GoldView II核酸染料说明书
关于电泳GoldViewTM 核酸染料安全性问题
关于电泳GoldViewTM 核酸染料安全性问题GoldViewTM 核酸染料——使用说明“注意事项”中有指出：虽然未发现GoldView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。
最近看到的资料显示goldview的主要成分含有吖叮橙，吖叮橙是不致癌，但却是强烈致突变的物质。
吖啶橙(Acridine Orange，AO)简介3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 ·HCl ·ZnCl2, 分子量438.12 g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。
它与细胞中DNA 和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA 结合量多发桔黄色或桔红色荧光。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA 染色。
因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。
吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
goldview的染色效果：有人经过实验对比发现，信号不太灵敏，有些条带检不出来，而EB 胶却清晰可见。
关于GoldViewTM 核酸染料中吖叮橙毒性文献The effective ingredient in GoldView is acridine orange (extremely cheap from Aldrich or Sigma at ~100g/$140!)Acridine orange is a known gel stain since 1970s (“Analysis of single- and double-stranded nucleic acids on polyacrylamide and agarose gels by using glyoxal and acridine orange”. Proc Natl Acad Sci U S A. 1977 Nov;74(11):4835-8.Acridine orange is a highly toxic and known mutagen!Selected list of papers on acridine orange toxicity:Web, RB. Mutat Res. 1984 Jul;137(1):1-6.Wugmeister, M. Yale J Biol Med. 1983 Jan-Feb;56(1):9-13.Martin, SE. Mutat Res. 1981 Jun;82(1):41-6.Ashad, R. Letters in Applied Microbiology 2006, 42:94.因此在电泳实验过程中，小心注意点，做好防护工作！！！。
GreenView凝胶核酸染料10000×水溶液
EB 终结者Red 凝胶核酸染料10,000×DMSO（Nucleic Acid Gel Stain, 10,000×DMSO ）Cat number ：KGM025R For Research Use OnlyStore at 4℃ for six monthsExpire date ：一、 试剂盒说明EB 终结者Red 凝胶核酸染料是一种高灵敏度的用于检测琼脂糖凝胶以及丙烯酰胺凝胶中的核酸荧光染料，不论是双链还是单链的DNA 或者RNA ，EB 终结者Red 染料都有很灵敏的染色信号。
使用者可以选择在制备凝胶过程中或者制备完毕之后进行染色。
EB 终结者Red 染料可以匹配300nm 、254nm 或者蓝光紫外透射仪，也可以用于匹配了可见光激发器如488nm 激光器的凝胶成像仪。
本产品是10,000X 的EB 终结者Red 染料浓缩型溶液，用于制胶前染色可以被10,000倍稀释，用于制胶后染色可以5,000倍稀释。
1管10,000X 溶液至少可以用于染色100张迷你胶。
用EB 终结者Red 染色凝胶中的核酸可以用于下游的胶抽提和克隆实验。
EB 终结者Red 染色可以通过酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀的方法很高效地从DNA 中去除掉。
EB 终结者Red 光谱特性Excitation (blue) and emission spectra (red) of EB 终结者Red bound to dsDNA in TBE buffer.EB 终结者Red Dye Ex/Em: 535/615 nm, bound to nucleic acid..二、试剂盒组份三、 操作说明1、制胶后染色1.1、根据您的实验步骤进行核酸的凝胶电泳。
1.2、以TE 、TBE 或者TAE buffer 稀释EB 终结者Red 10,000X 储液试剂5000倍，成为2X EB 终结者Red 染色液。
1.3、小心地将凝胶转移至聚丙烯容器中，缓缓倒入足量的2X EB 终结者Red 染色液，保证浸没胶体。
琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立
琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立王燕;彭莉萍;罗镇明【摘要】目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染.方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果.结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4％Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳.结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2012(035)004【总页数】3页(P276-278)【关键词】琼脂糖凝胶电泳;核酸染料;Goldview【作者】王燕;彭莉萍;罗镇明【作者单位】遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海 519041【正文语种】中文【中图分类】Q33目前实验室中所用的核酸染料主要有EB(溴化乙啶)、SYBR Green I和Goldview 等。
