细菌染色和涂片观察方法
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细菌染色和涂片观察方法
2、 固定：
染色前必须先行固定。其目的在于凝固细胞质和 其它细胞结构成分而杀死细菌；使菌体粘附于玻 片上以及改变细菌对染料的通透性（因活菌通常 不易使染料透入细胞内）。
固定的方法一般采用火焰加热法，在特殊目 的时也可用冷冻干燥法或化学法如醇、酸、氯化 高汞、重金属盐或氧化剂等进行固定。
细菌染色和涂片观察方法
3）、革兰氏染色法的临床意义
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量较多，脂类较少， 与95%酒精接触后可迅速导致细胞壁脱水，通透性 降低，使在细菌细胞内着色的染料——结晶紫与碘 的复合物不易透出，所以保留了紫色。而革兰氏阴 性菌细胞壁含肽聚糖较少、脂类较多，与95%酒精 接触后肽聚糖脱水不明显，而脂类被酒精溶解后使 细胞壁通透性增加，酒精易透入菌体内溶解染料— —碘复合物并使其透出，因而使紫色被洗脱后又被 染成红色。
Gram’s Negative）表示。
细菌染色和涂片观察方法
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄 色葡萄球菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性链球菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性弧菌例子
细菌染色和涂片观察方法
（1）、革兰氏染色的方法：
细菌染色和涂片观察方法
固定—→初染—→媒染—→脱色
（结晶紫或龙胆紫）
（ 卢戈氏碘液）
（95%酒精）
—→复 染 （稀释复红）
细菌染色和涂片观察方法
固定 初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP”
（Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN”（
细菌染色和涂片观察方法
（二）、复染色法：
复染色法是用二种以上染料进行染色的方 法。此法除显示细菌的形态、大小外，还 有鉴别细菌种类的价值，因此也称鉴别染 色法。常用的鉴别染色法有革兰氏染色法 及抗酸染色法。
细菌染色和涂片观察方法
1、 革兰氏染色法（Gram’s Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是 由丹麦细菌学家 Christian Gram氏于1882 ～1884年发明的，至今已逾百年，仍在广 泛使用，是细菌学中最为经典的染色方法 。
→ （脱色）→（复染）
细菌染色和涂片观察方法
1、 涂片制备：
随标本的种类而略有不同。一般临床标本大多可 直接涂抹于洁净载玻片上；培养的细菌，若为液 体培养液，亦可直接涂于载玻片上；若为固体培 养基上的细菌，则先取一接种环生理盐水于载玻 片中央，然后从培养基上取菌少许，在盐水中研 磨均匀，使呈轻度乳浊，以接种环扩成1cm2或2 份硬币大小的涂面，在室温下自然干燥或放在火 焰上方的热空气中慢慢烘干。但切忌紧靠火焰烤 干。
细菌染色和涂片观察方法
第二节 染色标本检查法
所谓染色标本检查法是用特殊的手段对细 菌进行染色，而后再检查其形态、大小、 排列方式、染色反应以及特殊结构的一种 检查方法,有助于细菌的初步识别或诊断。
细菌染色和涂片观察方法
细菌染色的一般程序
细菌染色的基本程序是： 涂片 → 固定 → （媒染）→ 染色
4、 染色：
随目的而选用适宜的染液。染色时，滴加 染液以覆盖涂面为度，染色时间随方法而 定。单染法只用一种染料如吕氏美兰、稀 释石炭酸复红等；而多数染色法需用第二 种染液进行复染。
细菌染色和涂片观察方法
5、 脱色：
脱色：是使被染物脱去已染上的颜色。脱色的目 的是观察细菌பைடு நூலகம்染料结合的稳定程度，故可作为 鉴别染色之用。
细菌染色和涂片观察方法
常用染色法
细菌的常用染色法有：单染色法、复染色 法、特殊结构染色法、负染色法以及荧光 染色法等。
细菌染色和涂片观察方法
（一）、单染色法：
单染色法是指用一种染料进行染色的方法 。如用美兰或稀释石炭酸复红等，使各种 细菌均染成同一种单一的颜色。故此法只 能显示细菌的形态及大小，对细菌的鉴别 价值不大。
