动物细胞融合
动物细胞融合原理
动物细胞融合原理动物细胞融合是指不同种类的动物细胞在特定条件下融合成为一个细胞。
这种细胞融合的原理涉及到细胞膜的融合、核融合和质体融合等过程。
动物细胞融合具有很大的研究价值，可以用于基因工程、细胞重编程和再生医学等领域。
细胞膜融合是动物细胞融合的第一步。
细胞膜是细胞的外包层，由磷脂双分子层构成。
在融合过程中，细胞膜上的融合蛋白质会相互作用，使两个细胞膜紧密贴合，并形成一个共享的细胞膜。
这种细胞膜融合的过程需要一定的条件，如适当的pH值、温度和离子浓度等。
核融合是动物细胞融合的关键步骤之一。
在细胞膜融合之后，两个细胞的细胞质会融合在一起，形成一个共享的细胞质。
此时，细胞中的核会相互靠近并融合在一起。
核融合的过程中，核膜会解体，使得两个核融合成一个大核。
在核融合之后，大核中的染色体会相互结合，形成新的染色体组合。
这种核融合的过程可以导致基因的重组和新的遗传特征的出现。
质体融合是动物细胞融合的另一个重要步骤。
质体是细胞质中的细胞器，包括线粒体和内质网等。
在细胞融合的过程中，两个细胞的质体会相互融合，并在共享的细胞质中重新分布。
质体融合可以使细胞获得更多的能量和合成物质，从而增强其代谢和生存能力。
动物细胞融合的原理可以通过实验进行验证。
在实验中，可以选择不同种类的动物细胞，如哺乳动物细胞、鸟类细胞和昆虫细胞等。
将这些细胞放置在培养基中，并提供适当的条件，如温度和营养物质等。
经过一段时间的培养，可以观察到细胞融合的现象。
通过显微镜观察可以看到融合后的细胞形态和染色体结构发生了改变。
动物细胞融合的原理在实际应用中具有重要意义。
例如，在基因工程中，可以利用动物细胞融合的原理将外源基因导入细胞中，从而实现基因的转移和表达。
在细胞重编程中，可以利用动物细胞融合的原理将特定细胞重编程为多能干细胞，进而实现组织再生和治疗。
此外，动物细胞融合还可以用于研究细胞的发育过程、疾病模型的建立和药物筛选等领域。
动物细胞融合是指不同种类的动物细胞在特定条件下融合成为一个细胞的过程。
动物细胞融合的方法
动物细胞融合的方法
动物细胞融合是一种重要的生物学技术，它可以用于细胞生物学研究、生物医
学研究以及生物技术领域。
动物细胞融合的方法有多种，下面将介绍几种常用的动物细胞融合方法。
首先，电融合是一种常用的动物细胞融合方法。
它利用高压脉冲或直流电场的
作用，使细胞膜通透性增加，从而促进细胞融合。
电融合方法操作简单，融合效率高，可以用于不同种类细胞的融合，因此在细胞生物学研究中得到广泛应用。
其次，化学融合是另一种常用的动物细胞融合方法。
化学融合利用化学物质
（如聚乙二醇）破坏细胞膜，使细胞融合。
化学融合方法操作简单，成本低廉，可以用于大规模的细胞融合实验，因此在生物医学研究和生物技术领域得到广泛应用。
另外，病毒介导的融合是一种新兴的动物细胞融合方法。
该方法利用病毒载体
介导细胞融合，可以实现特定细胞的融合，具有较高的选择性和特异性。
病毒介导的融合方法在基因治疗和细胞修复方面具有潜在的应用前景。
除了上述几种方法，还有许多其他动物细胞融合方法，如光融合、磁场融合等。
这些方法各有特点，可以根据具体的研究需求选择合适的融合方法。
总的来说，动物细胞融合是一项重要的生物学技术，不同的融合方法各有特点，可以根据具体的研究需求选择合适的方法。
随着生物技术的不断发展，相信动物细胞融合方法会得到进一步的完善和创新，为生物医学研究和生物技术应用提供更多的可能性。
动物细胞融合
动物细胞融合，也称பைடு நூலகம்胞杂交，是指两个 或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 两个或多个细胞 一个杂交细胞
原理：细胞膜的流动性
二、细胞融合的过程
杂交细胞的特点：既有两个细胞的遗传 信息，可表现两个亲本的遗传信息。
植物体细胞杂交
三、动物细胞融合的方法
物理法：电激 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的病毒
因为灭活的病毒可以使细胞膜上的蛋白质分子 和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生 融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细 胞融合。
动物细胞融合和植物细胞融合的对比
植物细胞融合 原理 细胞膜的流动性、植物细胞 的全能性 动物细胞融合 细胞膜的流动性
过程
细胞A、B去壁（果胶酶或纤 维素酶）后诱导原生质体融 细胞A、B融合形成杂交细胞， 合，产生的杂种细胞长成杂 经有丝分裂形成杂交细胞群 种植株
诱导方法
物理法（离心、振动、电 激）、化学法（聚乙二醇）
杂种细胞形成杂种植株 获得杂交植株
物理法（电激）、化学法 （聚乙二醇）、生物法（灭 活的病毒）
杂交细胞形成杂交细胞群 研究细胞遗传、细胞免疫、 生物新品种培育、制备单克 隆抗体
