无菌检查法验证方案

XXX无菌检验方法学验证方案

编号：VP.SV.039.00

目录

验证方案的审批

验证小组名单

验证实施进度

技术性文件

引言

1．概述

2．验证目的

3．职责

无菌检查方法学的确认

再验证周期

验证方案审批

验证小组名单

验证实施进度

技术性文件

引言

1.概述

1.1根据2010版《中华人民共和国药典》二部附录ⅪH规定，当建立药品的无菌检查方

法时，需进行方法学的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的检测。当药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检测方法应重新验证。

2.验证目的：

2.1根据2010版《中华人民共和国药典》二部附录ⅪH无菌检查方法要求，通过试验，

寻找合适的材料、条件和方法，最终确定氧氟沙星滴眼液的检验方法，并将其定为日常检测的正式方法。

3.职责

3.1验证办

3.1.1负责验证方案的审批。

3.1.2负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施。

3.1.3负责验证数据及结果的审核。

3.1.4负责验证报告的审核。

3.1.5负责再验证周期的确认。

3.2质量监控部

3.2.1负责验证所需的标准品、样品、试剂、试液等的准备。

3.2.2负责仪器、仪表、量具的校正。

3.2.3负责取样及样品检验。

3.2.4负责收集各项验证、试验记录，对结果进行分析，起草验证报告，报验证办。

3.2.5负责拟订验证方案。

3.2.6负责组织试验所需设备。

3.2.7负责按照验证方案里各项操作步骤进行操作。

3.2.8负责保证设备的正常运转。

无菌检查方法学的确认

1.验证环境、设备及实验前准备：

1.1无菌室内（无菌检查应在环境洁净度B级下的局部洁净度A级的单向流空气区域或

隔离操作器内完成。由QA人员定期按国家相关要求进行环境监控。

1.2仪器和设备：①GSP-9080MBE型隔水式电热恒温培养箱（上海博迅实业有限公司医疗

设备厂）；②生化培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；③AL204型电子天（梅

特勒—托利多仪器有限公司）；④GZX-9070MBE型电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实

业有限公司医疗设备厂）；⑤YXQ-LS-50SI型高压蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公

司医疗设备厂）；⑥HTY-2000A集菌仪、全封闭集菌培养器可重复使用集菌培养器（杭

州高得·泰林医疗器械有限公司）；⑦超净工作台(上海博迅实业有限公司医疗设备

厂)；。⑧微孔滤膜（孔径0.45µm直径50mm）…

1.3供试品：

1.4所需培养基：

1.4.1硫乙醇酸盐流体培养基（细菌培养）；批号：050104；灵敏度：应符合定

厂家：北京三药科技开发公司；

改良马丁培养基（真菌培养）；批号：050106 ；灵敏度：应符合规定

厂家：北京三药科技开发公司；

营养琼脂培养基（分离单个菌落及传菌种）；厂家：北京三药科技开发公司；

改良马丁琼脂培养基（培养真菌及传菌种）；厂家：北京三药科技开发公司；

1.5稀释液、缓冲液：

0.9%氯化钠溶液；PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 (配制方法参照chp2005附录—90页)

1.6验证用菌种：金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]；大肠埃希菌[CMCC（B）44 102]

生孢梭菌[CMCC（B）64 941]；枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]；黑曲霉[CMCC（F）

98 003]；白色念珠菌[CMCC（F）98 001]。（以上菌种均由湖北省药品检验所提供）1.7培养基的无菌检查：培养基配制好并采取验证合格的灭菌程序灭菌后随机取 5瓶

(管)，培养 14 天，结果应无菌生长。

2.方法学验证:

2.1简要方法说明：本品为喹诺酮类抗生素，通过抑制细菌的DNA旋转酶和DNA复制而发

挥作用。对革兰阳性菌、革兰阴性菌均有较强的抗菌作用。由于本品为液体眼用制剂，

且其组分中含强抑菌成分，故计划使用薄膜过滤法，以PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液

为冲洗液对本品进行方法学验证。

2.2检查方法：根据2010版《中华人民共和国药典》规定：凡供试品性状允许，应采用

薄膜过滤法。（检验量：10瓶；供试品用量：20ml ；培养基用量：100ml 2.3菌液的制备：（1）接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物

至100ml营养肉汤中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9%无菌氯化

钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法稀释，制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。

（2）接种白色念珠菌的新鲜培养物至100ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～

48小时，取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法稀释，

制成制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。菌悬液。。（3）接种黑曲霉的新鲜培养

物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3-5ml含0.05%（ml）

聚山梨80的酯0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，用管口带有薄的无菌棉花的无菌

吸管吸出菌液，用装有脱脂棉的小漏斗过滤，除去菌丝后收集菌悬液，用接种环取1

环至10ml 0.9%无菌氯化钠溶液混匀，取0.1ml接种至改良马丁琼脂培养基，23～28℃

培养72小时培养后制成制成每1ml含菌数小于100cfu的孢子悬液。（4）接种生孢梭

菌新鲜菌悬液用10倍递增稀释法接种至硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～

24小时，轻轻取此培养液，勿摇，观察培养基中悬挂的灯笼状菌落，计数，使菌数

制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。

2.4菌落计数，（结果见相关记录）

2.5取金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液各1 m1分别接种于营

养琼脂培养基中，生孢梭菌接种至含1．5％琼脂的硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～

35℃生化培养箱培养24～48 h，取白色念珠菌菌液、黑曲霉菌液各1 m1分别接种至

改良马丁琼脂培养基中，经23℃一28~C霉菌培养箱培养48～72 h，计数。(上述各

菌液分别接种两个平板，取平均值，同时设阴性对照)

2.6培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于

100cfu的金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，生孢梭菌，各2支，另1

支不接种作为空白对照，培养3天，取每管9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小

于100cfu的白色念球菌，黑曲霉各2支，另一支不接种作为空白对照，培养5天，

逐日观察结果。

2.7结果判断空白对照管应无菌生长，若加菌的培养管菌生长良好，判断该培养基

的灵敏度检查符合规定。

2.8供试液的制备：无菌操作，取供试品10瓶，注入无菌锥形瓶内混匀，取滴眼液原液