0.1mL(g）和
0.01 mL (g)。每稀释度3管。
②表内所列检样量如改用10mL(g)，1mL(g）和
0.1mL(g）时，表内数字应相应降低10倍；如改
用0.1ML(g), 0.01ML(g）和0.001mL(g）时，则
表内数字应相应增加10倍，其余可类推。
表 10毫升、1毫升、0.1毫升检样各接种3管的大肠杆菌最近似数检索表
pH7.4±0.1
实验步骤及操作要点：
1）样品的稀释：如第一法 2）平板计数选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。 3）及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
实验二食品中大肠菌群的检验
一、实验目的
1. 了解大肠菌群在食品检验中的意义。
2. 掌握检验的程序和步骤。 3. 通过MPN检索表的检索得出实验结果。
二、基本原理
大肠菌群系指一群在32～37℃下24hr内，能发酵乳糖产酸、产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标，来评价食品卫生质量，具有广泛的卫生学意义。食品中大肠杆菌群数是以每100mL（g）检样内大肠菌群最近似数（MPN）来表示，据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群数均应为100mL （g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值，为报告标准。

大肠菌群计数方法

大肠菌群计数1 目的规范大肠菌群的检测流程，确保检测结果的准确。

2 范围2.1 本标准中第一法为大肠菌群MPN计数法,单位MPN/g（mL），适用样品如：设备清洁程度，员工手部工作服清洁程度，原材料中的黄原胶、蜂蜜等；第二法为大肠菌群平板计数法,单位CFU/g（mL），适用样品如：腐乳成品，蚝油，黄豆酱等。

具体方法选择以对应样品的内控标准或验收标准为准。

2.2 本标准适用于广东美味鲜调味食品有限公司及其子公司、分公司。

3 依据GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》、GB 4789.1《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》、GB/T 4789.22《食品卫生微生物学检验调味品检验》4 定义和原理4.1 定义:大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。

4.3第二法：大肠菌群平板计数法大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。

5 培养基和试剂5.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、5.2煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）、5.31mol/L盐酸（HCl）、20%～30%碳酸钠（Na2CO3）、5.4磷酸盐缓冲液、5.5结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）。

（以上培养基和试剂配置方法见瓶子上的说明和《微生物检验用试剂的配制》）6 设备和材料6.1均质器6.2电子天平（0.1g）6.3灭菌吸管10mL，具0.1mL刻度；6.4生化培养箱、恒温培养箱(36℃±1℃，46℃±1℃)6.5 PH计、PH比色管或精密PH试纸6.6超净工作台、冰箱4℃～8℃7 第一法：大肠菌群MPN计数法7.1 检验程序36℃±1℃ 48h ±2h36℃±1℃ 48h ±2h7.2 操作步骤7.2.1样品的稀释步骤参照《大肠菌群测定（GB/T 4789.3-2003乳糖胆盐检测法）》执行。

mpn法检测大肠菌群的原理

mpn法检测大肠菌群的原理1. 什么是MPN法？大家都知道，大肠菌群对我们的健康可有着举足轻重的影响。

咱们今天要聊的是一种检测它们的好方法——MPN法。

MPN法，全名叫做“最可能数法”（Most Probable Number），听起来是不是挺高大上的？其实，这就是一种用来估算水或食品中大肠菌群数量的方法，简单说就是“猜个数”法，当然这不是随便猜的哦，背后可是有科学依据的。

2. MPN法的基本原理2.1 检测过程的初步了解首先，这个MPN法就像玩“猜谜游戏”。

你要先把你的样本，譬如水或食物，分成几份，放到不同的培养基里。

培养基就是一种特别的“营养液”，它可以帮助大肠菌群生长。

接着，你要观察这些培养基里的变化。

特别注意的是，如果有大肠菌群存在，它们会产生气体，气体会让液体变成泡泡状。

2.2 数据分析和结果估算然后，你会看到这些泡泡的数量，根据这些泡泡的多寡，你就可以用统计学的方法，估算样本中大肠菌群的数量。

是不是有点像把一篮水果分成几堆，然后根据每堆的水果数量来估算整篮水果的数目？这就是MPN法的“智慧”所在，通过这种方法，我们可以粗略估算出大肠菌群的数量，尽管这种估算是“最可能数”，但却很有帮助。