结果 应用
动物细胞融合的原理
动物细胞融合的原理动物细胞融合是一种重要的生物学技术，它可以用于研究细胞的功能、基因调控以及生物学过程。
动物细胞融合的原理是将两个或多个不同的细胞融合在一起，使它们的细胞质和细胞核融合成一个新的细胞。
这项技术在生物医学研究、生物技术和医学应用等领域有着广泛的应用。
动物细胞融合的原理主要包括细胞融合、胞质融合和细胞核融合三个基本过程。
首先，细胞融合是指两个细胞膜融合在一起，形成一个共享细胞膜的大细胞。
这个过程需要一定的条件和环境，比如细胞膜表面的蛋白质相互识别和结合，以及适当的渗透压和温度等。
其次，胞质融合是指两个细胞的细胞质融合在一起，形成一个混合的细胞质。
这个过程涉及到细胞质中的细胞器和细胞器的成分，比如线粒体、内质网、高尔基体等。
最后，细胞核融合是指两个细胞的细胞核融合在一起，形成一个混合的细胞核。
这个过程需要细胞核的融合蛋白和核孔蛋白的参与，以及细胞核的DNA和蛋白质的重新排列和组合。
动物细胞融合的原理还涉及到细胞融合的方式和途径。
细胞融合可以通过化学方法、电脉冲方法、病毒介导方法和细胞融合素介导方法等不同的途径进行。
其中，化学方法是指利用化学物质，比如聚乙二醇和聚乙烯醇等，来破坏细胞膜，促使细胞融合。
电脉冲方法是指利用电场脉冲来破坏细胞膜，促使细胞融合。
病毒介导方法是指利用病毒颗粒来介导细胞融合。
细胞融合素介导方法是指利用细胞融合素来介导细胞融合。
这些方法各有优缺点，可以根据实际需要选择合适的方法进行细胞融合。
总的来说，动物细胞融合的原理是通过细胞融合、胞质融合和细胞核融合三个基本过程，将两个或多个不同的细胞融合在一起，形成一个新的细胞。
这项技术在生物学研究和医学应用中有着重要的意义，可以帮助人们更好地理解细胞的功能和调控机制，以及研究疾病的发生和治疗方法。
随着生物技术的发展和进步，动物细胞融合技术将会得到更广泛的应用和推广。
动物细胞融合的例子
动物细胞融合的例子
动物细胞融合，指的是两个或更多的动物细胞融合成一个大细胞的过程，这个过程可以在自然界中发生，也可以在实验室中进行。
以下是一些具体的例子：
1. 大肠杆菌融合
大肠杆菌是一种常见的细菌，可以通过融合形成大片的菌落，形成一整个细胞群体。
这个过程使得细菌可以更好地协作合作，更有效地生存和繁殖。
2. 叶绿体融合
叶绿体是一个细胞器，可以进行光合作用。
在植物细胞中，叶绿体可以通过融合来形成更大的结构，以更高效地利用阳光进行光合作用。
在某些情况下，一些叶绿体甚至可以融合到野生细胞中，从而改变其光合作用的特性。
3. 肌肉细胞融合
肌肉细胞是一种特殊的细胞，具有很高的收缩能力。
在一些哺乳动物
中，肌肉细胞可以通过融合形成更大的胚胎表面层，从而更好地保护胚胎。
在许多种动物中，肌肉细胞也可以通过融合形成更大的肌肉细胞，以提高运动能力和协同性。
4. 病毒细胞融合
病毒是一种脆弱的生物体，需要依附于细胞体内进行生存和复制。
在某些情况下，两种不同病毒的细胞可以融合形成新的病毒，这种现象被称为交杂感染。
这种情况下，病毒可以产生新的遗传特征，从而更高效地繁殖和感染宿主细胞。
总之，动物细胞融合是一种普遍存在且重要的现象，它可以改变细胞的性质和功能，并促进生物体的生存和繁殖。
通过研究细胞融合可以深入了解生命的本质和复杂性。
动物细胞融合的标志
动物细胞融合的标志
动物细胞融合是指两个或多个动物细胞在特定的条件下，形成新的细胞。
这种现象常常在生物学研究中使用，例如细胞分裂、人工受精和细胞克隆等方面。
动物细胞融合有四种标志，分别是共同核、空核、异核和双核。
一、共同核
当两个细胞融合后，它们的核会合并为一个共同的核。
这个共同的核包含了融合前两个细胞各自的核，其中包括了各种细胞器和遗传物质。
共同核的出现意味着两个细胞融合成功，并且新的细胞开始发育成熟。
二、空核
空核是指两个细胞融合后，核周围的细胞质没有融合在一起，从而形成一个空的核。
空核通常只是短暂的，然后核周围的细胞质便开始融合在一起，形成新的细胞。
三、异核
异核是指两个细胞融合后，核周围的细胞质没有融合在一起，但是新细胞内的两个核没有融合在一起。
这时，新细胞内存在着两个独立的核，细胞质内也有两个互不相连的区域。
异核通常只出现在一些特定的细胞融合过程中，如细胞分裂和人工受精。
四、双核
新细胞内的两个核也可能合并为一个，但核融合的过程较于共同核来得缓慢，因而新细胞内的两个核在一定时间内能够共存。
这时，新细胞含有两个核，形成了双核状态。
双核状态通常发生在细胞融合后的早期发育过程中。
总之，动物细胞融合的标志是共同核、空核、异核和双核。
只有当两个细胞融合后形成了共同核，才说明融合成功，新的细胞开始发育成熟。
动物细胞融合原理
动物细胞融合原理
动物细胞融合是指将两个或多个动物细胞的质膜和细胞质融合在一起，形成一个新的细胞。
这种技术被广泛应用于生物学研究、医学治疗和生物工程等领域。
动物细胞融合的原理主要涉及三个方面：细胞膜融合、细胞质融合和核融合。
