食品葡萄糖酶 比色法酶电极法

100μg纤维二糖(生化试剂)、100μg乳糖和100μg蔗糖，再加入3mL酶试剂溶液。
以下按4.4步骤操作。
测定吸光度后，在标准曲线4.3上查出对应的葡萄糖含量，按式(A1)计算葡
萄糖的回收率：
F
=
C 0.5 × 200
×100 …………………(A1)
式中：F—葡萄糖的回收率，％； C—葡萄糖的实测值，μg。
方法一：酶-比色法 2.原理
葡萄糖氧化酶在有氧条件下，催化β-D-葡萄糖(水溶液状态)氧化，生成D葡萄糖酸-δ-内酯和过氧化氢。受过氧化物酶催化，过氧化氢与4-氨基安替比林 和苯酚生成红色醌亚胺。在波长505nm处测定醌亚胺的吸光度，计算食品中葡萄 糖的含量
C6 H12O6 + O 2 GOD→ C6H10O6 +H 2 O 2
方法二：酶-电极法 7.原理
葡萄糖氧化酶在有氧条件下催化β-D-葡萄糖(水溶液状态)氧化，生成D-葡 萄糖酸-δ-内酯和过氧化氢。过氧化氢与过氧化氢型电极接触产生电流。该电流
值与β-D-葡萄糖的浓度呈线性比例，在酶电极葡萄糖分析仪上直接显示葡萄糖 含量。
C6 H12O6 + O 2 GOD→ C6H10O6 + H 2O 2
11.允许差 同一样品的两次测定值之差： 样品中葡萄糖含量小于1.0％时，不得超过两次测定平均值的5.0％; 样品中葡萄糖含量大于或等于1.0％时，不得超过两次测定平均值的2.0％。
12.来源 中国国家标准：GB/T16285—1996
附录A(标准的附录)
葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的技术要求、试验方法及判定规则
A1 技术要求
A1.1酶活力
葡萄糖氧化酶酶活力(U/mg)：≥20；
过氧化物酶酶活力(U/mg)：≥50。
A1.2.干扰酶
葡萄糖氧化酶、过氧化物酶中都不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖苷酶、β-
果糖苷酶、半乳糖苷酶和过氧化氢酶。
A2.试验方法
吸取0.50mL葡萄糖标准溶液，置于10mL比色管中，加入100μg可溶性淀粉、
MMFSCNG0097 食品 葡萄糖 酶-比色法 酶电极法
MM_FS_CNG_0097 食品中葡萄糖的测定方法酶-比色法和酶-电极法
1．适用范围 本方法适用于各类食品中葡萄糖的测定；亦适用于食品中其他组分转化为葡
萄糖的测定。本方法酶-比色法的最低检出限量为0.01μg(葡萄糖)/mL(试液)； 酶-电极法的最低检出限量为1.0mg/100mL。
(1)
X1
=
C
m
×
V2 V1
× 1 000
1 × 1 000
×Leabharlann Baidu100
………………………………
式中：X1—样品中葡萄糖的含量，质量百分率，％； C—标准曲线上查出的试液中葡萄糖含量，μg； m—试样的质量， V1—试液的定容体积，mL； V2—测定时吸取试液的体积，mL。
6.允许差 同一样品的两次测定值之差，不得超过两次测定平均值的 5.0％。
4.过程简述 4.1试样的制备 4.1.1固体样品：
粉末状样品：取样品至少200，将其密闭； 颗粒状样品：取样品至少200g，粉碎或研细，通过100目分析筛，将其密闭。 新鲜水果、蔬菜等固体样品：取可食部分至少200g，捣碎，将其密闭。 4.1.2糊状样品取有代表性的样品至少200g，混匀，密闭。 4.1.3固液体样品取有代表性的样品至少200 g，捣碎后将其密闭。 4.1.4液体样品：取样品至少200 mL，混匀，置于密闭的玻璃容器内。如样品中 含二氧化碳，须用三角瓶取200mL，旋摇至无气泡，置沸水浴中加热10min，冷却。 4.2试液的制备 4.2.1不含蛋白质的试样：用100mL烧杯称取试样(4.1)1～10g(精确至0.0001g)， 加少量重蒸馏水，然后在250mL容量瓶中定容。用快速滤纸过滤。弃去最初滤液 30mL，即为试液。