枸杞子多糖含量的测定实验报告
枸杞多糖测定
枸杞多糖测定稀释至刻度，备用。
2.6 样品中多糖的测定吸取适量样品液，加蒸馏水至2 ml，按标准曲线下的方法测吸光度A为0.2343，查标准曲线得样品液中葡萄糖含量4.69（μg/ml）。
2.7 结果计算多糖含量%=p?D?F?100 m式中：p：样液葡萄糖浓度（μg/ml）；D：样品液稀释因素；F：换算因素；m：样品质量（μg）。
测量结果代入得：多糖含量%=12.51%3 实验讨论（1）苯酚-硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸杞多糖成分在H2SO4的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，再用分光光度法测定其枸杞多糖含量。
本法操作简单，显色稳定，灵敏度高，重现性好，可作为枸杞及其它多糖含量的测定方法。
（2）枸杞子水提物中含有单糖、低聚糖等杂质, 且呈红色, 因此在测定之前要先用乙醇除去单糖、低聚糖等杂质并以丙酮-石油醚脱脂脱色, 才不至于对测定产生干扰。
（3）试验中发现，浓硫酸的加入方式对实验的结果影响较大，采取移液管悬空，垂直加入浓硫酸，立即摇匀的方式，显色反应充分，且显色结果稳定。
（4）各种单糖的标准曲线均只在0～30 μg含量范围内呈较好的线形关系，因此制作标准曲线时，单糖浓度不宜太大。
（5）本法采用精制的枸杞多糖作为对照品，计算出枸杞多糖与葡萄糖的换算因子，再乘以用硫酸-苯酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量，这样可避免直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差，结果更准确。
(6) 多糖提取工艺以及分离、纯化方法决定了产品的纯度, 另外枸杞子产地的不同也可能对研究结果有影响。
由于目前市场枸杞多糖产品主要作为保健产品,需较高的收率和较低的成本。
而采用乙醇沉淀法提取的枸杞多糖含量较高,收率可达8%左右,并且乙醇可回收,既使成本进一步降低,又减少了对环境的污染，且取得了很好的经济效益。
本实验所测得枸杞含糖量高，实验材料为上好的宁夏枸杞。
枸杞多糖的提取与含量测定
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实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机（大）、离心机（小）、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
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实验数据记录与处理
标准曲线的绘制
以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。
即可得到如下标准曲线。
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实验数据记录与处理
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实验数据记录与处理
枸杞多糖的含量测定
根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。
样液1含0.02367mg枸杞多糖， 样液2含0.04735mg枸杞多糖。
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实验内容
标准曲线的绘制
取干燥试管6 支，按下表数据配置一系列不同浓度的葡萄糖溶液 。
在620nm波长下以第一管为空白试验，迅速测量吸光值，以葡 萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线。
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实验内容
枸杞多糖的含量测定
精密称定20mg 多糖粗品，溶于50ml 蒸馏水中，制成样品液。 分别吸取0.5ml，1ml 多糖溶液至试管中，加蒸馏水至总体积为 1ml。冰浴中冷却，再加入4ml 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min ，取出后自来水冷却，620nm 比色，其他条件与作标准曲线同 。测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。
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实验内容
枸杞子中多糖含量的测定(1)
枸杞子中多糖含量的测定柳婷，胡浩斌(陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000)摘要：本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。
先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。
多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。
用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量，本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。
关键词:枸杞子；多糖；紫外分光光度计Detection of Polysaccharide in Lycium barbarumLiu Ting, Hu Hao-Bin(College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility.Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry枸杞子（Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物，性状呈类纺锤形，略扁，长6～21 mm,直径3～10 mm。
关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析
关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析关于不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析摘要：不同枸杞当中多糖含量存在着较大的区别，以此可作为枸杞品质鉴别参考。
本研究通过相关实验提取方法对枸杞多糖进行了提取，取得了一定的成果，供以参考。
关键词：枸杞;多糖;含量作为一种常见的中药药材枸杞不仅仅能够药用，同时具有良好的保健成效。
它具有补肾保肝、抗脂肪肝、抗疲劳、抗肿瘤、延缓衰老等作用。
不同产地、批次枸杞在组分含量上有着一定的区别，特别的在多糖含量上存在着较大的差异。
枸杞对免疫功能有着显著的影响，可让巨噬细胞的吞噬功能得以提升，同时能够让血清当中溶菌酶作用得以增强，由此可促进抗绵羊红细胞抗体效价上升【1】。