1. 细胞膜融合
细胞膜是细胞的外层保护层，由磷脂双层和蛋白质组成。
当两个细胞相遇时，它们的细胞膜会互相接触并发生变形，形成融合孔。
融合孔的大小和数量取决于细胞膜的性质和融合条件。
融合孔的形成使得两个细胞的质膜相互连通，形成一个共同的细胞膜。
2. 细胞质融合
细胞质是细胞内的液体和细胞器，包括线粒体、内质网、高尔基体等。
当细胞膜融合后，两个细胞的细胞质也会融合在一起，形成一个共同的细胞质。
融合后的细胞质中包含了两个细胞的所有细胞器和分子，这些分子可以相互作用，从而影响细胞的生理和生化过程。
3. 核融合
细胞的核是控制细胞生长和分裂的中心，包含了细胞的遗传信息。
当两个细胞膜和细胞质融合后，它们的核也会融合在一起，形成一个新的细胞核。
核融合需要细胞周期的调节和多种蛋白质的参与，是细胞融合的最后一步。
总之，动物细胞融合是一个复杂的过程，涉及到细胞膜、细胞质和核的相互作用和调节。
对于生物学研究和医学治疗来说，掌握动物细胞融合的原理和技术是非常重要的。
动物细胞融合法
动物细胞融合法
动物细胞融合法指的是利用细胞膜融合的原理，将两个或多个动
物细胞的细胞膜融合在一起，使它们成为一个大细胞。
这样的方法被
广泛应用于细胞学研究，特别是在细胞生物学和生理学领域。
通过动物细胞融合法，科学家们可以研究细胞内部的过程，如细
胞质流动、酶催化和细胞膜的作用等。
同时，动物细胞融合法也可以
用于生殖医学和遗传学的研究。
此外，动物细胞融合法还可以应用于细胞疫苗和基因治疗等领域。
在细胞疫苗制备方面，科学家们可以将病原体与宿主细胞融合，使得
宿主细胞产生病原体特异性抗原，从而制备出相应的疫苗。
在基因治
疗方面，动物细胞融合法可以使患者的细胞与健康捐献者的细胞融合，将健康的基因导入患者的细胞内，从而达到治疗效果。
总之，动物细胞融合法是一种重要的研究工具和应用手段，为人
类科学研究和医学进步做出了重要的贡献。
动物细胞融合
动物细胞融合
动物细胞融合是一种重要的生物学技术，它能够促进基因编辑和疾病研究。
本
文将介绍动物细胞融合的原理、应用和潜在风险。
原理
动物细胞融合是指将两个或多个动物细胞融合成一个细胞的过程。
这种技术通
常通过融合剂（如聚乙二醇）或电脉冲的方式实现。
一旦细胞融合成功，细胞的核和细胞质将合并成一个新的细胞。
应用
动物细胞融合在生物学研究中有着广泛的应用。
一项主要的应用是制造杂交动物，这对基因工程和疾病研究都具有重要意义。
动物细胞融合还被用于体细胞核移植和克隆技术中，为科学家们提供了在实验室中研究和改变动物基因的平台。
潜在风险
尽管动物细胞融合在生物学研究中有着重要作用，但它也存在一些潜在的风险。
首先，由于技术上的复杂性，动物细胞融合的成功率并不高，有时会导致细胞死亡或克隆动物的出现异常。
此外，动物细胞融合还可能导致遗传信息的混合和基因组的不稳定性，这可能会引发不可预测的后果。
在未来，科学家们需要继续研究动物细胞融合的机制和影响，以更好地利用这
一技术。
同时，应该加强对动物细胞融合过程中潜在风险的监管，以确保其在生物学研究中的安全应用。
动物细胞融合作为一种重要的生物学技术，为基因编辑和疾病研究提供了重要
的工具。
然而，科学家们仍需不断探索其机制和潜在风险，并采取适当的措施确保其安全应用。
动物细胞融合的过程描述
动物细胞融合的过程描述动物细胞融合是指两个或多个单独的细胞融合成一个大细胞的过程。
这个过程可以在自然界中发生，也可以通过实验室技术实现。
在实验室中，动物细胞融合是一种常见的技术，被广泛应用于细胞生物学和生物医学研究中。
动物细胞融合的过程可以分为四个主要步骤：细胞接触、细胞膜融合、细胞核融合和细胞质融合。
第一步，细胞接触。
细胞融合的第一步是使两个细胞接触在一起。
在实验室中，这个过程可以通过将两个细胞直接放在一起，或者通过使用电脉冲或化学诱导剂来促进细胞接触。
第二步，细胞膜融合。
在细胞接触之后，细胞膜会开始融合在一起。
这个过程涉及到细胞膜上的蛋白质和脂质，它们可以相互识别和结合，从而使细胞膜融合在一起。
第三步，细胞核融合。
在细胞膜融合之后，细胞核也开始融合在一起。
这个过程涉及到细胞核周围的膜和蛋白质，它们可以相互识别和结合，从而使细胞核融合在一起。
在这个过程中，两个细胞的染色体也会融合在一起，形成一个新的细胞核。
第四步，细胞质融合。
最后一个步骤是细胞质融合。
在细胞核融合之后，两个细胞的细胞质会开始融合在一起。
这个过程涉及到细胞质中的细胞器和其他细胞结构，它们可以相互识别和结合，从而使细胞质融合在一起。
这个过程最终会形成一个新的大细胞，其中包含两个或多个原始细胞的所有结构和分子。
动物细胞融合的过程在实验室中被广泛应用于细胞生物学和生物医学研究中。
它可以用来研究细胞分化、转化和增殖等过程，也可以用来制备人工细胞和克隆细胞等。
此外，动物细胞融合还可以用于研究病毒和癌细胞的传播机制，以及探索细胞间信号传递和代谢网络等。
动物细胞融合技术