作为核酸染料它们对人体都存在一定程度的危害。
EB作为一种常规的核酸染料曾广泛的被应用于琼脂糖凝胶[1]和聚丙烯酰胺凝胶[2]中DNA与RNA的观察和检测，但EB是一种诱变剂，可插入核酸相邻碱基平面之间，引起基因突变，具有中等毒性，对人体有潜在的危害性[3]。
SYBR Green I是近些年新推出的一种荧光核酸染料，因其危害性较低而逐渐成为EB的替代品之一[4]，但ssDNA的检测灵敏度不高，效果不好，应用于DNA凝胶电泳中稳定性不高。
目前琼脂糖凝胶电泳中Goldview已被广泛使用，其染色效果和灵敏度与EB相近，且未证实有致癌性[5]，是EB较理想的替代品。
SYBR Green I 核酸染料使用说明
SYBR Green I核酸染料使用说明货号：SR4110规格：50/100ul保存：-20℃避光保存，有效期至少一年。
产品说明：SYBR Green I染料是一种直接与双链DNA(dsDNA)结合的荧光染料，是荧光定量PCR 最常用的DNA结合染料。
在定量PCR中，SYBR Green I可与双链DNA（dsDNA）非特异性结合后发出荧光，则可以通过检测反应体系中的SYBR Green I荧光强度，达到检测PCR产物扩增量的目的。
游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，一旦与dsDNA结合，其荧光增加1000倍，一个反应发出的全部荧光信号与出现的dsDNA量成比例，且会随扩增产物的增加而增加；所以通过检测PCR反应液中的荧光信号强度，可以对目的基因进行准确定量，同时还可以测定扩增的目的DNA片段的熔解温度。
使用说明：使用时，配置PCR反应混合液，将10000×SYBR Green I浓缩液加入到PCR反应体系，使终浓度为0.5×（0.2×到1×之间调整）。
以上操作建议在冰上进行。
注：①反应液配制方法和PCR扩增条件请参照DNA聚合酶使用说明。
②Realtime PCR扩增仪的使用方法，请参照各仪器说明书。
注意事项：使用浓度对荧光PCR结果的影响SYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。
如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低，这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应，降低PCR反应效率。
所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度，反应的终浓度为0.2×到1×之间。
镁离子浓度的影响提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。
我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时，镁离子浓度比无SYBR Green I的普通PCR反应高出0.5～3mM。
GoodViewTM核酸染料使用说明
GoodViewTM核酸染料使用说明概述GoodViewTM是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoodViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。
通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。
因此用Goodview代替EB不失为一种明智的选择。
使用方法 1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%～2%）在微波炉中融化。
2. 加入5μl GoodView，轻轻摇匀，避免产生气泡。
3. 冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4. 电泳完毕在紫外灯下观察。
若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。
保存：室温保存2年注意事项 1. 胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。
2. 加入GoodView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。
3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时，建议使用GoodView染色，在自然光下切割DNA条带，避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4、未发现GoodView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。
GoodView和EB灵敏度检测对比 1. GoodViewTM核酸染料检测检测模板：5～70ng λDNA（将λDNA稀释成不同浓度进行检测）。
GoldViewTM核酸染料用量：100ml琼脂糖胶溶液（浓度1%）微波炉中融化后加入5μl GoodViewTM染料2. EB核酸染料的检测检测模板：5～70ng λDNA（将λDNA 稀释成不同浓度进行检测）。
最新GelRed-核酸电泳用染料