试液中葡萄糖含量大于300μg/mL时，应适当增加定容体积。 4.2.2含蛋白质的试样：称取试样(4.1)1～10g(精确至0.0001g)，用量重蒸馏水 溶解，转移到250mL容量瓶中，加0.085mol/L亚铁氰化钾溶液5mL、0.25mol/L硫 酸锌溶液5mL和0.1mol/L氢氧化钠溶液10mL，用重蒸馏水定容。用快速滤纸过滤。 弃去最初滤液30mL，即为试液。 4.3.标准曲线的绘制： 取0.00，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL葡萄糖标准溶液，分别置于10mL 比色管中，各加3mL酶试液，在36±1℃水浴锅中恒温40min。冷却，用重蒸馏水 定容至10mL。用1cm比色皿，用含量为0.00的试液调整分光光度计的零点，在波 长505nm处，测定各比色管中溶液的吸光度。然后绘制标准曲线。 4.4.测定： 取0.50～5.00mL试液(4.2)，置于10mL比色管中。以下按4.3.1步骤操作，但 须用等量试液(4.2)调整分光光度计的零点。测出试液吸光度后，在标准曲线上 查出对应的葡萄糖含量。 5.结果计算： 样品中葡萄糖的含量以质量百分率表示，按式(1)计算：
校正仪器操作步骤完成后，仪器显示酶膜线性检查指令。用微量进样器注入 50 μL标准溶液，如显示值大于184.0，表示酶膜线性良好；小于184.0时，应按 下仪器线性校正键，进行线性校正，或更换新酶膜。 B3 酶膜抗干扰性的判定
校正仪器操作步骤完成后，用微量进样器吸取25 μL新配制的1％亚铁氰化 钾溶液，注入反应池进样口。当仪器显示值为－2.0～＋6.0时，表示酶膜抗干扰 符合要求；否则应更换新酶膜。
H 2O2 + C6H5OH + C11H13 N3O POD→ H 6H5 NO + H 2O 3.主要仪器和试剂 3.1试剂 3.1.1 组合试剂盒(须在4℃左右保存):
1号瓶:内含0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.0)100mL，其中4-氨基安替比林 为0.00154mol/L；
2号瓶：内含0.022mol/L苯酚溶液100mL； 3号瓶：内含葡萄糖氧化酶400U、过氧化物酶(辣根)1000U。 3.1.2 酶试剂溶液：将1号瓶和2号瓶的物质充分混合均匀，再将3号瓶的物质溶 解其中，轻摇，使其完全溶解。此溶液须在4℃左右保存，有效期1个月。 3.1.3 0.085mol/L亚铁氰化钾溶液：称取3.7g亚铁氰化钾结晶，溶于100mL重蒸 馏水中，摇匀。 3.1.4 0.25mol/L硫酸锌溶液：称取7.7g硫酸锌结晶，溶于100mL重蒸馏水中， 摇匀。 3.1.5 0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4 g氢氧化钠，溶于1000mL重蒸馏水中，摇 匀。 3.1.6 葡萄糖标准溶液：称取经100±2℃烘烤2h的葡萄糖1.0000g，溶于重蒸馏 水中，定容至1OOmL。将此溶液用重蒸馏水稀释V2.00→V100，即为200μg/mL葡萄糖 标准溶液。 3.2仪器和设备 3.2.1 研钵或粉碎机。 3.2.2 分析筛。 3.2.3 组织捣碎机。 3.3.4 恒温水浴锅。 3.2.5 可见光分光光度计。 3.2.6 微量移液管：1.00mL，精度0.01mL。
9.1.1.固体粉末状样品：取样品至少200 g，密闭；固体颗粒状样品：取样 品至少200g，粉碎或研细，通过100目分析筛，密闭；新鲜水果、蔬菜等固体样 品：取可食部分至少200g，将其密闭。