动物细胞融合技术动物细胞融合技术一、定义动物细胞融合技术是利用一定方式将两个或者多个细胞进行融合，来形成一个新的物种；这个新的物种分子可以通过改变融合细胞的表达水平和功能来实现定向的基因调控。
二、作用1、调控基因表达：可以改变融合细胞的表达水平，从而调控基因的功能；2、生物抗性：可以改变融合细胞的生物抗性，有效地增强细胞对外界环境的抗性；3、进化速度：细胞融合技术可以加快动物进化的速度，从而使得动物能够更快的调整调控环境和抗病能力；4、生物制造：可以利用细胞融合技术，将动物细胞和其他制造过程相结合，进行生物制造等研究。
三、原理动物细胞融合技术的原理主要是将不同的动物细胞放在一起，然后使用生化物质（如胞质质量抗原-1）等来诱导两个不同细胞间发生融合，并通过生物化学方法对融合细胞进行基因调控，最终形成一种新的物种。
四、应用1、医学：动物细胞融合技术在医学方面主要是用于研究癌症的发生和发展机制，进而发展出有效的治疗方案；2、生物制造：与其他制造过程结合，利用细胞融合技术，可以进行生物制造等研究，从而大大提高生物制造的效率；3、生命体系模拟：可以使用细胞融合技术来模拟活体生物的形态和功能，从而可以有效进行生命体系研究；4、药物研发：利用细胞融合技术，可以调整融合细胞的表达水平，从而发现可能作为药物的田间成分，以加快新药的研发。
五、局限1、对于融合物的稳定性和可靠性均存在一定的局限；2、融合细胞的功能可能会受到转化事件的影响，从而不利于定向的基因调控；3、融合细胞的发育和衰老速度可能比普通细胞要慢，从而不利于长期的研究。
总结：动物细胞融合技术是一种可以控制基因表达，改变生物抗性，加速进化速度，实现生物制造等功效的技术。
它具有重要的应用价值，但也存在一定的局限性，如产生稳定性和可靠性较低，转化事件影响调控，发育衰老速度较慢等。
动物细胞融合
式细胞仪等技术。单克隆抗体促进了商品化试剂盒的开 展，试剂盒灵敏度高、使用方便、快速，用于病原微生 物抗原、肿瘤抗原、免疫细胞及其亚群的检测，激素、 细胞因子的测定。
2. 食品安全的检测
食品中的毒素〔如黄曲霉毒素〕、有机农药的检测。 方便、灵敏
3．蛋白质的提纯 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆
断；HGPRT缺乏，DNA合成的补救途径受阻，不
能生长，5~7天死亡；
淋巴细胞和骨髓瘤融合细胞：能生长
〔4〕 杂交瘤细胞的选择和克隆化培 养
第一次抗体筛选：融合培养24h后更换成HAT 选择性培养液，杂交瘤细胞生长增殖、形成 细胞群，再利用免疫学方法检测其抗体合成。 第二次抗体特异性筛选：从杂交瘤细胞群中 筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特 异性杂交瘤细胞。
抗体是由B淋巴细胞分化形成的浆细胞合成、分 泌的。每一个B淋巴细胞在成熟的过程中只产生一种 抗体。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞，因此， 当机体受抗原刺激时，每种B淋巴细胞产生一种抗体 〔单一抗体疫动物生产、制备抗体效率 低，且多克隆抗体应用有很多缺陷，别离这些不同 的抗体极为困难。
1〕 取1.0 ml 5×104/ml细胞+4ml培养基稀释，得 1×104/ml. 2〕 取0.5ml 1×104/ml细胞液+4.5ml培养基稀释， 得1×103/ml. 3〕 取0.5ml1×103/ml细胞液+4.5ml培养基稀释， 得100 cells/ml. 4〕 取0.01ml的 100 cells/ml细胞液于培养板小孔， 加0.1 ml培养基，培养后得杂种细胞系。
动物细胞融合和植物细胞融合的方法
动物细胞融合和植物细胞融合的方法
一、动物细胞融合
动物细胞融合通常是通过化学或物理方式实现，主要分类有以下几种：
1、用电解法融合动物细胞
用电解法融合动物细胞，主要是将动物细胞悬挂在滤箱中，当加入电解液(NaCl)时，引起电场的作用，动物细胞接触到电解液就会形成电解质梯度，细胞受这种电场的作用就会与彼此碰撞，然后细胞膜发生融合，从而实现细胞的融合。
2、通过热法融合动物细胞
热法融合是在低温环境下将动物细胞悬挂在滤箱中，当加入离子梯度溶液时，细胞就会被激活，并且向溶液中的高活性离子运动，当它们相撞时，细胞膜接触并发生融合，从而实现细胞的融合。
3、通过胞外表达技术融合动物细胞
胞外表达就是将具有融合功能的基因表达到宿主细胞中，从而实现细胞的融合。
这种方法的优点在于可以控制融合细胞的类型，融合的实验更加安全、快捷。
4、通过化学处理融合动物细胞
化学处理融合动物细胞，主要是将动物细胞暴露在一定的溶剂中，如有机溶剂，对其进行化学处理，从而实现细胞的融合。
二、植物细胞融合
植物细胞融合也可以分为化学和物理两种方式。
1、通过化学方法融合植物细胞
使用化学方法融合植物细胞，将植物细胞暴露在冷冻密度梯度离子溶液中，从而形成温和的离子梯度，使细胞的膜发生融合，从而实现植物细胞融合。