3. 为什么选择MPN法？3.1 MPN法的优势说到为什么用MPN法，其实这有点像在菜市场挑选水果，MPN法就像是用比较简单的工具来确定水果的新鲜程度。

它不仅简单易用，而且对于某些检测条件下，MPN法比其他方法要方便得多。

尤其是当你面对大量的样本时，它就显得特别得心应手。

你只需要简单的试剂和培养基，就能完成检测，省时省力。

3.2 MPN法的局限性不过，任何方法都有它的“短板”，MPN法也不例外。

虽然它方便，但它的结果只是一个“估计值”，而不是一个精准值。

就像你估算一桌子菜的分量，不可能每次都做到百分百准确，对吧？MPN法同样如此，它给出的结果只能算是一个“最可能”的数值，实际情况可能会有所不同。

4. 实际应用中的MPN法4.1 在水质检测中的应用在实际应用中，MPN法广泛用于水质检测。

大肠菌群MPN法的设计原理

大肠菌群MPN法的设计原理
大肠菌群MPN法是一种用于检测环境水样和食品样品中大肠菌群数量的方法。

它的设计原理基于以下几个方面：
1. 大肠菌群指标：大肠菌群是一类广泛存在于环境中的微生物，其中包括了多种大肠杆菌和其他肠道细菌。

大肠菌群可以作为一种指标，用来评估水质和食品中的细菌污染程度。

2. MPN法：MPN（Most Probable Number，最可能数）法是一种常用的微生物计数方法。

它通过对不同稀释度的样品进行对比培养，观察细菌生长情况，从而推测出细菌的数量。

3. MPN法的流程：大肠菌群MPN法的流程一般包括以下几个步骤：首先，将样品进行预处理，如加入适当的培养基和抑制剂，以排除其他非目标菌的影响；然后，将样品分成若干个不同稀释度的试管；接下来，将试管中的样品逐渐转移到培养基中进行培养；最后，观察培养基中的生长情况，根据特定的生长特征，确定大肠菌群的MPN值。

4. 数据分析：根据大肠菌群MPN法的设计原理，可以使用统计学的方法对实验结果进行分析和计算，得出大肠菌群的数量。

通过与相关标准进行比较，可以评估环境水样或食品样品是否符合卫生标准。

总而言之，大肠菌群MPN法通过稀释样品、对比培养和数据分析等步骤，可以量化环境水样和食品样品中大肠菌群的数量，从而评估细菌污染程度。

大肠杆菌检测方法[整理]

大肠杆菌检测方法[整理]大肠杆菌是一种常见的肠道菌，在人和动物的肠道内常常存在。

然而，一些大肠杆菌菌株也可以引起人类疾病，如腹泻、细菌性肺炎和尿路感染等。

因此，对于食品、环境以及水源中的大肠杆菌的检测是很重要的。

目前常见的大肠杆菌检测方法包括宏域和微域方法。

下面我们分别介绍一下。

宏域方法：1. MPN法：MPN法（Most Probable Number）是微生物数量统计法中一个比较常用的方法，可以用于测定食品和水中大肠杆菌的数量。

它的原理是根据菌落形成的频率计算出样品中该菌的浓度。

这种方法通常需要更长时间，但其准确性较高。

2. 营养平板计数法：这种方法通过将样品表面原液（如，生牛肉）放置在固体培养基上，让其在37℃下培养24小时，经过染色后可以直接数出菌落，并通过菌落形状和生理生化特征鉴定出大肠杆菌。