G e l R e d-核酸电泳用染料GelRed核酸染料（10,000×水溶液）GelRed核酸染料特点● 无毒性：GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远远小于EB。
● 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
● 稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强。
● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
● 操作简单：与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
● 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA 或 ssDNA 或 RNA 染色。
●无需改变滤光片及观察装置：标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。
GelRed使用方法简介1．胶染法（用法同EB）（推荐方法）（1）制胶时加入GelRed核酸染料。
每50mL胶中加入5μL GelRed 核酸染料。
（2）按照常规方法进行电泳即可。
◆注：此方法染色染料用量相对较少。
500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。
当染料稀释在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时可以使用微波炉加热，从而与通常制备预制凝胶的方法相同。
含有染料的预制凝胶可以成批制备，并可以长期保存直到使用。
2．泡染法（1）按照常规方法进行电泳。
（2）用0.1M的NaCl水溶液按照3300﹕1的比例稀释GelRed浓缩液，混匀，制成3× GelRed染色溶液。
（例如：在45mL水溶液中加入5mL 1M的NaCl溶液及15μL10,000× GelRed水溶液。
核酸染色剂SYBR—Gold染色特性分析
ｗａ ｓ ｍｕ ｃ ｈ ｍｏ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｔ ｈ ａ ｎ ＥＢ ｔ Ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｄ ｏ ｕ ｂ ｌ ｅ ｓ ｔ ｒ ａ ｎ ｄ ＤＮＡ． Ｂ ｕ ｔ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｒ ｅ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ＤＮＡ
ｕ ｓ ｅ ｄ ｐｏ ｓ ｔ ｓ ｔ ａ ｉ ｎｉ ｎｇ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｅ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ Ｏ ｄｙ ｅ ｄ ｏｕ ｂｌ ｅ ｓ ｔ ｒ ａ ｎｄ ＤＮ Ａ ｉ ｎ ａ ｇａ ｒ ｏｓ ｅ ｇｅ ｌ ｅｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏｐ ｈｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ． Ｔｈ ｅ ｓ ａｍ ｅ ｗａｙ ｉ ｓ ｕｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ Ｄ ＮＡ ｗｉ ｔ ｈ ＥＢ ａ ｓ ａ ｃ ｏｎ ｔ ｒ ｏ １ ． Ａ ｎｄ ｗｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｅ ｄ ｔ ｈｅ ｒ ｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ ｂｙ ｔ ｈ ｅ ｇ ｅ ｌ ｉ ｍａ ｇ ｉ ｎ ｇ ｓ ｙｓ ｔ ｅ ｍ ．Ｒｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ Ｗｅ ｆ ｏｕ ｎｄ ＳＹＢＲ— Ｇｏ ｌ ｄ
中图分类号 ： Ｒ３ ９ ２ ． ３ 文 献标 识码 ： Ａ
Ｔｈ ｅ Ｃｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ＹＢ Ｒ Ｇｏ ｌ ｄ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｄ ｙ ｅ Ｊ Ｉ Ｎ Ｌｅ ｉ ．（ Ｅｘｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｂｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ
Ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ Ｂｉ ｏ ｌ ｏ ｇｙ Ｔｅ ａ ｃ ｈ ｉ ｎ ｇ． Ｘｕ ｚ ｈ ｏ ｕＭ ｅ ｄｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇｅ ， Ｘｕ ｚ ｈ ｏ ｕ， Ｊｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ ２ １ ０ ０ ２， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
SYBR Green Ⅰ 核酸染料(10000×)使用说明
SYBR GreenⅠ核酸染料（10000×）使用说明货号：SY1020规格：50/100ul保存：-20℃避光保存，有效期12个月。
产品简介：采用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺电泳方法检测双链DNA时，SYBR GreenⅠ是最灵敏的荧光染料，当其结合到核酸上时，会产生很强的荧光及高量子产额，DNA/SYBR GreenⅠ复合物的量子产额均为0.8。
