中药学-中药制剂中各类化学成分分析PPT教学课件

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(二)生物碱的色谱鉴别 1．薄层色谱法 首先用适当的溶剂提取生物碱，提取液经浓缩 后直接或经过必要的净化后，点在薄层板上，层析后喷洒生物碱显 色剂，再根据生物碱的特性，选择特异的颜色反应或荧光，并应用 纯品对照，或标准药材对照，同时须作阴性对照后确定。如用硅胶 为吸附剂时，一般应用碱性系统展开剂较多，或使生物碱的薄层分 离在碱性环境下进行。
2021/01/21测定
(一)经典化学方法 1.重量法 重量法测定中药制剂中生物碱多为测定其总生物碱的 含量。本法可用于混合总碱、未知结构或分子量相差较大的生物碱 的含量测定。缺点是挥发性生物碱不宜用此法，在蒸发提取溶剂或 加热、干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可发生水解的生 物碱也不可用此法。本法取样量大，得到的残渣在称量的准确度内 方可应用。应用本法要求定量的将生物碱提取完全，并尽可能除去 杂质，须注意选择合适的提取溶剂。 实例 见P135 苦参片中苦参总碱的测定
(2)两相滴定法： 因边滴边使游离生物碱溶于有机溶剂中，不
致影响终点的观察。更重要的是由于游离生物碱进入有机相，明显
地增大了生物碱盐的电离常数pKa。生物碱盐在两相中的水解为
pKa(D)=pKa - log(1+PC)，即与分配系数有关。一般的测定方法是
称取生物碱盐类溶于水中(加氯化钠少许)，然后加一定量有机溶剂，
(2)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘碘化钾试剂数滴，产生棕色或褐色沉淀，
BH+ + I2-K+I- → BI2HI（棕、褐色） + K+
(3)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘化 铋钾、碘化汞钾试剂数滴，产生红棕色沉淀、类白色沉淀。
BH+ + BiI3KI → BBiI3HI（红棕色） + K+ 2B02H1/+01/2+1 HgI2KI → BHgI22HI（类白色） + K+ 第一课件网 1
用氢氧化钠标准溶液进行滴定，并不断搅拌振摇。常用的有机溶剂
有氯仿、乙醚等，以氯仿用的较多，常用的指示剂如酚酞。
如滴定剂选用酸性染料作为生物碱的两相滴定，则称之为酸性
染料滴定法。利用在一定的pH条件下，酸性染料能与生物碱结合而
定量地被有机溶剂提出，当滴定到达终点时，由于稍过量的酸性染
料，使水层产生颜色而指示终点。为了保证酸性染料与生物碱的结
W =（ A/ε）×M×V/1000 式中，M：生物碱雷氏盐沉淀的分子量，W：生物碱雷氏盐沉淀 的重量；A：吸收度；ε：克分子消光系数；V：丙酮毫升数。 本方法可不需要标准对照品，但需注意生物碱生成单盐或双盐， 并要注意样品的净化。
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(2)酸性染料比色法：在一定pH的介质中，生物碱B与氢离子H+ 结合成盐(BH+)，与某些酸性染料的阴离子In-结合成有色化合物 [BH+In-]，它能定量的被有机溶剂提取出来，此结合物碱化或酸化 后，即定量放出染料可进行比色，或测定该有色的有机溶液。
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(二)光谱法
(1)雷氏盐比色法：生物碱与雷氏盐生成沉淀后，将沉淀分离， 溶于丙酮，于520～526nm波长处比色测定吸收度，换算生物碱的含 量。经实验证明生物碱的雷氏盐沉淀的丙酮溶液所呈现的吸收特征， 是由于分子结构中的硫代氰酸铬铵部分，而不是结合的生物碱部分， 其吸收值与样品或溶剂无关。硫代氰酸铬铵在丙酮中的克分子吸收 系数为106.5(单盐)或213.0(双盐)。故可根据其吸收值A按下式直 接测得样品重而不需绘制标准曲线。
2．纸色谱法 多为薄层色谱所代替，利用多缓冲纸色谱来快速 鉴别乌头中双酯类生物碱和醇胺类生物碱有其独到之处。
3．高效液相色谱法 在恒定的高效液相色谱条件下，各种生物 碱都具有一定的保留时间，可作为定性鉴别的参数。一般要求取得 两个色谱系统的保留时间，或应用二级管阵列检测器作出鉴定。
4．气相色谱法 适用于具挥发性且过热不分解的生物碱分离和鉴 定，目前在应用上有一定的局限性。
此方法的关键：选择合适的pH、合适的酸性染料和合适的有 机溶剂。含有1个N原子的生物碱与酸性染料(溴酚蓝)生成分子1∶l 的结合物，与2个N原子的生物碱生成分子1∶2的结合物(pH应较低 pH3.0 ～5.8)。此外，应防止操作时混入水分。同时也须注意带入 水相中过量染料影响测定的结果。
2．容量法 (1)酸碱滴定法：
a.游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶于过量标准酸溶液中， 再用标准碱溶液回滴。
b.游离生物碱能溶于水或水-乙醇溶液中的可直接滴定。 c.生物碱盐在水或乙醇介质中，用强碱溶液滴定。一般使其溶于 90％乙202醇1/01溶/21 液中，可用标准碱乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。3
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(3)络合滴定法： 重金属盐类如碘化铋钾、碘化汞钾和碘化 镉钾等可使生物碱或其盐生成沉淀，将沉淀溶解，然后用络合滴定 剂直接滴定原来沉淀中的重金属；或者滤出沉淀，滴定滤液中剩余 的过量的重金属而求得生物碱含量。本测定方法手续繁琐，目前仅 应用于原料药材的生物碱含量测定，在中药制剂中应用较少。
(4)沉淀容量法： 利用多数生物碱与硅钨酸、雷氏盐、四苯 硼钠等试剂，生成沉淀，组成一定，直接或间接测定其含量。例如 生物碱或其盐类与一定量四苯硼钠溶液作用，过量的四苯硼钠用阳 离子表面活性剂如氯化十六烷基吡啶或氯化烃基二甲基苄基铵溶液 回滴过量的四苯硼钠，以溴酚蓝为指示剂，终点时多一滴以上季铵 盐溶液与溴酚蓝生成鲜蓝色络合物以指示终点，此方法亦多用于原 料药材的生物碱含量测定。
第一节 含生物碱类成分的分析
一、含生物碱类成分中药制剂的定性鉴别
(一)生物碱的沉淀反应 (1)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加硅钨 酸、磷钨酸、磷钼酸试剂数滴，生成（BH+）4[Si（W3O10）4]沉淀 （ 淡 黄 色 或 灰 白 色 ） 、 3BHPO412WO32H2O 沉 淀 （ 白 色 至 褐 色 ） 、 3BH3PO412MoO32H2O 沉淀（白色至黄褐色，加氨水转变为兰色）。
合，可在水层中加入缓冲溶液。
BH+ + In- → BHIn
本方法测定生物碱含量时，应注意选择合适的pH、合适的酸性
染料和合适的有机溶剂。
酸性染料现以溴酚蓝、溴麝香草酚蓝及溴甲酚绿应用较多。有机
溶剂应用最多的是氯仿，其次是苯和二氯乙烷。要求有机溶剂应对
生物碱202与1/01酸/21 性染料结合物有很好的溶解度。