蒽酮比色法快速测定葡萄糖
蒽酮比色法
蒽酮比色法，具体步骤一、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜高粱，甘草二.操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡萄糖标准液（mL）0.10.20.30.40.60.8蒸馏水（mL）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（µg）102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。
3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。
4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。
以下操作同标准曲线制作。
根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。
三、结果处理：C × V总× D样品含糖量（%）= ————————————— × 100%W × V测× 106其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），V总——提取液总体积（mL），V测——测定时取用体积（mL），D——稀释倍数，W——样品重量（g），106——样品重量单位由g换算成µg的倍数。
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作方法(一)
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作方法(一)
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作
引言
蒽酮比色法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法，它通过测量葡
萄糖溶液与蒽酮反应产生的紫色溶液的吸光度，来推断葡萄糖的浓度。
本文将介绍如何操作蒽酮比色法来绘制葡萄糖的标准曲线。
实验材料准备
•蒽酮溶液
•mol/L 磷酸二氢钾溶液
•磷酸(pH=)
•葡萄糖溶液 (不同浓度)
•分光光度计
•塑料比色皿
•移液器
•艾氏试管 (10 mL)
实验步骤
1.准备一组葡萄糖标准溶液，包括不同浓度的葡萄糖溶液和纯磷酸
二氢钾溶液。
葡萄糖的浓度可选取为、、、、和 mg/mL，磷酸二氢钾的浓度为 mol/L。
2.取一定体积的葡萄糖标准溶液，加入到不同的艾氏试管中。
3.分别加入相同体积的磷酸，混合均匀。
4.将每个试管内的溶液均匀地倒入塑料比色皿中。
5.使用分光光度计，在波长为540 nm 处进行初始的零值调整。
6.依次测量每个标准溶液的吸光度，并记录数据。
7.将吸光度数据与标准溶液浓度建立线性回归，绘制葡萄糖的标准
曲线。
数据处理与分析
通过将吸光度数据与标准溶液浓度进行线性回归，可以得到葡萄糖标准曲线的方程式，并利用该方程式可以预测未知葡萄糖样品的浓度。
结论
蒽酮比色法是一种简单、快速而准确的测定葡萄糖含量的方法。
通过制备葡萄糖标准曲线，我们能够利用吸光度测量的数据推断未知葡萄糖样品的浓度。
这项实验不仅可用于葡萄糖测定，也可用于其他具有还原性的物质的测定。
蒽酮比色法测总糖
啤酒中糖含量的测定蒽酮比色法测总糖一．实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
二．仪器与药品1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液（l00 µg/ml）：精确称取100mg干燥葡萄糖，先用蒸馏水定容至100ml，再取出10ml定容至100ml；(2)浓硫酸；(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用；(4)啤酒（不用处理）。
三．实验步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.稀释：吸取啤酒1-2 m1稀释至500ml（先吸取2ml啤酒定容至100ml，再吸取10ml 已稀释的啤酒将其定容至50ml）即2ml→100ml→取出10ml→定容至100ml3.测定吸取1.00ml已稀释的啤酒于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代啤酒。
以下操作同标准曲线制作。
根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。
四．数据记录与处理1.校准空白值2.标准曲线的绘制3.由上面表格可作出下面的曲线Y轴为校正后的A值X轴为葡萄糖的浓度4.待测啤酒编号7 8 9A 0.480 0.472 0.542校正后A值0.484 0.480 0.5465 .数据处理由标准曲线可得：A=7.1256C(*)啤酒的A的平均值为：（0.484+0.480+0.546）/3=0.503将0.503代入(*)式得:C=A÷7.1256=0.0706（mg/ml)则啤酒中总糖的含量为:0.0706×250=17.6（mg/ml)=1.8（g/100ml)。
植物可溶性糖测定
植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。
在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。
该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
实验用品721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸试剂：活性炭，酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。
实验步骤1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。
按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。
试剂（ml) 管号1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.980%酒精 1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 5葡萄糖浓度（ul/ml) 0 30 60 90 120 150 180 样品中含糖量％：设V为植物样品稀释后的体积（m L）；C为提取液的含糖量(μg/ m L)；W为植物组织鲜重(g)可溶性糖含量％＝( C×V)/(W×106) ×100%可溶性糖(SS) 含量的测定: 根据赵世杰[20 ] 的方法。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