由于与核酸结合后能产生很强的信号，背景极低，并且对核酸的亲和力高，因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。
SYBR GreenⅠ的最低检出限：20pg DNA(254nm);60pg DNA(300nm紫外透射)；此外，SYBR GreenⅠ还可以用于检测寡核苷酸(1-2ng,300nm紫外透射)，比EB灵敏20至100倍。
SYBR GreenⅠ用于电泳检测DNA时，既可预染，也可电泳后再进行染色。
SYBR Green Ⅰ用于琼脂糖电泳检测DNA后，可直接将DNA转移至膜上，进行后续核酸印迹杂交反应。
此外，SYBR GreenⅠ与DNA的结合对多种常用的限制性内切酶活性无抑制作用，可直接进行消化或连接。
使用说明：该产品使用方法同EB.点染法：用于琼脂糖凝胶电泳：取原液1ul加入TE缓冲液或灭菌双蒸水1ml，再加入6×DNA Loading buffer上样缓冲液1ml混匀，(此时溶液为1：2000稀释，即为工作液)电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后静置5min后直接上样。
胶染法：常规配置琼脂糖凝胶100ml，加热至融化，待温度将至50-70℃（感觉不烫手）加入该原液10ul。
待胶凝固后即可电泳，电泳结束后即可在紫外照射下观察。
注意事项：1.SYBR GreenⅠ应避光存放，原液保存于-20℃；建议分装冻存，短期可以4℃保存。
2.胶染法灵敏度较高，须将商品化的DNA marker稀释5-10倍后使用。
3.在预染色方法中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。
基因工程实验报告2012
实验一植物总DNA的提取、纯化一、实验目的：掌握从植物的组织（细胞）中提取DNA的方法。
二、实验原理：十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物。
在高盐浓度条件下，核酸以稳定形式与去污剂CTAB络合于溶液中，当降低溶液浓度到一定程度时，CTAB与核酸的复合物从溶液中沉淀下来，通过离心就可将该复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB溶于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB溶于乙醇中。
苯酚、氯仿、异戊醇混合液抽提更好，但是苯酚较难除去。
EDTA螯合Mg2+或Mn2+，抑制Dnase（DNA酶）的活性，防止降解DNA。
三、仪器、材料与试剂：材料：青皮的叶子（野外采集，冷冻于-20度的冰箱中）。
主要仪器：水浴锅、台式高速离心机、研钵、涡旋仪（避免破坏核酸链，震荡时间要短，混匀即可，可以用手来混匀）、移液枪等。
主要试剂和材料：CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）裂解液：2%CTAB（W/V）、20 mmol EDTA(pH8.0)、100 mmol Tris-HCl (pH8.0)、1.4 mol NaCl 。
氯仿：异戊醇（24：1）。
异丙醇，无水乙醇。
TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl(pH8.0)、1mmol/L EDTA。
四、实验步骤：1. 取2g左右的嫩叶子放入预冷的研磨中，第一次加入较多的液氮，开始先慢慢磨开后研磨中待液氮量较少时快速磨动，如发现液氮挥发完迅速加入液氮（加入时动作要轻，防止粉末溅起），重复两次。
2. 将粉末加入预冷1.5mlEP管中（约1/3）后，加入事先700ul65℃水浴的2%CTAB和30ul室温β-巯基乙醇（剧毒），轻轻摇动混匀。
放入65℃水中水浴40min，每10min取出震荡使沉淀散开。
3. 取出后冷却至室温，加入氯仿/异戊醇（24：1，V/V）至满管（加药品千万注意别让药品污染桌面及手上，有必要可带面罩），剧烈震荡后12000rpm离心10min，取上清加入500µl 氯仿/异戊醇12000rpm 离心10min。
GoldView II型核酸染料说明书
第1页，共1页GoldViewII 型核酸染料(5000×)说明书货号：G8142规格：0.5mL(5000×)保存：-20℃，短期2-8℃保存。
注意：本产品属于微量核酸检测试剂，使用时请严格按照说明书操作。
第一次使用前请融化后离心再开封。
产品简介：GoldView II 是一种可代替溴化乙锭（EB ）的新型花青类核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA 时，GoldView II 与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度比EB 强5-10倍，使用方法与之完全相同。
GoldView II 与核酸结合后，最大吸收峰为497nm ，另外，其在254nm 处也有一强吸收峰，发射波长为520nm ，在紫外透射光下双链DNA 呈现绿色荧光，而且也可用于染RNA 。
通过Ames 试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB ）是一种强致癌剂。
因此用Goldview II 代替EB 不失为一种明智的选择。
本产品为DMSO 溶解，低温时为固体状态，温度到达20℃以上即可融化。
使用方法（仅供参考）:胶染：由于GoldView II 敏感度比EB 高数倍，使用时，请将商品化的Marker 用1×DNA Loading Buffer 作5-10倍的稀释，上样1-10µL ，以得到较好的结果(通常稀释10倍后上样5µL)。
对于待检测样品，通常仅需1-2µL 即可。
如果浓度较高，也须作一定倍数稀释，否则会造成条带不整，影响迁移速率。
凝胶回收请选择点染方法。