枸杞提取物具有较好的降血糖效果且持续性较长、毒性较小，可促进机体的糖耐量提升。
在相关研究中发现实验大鼠食用枸杞当中的甜菜碱可促进磷脂水平提升，胆固醇呈降低太，对碱性磷酸脂酶、胆碱酯酶等都有明显的改善作用【2】。
另外枸杞具有抗癌成效，可对癌细胞DNA合成产生抑制作用并对有丝分裂产生显著的干扰作用，从而降低癌细胞的实际生殖能力。
从产地来看目前我国优质的枸杞大局部来自宁夏，在相关研究中也证实宁夏地区及周边产地枸杞多糖含量较其他地区更高，这也表达了不同地域环境下枸杞果实的差异。
本研究通过相关实验对不同类别的枸杞进行了鉴定，并以多糖含量对枸杞的品质进行了分析。
一、实验样品、器材及试剂实验样品：市场上的交易的不同批次的宁夏枸杞。
实验试剂：苯酚、碳酸氢钠、石油醚、乙醚、乙醇、丙酮等，上述试剂均为分析纯，基准试剂为葡糖糖溶液。
实验仪器：紫外分光管度计、旋转蒸发仪、电子分析天平、恒温枯燥箱、水浴锅等。
二、实验方法先制备苯酚试剂，用分析天平准确称取100g苯酚、0.05g碳酸氢钠以及0.01g铝，三者均至于圆底烧瓶当中，加热蒸馏，蒸馏温度控制在180摄氏度左右，冷却后将馏分提出，并用蒸馏水溶解，密封保存。
然后制备标准曲线，先配置标准葡萄糖溶液，取枯燥后葡萄糖0.1006g置入100ml容量瓶配制标准也。
枸杞中枸杞多糖含量的测定
枸杞中枸杞多糖含量的测定一、实验内容用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖的含量。
二、实验目的与要求(1)掌握用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖含量的原理及方法。
(2)熟练掌握分光光度计的原理及使用方法。
三、实验原理用80%乙醇溶液提取以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰性成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分。
多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。
四、试剂80%乙醇溶液：用95%乙醇或无水乙醇加适量蒸馈水配制。
硫酸。
苯酚液：取苯酚100g，加铝片O.lg与碳酸氢钠0.05g，蒸馏收集1721馏分，称取此馏分10g，加水150mL，置于棕色瓶中即得。
葡萄糖标准溶液：精密称取105T：干燥至恒重的标准葡萄糖O.lOOOg，加水溶解并定容至lOOOmL即得。
五、仪器)实验室用样品粉碎机、分光光度计、电热恒温水浴。
六、操作步骤1-样品处理精密称取样品粉末0.4g (精确到0.000lg)置于圆底烧瓶中，加80%乙醇溶液 200ml回流提取lh，趁热过滤，残渣用80%热乙醇溶液洗涤（约10mL x 10次），残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水l00ml，加热提取1h，趁热过滤，残渣用热蒸馏水充分洗涤（约lOmLxl0次），洗液并入滤液，冷却后移入250mL容量瓶中，用水定容，待Ho2•标准曲线的绘制 %精密吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1-OmL 中，各加蒸馏水使体积为2. OmL，再各加苯酚液l.OmL，摇匀，迅速滴加硫酸5.0mL,摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出冷却至室温;另以蒸馏水 2mL，加苯酚和硫酸，同上操作为空白对照。
于490nm处测定吸光度，绘制标淮曲线。
3.试样的测定准确吸取待测液一定量（视待测液含量而定），加蒸馏水至2niL,以下操作按标准曲线绘制下的方法测定吸光度，根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量。
枸杞子中多糖含量的测定(1)
枸杞子中多糖含量的测定柳婷，胡浩斌(陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000)摘要：本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。
先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。
多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。
用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量，本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。
关键词:枸杞子；多糖；紫外分光光度计Detection of Polysaccharide in Lycium barbarumLiu Ting, Hu Hao-Bin(College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility.Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry枸杞子（Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物，性状呈类纺锤形，略扁，长6～21 mm,直径3～10 mm。
枸杞多糖的测定
枸杞多糖的测定一、实验原理：用80%乙醇溶液提取以除去单糖，低聚糖等干扰成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分，多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度计法于适当波长处测其多糖。
二、仪器设备:可见光分光光度计，电炉，烘箱，回流装置，蒸馏装置等三、试剂配制：1.葡萄糖标准溶液:称取0.1g(精确到0.1000)105度混干恒重的样品，溶解后转移到1000ml容量瓶中，定容。
2.苯酚液：称取苯酚100g,铝片0.1g 碳酸氢钠0.05g与蒸馏瓶中，收集172度六份，称取溜出液10g 加入150ml蒸馏水。
四、实验步骤：1.样品的制备：称取0.4g样品用80%乙醇回流反应一个小时后，过滤，用热乙醇冲洗后用收集残渣，加蒸馏水100ml回流一小时后过滤收集滤液，转移至250ml 容量瓶中定容。
2.标准曲线的绘制：吸取配置好的葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml于试管中，加蒸馏水至2ml，加入苯酚液1ml，迅速加入硫酸5m后水浴锅煮沸15min。
等冷却后495纳米处测定吸光度。
另吸取2ml蒸馏水做空白试验。
3.试样的测定：吸取一定量的样品溶液，按标准曲线溶液方法配制后测吸光度。
五、测定结果的记录及计算：1.标准曲线的制定：葡萄糖标准液吸光度2.试样的检测：样品吸光光度值代入公式得x=59.6计算公式：W=(ρ×250×∫(3.19)/m×v×106)×100=19.8% (ρ:显色中葡萄糖的含量，单位为μg。
)检测结果：粗多糖含量为19.8%。
枸杞提取多糖实习报告