操作步骤
葡萄糖标准曲线的制作
取6支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2个重复：
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热10min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却10min。
在652nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在652nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
Cri-J。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
蒽酮比色法[宝典]
![蒽酮比色法[宝典]](https://img.taocdn.com/s3/m/4776734776232f60ddccda38376baf1ffc4fe367.png)
蒽酮比色法蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
蒽酮比色法测糖试验蒽酮比色法测定多糖含量1、蒽酮比色法测糖试验一实验目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二实验原理蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
三实验器材及试剂马铃薯干粉可调试移液器或移液管可见分光光度计（723型）电子分析天平水浴锅电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml 备用。
四、操作1.制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml ）为横坐标作图得标准曲线。
表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min,于620nm处比色葡萄糖浓度（mg/ml）2.样品含量的测定样品液的制作：精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml，再定容到10ml的容量瓶中样品液的测定：（1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）表2 蒽酮比色法定糖——样品的测定（2）加样冷却完成后置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm 处比色测量各管OD值。
（3）以1号试管作为调零管，2、3、4号管的OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。
3．结果计算：C×Vw = ————×100%m，式中w：糖的质量分数（%）C：从标准曲线中查出的糖质量分数（mg/ml）V：样品稀释后的体积（ml）m：样品的质量（ml）2、蒽酮比色法测定多糖含量一试验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
总糖的测定-蒽酮比色法
实验一总糖的测定-蒽酮比色法一、实验目的（1）学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
（2）学习723型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原糖及在本法测定条件下水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在每毫升150微克以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用，样品不必经过水解。
三、实验材料、器材与试剂1、材料白薯。
2、器材（1）试管（或具塞试管）及试管架；（2）吸量管；（3）沸水浴；（4）冰浴；（5）723型分光光度计。
2、试剂（1）蒽酮试剂：称取100mg蒽酮溶于100mL98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
（2）葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:精确称取100mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000mL。
（3）样品溶液：称取500g市售白薯，洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液留渣，将渣放入烘箱内80℃～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛区100目筛下物为待测样品。
（也可用市售红薯面粉代替）取样品在烘箱内150烘干，恒重后，精确称取1～5g，置于锥形瓶中，加入80mL沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取半小时。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100mL。
四、实验方法(1)制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。
每管加入葡萄糖标准液和谁后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置于冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1cm厚度的比色皿，以第一管为空白，在620nm处迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg数为横坐标，吸光度（A620nm）为纵坐标，画出含糖量与A620nm 的相关标准曲线。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量讲课稿
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。
二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。
当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。