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性产芽孢杆菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特 菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性弯曲菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性棒状杆菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件、操 作技术及菌龄等有密切的关系。 培养基成分：在缺乏镁盐的培养基中，革兰氏阳 性菌可变为革兰氏阴性菌。 培养条件：在酸性环境中细菌带正电荷。 操作技术：如涂片太厚影响酒精脱色，革兰氏阴 性菌则可染成革兰氏阳性菌；脱色时倘酒精作用 时间太长，革兰氏阳性菌又会染成革兰氏阴性菌。 菌龄：菌龄也能影响染色的结果，这和细菌生长 过程中核酸含量的改变有关。例如本是革兰氏阳 性的老龄菌，因核酸减少则常有许多菌细胞变为 革兰氏阴性。
细菌染色和涂片观察方法
3、 媒染：
媒染的目的是增加染料和被染物的亲和力。凡使 染料固定于被染物；或引起细胞膜通透性改变的 物质统称为媒染剂。常用的媒染剂有明矾、苦味 酸、金属盐、碘等。也可用加热法媒染。媒染剂 可用于固定之后，亦可含于固定液或染液中，也 可在初染之后复染之前进行。
细菌染色和涂片观察方法
细菌的染色和涂片观察
细菌染色和涂片观察方法
第一节 不染色标本检查法
所谓不染色标本检查法是将细菌标本不经 染色直接镜检，从而观察生活状态下细菌 的形态及运动状况的一种检查方法。这种 检查方法虽可看到细菌的大致轮廓，但主 要用于观察细菌的动力。
细菌染色和涂片观察方法
一、不染色标本检查法的具体方法
1 、压滴法 2、悬滴法 3、毛细管法
凡具有脱色作用的化学试剂称脱色剂。脱色剂或 呈溶媒作用，如醇类、丙酮等；或能影响蛋白质 的电离程度，改变其电荷性质或数量，因而影响 细菌与染料的结合程度，如酸类能减少细菌的负 电荷，故可作碱性染料的脱色剂。
细菌染色和涂片观察方法
6、 复染：
已经脱色处理的细胞或其结构常以复染液作复染 以便于观察。复染液与初染液的颜色不同而成鲜 明对比，所以复染也称为对比染色。复染液不宜 太强，以免掩盖初染的颜色而失去对比作用。
2、 固定：
染色前必须先行固定。其目的在于凝固细胞质和 其它细胞结构成分而杀死细菌；使菌体粘附于玻 片上以及改变细菌对染料的通透性（因活菌通常 不易使染料透入细胞内）。
固定的方法一般采用火焰加热法，在特殊目 的时也可用冷冻干燥法或化学法如醇、酸、氯化 高汞、重金属盐或氧化剂等进行固定。
细菌染色和涂片观察方法
3）、革兰氏染色法的临床意义
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量较多，脂类较少， 与95%酒精接触后可迅速导致细胞壁脱水，通透性 降低，使在细菌细胞内着色的染料——结晶紫与碘 的复合物不易透出，所以保留了紫色。而革兰氏阴 性菌细胞壁含肽聚糖较少、脂类较多，与95%酒精 接触后肽聚糖脱水不明显，而脂类被酒精溶解后使 细胞壁通透性增加，酒精易透入菌体内溶解染料— —碘复合物并使其透出，因而使紫色被洗脱后又被 染成红色。
Gram’s Negative）表示。
细菌染色和涂片观察方法
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄 色葡萄球菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性链球菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性弧菌例子
细菌染色和涂片观察方法
（1）、革兰氏染色的方法：
细菌染色和涂片观察方法
固定—→初染—→媒染—→脱色
（结晶紫或龙胆紫）
（ 卢戈氏碘液）
（95%酒精）
—→复 染 （稀释复红）
细菌染色和涂片观察方法
固定 初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP”
（Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN”（
细菌染色和涂片观察方法
（二）、复染色法：
复染色法是用二种以上染料进行染色的方 法。此法除显示细菌的形态、大小外，还 有鉴别细菌种类的价值，因此也称鉴别染 色法。常用的鉴别染色法有革兰氏染色法 及抗酸染色法。