中药提取分析实习报告XX 学院班级：XXX姓名：XXXXXX年XX月XX日中药提取分析实习报告指导教师：XXX一﹑实习的目的和意义研究枸杞中多糖含量的提取及测定，通过单因素试验的分析，筛选出正交试验对枸杞中多糖含量提取影响显著的因素与水平。
结果在分析各个因素的显著性和交互作用后，得出水浴法提取枸杞多糖提取的最佳工艺为：提取温度90℃；提取时间30min;料液比1:30。
枸杞多糖的实际提取率可达8.83%。
在试验的过程中，我们对具体的操作方法更加规X、熟练、且掌握了其技巧。
我们分工明确，在保证试验质量的前提下也大大提高了速度，与同学之间的配合更加默契。
二、实习时间及地点时间：XXXX年XX月X日---XXXX年XX月X日地点：XXX三、实习内容1、材料与方法（1）材料：枸杞水浴锅回流装置电子天平烧杯滴定管100ml容量瓶50ml容量瓶量筒移液管离心管离心机具塞试管洗耳球722型分光光度计比色皿水乙醇苯酚浓硫酸冰块等（2）方法：回流提取法2、实验内容（1）对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品60mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得（每1ml中含无水葡萄糖0.6mg）（2）标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，分别置5ml量瓶中加水至刻度，摇匀，精密量取上述各溶液2ml，置具塞试管中，分别加4%苯酚溶液1ml,混匀，迅速加硫酸7ml，摇匀于40℃水浴锅中保温30min,取出置冰水浴中5min。
取出以相应试剂为空白对照，紫外—可见分光光度法，在490nm波长处测A（吸光度），以A为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
结果：吸光度分别为：0.289、0.320、0.354、0.389、0.415 浓度分别为：0.012、0.018、0.024、0.030、0.036方程：（3）测定法：精量枸杞粗粉约1g，置圆底烧瓶中加水100ml，加热回流1h，用脱脂棉滤过，如上重复1次，两滤液合并，浓缩，移置100ml量瓶中，定容，摇匀。
枸杞多糖测定实验报告
一、实验目的1. 掌握枸杞多糖提取的基本原理和方法；2. 学习使用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量的操作步骤；3. 分析实验数据，评估枸杞多糖的含量。
二、实验原理枸杞多糖是一种生物活性物质，具有多种生物功能，如抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等。
本实验采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量，其原理是：在酸性条件下，多糖与苯酚反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与多糖含量成正比。
三、实验材料1. 材料与试剂：枸杞子、苯酚、硫酸、葡萄糖标准品、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、离心机、研钵等。
四、实验方法1. 枸杞多糖提取（1）将枸杞子洗净，晾干，研磨成粉末；（2）称取一定量的枸杞子粉末，加入适量蒸馏水，煮沸提取；（3）提取液过滤，取滤液备用。
2. 标准曲线制备（1）精密称取一定量的葡萄糖标准品，配制成不同浓度的溶液；（2）按照苯酚-硫酸法测定吸光度，以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 枸杞多糖含量测定（1）取一定量的枸杞多糖提取液，按照苯酚-硫酸法测定吸光度；（2）根据标准曲线，计算枸杞多糖的含量。
五、实验结果1. 标准曲线制备根据实验数据，绘制标准曲线，得出回归方程为：y = 0.0018x + 0.0016，相关系数R² = 0.9988。
2. 枸杞多糖含量测定取一定量的枸杞多糖提取液，测定吸光度为0.521，根据标准曲线计算枸杞多糖含量为1.24mg/mL。
六、实验讨论1. 本实验采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量，操作简便，结果准确可靠。
2. 在实验过程中，要注意控制提取条件，以确保提取液的纯度和含量。
3. 标准曲线的绘制是本实验的关键环节，应严格控制实验条件，保证标准曲线的准确性和可靠性。
4. 本实验结果初步表明，枸杞中含有较高的多糖含量，具有一定的生物活性。
七、实验结论本实验成功提取了枸杞多糖，并采用苯酚-硫酸法测定了枸杞多糖含量。
实验结果表明，枸杞中含有较高的多糖含量，具有潜在的开发价值。
枸杞多糖
1 前言2 实验目的3 实验原理3.1枸杞多糖提取原理萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。
通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。
它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。
经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。
萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。
在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。
多糖类化合物的溶剂提取，溶剂的选择是根据原料中被提成分，即多糖类化合物的极性、共存杂质的理化特性，遵循相似相溶的原则，使有效成分从原料固体表面或组织内部向溶剂中转移的传质过程。
一般而言，分子的极性依据活性基团的种类和数目、分子的缔合程度大小进行判断，分子中含有羟基或羧基基团越多，极性就越大，亲水性就越强；反之极性就越小，亲脂性越强。
要把存在于植物细胞中各种水溶性多糖完全地提取出来,一般要求将试样尽可能地粉碎。
根据枸杞果实细胞的特点及其含有大量的还原糖(40%～50%)不宜粉碎等情况,采用了机械成浆或剪碎成细粒后再行提取。
3.2脱蛋白常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevage法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀。
从资料知，枸杞子水溶性蛋白质为1.54%，这些蛋白质无论是游离态或以糖肽结合态进入热水中，在沉淀多糖的浓乙醇溶液中均被沉淀下来。
为了除去能与多糖一起沉淀的游离蛋白质，许多人在提取分离流程中采用了Sevage法脱蛋白质手续。
Sevage方法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。
Sevage法：利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与Sevage试剂[氯仿：正丁醇=5：1（V/V）]5：1 混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与Sevage 试剂交界处。
