噬菌体效价的测定

3、混合液加入到上层培养基中 、 (1) 将5管上层培养基溶化，分别标上 -4,10-5, 10-6,10-7和对照。 管上层培养基溶化， 和对照。 管上层培养基溶化 分别标上10 放置于48℃的水浴锅内。 放置于 ℃的水浴锅内。 (2) 分别将 管混合液和对照管加入对应的上层培养基试管中， 分别将4管混合液和对照管加入对应的上层培养基试管中 管混合液和对照管加入对应的上层培养基试管中， 每加入一管就要立即摇匀。 每加入一管就要立即摇匀。 4、上层培养基倒入底层平板上 、 (1)将摇匀的上层培养基迅速倒入相应的底层平板上，放在台面 将摇匀的上层培养基迅速倒入相应的底层平板上， 将摇匀的上层培养基迅速倒入相应的底层平板上 上摇匀，使上层培养基布满平板。 上摇匀，使上层培养基布满平板。 (2)凝固后，置37℃培养过夜。 凝固后， 凝固后 ℃培养过夜。
四、实验操作步骤
1、稀释噬菌体 、 管含4.5ml水的试管分别标上 -3,10-4,10-5和10-6，用1ml 水的试管分别标上10 将4管含 管含 水的试管分别标上 无菌吸管吸0.5ml 10-2的大肠杆菌噬菌体，加入到 -3的试管中， 的大肠杆菌噬菌体，加入到10 的试管中， 无菌吸管吸 摇匀。依次类推，稀释至10 摇匀。依次类推，稀释至 -6管。 2、噬菌体与菌液混合 、 (1) 将5支灭菌的空试管分别标上 -4,10-5,10-6,10-7和对照。 支灭菌的空试管分别标上10 和对照。 支灭菌的空试管分别标上 (2)用吸管从 -3噬菌体稀释管中吸 用吸管从10 噬菌体稀释管中吸0.1ml加入 -4空管中，再用另 加入10 空管中， 用吸管从 加入 外一支灭菌试管从10 的噬菌体稀释管中吸0.1ml加入 -5的空 加入10 外一支灭菌试管从 -4的噬菌体稀释管中吸 加入 试管中，依次类推，直至10 的试管。 试管中，依次类推，直至 -7的试管。 (3) 将大肠杆菌摇匀 用吸管取菌液 将大肠杆菌摇匀,用吸管取菌液 用吸管取菌液0.9ml分别加入上面的 -4,10分别加入上面的10 分别加入上面的 5,10-6,10-7和对照试管中 分别将上面的试管摇匀。 和对照试管中.分别将上面的试管摇匀 分别将上面的试管摇匀。
10-4
10-5
10-6
10-7
对照
10-4
10-5
10-6
10-7
对照
D：倒板，37℃培养 ：倒板， ℃ E：观察并记数噬菌斑 ：
噬菌体效价测定流程图
五、实验结果 1、观测平板中的噬菌斑,计数噬菌斑形成单位(pfu), 、观测平板中的噬菌斑,计数噬菌斑形成单位(pfu), 记录实验数据,并选取30-300个pfu数的平板计算每 记录实验数据,并选取30-300个pfu数的平板计算每 ml未稀释的原液的噬菌体的效价： ml未稀释的原液的噬菌体的效价： 噬菌体效价=pfu数 噬菌体效价=pfu数×稀释倍数 =pfu 2、结果分析
三、实验器材
1、菌种：大肠杆菌，大肠杆菌噬菌体(10-2的稀释液 。 、菌种：大肠杆菌，大肠杆菌噬菌体 的稀释液)。 2、培养基： 、培养基： 液体培养基的小试管4支 含0.9ml液体培养基的小试管 支; 液体培养基的小试管 牛肉膏蛋白胨琼脂平板(10ml培养基 培养基,2%琼脂 作底层培养 琼脂,作底层培养 牛肉膏蛋白胨琼脂平板 培养基 琼脂 基用)5个 基用 个; 琼脂培养基的试管(0.7%琼脂 作上层培养基用 支。 琼脂,作上层培养基用 含4ml琼脂培养基的试管 琼脂培养基的试管 琼பைடு நூலகம் 作上层培养基用)5支 3、仪器与其他用具： 、仪器与其他用具： 灭菌小试管5支 灭菌小试管 支， 灭菌1ml吸管 支， 吸管10支 灭菌 吸管 48℃水浴箱。 ℃水浴箱。
微生物学实验
噬菌体效价的测定
胡胜标 莫湘涛 2010年11月
一、目的要求
学习噬菌体的效价的测定。 学习噬菌体的效价的测定。
二、基本原理
噬菌体效价：是指 液体中所含的活噬菌体的数量。 噬菌体效价：是指1ml液体中所含的活噬菌体的数量。 液体中所含的活噬菌体的数量 效价测定的方法：一般是应用双层琼脂平板法。 双层琼脂平板法 效价测定的方法：一般是应用双层琼脂平板法。由于含 有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑， 有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑， 因此能够进行噬菌体的记数。 因此能够进行噬菌体的记数。 因为噬菌体斑记数方法其实际效率难以接近100%（一般 （ 因为噬菌体斑记数方法其实际效率难以接近 偏低，因为少数活噬菌体可能未引起感染）， ），所以为了准确的 偏低，因为少数活噬菌体可能未引起感染），所以为了准确的 表达病毒悬液的浓度（效价或滴度） 表达病毒悬液的浓度（效价或滴度）一般不用病毒粒子的绝对 数量而是用噬菌体形成单位（ 数量而是用噬菌体形成单位（plague-forming units，简写成 ， pfu）表示。 ）表示。
噬菌体原液
10-2 10-1
0.5ml 10-3 0.1ml 0.1ml
0.5ml 10-4 0.1ml
0.5ml 10-5 0.1ml 10-6
A：稀释噬菌体——试 ：稀释噬菌体 试 管中装4.5ml水灭菌后 管中装 水灭菌后 待用 B：空试管中加入大肠 ： 杆菌菌液0.9ml+噬菌体 杆菌菌液 噬菌体 0.1ml ，对照中换成 0.1ml水 0.1ml水 C：将全部混合液 ： （1ml）加入融化的 ） 48℃上层培养基内 ℃