1.将50mL 琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。
2.冷却至不烫手时加入10-15µL GoldView II (不能少于10µL)，轻轻摇匀，避免产生气泡。
3.倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4.电泳完毕在紫外灯下观察。
构建质粒
构建质粒一、选择载体选择合适的载体，可在SnapGene Viewer上查看载体图谱，选择合适的酶切位点。
二、设计引物根据目的基因的序列和酶切位点设计目的基因全长引物。
三、提取RNA提取步骤见试剂盒说明书或见RNA提取篇四、逆转录逆转录步骤见试剂盒说明书五、PCR扩增这一步要使用高保真酶，按照说明书的条件进行PCR扩增，扩增完成后进行琼脂糖电泳。
六、琼脂糖电泳1.5%琼脂糖（含万分之一Goldview核酸染料）将扩增产物进行电泳，电泳缓冲液1*TAE,电压120V，电泳45分钟，电泳后用凝胶成像系统观察是否有目的基因条带。
七、胶回收胶回收步骤见试剂盒说明书八、酶切分别将胶回收的目的基因片段和空载质粒酶切，根据说明书进行酶切，37度酶切5小时。
九、电泳并胶回收酶切后的目的基因和载体产物分别电泳并胶回收。
十、酶连用T4连接酶按照说明书进行酶连，4度过夜。
十一、转化1、从-80℃冰箱中取出100微升感受态，立即放冰上解冻（约2分钟）；2、加入2-3微升酶连产物，慢慢摇匀，并上放置30分钟；3、42℃水浴热击60秒，速置冰上冷切3-5分钟；4、向管中加入1mlLB液体培养基（不含抗生素），混匀后37℃振荡培养45分钟；5、取上述菌液涂布于含抗生素的平板固体培养基上，正面朝上放置30分钟（视实际情况而定），待菌液完全被吸收后倒置平板，37℃恒温培养箱培养12-16小时。
十二、挑菌、摇菌将平板从37℃恒温培养箱中取出，在酒精灯旁边挑选单个肉眼可见的菌落，菌落不宜太大，否则会有杂菌混入。
将菌落挑入装有LB培养基的摇菌管中，放入恒温摇床中180-200rpm培养过夜（一般12-16小时）。
十三、抽提重组质粒1、抽提前要甘油保菌（40%甘油和菌液1:1混匀，直接放置到-80℃冰箱。
）2、抽提步骤见试剂盒说明书十四、重组质粒初步鉴定1、将重组质粒进行酶切，37℃酶切1小时。
2、琼脂糖跑胶鉴定：将酶切产物置于1.5%琼脂糖（含万分之一Goldview核酸染料）将扩增产物进行电泳，电泳缓冲液1*TAE,电压120V，电泳45分钟，电泳后用凝胶成像系统观察是否有目的基因条带。
GoodViewTM DNA染料(溴化乙锭的替代品)
GoodView TM 核酸染料使用说明概述GoodView TM是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoodView TM与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。
通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。
因此用Goodview代替EB不失为一种明智的选择。
使用方法1.将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%～2%）在微波炉中融化。
2.加入5µl GoodView，轻轻摇匀，避免产生气泡。
3.冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4.电泳完毕在紫外灯下观察。
若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。
保存：室温保存2年注意事项1.胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。
2.加入GoodView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。
3.通过凝胶电泳回收DNA片段时，建议使用GoodView染色，在自然光下切割DNA条带，避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4、未发现GoodView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。
GoodView和EB灵敏度检测对比1. GoodView TM核酸染料检测检测模板：5～70ng λDNA（将λDNA稀释成不同浓度进行检测）。
GoldView TM核酸染料用量：100ml琼脂糖胶溶液（浓度1%）微波炉中融化后加入5μl GoodView TM染料2. EB核酸染料的检测检测模板：5～70ng λDNA（将λDNA稀释成不同浓度进行检测）。
GoldView(10000×)
北京雷根生物技术有限公司
GoldView(10000×)
简介：
GoldView 是一种可替代溴化乙锭(Ethidium Bromide)的核酸染料，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA ， DNA 紫外光透射仪激发并放射出绿色荧光信号。
GoldView 具有一定的毒性。
组成：
自备材料：
1、 电泳缓冲液(如TAE 、TBE 等)
2、 微波炉
3、 紫外分析仪或凝胶成像系统
操作步骤(仅供参考)：
1、 将50ml 琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8～2%)在微波炉中融化。
2、 加入5～10μl GoldView ，轻轻摇匀避免气泡。
3、 冷却至50～60℃不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固，拔出梳子并置于电泳缓冲液
中，上样电泳。
4、 紫外分析仪或凝胶成像系统下观察并拍照或记录。
注意事项：
1、 凝胶厚度一般不超过0.5cm ，凝胶太厚会影响检测的灵敏度。
2、 通过凝胶电泳回收DNA 片段时，应避免长时间暴露于紫外线下。
3、 GoldView 有一定毒性，对皮肤、眼睛有一定刺激，请小心操作。