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量摘要:目的：提供一种测定枸杞制品中功效成分多糖的方法，同时合理筛选枸杞品种。
方法：运用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定3种枸杞品种中多糖的含量。
结果：宁夏枸杞中的多糖含量为4.01%，新疆枸杞中的多糖含量为3.85%，青海枸杞中的多糖含量为4.01%；同时发现使用紫外分光光度法测定精密度好、重复性好、方法简便。
结论：宁夏枸杞中多糖含量明显高于新疆枸杞和青海枸杞，差异达到显著水平；紫外分光光度法是一种测定枸杞多糖质量分数的理想方法，亦可为其它类多糖质量分数的测定提供依据。
关键词：苯酚-硫酸；紫外分光光度法；枸杞；多糖枸杞(Lycium Barbrum L.)属茄科枸杞，为落叶灌木植物干燥成熟果实。
近年的医学研究表明，枸杞含有多种营养成分和微量元素，其有效成分枸杞多糖(LBP)具有广泛的药理学作用，可促进造血、降血脂、保肝及治疗神经衰弱等。
枸杞多糖(LBP)是由多个单糖或衍生物聚合而成的大分子活性化合物，是枸杞生物学作用的主要有效成分之一，其结构按LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ、LBP-Ⅳ的顺序水溶性依次递减，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。
枸杞多糖对机体具有非特异性免疫调解功能，可调节机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老、提高适应能力，并具有抗疲劳和加速消除疲劳的作用，已成为保健食品中的一种重要功能性添加剂，显示出良好的应用前景。
为了进一步开发新疆黑枸杞的药用价值，本文采用紫外分光光度法测定了几种枸杞叶中的多糖含量。
1 材料与方法1.1 原理多糖在80%乙醇溶液中沉淀，与单糖和低聚糖及甙类物质分离。
沉淀用水溶解后，再用碱性二阶铜试剂选择性地从其它高分子物质中沉淀出具有葡聚糖结构的多糖。
苯酚-硫酸可与其中的多糖起显色反应，生成橙黄色化合物，可于485nm 处比色，定量。
1.2 材料与仪器TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用)、岛津CS-9301PC薄层扫描仪、定量毛细管(美国Dummond)、手动点样仪(CAMAGIII型)、硅胶G(青岛海洋化工集团公司)自制板；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所生产，批号110833200302)；试剂：所用试剂均为分析纯。
新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定
新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定库尔班江（伊犁师范学院化学与生物科学学院，新疆伊宁835000）摘要：对新疆枸杞子进行多糖的提取及含量测定. 用水提醇沉法从新疆枸杞子中提取水溶性多糖，通过苯酚-硫酸比色法在490n m波长处测定多糖含量. 提取过程中通过单因素试验分析了乙醇浓度、浸提温度、料液比及浸提时间等因素对多糖提取率的影响. 在单因素试验的基础上，通过正交设计法优化新疆枸杞子中多糖提取工艺条件，确定了多糖的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度为80％、浸提温度为90℃、料液比为l∶50、浸提时间为2.5h、浸提次数为3次. 在此条件下，回归方程A = 6.8316C + 0.03 ，R=0.9993，葡萄糖在7～49μg/m L范围内，呈良好的线性关系，f因子为3.79（RSD=1.24%，n=3），多糖含量为7.37%（R SD=0.38%，n=3），回收率为中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673—999X（2014）03—0043—05枸杞子（Fructus Lycii）为茄科（Solanaceae）植物枸杞（Lycium chinense Mill.）的成熟果实，是我国传统的滋补中药材. 新疆枸杞为灌木，高1.5 米，多分枝，枝条坚硬，呈淡黄色或淡灰色，具条纹老枝有长0.6～6 厘米的硬棘刺，棘刺无叶或生叶和花. 新疆枸杞主要分布在海拔1200～2700 米的天山山前荒漠、河谷、山地草原、干山坡，伊犁地区主要分布在霍城县. 我国甘肃、宁夏、青海等省区，中亚地区也有分布[1].枸杞子含有钙、粗纤维、碳水化合物、磷、铁、粗脂肪、抗坏血酸、粗蛋白、尼克酸、甜菜碱、维生素B1、维生素B2、维生素C、硫氨酸、核磺酸、胡萝卜素等[2]，还含有丰富的钾、钠、钙、镁、铁、铜、锰、锌等元素以及22 种氨基酸[3]. 枸杞子多糖是一种糖和蛋白质结合的糖蛋白高分子聚合体，其中糖量占糖蛋白总量的70%，主要含有木糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖和鼠李糖6 种单糖[4].《本草纲目》中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气之不足、明目安神、令人长寿等功效[2]. 近年来研究发现，植物多糖具有抗肿瘤、增强机体免疫力等功效，已是当前国内外研究的热点[5～7]. 人们对枸杞子多糖的研究发现，枸杞子多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧、滋补肝肾、益精明目等功效[8～11]. 目前已有不少研究报道枸杞子多糖具有抗癌[11]、增强免疫力[12]、降血糖[13]、防衰老、抑制肿瘤生长和细胞突变等作用[14]. 多糖应用前景广阔，开发和研究多糖不仅有重要的理论和经济价值，还具有非常显著的社会效益.多糖是来自于高等植物、动物细胞膜、微生物的细胞壁中的天然大分子物质，是所有生命有机体的重要组成成分与维持生命所必需的营养物质. 目前，国际上对多糖的研究以日本、美国、加拿大、德国处于领先地位. 我国对多糖的研究起步较晚，但近年来发展非常迅猛. 其研究对象包括真菌类、植物类、动物类、地衣类等，见诸报道的主要以微生物多糖和植物多糖为主，动物多糖较少[15]. 关于枸杞子的研究，对宁夏、甘肃等地的枸杞子的研究文献报道较多，但对于新疆枸杞子的研究文献报道收稿日期：2014-05-21作者简介：库尔班江（1962—），男（维吾尔族），新疆伊宁人，教授，研究方向为中药与天然药物.伊犁师范学院学报（自然科学版）2014 年44很少. 本文对新疆枸杞子的多糖提取和含量测定进行研究，为新疆枸杞子多糖的深入研究及枸杞子资源更好地开发应用提供依据.1 仪器与试药1.1 仪器7230G 可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；RE-52 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；精细鼓风干燥箱（旋都凯仪器设备有限公司）；DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器（上海羌强仪器设备有限公司）；QE-10A 型500 克装高速中药粉碎机（武义县屹立工具有限公司）；JD-2003 电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）.1.2试药枸杞子于2009 年11 月22 日采自新疆精河县，并通过我院有关专家鉴定为茄科（Solanaceae）植物枸杞（Lycium chinense Mill.）