2、通过超声处理融合植物细胞
超声处理融合植物细胞，通过高频超声去激活细胞，将细胞悬挂在离子梯度溶液中，然后使用高频超声波来刺激细胞发生融合，从而实现植物细胞的融合。
动物的细胞融合原理有哪些
动物的细胞融合原理有哪些
动物细胞融合是指两个或多个动物细胞的膜融合，形成一个具有合并的细胞。
细胞融合是生物体发育和修复过程中的关键步骤之一。
以下是一些动物细胞融合的原理：
1. 脂质双层融合：细胞融合最常见的方式是两个细胞的脂质双层融合。
这种融合方式发生在细胞膜的脂质层，其中磷脂分子相互扩散和重新排列，形成两个融合细胞的共享膜。
2. 物理刺激：细胞融合还可以通过物理刺激来实现。
例如，利用电脉冲或激光等外部能量刺激细胞，改变细胞膜的渗透性，使细胞之间的膜发生融合。
3. 细胞融合素介导的融合：某些细胞融合素可以在细胞膜上结合并促进细胞融合。
这些细胞融合素可以是细胞表面蛋白质或其他生物分子。
4. 钙离子介导的融合：细胞质中的钙离子浓度的变化可以调控细胞膜的渗透性。
当细胞质中的钙离子浓度升高时，细胞膜就会发生变化，促进细胞融合。
综上所述，动物细胞融合原理主要包括脂质双层融合、物理刺激、细胞融合素介导的融合和钙离子介导的融合。
动物细胞工程—动物细胞融合
动物细胞融合与植物细胞杂交的比较
动物细胞融合与植物细胞杂交的比较
动物细胞融合
植物细胞杂交
融合原理 融合预处理 诱导方法
细胞膜流动性
细胞膜流动性，植物细胞全能型
用胰岛蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散 用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导
后诱导细胞融合
原生质体融合
灭活的病毒、电激、聚乙二醇
电激、振动、离心、聚乙二醇
结果 应用
杂交细胞
杂交植株
制备单克隆抗体、病毒疫苗、干扰素等
克服远缘杂交不亲和的障碍，扩展杂交 亲本范围，培育新品种
思考题：
思考题：
为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活的病毒可以作为诱 导剂吗？
自发融合：同种细胞在培养时2个靠在一起 的细胞自发合并。 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理 才能融合。
第二章
动物细胞融合原理
动物细胞融合原理
动物细胞融合原理 原理：细胞膜具有一定的流动性
诱导融合因素： 生物方法（病毒） 化学方法（聚乙二醇PEG） 物理方法（离心，震动，电刺激）
基因产物：mRNA、tRNA、rRNA
第三章
动物细胞融合的具体步骤
动物细胞融合的具体步骤
动物细胞融合的具体步骤
细胞准备
细胞融合
杂种细胞 选择
杂种细胞 克隆
分贴壁和悬浮细胞两 种。前者可直接将两 亲本细胞混合培养， 后者需制成一定浓度 的细胞悬浮液。
加促融因子于将 行融合的细胞之 中，诱导融合。
利用选择性培养 基等，使亲本细 胞死亡，而让杂 种细胞存活。
动物生物技术
动物细胞融合
第一章
动物细胞融合
动物细胞融合
动物细胞融合
动物细胞融合
异核体（heterokaryon）：来自不同基 因型的细胞所融合形成的杂交细胞。
第二节 诱导细胞融合的方法
1.生物方法（病毒） 病毒是最早采用的融合剂。某些病毒被膜中有 融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿 主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合。
常用于诱导动物细胞融合的病毒有仙台病毒、 新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等。用作融合剂的病 毒必须事先灭活（紫外线或β-丙内酯），使病毒 的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。
1957年，日本科学家岗田善雄在培养动 物细胞时加入失去活性的仙台病毒，发 现了细胞融合、产生具有两个核的细胞。 后来人们用此方法又成功地诱导了不同 种动物的体细胞融合，并且能将杂种细 胞培养成活，动物细胞融合技术随之诞 生。现在这项技术已经广泛应用于细胞 学、遗传学、免疫学、病毒学等多种学 科的研究工作中。
最常用的是电融合法
细胞在电场中排列成串、聚集成串珠状， 然后施加高压电脉冲，促使细胞在相互接触的 细胞膜处产生穿孔，导致细胞之间的细胞质连 通，进而发生细胞融合。 细胞电融合技术有许多优点，如诱导细胞
融合的频率高，对细胞无毒害作用，操作简便， 可重复性好。
第三节 杂种细胞的筛选
两种亲本细胞融合的混合物中可能有多种 类型细胞，如： 1) 亲本细胞 2) 同核体：同源细胞的融合体 3) 异核体：非同源的细胞的融合体 4) 多核体：含有双亲不同比例核物质 的融合体 筛选的目的是为了获得优良的杂种细胞
1.半固体培养法=平板培养
