健骨冲剂对去卵巢大鼠骨组织形态计量学的影响

・论 著・健骨冲剂对去卵巢大鼠

骨组织形态计量学的影响

王晓达1　胡庆沈2　陈伟珍1　江兰英2　史炜镔1　张凤华1　符诗聪1　杜　宁1　李国衡1

(1.上海第二医科大学附属瑞金医院伤科　上海市伤骨科研究所　上海　200025;

2.上海第二医科大学生物物理实验室)

摘要　目的:评估健骨冲剂短期预防性应用对绝经后骨质疏松症的作用,并试图揭示其机理。方法60只

SD大鼠通过卵巢摘除术随机分为正常对照组(SHAM)、模型组、健骨冲剂高、中、低剂量组和仙灵骨葆组,治

疗1月后作骨组织形态计量学观测。结果:健骨冲剂组BV TV、T b.T h、骨小梁间距、节点数显著高于造模组,

游离未端数显著少于后者;骨计量学指标低、高剂量组与仙灵骨葆无差别,中剂量组优于后者。结论:健骨冲

剂短期预防应用能够改善骨质疏松症模型大鼠的骨计量学指标:增加最终形成骨量,改善骨小梁结构,提高骨

形成速率的同时降低骨吸收速率。

关键词　健骨冲剂　骨质疏松症　骨组织形态计量学

中图分类号: 文献标识码:A 文章编号:1005-0205(2001)02-0017-03

H isto m orpho m etr ic Study of the Effects if J i anguChongj i on the

Bone Turnover i n Ovar iecto m ized Fe ma le Ra ts

W ang X iaoda,H u Q ingshen,Chen W eizhen,et al

S hang ha i R u ij in H osp ita l A f f ilia ted to

S hang ha i S econd M ed ica l U n iversity,S hang ha i200025

ABSTRACT　Objective:To assess the effects of J iangu Chongji(JC)on p reven ting po stm enopau sal o steo2

po ro sis,attemp t to reveal its m echan is m.M ethods:60fem ale Sp rague2D aw ley rats at6mon th s of age w ere

cho sen:they w ere random ly devided6group s,ovariectom ized and treated fo r1mon th.T hen U nder V I DA S system,bone tu rnover w as assessed by bone h istomo rphom etry.Results:BV TV,T b.T h,Spacing,Juncti on increased and N om adic T erm inal decreased sign ifican tly in the group s fed on JC compared to model rats;there

is no rem arkab le difference betw een low,h igh do se2JC and X ian linggubao,bu t BV TV,T b.T h,Juncti on in

m iddle do se2JC2group s w ere sign ifican tly increased w ith the group fed X.Conclusion:JC can op ti m ize param e2 teers of h istomo rphom etry:increase bone m ass,fo rce bone stuctu re and accelerate bone fo rm w ith decelerati on

in bone ab so rp ti on in ovariectom ized fem ale rats.

KEY WOR D S　J ianguChongji Bone h istomo rphom etry O steopo ro sis

妇女绝经后雌激素水平下降导致骨转换速率加快,骨量下降引发骨质疏松症。现有文献报道卵巢摘除术(OV X)诱导的原发性骨质疏松症大鼠

收稿日期:2000-09-04

基金项目:上海市科委资助项目　编号:97411903

作者简介:王晓达(1973-),男(汉族),山东人,

医学硕士医师。模型在去势2周后即可以观察到血清降钙素水平显著低于Sham组1,尿吡叮酚、脱氧吡叮酚水平显著高于Sham组2,骨小梁骨量的丢失开始有显著意义,l个月后检测到骨密度显著降低3,4。本实验运用骨组织形态计量学(h istom o r2 p hom etry)检测方法观察健骨冲剂对切除卵巢诱导骨质疏松症大鼠模型的影响,旨在评估早期短期应用健骨冲剂对绝经后骨质疏松症的预防作

用,并试图揭示其作用机理。

材料与方法

1　动物　6月龄SD大鼠60只,体重280±20克,由中科院动物实验中心提供(中科院实验动物合格证号:992004)。

2　药物和试剂　健骨冲剂(主要成分为党参、生白术、淫羊霍等)李国衡教授经验方,由上海瑞金医院制剂室提供;仙灵骨葆,由贵州仙灵药业有限责任公司生产,批号:980404。