的成熟干燥果实.葡萄糖（A.R.，天津市天新精细化工开发中心）；苯酚（A.R.，天津市化学试剂三厂）；浓硫酸（A.R.，乌鲁木齐迪城化工有限公司）；无水乙醇（A.R.，成都市科龙化工试剂厂）；茚三酮（A.R.，天津市科密欧化学试剂开发中心）.2 方法与结果2.1 溶液的配制2.1.1 5%苯酚溶液的配制精确称取苯酚100g ，加0.1g 铝片和0.05g NaHCO3，蒸馏收集186℃时的馏分，精密称取5g 溶液移至100mL 容量瓶中定容，置棕色瓶中避光保存备用.2.1.2 葡萄糖标准溶液的配制精密称取真空干燥至恒重的葡萄糖7mg，溶解至100mL 容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，备用.2.2 枸杞子多糖的提取及纯化精密称取枸杞子样品20.00g 至250mL 容量瓶中，加160mL 蒸馏水，90℃水浴提取2h，过滤，提取液静置12h 后，减压浓缩，浓缩液以无水乙醇调制使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，得沉淀物为枸杞子多糖粗品，分别以无水乙醇、丙酮、乙醚回流洗涤，得棕褐色枸杞子多糖，于60℃烘干，密封备用.2.3 最大吸收波长的选择准确称取枸杞子多糖3.5mg 于100mL 容量瓶中，稀释至刻度线，摇匀. 取2mL 枸杞子多糖溶液于锥形瓶中，迅速加入1mL 苯酚溶液和5mL 浓硫酸，摇匀，冷却至室温，以蒸馏水做空白，测其在不同波长下的吸光度.0.190.180.170.160.150.140.130.12400 450 500 550 600波长（nm）图1 波长与吸光度的关系由图1 可知，波长在490nm 处有最大吸收峰，因此，波长选择490nm 为最大吸收波长.2.4 线性范围的考察分别精密吸取葡萄糖标准溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL 至10mL 容量瓶中定容，制成系列浓度的标准溶液. 再分别精密吸取系列浓度的标准溶液各2.0mL，各加入1mL 5%苯酚溶液，摇匀，迅速滴入5mL 浓硫酸，摇匀，放置，冷却至室温，另取2.0mL 蒸馏水作空白对照，于490nm 波长处比色，测定吸光度，以葡萄糖标准液浓度C（mg/mL）为横坐标，以吸光度A 为纵坐标，进行线性回归，得到葡萄糖标准溶液的回归方程式为：A = 6.8316C + 0.03 ，R=0.9993，由此可见，葡萄糖标准溶液的浓度在7～49μg/mL 范围内，呈良好的线性关系.0.300.250.200.150.100.050.000.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05标准液浓度（mg/mL）图2 葡萄糖标准曲线2.5 换算因子的测定准确称取60℃干燥至恒重的枸杞子多糖吸光度吸光度第3 期 库尔班江：新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定453.4mg ，加适量水溶解后转移至50mL 容量瓶中定容，摇匀，作为多糖储备液，精确吸取多糖储备液 2.00mL ，按2.4法测定吸光度，由回归方程计算出多 糖液中葡萄糖的浓度（C ），按下式计算其换算因子：℃为最佳.4.2 4.0 3.8 m f CD ， 3.6 式中：m 为样品的质量（mg ），C 为多糖液中葡萄糖的浓度（mg/mL ），D 为多糖的稀释因数. 测定结果 为，枸杞子多糖的换算因子f=3.79（RSD=1.24%， n=3）.2.6 枸杞子多糖的提取工艺优化2.6.1 料液比对枸杞子多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 5 份（每份 1g ），分别加入 40mL 80%乙醇，在 85℃下回流提取 1h ，抽滤， 将滤渣分别加入料液比为 1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50 的蒸馏水 90℃水浴提取 1.5h ，抽滤，将 3.4 3.2 3.0 2.8 2.64050 60 70 80 90 100 110温度（℃）提取温度对多糖提取率的影响图 4 2.6.3 提取时间对多糖提取率的影响 准确称取枸杞子粉末 5 份（每份 1g ），分别加 入 40mL 80%乙醇溶液，在 85℃下回流提取 1h ，抽 滤，将滤渣各加入 80mL 蒸馏水，在 90℃水浴下分别提取 0.5h 、1h 、1.5h 、2h 、2.5h ，抽滤，将滤液 置于 250mL 容量瓶中定容. 按 2.6.2 项下同法操作， 测定不同水浴时间提取液的吸光度，得到水浴提取时间对多糖提取率的影响（见图 5）.滤液置于 250mL 容量瓶中定容. 定多糖的含量.按2.4 项下同法测 2.82.72.63.62.53.43.2 2.43.0 2.32.8 2.6 2.21:101:201:301:401:502.4 料液比料液比对多糖含量的影响2.2 图 3 2.0 1.8从图3可知，随着提取液用量的增加，所测得的枸杞子多糖含量也随之增加，当料液比为1∶40时达到最高，以后随着提取液用量的增加，所测得的枸杞子多糖的含量不再增加. 因此，料液比以1∶40最佳.2.6.2 温度对枸杞子多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 5 份（每份 1g ），分别加入 40mL 80%乙醇溶液，在 85℃下回流提取 1h ，抽滤，将滤渣各加入 80mL 蒸馏水，分别在 45℃、60℃、75℃、90℃、105℃下水浴提取 1.5h ，抽滤，将滤液置于 250mL 容量瓶中定容. 按 2.4 项下同法测定多糖的含量（见图 4）.由图 4 可知，随着温度的升高，所测得的多糖含量不断增大，并在 90℃时达到最大值，继续提高温度，所测多糖含量反而下降. 因此，浸提温度 900.51.01.52.02.5时间（h ）提取时间对多糖提取率的影响图 5 由图 5 可知，随着浸提时间的增长，所测得的多糖含量也随着增加，当时间为 2h 时，其所测多糖含量最大，之后基本保持不变. 因此，浸提时间选取 2h.2.6.4 提取次数对多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 4 份（每份 1g ），分别加入 40mL 80%乙醇溶液，在 85℃下回流提取 1h ，抽滤，将滤渣各加入 80mL 蒸馏水，在 90℃水浴下提取 2h ，分别提取 1 至 4 次，抽滤，将滤液置于 250mL容量瓶中定容. 分别吸取 1mL 于 50mL 容量瓶中定容，按 2.4 项下同法操作，测定不同水浴次数提取多糖含量 多糖含量 多糖含量 %%%伊犁师范学院学报（自然科学版） 2014 年46液的吸光度，得到提取次数对多糖提取率的影响 （见图 6）.基本不再增加. 