单细胞在软琼脂（或者琼脂糖）培养 基上增殖后不能移动，形成集落。待细 胞集落长到肉眼可见后，用吸管从琼脂 上挑出来(一般8-10天后)，再移到液体 培养基中，进行繁殖。
2. 有限稀释法
将细胞稀释到100个/ml，理论上每0.01ml(10μl) 含有1个细胞。取0.01ml细胞液在培养板(如96孔板) 的小孔中培养，则可获得单个细胞形成的集落。 1) 取1.0 ml 5×104/ml细胞+4ml培养基稀释，得 1×104/ml. 2) 取0.5ml 1×104/ml细胞液+4.5ml培养基稀释， 得1×103/ml. 3) 取0.5ml1×103/ml细胞液+4.5ml培养基稀释，得 100 cells/ml. 4) 取0.01ml的 100 cells/ml细胞液于培养板小孔， 加0.1 ml培养基，培养后得杂种细胞系。
动物细胞融合
12．将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融 合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体， AC 其依据是（多选） A.B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增 殖 B.B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能 产生抗体 C.骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗 体 D.骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增 殖
13．下列叙述中，与植物体细胞杂交密切相 关的是（多选）
17.对下列有关实例形成的原理的解释，错误 的是（多选） ABD
A、无子番茄的获得是利用了多倍体育种的原 理 B、多莉羊的获得是利用了杂交育种的原理 C、单克隆抗体的制备是利用了细胞融合的原 理 D、抗虫棉的获得是利用了基因突变的原理
18.动物细胞融合过程中所用的诱导剂—灭活 的病毒，其抗原性和感染力的有无是 D A.失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力
在单克隆抗体上带上抗癌药物制成
课堂小结:
动物细胞融合过程 两个过程
单克隆抗体制备过程
一个诱导细胞融合的新方法:灭活病毒
一个新细胞:杂交瘤细胞 三个“一” 一个优势:单克隆抗体,特异性强、灵敏度 高的优势
1．动物细胞融合技术的目的中最重要的是
B
A．克服远缘杂交不亲和的障碍 B．制备单克隆抗体 C．培育新物种 D．生产杂种细胞
15、下列属于单克隆抗体在实践上应用的 实例是（多选）
CD
A．将抗药菌的某基因引入小鼠细胞内 B．培育成功转基因抗虫棉 C．利用免疫毒素清除异体骨髓移植中的供 体骨髓T细胞 D．制成“生物导弹”，将药物定向地带到 癌细胞所在部位
16、以下四种细胞工程技术中，培育出的 新个体同时具有两个亲本遗传性的方法是 （多选） BD A、细胞和组织培养 B、细胞融合 C、动物胚胎移植 D、细胞核移植
动物细胞特有的融合方法
动物细胞特有的融合方法1、电击法电击法是一种常用的动物细胞融合方法，适用于融合细胞数量较少的情况。
该方法是利用高压电脉冲把两种细胞膜上的离子通道打开，从而使两种细胞融合成为一个细胞。
该方法较为简单、实用，但需要前期的选材和条件控制。
2、化学诱导法化学诱导法是利用化学试剂诱导细胞融合，适用于融合细胞数量不多，且对细胞损伤较小的情况。
化学诱导法涉及到许多化学试剂，如多磷腺苷、聚乙二醇和硫酸化剂等，需要对其浓度、时间和温度等条件进行控制，确保化学试剂的合适使用。
3、光诱导法光诱导法是利用激光器产生的光束把两种细胞受体上的光感受器激活从而诱导细胞融合的方法。
该方法对细胞损伤较小，操作相对简单，但需要专门的光束和设备，成本较高。
4、冷冻解冻法冷冻解冻法是利用细胞在冷冻过程中不断受到挤压和张力，从而使得细胞膜发生破损，破损的膜片能够与其他细胞膜片融合形成新的细胞。
该方法存在技术难度和操作限制，且需要对解冻和培养条件进行严格控制。
5、微注射法微注射法是利用显微注射管将两种单独的细胞直接注射到一起，从而使它们发生融合。
该方法较为准确，但需要显微注射设备，操作技巧较高。
6、膜接触法膜接触法是将两种细胞培养在同一平面上，待细胞密度适当时，两种细胞膜片会自行接触并融合。
该方法简单易行，但需要对培养条件进行严格控制。
7、人工膜融合法人工膜融合法是将两个细胞膜放在一起，利用甘油等化学试剂进行激活，使得两个细胞膜彼此融合。
该方法需要时间控制，且操作周期较长。
8、酶解法酶解法是利用酶溶解细胞膜的部分成分，使得细胞膜破裂，从而使相应细胞膜片与其他细胞片融合形成新的细胞。
该方法需要对酶类的浓度和时间进行严格控制。