三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。
在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在625nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
创作编号：GB8878185555334563BT9125XW创作者：凤呜大王*蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。
该物质在620 nm 处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。
二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。
当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。
三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。
在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在625nm波长下迅速测定各管吸光值。
根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。
多糖测定
多糖的测定蒽酮比色法原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
仪器、试剂和材料：1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂： (1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：小球藻操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.小球藻中可溶性糖的提取（1）将生长至平衡期的小球藻液6ml离心（3500r/min）5min,获得新鲜的小球藻藻泥；（2）向藻泥中加入5倍体积的去离子水，置于冰箱（-4℃）中冷冻，然后取出融化，如此反复3次提取水溶物；（3）将冰融后的溶液离心（4500r/min）10min，弃残渣，取上清清液；（4）将上清液在水浴中加热，浓缩至原体积的1/3，然后加入体积分数为3%的三氯乙酸沉淀蛋白，离心（12000r/min）10min,取上清液；（可以再平均分成n份，视量而调整）（5)吸取上清液1ml，加入5倍体积的乙醇溶液（体积分数为95%），所得的沉淀物即为小球藻粗多糖；（6）将粗多糖溶于水，再用体积分数30%乙醇（95%乙醇31.58ml，68.42ml蒸馏水）进行沉淀，最终得到多糖。
蒽酮比色法快速测定葡萄糖
蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。
不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。
第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。
第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。
(二)试剂(1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。
溶解后置水中冷却备用。
此液当天配制。
(2)2mol/L氢氧化钾溶液。
(3)3mol/L盐酸溶液(5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。
溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。
(6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。
此液含糖为100μg/ml。
(三)测定步骤1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为2.0ml。
从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。
摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。
用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。
在分光光度计中,以640nm2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。
精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。
离心液倒入干净试管中。
再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量之阳早格格创做一. 真验本理糖类正在较下温度下可被浓硫酸效率而脱火死成糠醛或者羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱火缩合，产死糠醛的衍死物呈蓝绿色.该物量正在620 nm处有最大吸支，正在150 µg/mL范畴内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.该法有很下的敏捷度，糖含量正在30 µg安排便能举止测定.二. 试剂器材蒽酮试剂：粗稀称与蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；葡萄糖尺度液：将无火葡萄糖置于五氧化两磷搞燥器中，12hr后粗稀称与100mg，用蒸馏火定容至100ml；其余器材：分解天仄、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器战兴液缸等.三. 支配步调葡萄糖尺度直线的创制与7支具塞试管，按下表数据粗稀配制一系列分歧浓度的葡萄糖溶液，每个浓度搞2-3个沉复：管号0 1 2 3 4 5 6 尺度葡萄糖溶液/mL 0 0.4 0.6 0.8蒸馏火/mL正在每支试管中坐时加进蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后所有置于沸火浴中加热15min.与出，赶快浸于冰火浴中热却15min.正在625nm波少下以第1管为空黑，赶快测定其余各管吸光值.以尺度葡萄糖含量(g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，画制尺度直线.