9.1.2.糊状样品：取样品至少200g，充分混匀，将其密闭。 9.1.3.固液体样品：取样品至少200g，捣碎后将其密闭在玻璃容器内。 9.1.4.液体样品：取样品至少200mL，将其密闭。如样品中含有二氧化碳， 须用三角瓶取200mL，摇至无气泡，置沸水浴中加热10min，取出冷却。 9.2.试液的制备 9.2.1.固体试样和固液体试样 一般固体试样和固液体试样：称取试样(9.1)1～10g于100mL烧杯内，精确至 0.0001g，移入100mL容量瓶中，定容，置放30min。用快速滤纸或脱脂棉过滤。 弃去最初滤液，收集1～2mL滤液于带盖小试管中。 水果、蔬菜试样：称取试样(9.1)1～10g于100mL烧杯内，精确至0.0001g。 加煮沸的蒸馏水30～50mL和5mL缓冲溶液(8.1.2)，继续煮沸3～5min，冷却后研 细或捣碎。用蒸馏水移入100mL容量瓶中定容。用快速滤纸或脱脂棉过滤。弃去 最初滤液，收集1～2mL滤液于带盖小试管中。 食用葡萄糖试样：称取试样(9.1)1～10g于100mL烧杯内，精确至0.0001g。 加约50mL蒸馏水，溶解后煮沸2min。冷却后移入1000mL容量瓶中，定容。 9.2.2糊状和液体试样 称取试样(9.5)1～10g于100mL烧杯内，精确至0.0001g。移入100mL容量瓶中， 定容。用快速滤纸或脱脂棉过滤。弃去最初滤液，收集1～2mL滤液于带盖小试管 中。
1％亚铁氰化钾溶液的配制：用100mL烧杯准确称取1.15 g亚铁氰化钾晶体， 加入少量蒸馏水使之溶解，转移至100mL容量瓶中，定容。
30～60 s，即可重复注入标准溶液(8.1.1c)数次，直至仪器显示允许开始测定样
品。当连续两次标准溶液显示值的相对误差小于2.0％时，即完成校正步骤。
9.4.测定样品
用试液(9.2)冲洗微量进样器，至少两次。准确吸取25μL试液(9.2)，用滤
纸擦干针尖外部，注入进样口。20～40s后读取显示值。
10.结果计算
样品中葡萄糖的含量以质量百分率表示，按式(2)计算：
R ×V3
X2
=
1 000 × m1 100
×100
=
R ×V3 1 000 ×…m…1 ………………(2)
式中：X2—样品中葡萄糖的含量，质量百分率，％； R—仪器测定值，mg/100 mL； V3—试液的定容体积，mL； m1—试样的质量，g。
9.3.校正仪器
吸取缓冲溶液(8.1.2)滴在电极表面。将一片酶膜圈安装在电极表面，使酶
膜圈中心和电极中心的白金完全贴紧，形成无气泡的薄层液体，然后将电极安装
在反应池内。开机仪器，自行冲洗。当出现进样指令后，用微量进样器准确吸取
25μL标准溶液注入进样口内。20～40s后仪器自动显示标准溶液的指示值。再等
8.主要仪器和试剂 8.1试剂 8.1.1组合试剂盒
a.葡萄糖氧化酶酶膜圈：含葡萄糖氧化酶15U；须在0～4℃左右保存，有效 期12个月。
b.复合试剂：含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、乙二胺四乙酸二钠、氯化钠、苯 甲酸钠、庆大霉素硫酸盐；常温保存，有效期24个月。
c.β-D-葡萄糖标准溶液：浓度100.0mg/100mL；密封保存，有效期12个月。 8.1.2缓冲溶液：将一袋复合试剂(8.1.1b)溶解在1000mL蒸馏水中。 8.2仪器 8.2.1 研钵或粉碎机。 8.2.2 分析筛。 8.2.3 组织捣碎机。 8.2.4 酶电极葡萄糖分析仪：直接读数式，测量范围0～100.0mg/100mL；测量 精度±1.0mg/100mL(β-D-葡萄糖)。 8.2.5 微量进样器：容量50μL，精度1μL。 9.过程简述 9.1.试样的制备
A3 判定规则 测得葡萄糖的回收率，如在95％～105％范围内，则判定葡萄糖氧化酶和过
氧化物酶符合要求。 附 录 B(标准的附录)
葡萄糖氧化酶酶膜圈性能判定方法 B1 酶膜活性的判定
校正仪器时，注入25 μL标准溶液(8.1.1c)，仪器显示标准溶液的指示值后， 按下酶膜响应键，则显示出酶膜活性相对值。如相对值大于10.0，则表示酶膜活 性符合要求；相对值小于10.0时，应更换新酶膜。 B2 酶膜线性的判定