因此，提取3次为最佳次数.2.6.5 正交试验及结果通过单因素试验对上述不同提取条件参数进 行了初步的筛选，为了分析参数影响主次因素，得 到最佳的提取条件，进行了正交试验. 参照单因素 试验结果，以影响多糖含量测定的乙醇浓度、料液 比、浸提温度、浸提时间为四个影响因素，三个水 3.0 2.9 2.8 2.7 2.6 平L 9（34）进行正交试验，优选最佳提取条件. 素水平L 9（34）见表1，试验结果见表2.因 2.5 2.4 4表 1 因素水平L 9（3 ）表2.3水 平A 乙醇浓度 （%）B 料液比 （g/mL ）C 浸提温度 （℃）D 浸提时间（h ）1.01.52.02.53.03.54.0浸提次数图 6 提取次数对多糖提取率的影响由图6可知，随着提取次数的增加，所测多糖 含量也逐步增加，当提取3次以后，所测多糖1∶30 1∶40 1∶50 1 2 3 80 95 100 75 90 105 1.5 2 2.54表 2 L 9（3 ）正交试验结果试验组水平AB C D 吸光度 多糖含量（%）1 23 4 5 6 7 8 9 K 1 K 2 K 3 R1 1 12 2 23 3 3 0.121 0.117 0.117 0.0041 2 3 1 2 3 1 2 3 0.102 0.097 0.155 0.0581 2 3 2 3 1 3 1 2 0.113 0.122 0.119 0.0091 2 3 3 1 2 2 3 1 0.126 0.090 0.139 0.0490.107 0.076 0.179 0.125 0.104 0.121 0.073 0.112 0.1662.141 1.137 4.033 2.634 2.047 2.520 1.194 2.2743.771通过数理统计的极差分析法进行分析可知，乙 醇浓度、料液比、浸提温度、浸提时间四因素对枸 杞子多糖含量影响主次的顺序为 B ＞D ＞C ＞A ，并 且最佳的提取条件为 A 1B 3C 2D 3，即：乙醇浓度为 80％，料液比为 1∶50，浸提温度为 90℃，浸提时 间为 2.5h. 2.7 加样回收率试验精密称取精制的枸杞子多糖10mg ，加水溶解至 100mL 容量瓶中定容，摇匀，得0.1mg/mL 的多糖精 品溶液，精密吸取5份（每份1mL ）溶液，分别加入 标准葡萄糖溶液1mL 、2mL 、3mL 、4mL 、5mL ， 计算回收率（见表 3 ），得到平均加样回收率为96.96%（RSD=1.87%，n=5）.表 3 加样回收率试验取样量 （mL ） 多糖含量 （mg ） 加标量 （mg ） 测得量 （mg ） 回收率 （%） 序号12 3 45 平均值11 1 110.10.1 0.1 0.10.10.070.14 0.21 0.280.350.3710.442 0.501 0.5730.64597.199.3 94.3 96.4 97.796.962.8 样品多糖含量的测定称取枸杞子2g ，置于250mL 圆底烧瓶中，加入 40mL 80% 乙醇85 ℃回流1h ，抽滤，将滤渣置于多糖含量 %第3 期库尔班江：新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定47量瓶中定容，备用.精密量取样品溶液1mL 于50mL 容量瓶中，加蒸馏水稀释定容，摇匀. 再分别吸取2mL 于锥形瓶中，加入1mL 苯酚溶液，迅速滴入5mL 浓硫酸，摇匀，放置至室温，测其吸光度，由回归方程计算试液中葡萄糖的含量，按下式计算样品中多糖的含量：多糖含量(%)=(CDf m)⨯100 ，式中：C 为样品溶液中葡萄糖的含量（mg/mL），D 为样品溶液的稀释倍数，f 为换算因子，m 为样品的质量（mg），测得提取结果见表4.表4 多糖含量的测定本实验中测得的枸杞子多糖含量为7.37% （n=3，RSD=0.38%）.3 结果与讨论3.1 本文采用枸杞子提取纯化所得多糖为样品测定f 因子为3.79（RSD=1.24%，n=3），计算多糖含量为7.37%（RSD=0.38%，n=3），减小了系统误差，结果更准确.3.2 《中国药典》2005 年版，枸杞子项下只收集宁夏枸杞子一种，并规定枸杞子多糖含量不得低于1.8%. 然而，在市场上除出现较多的宁夏枸杞子外，还有新疆枸杞子、北方枸杞子等. 其中，新疆枸杞子多糖含量可达7.37%，结果表明，新疆枸杞子可望作为枸杞子的新来源.3.3 此法具有仪器方便、操作简单、快速、溶剂用量小、成本低、无毒害、准确等优点，可提高新疆枸杞子的使用价值，为进一步开发利用新疆枸杞子提供参考依据.葡萄糖浓度（mg/mL）多糖含量（%）序号吸光度1 2 0.5600.5620.07760.07797.357.383 平均值0.563 0.0780 7.39 0.562 0.0778 7.37参考文献：[1][2][3][4] 潘晓玲，米吉提·胡达拜尔地. 新疆植物志第四卷[M]. 乌鲁木齐：新疆科学技术出版社，2004. 357.段昌令，乔善义，王乃利，等. 枸杞子活性多糖的研究[J]. 药报，2001，36（3）：196.刘乃珩. 药食兼用之枸杞子[J]. 食品与健康，2007（3）：311.田庚元，王晨，冯宇澄. 枸杞子糖蛋白的分离纯化，物化性质及糖肽键特征[J]. 生物化学与生物物理学报，1995，27 （5）：493-498.韩果萍，段玉峰. 我国天然活性多糖药理研究进展[J]. 中药材，2003，26（2）：128. 韦巍，李雪华. 多糖的研究进展[J]. 国外医学·药学分册，2005，32（3）：179. 吴梧桐，高美凤，吴文俊. 多糖的抗肿瘤作用研究进展[J]. 中国天然药物，2003（3）：182.朱彩平，张声华. 枸杞多糖对高脂血症小鼠血脂及脂质过氧化的影响[J]. 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枸杞多糖
精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置具塞试
管中，分别加水补至2.0ml，各精密加入5%苯酚溶液1m1，摇匀，迅速精 标准曲线 的制备 密加入硫酸5ml，摇匀，放置10分钟，置40℃水浴中保温15分钟，取出， 迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典 2010年版Ⅰ部 附录V A)，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐
匀，精密量取1ml，置具塞试管中，加水1.0ml，照标准曲线的制备项下的
方法，自“各精密加入5%苯酚溶液1m1”起，依法测定吸光度，从标准曲 线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。
枸杞多糖的作用探究实验
实验方法与结果
枸杞子多糖与环磷酰 胺合用的抑瘤作用