9、电穿孔法电穿孔法是利用高压电脉冲的电场效应开启细胞膜的孔道，使得另外一个细胞通过这些孔道进入，从而实现细胞融合。
该方法操作效果有待进一步验证。
10、热融合法热融合法是将两个相应的细胞培养在相同的培养基中，然后在高温条件下进行融合。
动物细胞融合的过程
动物细胞融合的过程动物细胞融合是指将两个或多个动物细胞合并成一个新的细胞。
这种细胞融合的过程，可以通过多种方式进行，其中包括自然界和人工实验室中的不同情况。
自然界中的动物细胞融合在自然界中，动物细胞融合通常发生在生殖细胞的形成过程中。
例如，在人类的体内，男性的精子和女性的卵子在受精过程中会发生融合，形成新的受精卵细胞。
这种融合过程，是由精子中的一个细胞核和卵子中的一个细胞核相互融合而成的。
在某些动物中，还存在多种细胞融合的现象。
例如，在蚂蚁的社会中，工蚁和女王蚁之间会发生细胞融合，从而形成新的蚁群。
在海葵的生殖过程中，母体细胞和父体细胞也会发生细胞融合，形成新的生殖体。
人工实验室中的动物细胞融合在人工实验室中，动物细胞融合的过程通常是通过化学或物理手段实现的。
其中，最常见的融合方式是细胞融合剂的使用。
细胞融合剂是一种可以使细胞融合的化学物质。
在实验室中，研究人员可以使用细胞融合剂将两个或多个不同种类的细胞融合在一起，从而形成新的细胞。
还有一种称为电穿孔的物理方法，可以通过电流的作用使细胞膜破裂，从而实现细胞融合。
这种方法通常用于细胞融合后的基因重组实验中。
细胞融合的意义动物细胞融合在医学和科学领域中有着广泛的应用。
例如，在基因工程领域中，研究人员可以通过将不同种类的细胞融合在一起，实现基因的互换和重组，从而研究基因功能和疾病的发生机制。
细胞融合还可以用于生殖医学和再生医学中。
例如，在不孕症治疗中，研究人员可以将男性的精子和女性的卵子进行体外受精，从而实现不孕症患者的生育。
动物细胞融合是一种重要的实验技术，它在医学、科学和农业等领域中有着广泛的应用。
随着技术的不断发展，细胞融合将在更多领域中发挥其重要作用。
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动物细胞融合
姓名：学号：实验时间：2014.9.16
1.实验目的
a.了解动物细胞融合的常用方法
b.学习化学融合和电融合的基本操作过程
c.观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化
2.实验原理
细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
聚乙二醇（PEG）能诱导细胞融合，改变细胞膜脂质分子的排列，去除这些物质后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
3.实验材料和用品
试剂：50%PEG液、鸡红细胞悬液、0.85%NaCl溶液、GKN液
器材：倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片
4.实验步骤
a.取1ml鸡红细胞悬液+4ml 0.85%的NaCl溶液，进行以下两次离心处理：
1）1000r/min离心2分钟。
（去上清液，再加入至5ml的0.85%的NaCl溶液）2）1000r/min离心2分钟
b.将上步最后一次的沉降血球（去上清液后，约0.1~0.2ml)，加入GKN液至
1~2ml，使之成为10%的细胞悬液。
c.取上述10%的细胞悬液1ml，加入3mlGKN液。
d.取c中1ml+0.5ml 50%PEG液，c中0.5ml+0.5ml 50%PEG液，c中0.5ml+1ml
50%PEG液，混匀滴片，在常温下2~3分钟后，镜下观察。
5.实验结果
a.图片与解释
a.两个相接处的鸡血红细胞在PEG的诱导下细胞膜开始发生融合
b.发生部分细胞质融合的鸡血红细胞，此时细胞核尚未接触
c.细胞融合接近完成的鸡血红细胞，此时细胞核尚未完全融合
d.细胞核融合完成，细胞融合完成
b.三组对比实验结论：鸡血红细胞的融合率随PEG浓度的增加而增大
6.讨论与结论
a.视野中有较多细胞凝集成团，因为之前滴加溶液时没有混匀，以后要充分混匀溶液
b.有些细胞已经变形，因为反应后放置时间过长，以后要及时进行观察
c.细胞融合完成的最后阶段细胞是椭圆而非圆形，因为细胞融合整个过程太短，导致细胞膜没有回复原来的形状
d.细胞变形也有可能是受到PEG的影响，所以PEG浓度不应该太高
细胞融合应用
1.医学：
a.用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗
一般认为肿瘤细胞表面抗原不能诱导强的免疫应答反应，树突状细胞（dendritic cells,DCs）与肿瘤细胞融合形成的树突状细胞疫苗能够有效地激发机体的细胞免疫应答，无论是在动物研究还是在人体早期临床试验中都证明这是一种方便、安全、可行的方法。
并且由于融合细胞可以在体内存活，因此可以维持较长时期的免疫应答，有利于诱发机体产生有效的抗肿瘤免疫。