这种方法简单，实验室易于操作，但需要更多的时间和更高的技能水平。

3. 膜过滤法：该方法将样品过滤到膜上，紫外线灭菌，然后将膜放置到富含营养成分的固体培养基上进行培养。

这个方法比较适合于检查食品或水样品中的低浓度大肠杆菌，但没有选择感染性的菌株的能力。

1. PCR (聚合酶链式反应)：PCR是一种高效的DNA增幅技术，可用于检测大肠杆菌DNA 的存在。

PCR方法的鉴定出现假阳性的可能性较低，但它不能鉴定出大肠杆菌的活性，仅能检测到细胞核酸。

2. ELISA (酶联免疫吸附法)：ELISA方法是用来检测食品和水中大肠杆菌的方法之一。

试剂盒中含有特定的抗体，它们与大肠杆菌的特定抗原结合。

这种方法速度快，准确率高，但可以只检测某一菌株。

3. 生物传感技术：生物传感技术是利用微生物的活性和生化反应来检测分子的技术。

它的优点是快速，准确，且对细胞造成的伤害较少。

大肠菌群mpn检验法的流程

大肠菌群mpn检验法的流程大肠菌群MPN检验法是一种用于测定水样和食品中大肠菌群浓度的方法。

其原理基于数值分析法，通过对3杯平行称量水样的不同稀释液进行培养并观察其菌落形态和数量，从而计算出大肠菌群的数量。

以下是大肠菌群MPN检验的详细流程。

步骤一：准备试管、试剂和培养基1. 选择三个或更多的试管，标记上每个试管的编号。

2. 准备9 ml 0.1％碳酸钠液，并在每个试管中加入 10 ml。

3. 在每个试管中加入 1 ml 稀释液1。

4. 在每个试管中加入 1 ml 稀释液2。

5. 在每个试管中加入 1 ml 稀释液3。

6. 在每个试管中加入 9 ml 液体培养基。

可以使用多种不同的培养基，如McConkey 培养基和E.coli/coliforms双层营养琼脂板。

步骤二：制备稀释液1. 制备初次稀释液。

将被测水样取10 ml，加入90 ml稀释液1中，充分混合得到10-1（即1/10）的初次稀释液。

2. 制备第二次稀释液。

在稀释液1中各取1 ml，加入9 ml稀释液2中，充分混合得到10-2（即1/100）的第二次稀释液。

3. 制备第三次稀释液。

在稀释液2中各取1 ml，加入9 ml稀释液3中，充分混合得到10-3（即1/1000）的第三次稀释液。

步骤三：测定大肠菌群1. 从每个试管中取10 ml水样或者是不同浓度的稀释液，加入液体培养基中。

2. 在培养基中进行培养。

大肠菌在摄氏35-37度下，48小时内可以在大部分培养基上生长。

这非常重要因为不同的培养基其菌群生长的时间和数量可能会有所不同。

3. 观察培养结果。

如果在试管中形成了典型的大肠菌落，就说明这个营养基中含有大肠菌。

如没有形成典型菌落，可能需要重新试验。

4. 根据试管中出现大肠菌的情况，使用MPN表来计算每毫升水样中的大肠菌数量。

MPN表是一种标准表格，可以用来对菌落数量进行估算。

步骤四：分析结果MPN值是指每毫升水样中大肠菌群数量的估计值。

实验四--食品中大肠菌群的测定

实验四--食品中大肠菌群的测定一、实验目的掌握大肠菌群的原理及其检验方法，以判别食品的卫生质量了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义二、实验原理大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。

最近似数测定法(MPN)是指对未知样品做连续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每g(mL)样品中大肠菌群的最可能数。

食品中大肠菌群数以每g(mL)样品中大肠菌群的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。

三、实验器材(一)培养基月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)培养基煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)培养基(二)实验材料市售饮料(三)其他三角瓶，试管，培养皿，移液管(四)仪器超净工作台，电子天平，高压蒸汽灭菌锅四、实验准备(一)配制培养基和试剂(以中央台为单位)1、配制生理盐水：1000mLNaCl8.5g水1000mL分装：3个三角瓶(含玻珠)中，225mL/个9支试管，3支/组，9mL/支灭菌：121~126℃灭菌20min2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)培养基：300mL分装到27个已装有杜氏小管试管中，10mL/个包扎(3支一捆),112~115℃灭菌30min 胰蛋白胨6gNaCl1.5g乳糖KH2PO4水1.5g0.825g300mLK2HPO4十二烷基硫酸钠pH6.80.825g0.03g3、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)培养基：150mL分装到12个已装有杜氏小管试管中，10mL/个包扎，112~115℃灭菌30min蛋白胨牛胆粉溶液水1.5g30mL150mL乳糖0.1%煌绿水溶液pH7.21.5g2mL牛胆粉溶液制法：将3g牛胆粉溶于30mL水中，调pH至7.0~7.5BGLB制法：先将蛋白胨、乳糖溶于约100ml水中，加入牛胆粉溶液30mL,调节pH,再加入0.1%煌绿水溶液，最后用水补足到150ml,用纱布过滤后，再分装到试管中。