细菌染色和涂片观察方法
1、 革兰氏染色法（Gram’s Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是 由丹麦细菌学家 Christian Gram氏于1882 ～1884年发明的，至今已逾百年，仍在广 泛使用，是细菌学中最为经典的染色方法 。
→ （脱色）→（复染）
细菌染色和涂片观察方法
1、 涂片制备：
随标本的种类而略有不同。一般临床标本大多可 直接涂抹于洁净载玻片上；培养的细菌，若为液 体培养液，亦可直接涂于载玻片上；若为固体培 养基上的细菌，则先取一接种环生理盐水于载玻 片中央，然后从培养基上取菌少许，在盐水中研 磨均匀，使呈轻度乳浊，以接种环扩成1cm2或2 份硬币大小的涂面，在室温下自然干燥或放在火 焰上方的热空气中慢慢烘干。但切忌紧靠火焰烤 干。
细菌染色和涂片观察方法
第二节 染色标本检查法
所谓染色标本检查法是用特殊的手段对细 菌进行染色，而后再检查其形态、大小、 排列方式、染色反应以及特殊结构的一种 检查方法,有助于细菌的初步识别或诊断。
细菌染色和涂片观察方法
细菌染色的一般程序
细菌染色的基本程序是： 涂片 → 固定 → （媒染）→ 染色
4、 染色：
随目的而选用适宜的染液。染色时，滴加 染液以覆盖涂面为度，染色时间随方法而 定。单染法只用一种染料如吕氏美兰、稀 释石炭酸复红等；而多数染色法需用第二 种染液进行复染。
细菌染色和涂片观察方法
5、 脱色：
脱色：是使被染物脱去已染上的颜色。脱色的目 的是观察细菌பைடு நூலகம்染料结合的稳定程度，故可作为 鉴别染色之用。
细菌染色和涂片观察方法
常用染色法
细菌的常用染色法有：单染色法、复染色 法、特殊结构染色法、负染色法以及荧光 染色法等。
细菌染色和涂片观察方法
（一）、单染色法：
单染色法是指用一种染料进行染色的方法 。如用美兰或稀释石炭酸复红等，使各种 细菌均染成同一种单一的颜色。故此法只 能显示细菌的形态及大小，对细菌的鉴别 价值不大。
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性产芽孢杆菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特 菌 x 1000)
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阴性弯曲菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏阳性棒状杆菌例子
细菌染色和涂片观察方法
革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件、操 作技术及菌龄等有密切的关系。 培养基成分：在缺乏镁盐的培养基中，革兰氏阳 性菌可变为革兰氏阴性菌。 培养条件：在酸性环境中细菌带正电荷。 操作技术：如涂片太厚影响酒精脱色，革兰氏阴 性菌则可染成革兰氏阳性菌；脱色时倘酒精作用 时间太长，革兰氏阳性菌又会染成革兰氏阴性菌。 菌龄：菌龄也能影响染色的结果，这和细菌生长 过程中核酸含量的改变有关。例如本是革兰氏阳 性的老龄菌，因核酸减少则常有许多菌细胞变为 革兰氏阴性。
细菌染色和涂片观察方法
3、 媒染：
媒染的目的是增加染料和被染物的亲和力。凡使 染料固定于被染物；或引起细胞膜通透性改变的 物质统称为媒染剂。常用的媒染剂有明矾、苦味 酸、金属盐、碘等。也可用加热法媒染。媒染剂 可用于固定之后，亦可含于固定液或染液中，也 可在初染之后复染之前进行。
细菌染色和涂片观察方法
细菌的染色和涂片观察
细菌染色和涂片观察方法
第一节 不染色标本检查法
所谓不染色标本检查法是将细菌标本不经 染色直接镜检，从而观察生活状态下细菌 的形态及运动状况的一种检查方法。这种 检查方法虽可看到细菌的大致轮廓，但主 要用于观察细菌的动力。
细菌染色和涂片观察方法
一、不染色标本检查法的具体方法
1 、压滴法 2、悬滴法 3、毛细管法
凡具有脱色作用的化学试剂称脱色剂。脱色剂或 呈溶媒作用，如醇类、丙酮等；或能影响蛋白质 的电离程度，改变其电荷性质或数量，因而影响 细菌与染料的结合程度，如酸类能减少细菌的负 电荷，故可作碱性染料的脱色剂。
细菌染色和涂片观察方法
6、 复染：
已经脱色处理的细胞或其结构常以复染液作复染 以便于观察。复染液与初染液的颜色不同而成鲜 明对比，所以复染也称为对比染色。复染液不宜 太强，以免掩盖初染的颜色而失去对比作用。