肿瘤抗原可以肽段或完整蛋白的形式与DCs结合，或者将肿瘤抗原基因转化进DCs中，使其内源性地表达抗原，这两种方法在抗肿瘤免疫应答中均有效，但适于免疫的肿瘤抗原及其基因难以鉴定从而限制了其应用，有实验证明用这两种方法制备的肿瘤疫苗的免疫原性不及肿瘤细胞与树突状细胞直接融合的异核细胞，融合细胞保持了DCs和肿瘤细胞的特性，并且能高效地将未知的肿瘤抗原提呈给免疫系统，今后肿瘤疫苗的研究工作将集中在疫苗的纯化上，以期用高度纯化的杂合细胞来激发更为有效和强烈的免疫应答反应，使得这种方法在临床应用中更为实际。
b. 用于生产单克隆抗体
使小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合形成能产生单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）的杂交瘤细胞，单克隆抗体具有专一性和灵敏性，作为理论研究的工具在病原检测和疾病治疗以及食品安全领域具有广阔的应用前景。
1985年，中科院上海细胞生物学研究所研制成功抗北京鸭红细胞和淋巴细胞表面抗原的单克隆抗体，同时还与有关医学部门合作，成功地制备了抗人肝癌和肺癌的单克隆抗体。
在神舟四号上我国自制的细胞电融合仪分别进行了植物细胞的电融合试验和动物细胞的电融合试验，动物细胞电融合实验采用纯化的乙肝疫苗病毒表面抗原免疫的小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，目的是获得乙肝单克隆抗体。
目前有关单位利用McAb作用的专一性这一特点正在探索用“生物导弹”
对癌症进行早期诊断和治疗。
c.用于细胞疗法
SCNT将患者的任何体细胞与去核卵细胞融合，融合子进行有丝分裂形成囊胚，囊胚的内细胞团是多能干细胞，对多能干细胞进行诱导使其定向分化可形成所需的组织和器官用于器官移植，不仅解决了器官和组织来源问题，并且也避免了宿主对外来物的免疫排斥。
d.动物体细胞融合在基础理论研究方面的应用
(1)用于研究细胞的核质关系和个体发育。
20世纪70年代初，诞生了细胞拆合工程。
Carter于1967年发现细胞松弛素B（CB）能诱发体外培养的小鼠L细胞的排核作用。
Prescott等1972年首先应用离心术结合CB分离哺乳类细胞的胞质体获得成功，为研究哺乳类细胞的核、质相互关系、细胞质基因的转移开创了新的途径。
异核体和细胞杂合子被用来确定基因调节因子，这些调节因子决定一个细胞表型消失或得以保持以及赋予受体新性状；通过对供体和受体细胞所有细胞特异性基因表达研究，细胞融合有助于人们了解发育，特别是在研究基因编码的可逆性方面。
在个体发育过程中，血红蛋白存在着从胚胎型向胎儿型（幼虫）最终向成人型的转换，对这些转换进行研究，除了揭示基因顺序表达的调控机理外，在医学方面也有意义，人们可以部分或全部扭转从胚胎型向胎儿型的转变从而治疗镰刀型贫血病。
（2）用于揭示疾病发生的机制。
与其他技术结合使用，细胞融合是一种揭示疾病机理的有效方法。
例如，细胞融合与免疫荧光，生化分析，电镜技术相结合，Lattanzi G等对肌肉萎缩症发生的机理进行了研究。
（3）用于膜蛋白动力学研究。
细胞融合技术与显微镜技术结合使用被用来研究膜蛋白动力学以及这些膜蛋白之间的关系，Péter Nagy等的研究发现大型膜蛋白群之间(主要组织相容性复合物major histocompatibility complex,MHC，包括MHC Ⅰ和MHC Ⅱ）发生蛋白质交换，并且群内蛋白之间也发生蛋白移位，小蛋白群之间也存在着蛋白重排现象。
2.农业：
a. 体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过
程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统。
b.融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质
交换提供了有效途径。
3.生物：
a.用于基因定位和绘制人类基因图谱
JP2 杂种细胞中某一染色体或其片段的存在与否与细胞的某一性状表达与否相联系，从而可以实现把基因定位于某一染色体或某一区段上。
1967年Weise和Green发现在人和鼠的融合细胞中，人的染色体优先丢失，并证明利用这一特点有可能对人染色体上的基因进行定位。
1970年Ruddle等开始系统地用融合细胞作为实验系统来绘制人类基因图。
b.用于动物育种
体细胞核移植技术（somatic cell nuclear tran sfer technique,SCNT）是将细胞核移植到另一细胞的细胞质中的生物技术。
动物体细胞融合后，杂种细胞难以发育再生为一个个体，但借助于细胞核移植的方法将融合后杂种细胞的细胞核移入去核成熟卵内，可培育新的杂种。
另外，细胞核移植技术的建立，还为目前进行的哺乳动物体细胞克隆和转基因技术打下良好的实验基础。