小鼠皮下接种S180 细胞后2天皮下注射Cy25mg/kg，抑瘤率为31%，同时腹 腔注射LBP 10m/（kg.天）×7天，则抑瘤率提高到47%，但无显著差异 （P>0.05）。当Cy皮下注射l2.5mg/kg时抑瘤率为14%，其瘤重与肿瘤对照 组相比无显著差异，如同时合用LBP10mg/（kg.天）×7天，腹腔注射则抑瘤 率增至54%， 在诱导小鼠脾细胞白细胞介素-2（IL-2）的培养液（脾细胞5×l0/ml和 ConA4ug/ml）中加入LBP，所制备的含IL-2上清液使成年小鼠胸腺细胞在体 外增殖活性（[3H]TdR参入法）升高。老年小鼠IL-2促进淋巴细胞增殖水平显 著低于成年。LBP可使老年小鼠IL-2的这种作用显著提高，达到成年小鼠水 平。实验表明LBP对IL-2的活性有增强作用并使老年小鼠IL-2活性得到恢复。 老年小鼠脾溶血空斑形成细胞（PFC）数明显低于正常成年小鼠水平，下降 51%。给于LBP20mg/（kg.天），腹腔注射，7天，可明显提高老年小鼠脾 PFC值到正常成年水平。老年小鼠对ConA 诱导下3H一TdR掺入胸腺细胞值 也明显降低。给于LBP后掺入值显著提高，在给予LBP 5mg/kg 时可使3H一 TdR掺入胸腺细胞值也明显降低。给于LBP后掺入值显著提高，在给予LBP 5mg/kg时可使3H一TdR掺入值提高大约10倍。 LBP在5.20mg/（kg.天）×7天可显著增高脾PFC数，5mg/kg剂量可使PFC数 达正常免疫对照组的1.4倍。而25.50mg/kg时，则见PFC数明显降低，其中 25mg/kg组PFC数为正常对照组的43%。
枸杞子水提物中多糖含量的测定
312 讨 论
酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量 ,这样可避免
(1) 苯酚2硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸 直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差 ,结果更准
杞多糖成分在浓 H2 SO4 的作用下 ,水解成单糖 ,并迅 速脱水生成糠醛衍生物 ,与苯酚缩合成有色化合物 , 再用分光光度法测定其枸杞多糖含量 。本法操作简
3 结果与讨论
311 精制枸杞多糖的得率
250 g 干燥的枸杞子按 211 方法制得的精制枸杞
多糖 5153 g ,得率 2121 % ( n = 3) 。
31112 换算因子
f = 3126 ( n = 5) 。
31113 枸杞子水提物的得率
50 g 枸杞子制得红色枸杞子水提物 34126 g ,得
吸光度 ,计算多糖的含量 。 216 稳定性试验
精密 吸 取 按 21411 方 法 制 备 的 样 品 溶 液 110 mL ,补水至 210 mL ,每隔 30 min 测定 1 次吸光度 ,连 续 4 h 考察其稳定性 。 217 回收率测定
精密称取精制的枸杞多糖 10 mg , 加水定容至 100 mL ,摇匀 ,得 100 μg/ mL 的多糖精品溶液 ,精密 吸取 6 份该溶液 015 mL ,并分别加入 21211 中配制 的葡萄糖贮备液 011 、012 、013 、014 、015 、016 mL ,补 水至 210 mL ,按照 21213 方法测定吸光度 ,计算加样 回收率 。
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枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定
枸杞多糖的提取与含量测定2011级药学班A6组丁艺兰，冯霞枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定一、实验目的：1、解中药品种品质研究的思路和方法2、熟悉枸杞多糖的了化学性质和提取方法3、掌握查阅文献和数据处理的方法二、实验原理:枸杞为茄科植物枸杞的成熟果实，它既可以作为药材，又可以作为保健食品。
经研究发现其主要活性成分之一就是枸杞多糖。
枸杞多糖是一种水溶性糖系蛋白多糖，主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。
现代医学研究证明：它具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫力、降血脂等作用，能改善老年人易疲劳、食欲缺乏和视力模糊等症状。
萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。
通过萃取，能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。
它的基本原理是利用化合物在两种不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。
经过反复的多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。
萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。
在本次实验中，是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物，属于液-固萃取。
本实验使用水提醇沉法提取宁夏枸杞的枸杞多糖。
三、实验步骤1、枸杞多糖的提取称取干燥的枸杞80g，用研钵研成粉末状，放入烧杯内，加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，过滤，得滤渣，再加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置30min，温度70-100摄氏度之间，功率300w，合并滤液，采用旋转蒸发器真空浓缩，得到的浓缩物用乙醇(乙醇终浓度大于80%)沉淀，滤布过滤，得滤渣用丙酮。
石油醚混合液(体积比1：1)于50～60℃回流0.5h，滤布过滤，得沉淀，烘干，得到枸杞粗多糖。
2、Sevage法脱蛋白取一定量的粗多糖，加蒸馏水完全溶解，使其浓度约为100mg/m L，用Sevage法脱蛋白，按枸杞多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷，再加入三氯甲烷体积的20%的正丁醇，剧烈振摇20min，使其充分混匀，1000r/min离心，倾出上清液，除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，重复以上操作直至中间层无变性蛋白，得到脱蛋白多糖。
枸杞中总糖的测定
枸杞中总糖的测定1(实验原理在沸热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的菲林试剂时，将菲林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
2.仪器设备? 实验室用样品粉碎机? 电热恒温水浴? 1000W调温电炉? 玻璃仪器:200ml、250ml容量瓶，250ml锥形瓶，50ml碱式滴定管 3.试剂配制? 碱性酒石酸铜甲液:称取15g硫酸铜及0.05g次甲基蓝溶于水中并稀释至1000ml。
? 碱性酒石酸铜乙液:称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾完全溶解后稀释至1000ml，贮存于橡胶塞棕色瓶中? 乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌，加入3ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100ml。