样品的测定将样品溶液糖浓度安排到测定范畴，透彻吸与2mL置于搞燥净净试管中，正在每支试管中坐时加进蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后所有置于沸火浴中加热15min.与出，赶快浸于冰火浴中热却15min，每个浓度搞2-3个沉复.正在625nm波少下赶快测定各管吸光值.根据葡萄糖含量的尺度直线，由样品溶液吸光值估计百般品溶液中糖的浓度，并估计其糖含量.四. 注意事项该法的特性是险些可测定所有的碳火化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有鳏糖类战多糖类，包罗淀粉、纤维素等（果为反应液中的浓硫酸可把多糖火解成单糖而爆收反应），所以用蒽酮法测出的碳火化合物含量，本量上是溶液中局部可溶性碳火化合物总量.正在不需要粗致区分百般碳火化合物的情况下，用蒽酮法不妨一次测出总量，省来许多贫苦，果此，有特殊的应用价格，但是正在测定火溶性碳火化合物时，则应注意切勿将样品的已溶解残渣加进反应液中，可则会果为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂爆收反应而减少了测定缺面.分歧的糖类与蒽酮试剂的隐色深度分歧，果糖隐色最深，葡萄糖次之，半乳糖、苦露糖较浅，五碳糖隐色更浅，故测定糖的混同物时，常果分歧糖类的比率分歧制成缺面，但是测定简单糖类时则可预防此种缺面.。
粗多糖检测方法(蒽酮比色法)
粗多糖检测方法（蒽酮比色法）：1 主要仪器（1）离心机（ 4000r/min ）。
（2）离心瓶容量 100ml 或具盖 10ml 离心管。
（3）分光光度计。
（4）水浴锅。
2 试剂实验用水为双蒸水；所用试剂为分析纯级。
（1）葡萄糖标准液：准确称取I.OOOOg经过98〜100 C干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后以水稀释至 1000ml ，此溶液 1ml 含 1mg 葡萄糖，用前稀释10倍（0.1mg/ml ），现用现配。
（2） 0.2%蒽酮硫酸溶液：称取0.2g蒽酮置于烧杯中，缓慢加入100ml浓硫酸（分析纯），溶解后呈黄色透明溶液，现用现配。
3 测定步骤（1）样品处理：准确称取样品 1〜2g 按上法用乙醇沉淀多糖，然后用热水分次溶解沉淀并稀释定容至 100〜250ml （使样液含糖量在 0.02〜 0.05mg/ml间）。
过滤，弃去初滤液即为待测液。
（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准液（ 0.1mg/ml ） 0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 于 10ml 具塞比色管中，加水至 1.0ml ，加入蒽酮试剂 5ml 充分混匀，在沸水浴中加热 10min ，取出在流水中冷却 20min后，在 620nm 波长下，以试剂空白调零，测定各管的吸收值绘制标准曲(3) 样品测定：准确吸取样品待测液10ml (含糖20〜80⑷)按标准曲线绘制步骤于 620nm 波长下测定吸光度值并求出样品含糖量。
4 结果计算：m1X= --------------- x F x n x 100%m x 1000式中X—样品中粗多糖含量(以葡萄糖计)(%)；m1 —由标准曲线查得样品液含糖质量( mg )；m —样品质量( g )；n —稀释倍数；F—换算因子。
换算因子的测定：准确称取被测物质的纯品 20mg 置 100ml 容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，吸取 0.2 〜0.4ml 于 10ml 具塞比色管中，加水至 1.0ml 按上法测定。
葡萄糖的蒽酮显色反应
利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反 应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色。
葡萄糖与DNS反应过程中，二硝基水杨酸（DNS）是显色剂
待测物稳定时，如何选择显色反应？
1显色剂 2反应条件
❖ 选择性好 ❖ 灵敏度足够高 ❖ 有色配合物的组成要恒定 ❖ 生成的有色配合物稳定性好 ❖ 色差大
• 知识点：葡萄糖蒽酮显色反应 • 情境六：糖类和脂类 • 任务三：葡萄糖含量的测定（蒽酮比色法）
• 课程：化学及生物物料的识用
蒽酮显色
葡萄糖在硫酸的作用下生成糠醛酮，糠醛酮与蒽酮作用生成一种 绿色的络合物
可见分光光度法是利用测量有色物质对某一单色光的吸收程度来进行定性定量的 ，本身无色或者浅色的物质对可见光不吸收或吸收不大
❖显色条件温和易于控制：反应时间 ，反应温度等
葡萄糖的显色反应
用吸量管吸取适量葡萄糖标准溶液，注入大试管中，依次加入蒽 酮试剂和浓硫酸,摇匀后,加热煮沸10min后，低温冷却。
显色剂
显色反应：将被测组分转变成有色化合物的化学反应。 显色剂：能与被测组分反应使之生成有色化合物的试剂。
葡萄糖与蒽酮反应过程中，有哪些试剂参与反应？ 它们的作用是什么？
实验一蒽酮比色定糖法
实验一：蒽酮比色定糖法一．实验目的：1.学习分光光度法的基本原理2.学习对蔬菜和食品中糖含量进行测定的方法二．实验原理1. 分光光度法基本原理：溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理——比尔定律。
2.朗伯-比尔定律A=lg(1/T)=KbcA：为吸光度,T：为透射比,是投射光强度比上入射光强度c：为吸光物质的浓度b：为吸收层厚度3.物理意义当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的西光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比.4.蒽酮比色法蒽铜比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
对于特定的糖类，反应较稳定。
本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。
三．实验试剂1. 制作标准曲线：（1）蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL 80%(V/V)硫酸中，当日配制使用；（2）标准葡萄糖溶液(0.1mg/mL)：(可滴加几滴甲苯作防腐剂)；（3）糖样品溶液。
四．实验操作步骤1.取干试管6支，依次加入标准糖溶液0，0.1，0.2，0.3mL,0.4ml，0.5ml,并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入蒽酮试剂4mL，沸水浴准确煮沸10 min，室温放置10min，用1号试管溶液调零，比色测定A620（同时测定样品）。
用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。