4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 NA0093 Storage GoldView(10000×) 1ml 4℃ 避光 使用说明书 1份。
常用的核酸染料有哪些
EB（溴化乙锭）：溴化乙锭是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂，为强致癌诱变剂，但价格便宜。
它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。
EB的这种特性使其成为一种核酸染料，常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色。
溴化乙锭在紫外区302nm和366nm处有吸收峰，在紫外光的照射下，溴化乙锭可被激发出橙红色的荧光（590nm）。
结合有DNA的溴化乙锭复合物的荧光强度要比没有结合DNA的染料高出20-30倍，因此溴化乙锭可检测到少至10ng的DNA条带，非常灵敏。
Gel Green和Gel Red：GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
其特点有：高灵敏度：GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料之一；稳定性极好：可以使用微波炉加热，可以在室温下保存；更安全：艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭（EB）；广泛的适应性：适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色；染色过程简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗；对 DNA 和 RNA 的迁移影响小：对核酸迁移的影响小于 SYBR Green 。
与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容：使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时，GelRed 可以完美的替代EB；使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时，GelGreen 足以替代任意一种 SYB染料。
但该染料会使小片段DNA迁移慢一些（与EB相比).Gold View I型/II型：Goldview对于大片段DNA的染色效果良好，但是在对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。
GelRed说明书中文版GelRed10,000215;水溶液说明GelRed核酸染料特点无毒性Ge
GelRed说明书中文版GelRed（10,000× 水溶液）说明 GelRed 核酸染料特点● 无毒性： GelRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也说明，该染料的诱变性远远小于 EB。
● 灵敏度高：适用于各类大小片段的电泳染色，对核酸迁移的阻碍小于 SYBR Green I。
● 稳固性高：适用于利用微波或其它加热方式制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极为稳固，耐光性强。
● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
●操作简单：EB 一样，与在预制胶和电泳进程中染料不降解；而电泳后染色进程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观看。
● 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
● 与 EB 有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观看装置：标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，利用与观看 EB 相同的一般紫外凝胶透射仪观看即可，在 300nm 紫外光周围可取得最正确激发。
可是GelRed 不能被 488 nm 氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发，因此不推荐利用此类激发装置的成像系统。
美国 Biotium 公司是一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司，公司位于美国加利福尼亚的 BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。
该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其它特殊生化产品。
其产品被普遍应用于细胞生物学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模挑选等众多领域. GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳固于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
其水溶染色剂通过美国环保局平安认定，废弃物可直接倒入下水道，而可不能造成任何环境污染。
绿色荧光核酸染料(10000×)说明书
绿色荧光核酸染料（10000×）说明书货号：G8140规格：1.0ml（10000×）保存：常温保存，有效期至少一年。
产品介绍：绿色荧光核酸染料是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型DNA染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。