3　仪器　德国Zeiss公司V I DA S全自动图像分析系统。

4　动物分组及处理　动物随机分为假手术(Sham)组、模型(OV X)组、仙灵骨葆(X)组、健骨冲剂低剂量(JL)组、健骨冲剂高剂量(JH)组、健骨冲剂中剂量(JM)组,每组10只。Sham组行伪手术,余行双侧卵巢摘除术。术后Sham组、OV X 组正常饲料,余组含药饲料喂养:X组,仙灵骨葆26.65m g 100g体重・只・天(成人每公斤体重每月的8倍);JL组,健骨冲剂0.0732g 100g体重・只・天(成人每公斤体重每月的4倍);JM 组,健骨冲剂0.1464g 100g体重・只・天(成人每公斤体重每月的8倍);JH组,健骨冲剂0. 2928g 100g体重・只・天(成人每公斤体重每月的16倍)。术后第21、28天肌注盐酸四环素(50m g Kg),第30天处死取材:股骨远端、胫骨近端,第三腰椎,制备不脱钙塑料切片。

5　观察指标及方法　于全自动图像分析系统上作骨组织形态计量学测定,以一维之线、二维之面分别估测二维之面、三维之体5,每张切片每个指标测10个视野。

骨计量静力学参数:(1)BV TV:单位体积骨小梁骨量,%,视野中骨小梁面积占视野面积的百分比。(2)T b.T h:平均骨小梁宽度,Λm,每个视野测10个宽度,求平均值。(3)FLAW:平均骨小梁间距,Λm,每个视野测10个宽度,求平均值。(4) JO I N T:骨小梁节点数,单位视野中骨小梁交汇点的数目。(5)END:骨小梁游离末端数,单位视野中骨小梁断端的数目。

上述3参数可作为检测当时的最终形成骨量指标。

骨计量动力学参数(指时间上的动态观察): (1)M A R:矿化沉积速率,Λm day,四环素双标记线中点间的平均距离乘以Π 4,再除以2次标记所间隔的时间。(2)B FR(T):组织水平的骨形成速率,以M A R乘以相对骨形成面(以四环素单标记面+1 2四环素双标记面) 骨小梁周长表示),即每天骨形成量。

6　统计学处理　采用SA S　6.04软件行方差分析。

结果

1　股骨远端骨小梁形态计量学指标(见表1)与Sham组比较,OV X组BV TV降低,节点数减少,骨小梁厚度变薄,小梁间距增宽,M A R延长, B FR(T)加快,均有统计学意义。与OV X组比较, JL组骨小梁厚度增宽,小梁间距减小,M A R延长,B FR(T)加快(P<0.05);JM组BV TV升高,骨小梁厚度增宽,小梁间距减小(P<0.05); JH组骨小梁厚度增宽,小梁间距减小(P<0.

05)。与X组比较,JL组骨小梁游离末端数减少, M A R延长,B FR(T)加快(P<0.05);JM组BV TV升高,骨小梁厚度增宽(P<0.05);JH组骨小梁游离末端数减少,厚度增宽,间距减小(P<0. 05)。

表1　股骨计量学图象分析结果

　BV TV(%)JO I N T(个)END(个)T b.T h(um)FLAW(um)M A R( day)BFR(T, day) Sham64.03±7.174.60±1.430.40±0.52160.6±19.5193.0±7.71.01±0.120.63±0.06 OV X38.39±4.07s2.00±1.49s1.00±0.6777.5±4.0sx262.0±36.5sx1.35±0.18s0.87±0.12s JL41.49±4.912.60±1.26s0.20±0.42x132.4±11.7as168.9±20.0asx1.65±0.34sax1.04±0.23sax JM50.79±7.30asx3.00±0.94s1.20±1.03s158.8±13.7ax142.6±7.3as1.23±0.25s0.80±0.17s JH41.40±3.272.40±1.07s0.20±0.42x105.7±18.9asx124.0±21.8asx1.30±1.12s0.83±0.06s X43.32±7.942.20±1.231.60±0.84s120.8±14.7sa146.9±11.6as1.32±0.16s0.82±0.11s 注:a:与OV X组比较P<0.05;s:与S ham组比较P<0.05;x:与X组比较P<0.05。

2　腰椎骨小梁形态计量学指标(见表2)　与Sham组比较,OV X组BV TV降低,节点数减少,骨小梁厚度变薄,M A R延长,B FR(T)加快,均有统计学意义。与OV X组比较,JL组BV TV 增加,节点数增加,小梁厚度增宽,间距减小, M A R延长(P<0.05);JM组BV TV升高,节点数增加,小梁厚度增宽,间距减小(P<0.05);JH 组骨小梁BV TV增加,节点数增加,厚度增宽,