2. 样品含糖量测定：无蛋白糖溶液样品溶液稀释100倍，吸取1mL置试管中，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10分钟，取出后自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
实验二十一 可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）一、目的掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1 .仪器（ 1) 分光光度计(2 ）电子顶载天平(3 ）三角瓶： 50m1 X 1（ 4 ）大试管： 9 支（ 5) 试管架，试管夹（ 6 ）漏斗，漏斗架（ 7 ）容量瓶： 50rnl X 2（ 8 ）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1（ 9 ）水浴锅2 .试剂（ 1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml(2 ）浓硫酸(3) 蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用。
3 .材料小麦分蘖节。
四、操作步骤1 .葡萄糖标准曲线的制作取 7 支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2葡萄糖含量（ ug ）0 10 20 30 40 60 80在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。
以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。
2 .植物样品中可溶性糖的提取将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中，加沸水 25m1 ，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在 50m1 容量瓶中，定容至刻度。
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蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量
蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。
不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。
第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。
第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。
(二)试剂
(1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。
溶解后置水中冷却备用。
此液当天配制。
(2)2mol/L氢氧化钾溶液。
(3)3mol/L盐酸溶液
(5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。
溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。
(6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。
此液含糖为100μg/ml。
(三)测定步骤
1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为
2.0ml。
从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。
摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。
用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。
在分光光度计中,以640nm
2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。
精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。
离心液倒入干净试管中。
再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。
此液用干葡萄糖、果糖及蔗糖的测定(A液)。
以10ml3mol/L盐酸将离心管中沉淀物全部转移到容量瓶中,盖上玻塞,放在沸水浴中煮沸40～45min,取出冷却至室温,加3mol/L氢氧化钠溶液10ml中和其酸性,以蒸馏水定容至50ml,从中取2ml溶液,加蒸馏水至50ml,混匀。
此液用用淀粉的测定(B液)。
3.蔗糖的测定精确吸取样品液(A)10ml,加入2mol/L氢氧化钾溶液2ml,置沸水浴中煮沸10min。
取出迅速冷至室温,加蒸馏水稀释至50ml,摇匀。
精确吸取稀释液2ml至一干净试管中,按标准曲线绘制步骤加蒽酮试剂显色测定,得光密度值E蔗。
4.蔗糖的结果计算
从蔗糖工作曲线求得蔗糖量为S(μg),按下式计算样品中蔗糖百分含量。
式中:
S──待测样品液中蔗糖量(μg)
W──样品称重(g)
V1──用于测定的样品稀释液的体积(ml)
V2──用于分析的样品稀释液总体积(ml)
V3──样品液总体积(ml)
V4──用于氢氧化钾水解的样品液体积(ml)
5.葡萄糖、果糖的测定取样品液(A)10ml加蒸馏水至50ml,往两支干净试管中分别加入2ml 样品稀释液其中一支加蒽酮试剂6ml,摇匀,在沸水浴中煮沸5分钟,取出立即浸入自来水冷却至室温,在640nm下测定光密度E100。
另一支试管,加蒽酮试剂6ml,摇匀,在常温下显色5min,同上述操作测定光密度E常温。
由E常温查果糖工作曲线求得样品液果糖量为F(μg),按下式计算样品中果糖、葡萄糖含量。
6.果糖、葡萄糖的结果计算
由E100-E常温查葡萄糖工作曲线求得样品液中葡萄糖量为G(μg),按下式算葡萄糖百分含量。
7.淀粉测定取样品液(B液)2ml,再加6ml蒽酮试剂,摇匀,放在沸水浴中煮沸5min,取出,立入在冷水中冷却至室温,在640nm下测定光密度E淀粉,以E淀粉查葡萄糖式计算淀粉百分含量:
式中:
Y──查标准曲线得淀粉水解稀释测定液糖量(μg)
V0──-水解液总体积(ml)
W──样品称重(g)
V1──水解稀释液体积(ml)
0.9──换算糖为淀粉量
V2──用于稀释的样品液体积(ml)
V3──用于比色时样品稀释液体积(ml)。