食品中大肠菌群的测定(MPN法)

五、实验步骤
检样稀释
大肠菌群检验程图（新国标MPN法）
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h
不产气
产气煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 36±１℃，24~48±2h
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
报告
1、样品处理：
❖ 固体和半固体食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225 mL生理盐水的三角瓶中，充分振荡，制成 1:10样品匀液无菌均质杯或无菌均质袋内，于8000 r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液。
四、实验器材
1、培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤
2、仪器或其他用具：电子天平（感量0.1g）、无菌不锈钢勺、无菌称量纸、无菌吸管（1 mL和25 mL）、试管、三角瓶、无菌生理盐水（9mL/管，225mL/三角瓶内含适量玻璃珠）、无菌1 mol/L NaOH、无菌1 mol/L HCl、 75%酒精棉球、广口瓶、灭菌剪刀、灭菌镊子、酒精灯、精密pH 试纸、恒温培养箱、高压灭菌锅、均质器、振荡器、接种环等。
1、样品处理：
❖ 液体食品：以无菌吸管吸取样品 25mL 放入装有 225mL生理盐水的无菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，以30cm幅度、于7s内振摇25次（或以机械振荡器振摇）,制成1:10的样品匀液。
2、样品稀释：
1ml
1ml 1ml
生理盐水
1:10
25g/m
1:100 1:1000 1:10000
l样品
注意：吸管尖端不要触及稀释液面，每递增稀释1
次，用1 支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至

实验二市售豆浆中大肠菌群数量的测定

市售豆浆中大肠菌群的测定（一）大肠菌群MPN计数法测定市售豆浆中的大肠菌群一实验目的1.掌握大肠菌群的MPN测定法2.了解MPN计数原理二实验原理大肠菌群是指一群来自于温血动物肠道，36℃48h能发酵乳糖产酸产气的需氧或兼性厌氧菌革兰氏阴性菌无芽孢杆菌。

大肠菌群MPN计数法的原理就是根据大肠菌群的定义，利用它们能发酵乳糖产酸产气的特性，通过二次验证确为大肠菌群阳性的培养管数，对照MPN检索表，可以报告大肠菌群数。

三实验材料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）、0.85%生理盐水、带小倒管的试管四方法步骤该实验四个同学一组，按学号排。

选择原液、10-1、10-2稀释液进行培养。

每个稀释度接种1mL，每个稀释度接种3管。

五实验记录六结果与分析查MPN表，报告：该样品的大肠菌群MPN数为：____________/mL七思考题1.初发酵的阳性管为什么需要做复发酵实验？2.你认为MPN计数可信度如何？为什么？（二） PetrifilmTM测试片法测定大肠菌群数量一实验目的：1.通过接触PetrifilmTM测试片，了解微生物测试片的使用方法。

2.了解Petrifilm™测试片计数原则。

二实验原理Petrifilm™测试片的计数原则：①计数范围：15~150cfu②都＜15，以最低稀释度计算③都＞150，以最高稀释度计算④都不长菌，报告“＜1×最低稀释倍数”计算方法：同菌落总数报告单位：cfu/g或cuf/mL四实验步骤：每组同学做一张片，选择原液。

方法同菌落总数测定。

放入37℃培养24h计数。

五结果记录报告：24h后计数菌落总数为_____个，据此计算得出该样品的菌落总数为________。

六思考题根据你的测定结果，该样品是否符合卫生国家标准，为什么？。