色谱分析法实验实验一填充柱气相色谱进样技术练习一实验目的

色谱分析法实验

实验一填充柱气相色谱进样技术练习

一、实验目的

1、熟悉填充柱色谱仪进样系统结构。

2、掌握微量注射器的使用方法。

3、练习进样技术。

二、仪器与试剂

1、仪器气相色谱仪一台，上海分析仪器厂。

2、试剂甲乙酮、环已烷、苯，均为色谱纯或优级纯。

三、实验步骤

1、色谱条件柱2 mX3mm不锈钢柱，载体：硅烷化白色载体(60—80目)固定液，DNP，配比：20：100，

柱温90℃，捡测器温度了90℃，气化室温度：130℃，

氢火焰离子化检测器。

2．操作：

(1) 调整仪器，使其正常运行

(2) 用1μl注射器分别取0.1μl三种纯物质，多次进样，

观察同一物质相同进样量情况下色谱峰重现性。

(3) 将三种物质按一定比例混合，制成混合样，用10μl

注射器进样0.2μl ，多次进样观察每次进样时色谱

峰重现情况。

四、问题讨论

1、为什么有时同一样品同一进样量时色谱峰形(如峰高)不同?

2．为什么有时进样后不出峰?

五、注意事项

1、一取好样后应立即进样，进样时整个动作应稳当、连贯、

迅速。

2、硅橡胶密封垫圈在几十次进样后容易漏气，需及时更换。

实验二有关色谱参数的测试及计算

一、目的要求

1、通过本实验基本色谱参数的测试与计算，定量地了解溶

质组分在色谱柱过程中热力学和动力学作用的量度。

2．理解各色谱参数的意义及其相互关系。

3、通过本实验进一步掌握柱效、柱选择性、分离能力、

保留值等性质，使之能选择出最佳色谱操作条件，得到

可靠的定性，定量结果。

二、基本原理

在规定的色谱条件下，测定惰性组分的死时间(tM)及被测组分的．保留时间(tR)、半高峰宽(wh/2)及峰宽(w)等参

数，便可计算出基本色谱参数值。

三、仪器与试剂

1 仪器气相色谱仪一套，色谱柱2000mmX3mm一支，

FID检测器；微量注射器(5—10μl)一支。

2 试剂甲烷(自制)，正己烷，正庚烷，正辛烷，乙酸正丁酯，102白色载体(60—80目)；Apienzon—L；

石油醚(低沸程馏分)；DNP，乙醚，二氯甲烷。

四、实验步骤

1．联结好仪器系统，检查并排除故障至正常工作状态。

2．制备填充色谱柱：

(1)Apienzon-L柱：经计算称取适量102白色硅烷化载

体(60–- 80目)和ApienzonlL油酯(以5%重量比计)，用

CH2Cl2将其溶解并均匀地涂渍在载体上，挥发溶剂至

干。负压装柱至均匀满口，按老化程序老化好待用。

(2)DNP柱：以15%重量比计算称取DNP足量，用

乙醚溶解，均匀涂渍在102白色硅烷化载体上，挥发

溶剂至于，装柱，老化待用。

3．色谱条件 Tj＝120℃，Tc＝100℃，Td＝120℃；

载气：N2流速30m1／min，H2流速40ml／min，空

气流速350m1／min记录仪灵敏度10mV／25cm,

纸速10mm／min；甲烷,乙酸正丁酯 n-C06n-C07 n-C08

混合样4μ1，信号衰减视灵敏度状况而定。

4．测试待仪器开启运行至基线平稳后，取自制纯净CH4

样品10μ1注入GC仪器系统(如信号过截则可以适当减

少进样量)，计时，准确记录保留时间(tM)。重复进样5－

10次，至tM值绝大多数重复为止。取其平均值，为本实

验的tM值[tM (甲烷)]。再取四种混合组分的样品溶液4μl

注入仪器系统，得到较理想谱图后，再重复进样3－ 5

次，取其平均保留时间为本实验各组分的保留时间[tR (乙

酸正丁脂)，tR (正已烷)、tR (正庚烷)、tR (正辛烷)]。

5．测试结果在仪器操作条件稳定无误的情况下，应得到

分离状况良好的色谱图。

五、数据处理

1、记录甲烷的tR值和四组分混合样的各保留值(平均值)。令

tn-1=tR(正己烷); tn=tR(正庚烷);tn 1=tR (正辛烷);ti=tR (乙

酸正丁酯)。

2．按g—4940—85色谱术语标准测量并记录各组分的半高

峰宽Wh/2和峰宽W值。

3．各基本参数计算：

(1)调整保留时间：以t 'R = tR －tM关系计算出t'n-1、 t'n 、t'n 1 及t'i；

(2)相对保留值(ri,s)：按ri,s=t 'R(i)/ tM的关系，计算出

γ正庚垸，正已垸，γ乙酸正丁酯，正已烷，γ正辛烷，正已垸(以正已烷作标准物时)；

(3)容量因子：根据K＝t 'R/tM的关系，计算出K' (正己烷)

K' (正庚烷)，K'(乙酸正丁脂)，K'(正辛烷)值;

(4)理论塔板数：以其中K'=2—5的某组分为代表，根据

n=5．54(tR／Wh/2)2或n=16(tR／W)2的关系计算出柱效率

(每米柱长所具有的理论塔板数);

(5)有效塔板数:neff=5．54(t'R／Wh/2)2或neff=16(t'R／W)2

的关系计算出有效塔板数(仍可用K'=2—5的组分)。当K'

值足够大时，n≈neff；

(6)分离度:可根据R=2(tR2－tR1)/(W1 W2)关系，计算出四

种组分中较难分离的二组分间的分离度;