蒽酮比色法快速测定葡萄糖

蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量

蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。

(二)试剂

(1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。溶解后置水中冷却备用。此液当天配制。

(2)2mol/L氢氧化钾溶液。

(3)3mol/L盐酸溶液

(5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。

(6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。此液含糖为100μg/ml。

(三)测定步骤

1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为

2.0ml。从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。在分光光度计中,以640nm

2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。离心液倒入干净试管中。再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。此液用干葡萄糖、果糖及蔗糖的测定(A液)。

以10ml3mol/L盐酸将离心管中沉淀物全部转移到容量瓶中,盖上玻塞,放在沸水浴中煮沸40～45min,取出冷却至室温,加3mol/L氢氧化钠溶液10ml中和其酸性,以蒸馏水定容至50ml,从中取2ml溶液,加蒸馏水至50ml,混匀。此液用用淀粉的测定(B液)。

3.蔗糖的测定精确吸取样品液(A)10ml,加入2mol/L氢氧化钾溶液2ml,置沸水浴中煮沸10min。取出迅速冷至室温,加蒸馏水稀释至50ml,摇匀。精确吸取稀释液2ml至一干净试管中,按标准曲线绘制步骤加蒽酮试剂显色测定,得光密度值E蔗。

4.蔗糖的结果计算

从蔗糖工作曲线求得蔗糖量为S(μg),按下式计算样品中蔗糖百分含量。

式中:

S──待测样品液中蔗糖量(μg)

W──样品称重(g)

V1──用于测定的样品稀释液的体积(ml)

V2──用于分析的样品稀释液总体积(ml)

V3──样品液总体积(ml)

V4──用于氢氧化钾水解的样品液体积(ml)

5.葡萄糖、果糖的测定取样品液(A)10ml加蒸馏水至50ml,往两支干净试管中分别加入2ml 样品稀释液其中一支加蒽酮试剂6ml,摇匀,在沸水浴中煮沸5分钟,取出立即浸入自来水冷却至室温,在640nm下测定光密度E100。另一支试管,加蒽酮试剂6ml,摇匀,在常温下显色5min,同上述操作测定光密度E常温。由E常温查果糖工作曲线求得样品液果糖量为F(μg),按下式计算样品中果糖、葡萄糖含量。

6.果糖、葡萄糖的结果计算

由E100-E常温查葡萄糖工作曲线求得样品液中葡萄糖量为G(μg),按下式算葡萄糖百分含量。

7.淀粉测定取样品液(B液)2ml,再加6ml蒽酮试剂,摇匀,放在沸水浴中煮沸5min,取出,立入在冷水中冷却至室温,在640nm下测定光密度E淀粉,以E淀粉查葡萄糖式计算淀粉百分含量:

式中:

Y──查标准曲线得淀粉水解稀释测定液糖量(μg)

V0──-水解液总体积(ml)

W──样品称重(g)

V1──水解稀释液体积(ml)

0.9──换算糖为淀粉量

V2──用于稀释的样品液体积(ml)

V3──用于比色时样品稀释液体积(ml)