10.6%亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾溶于水中并稀释至100ml?即得。
? 6mol?L盐酸:量取247ml浓盐酸(相对密度1.19)，加水稀释至500ml即得。
? 30%氢氧化钠溶液:称取30g氢氧化钠溶于水中定容100ml。
? 0.2%甲基红溶液:称取0.2g甲基红溶于水中，定容100ml。
? 葡萄糖标准溶液:精密称取1.000g(精确到0.0001g)经过98?~100?干燥至恒重的纯葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸并用水稀释至1000ml容量瓶中，此溶液每毫升相当于mg葡萄糖。
4.样品提取液制备用四分法取样，粉碎至均匀(枸杞可以先冷冻再粉碎)，精密称取5.00g~10.00g 样品，转入250ml容量瓶中，加水至容积约为200ml，置80??2?水浴保温30min，期间摇动数次，取出加入乙酸锌及亚铁氰化钾溶液各5ml摇匀，冷却至室温用蒸馏水定容。
过滤(初滤液抛弃约30ml)，滤液备用。
吸取滤液50ml与100ml容量瓶中，加入6mol?L盐酸10ml，在80??2?水浴中加热水解15min，取出用冷水冷却至室温，加甲基红指示剂一滴，用30%氢氧化钠溶液中和，然后用蒸馏水定容，备用。
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篇一：实验三多糖含量的测定
实验三多糖含量的测定
一、实验目的
1、分光光度法测多糖的原理和方法
2、用officeexcel作标准曲线
二、仪器与试剂
1、仪器：7200分光光度计、水浴锅、电子天平
2、试剂：1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o
3、器皿：50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管
三、步骤
1、标准曲线的绘制
①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于50ml容量瓶，加蒸馏水
稀释,即1.0mg/ml。
②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml
分别置于已编号的50ml容量瓶，加蒸馏水定容。
③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，摇匀后，室温5min，90oc水浴15min，冷却至室温。
空白对照：2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸
吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b
④准确量取多糖溶液（待测）2.0ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容，方法同上述。
四结果
①计算浓度（待测液）
本组所测得多糖溶液（待测）的吸光度为的0.385，代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程
y=14.255x+0.0309，可得待测液的浓度为
0.025*25=0.625mg/ml.。
②实验主要步骤（记录）
步骤记录：
Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、
0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液；然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，；不断震荡，溶液逐渐变为褐色，放出热量，且随着葡萄糖浓度的增加，溶液的颜色也不断变深；
室温5min，90oc水浴15min，反应更为充分，溶液颜色有稍微加深，冷却至室温；最后用7200分光光度计一一测量其吸光度，得到的的数据是0.098、0.19、0.337、0.412、0.584、0.774。
Ⅱ根据上述的方法再测量待测液的吸光度，为0.385。
Ⅲ利用excel软件作出浓度与吸光度的特性曲线图。
如③图。
③用excel作图，并选择性粘帖至word到pDF
五注意
1、高毒——苯酚（强腐蚀）
2、高腐蚀——浓硫酸
篇二：枸杞多糖检测作业指导书
枸杞中枸杞多糖检测作业指导书
1.目的：规定了枸杞中枸杞多糖的测定方法。
2.适用范围：适用于枸杞中枸杞多糖的测定。
3.编写依据：gb/T18672-20XX《枸杞（枸杞子）附录A 枸杞多糖测定》。
4.原理：用80%乙醇溶液提取以除去单糖、低聚糖、甙糖及生物碱等干扰性成份，然后用水提取其中所含的多糖类成份，多糖类成份在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。
5.仪器和设备
5.1实验用样品粉碎机
5.2电子分析天平(±0.0001g)
5.3紫外-可见分光光度计（752型）：带1cm比色皿。
5.4电热恒温水浴锅
5.5圆底烧瓶：250mL（24#标准磨口）
5.6球形冷凝管
5.7容量瓶：250ml
5.8具塞试管：25mL
5.9刻度移液管：1mL、2mL、10mL
5.10单标移液管：10mL
6.试剂及材料
6.180%乙醇溶液：于800mL95%分析纯乙醇中加入150mL 纯水，摇匀
6.2硫酸：分析纯
6.3盐酸：分析纯
6.4苯酚液：取苯酚100g，加铝片0.1g与碳酸钠0.5g，蒸馏收集中间部分馏分，初时少量馏分和蒸馏结束时的馏分舍弃
6.55%苯酚溶液：称取蒸馏后苯酚5g，加水95mL水，摇匀，贮存于0℃～4℃冰箱中（有效期为7天）
7.操作步骤：
7.1试样的制备
取具有代表性试样200g，用四分法将试样缩减至100g，取适量样品严密封口，置冰箱冷冻室中冷冻约15min～20min，取出迅速粉碎并混匀，及时称取制备的试样。
7.2试样的测定
7.2.1样品溶液的制备精密称取制备样品0.4g～0.45g （精确到0.0001g）置于250mL圆底烧瓶中，加入80%乙醇
溶液200mL，80℃回流提取1h，趁热过滤，残渣用80%热乙
醇溶液洗涤10次，每次用量约10mL。
残渣连同滤纸置于烧
瓶中，加入烧开的水100mL，沸水提取1h，趁热过滤，滤液收集于250mL容量瓶中，残渣用热水充分洗涤，洗液并入滤液，冷却后定容至刻度，摇匀，待测。
7.2.2标准曲线的绘制精密称取105℃干燥恒重的分析
纯无水葡萄糖1g(精确到0.0001g），加水溶解，加入5mL分析纯盐酸，定容至1000mL，此溶液为葡萄糖标准溶液储备液，浓度为1.0000mg/mL，用10mL单标移液管移取标准葡萄糖储备液10mL于100mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀，此溶液为葡萄糖标准溶液使用液，浓度为0.10000mg/mL，精密吸取标准使用液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分别置于具塞试管中，加水使体积为2.0mL，加入5%苯酚溶液1mL，摇匀，迅速加入硫酸5mL，摇匀后放置5min，置沸
水浴中加热15min，取出后立即用凉水冷却到室温，于490nm。