使用方法：将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）放入微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手时）后加入10ul绿色荧光核酸染料，轻轻摇匀后倒胶（避免产生气泡），待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。
注意事项：1、胶厚度宜不要超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。
2、加入绿色荧光核酸染料的琼脂糖凝胶反复融化可能对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。
3、绿色荧光核酸染料在pH3.6-7.0之间能更好地与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液。
4、由于绿色荧光核酸染料产生绿色荧光，因此不适于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像系统保存图像。
5、含有绿色荧光核酸染料的凝胶不适于进行凝胶回收实验。
要进行回收实验，请使用EB或GoldView II型核酸染色剂。
6、绿色荧光核酸染料特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当)；当DNA片段小于1kb时，检测灵敏度低于EB，特别是低于500bp的片段，绿色荧光核酸染料可能亮度很弱或检测不到。
如果检测小片段的DNA，请选用GoldView II型核酸染色剂，该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA 片段。
应用特点：高效：绿色荧光核酸染料可以检测50ng级的DNA或RNA片段。
其激发波长有多处，其中两处最强：230nm 和490nm。
GreenView凝胶核酸染料10000×水溶液
AlamaBlue 细胞毒性检测试剂盒（AlamaBlue Cell Viability Assay Kit ）Cat number ：KG328 For Research Use OnlyStore at 4℃ for six monthsExpire date ：一、 试剂盒说明AlamaBlue 细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。
AlamaBlue 通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应，将非荧光信号的染料转换成为一红色荧光物质，试卤灵（9-羟基-3-异吩恶嗪酮 7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮），从而检测细胞的存活率。
维持细胞生产需要还原性环境而抑制生长则表现为氧化型环境。
细胞生长率相关的降低可表现为氧化还原指示剂从氧化型（非荧光素、紫色）转为还原型（荧光素、红色）。
该荧光信号可以用530~560nm 的激发波激发，在590nm 处可以获发射波，检测570和600nm 的的吸光度值，校正监测值，可以减去相应的570nm 和600nm 的背景吸光度值。
检测所产生的荧光信号是与样品中的活细胞数成正比的。
AlamaBlue 细胞活性检测试剂盒的灵敏度相似于[3H]胸苷法检测细胞增殖法。
根据不同类型的细胞，AlamaBlue 可以检测到至少40个细胞，同时保证很好的重现性和灵敏度。
作为试卤灵（紫红、红色荧光）可以进一步被还原为水解化的试卤灵（无色、无荧光），当细胞数量增多，所有的刃天青（7-羟基-3-羰基-10-氧化-三氢吩恶嗪）被转换为试卤灵（9-羟基-3-异吩恶嗪酮 7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮），试剂盒的信号反而会发生衰减。
因此，对于您所用的试剂盒来说，针对不同的细胞类型，应该调整您的细胞数，做相应的优化，才能得到更好的结果。
二、试剂盒组份三、 操作说明以下操作可用作通用指导建议。
考虑不同细胞类型与培养条件的差异性，有必要根据实际情况优化您的操作步骤。
生物工程研究生实验内容
⽣物⼯程研究⽣实验内容《⽣物⼯程综合实验》实验指导书张彩莹编写适⽤专业：2016级⽣物⼯程专业研究⽣⽣命科学与技术学院2016年10⽉前⾔随着⽣物技术的发展，⽣物⼯程的专业技术⼈员的需求更为迫切，特别是⽣物技术已经渗透到各个⾏业，并已蓬勃发展。
⽣物技术的发展不但要有深厚的理论基础，⽽且要求专业技术⼈员具有较强的动⼿能⼒。
由于该学科是⼀门实践性较强的科学，所以在培养⽣物⼯程专业学⽣时要特别注意学⽣实验能⼒的培养，尤其是专业基本操作。
本专业学⽣的实验课程已经包括⽣物化学实验、微⽣物实验、基因⼯程实验、细胞⼯程实验和发酵⼯程实验等基础课程实验。
这些实验为培养学⽣的基本操作能⼒、提⾼学⽣的实际动⼿能⼒等奠定了良好的基础，但是这些实验都是单个的⼩实验，各个实验各⾃为⼀体，没有系统地相互关联，所以学⽣完成实验后没有⼀个完整的概念。
本课程是在原有课程实验的基础上开设的综合性实验，放弃了原来单独⼩实验的结构，改为独⽴的⼤实验，增加了学⽣的设计性和主动性。
这些实验既注重和加强了原来各⾃的实验内容，⼜注意到相互联系，使学⽣有⼀个完整的操作过程，对理解⽣物⼯程技术有了进⼀步的认识。
根据教学计划的安排，本课程设置了两个综合实验：（1）DNA的分离提取及核酸电泳；（2）从⽣物组织中分离提取活性物质及鉴定。
以期通过这两个综合实验的完成，使同学们充分了解⽣物技术原理并熟练掌握⽣物活性物质分离、纯化与鉴定的常⽤⽅法。
涉及的⽅法有：溶剂提取法、酶活⼒测定、物质含量测定(分光光度法)。
本课程主要以学⽣⾃⼰动⼿操作为主，教师指导学⽣完成实验内容，使同学们在开放的实验环境下，充分发挥主观能动性，摸索试验条件，解决具体问题，培养应⽤基本理论去分析和解决实际问题的能⼒。
希望通过这些实验和探索，让同学们获得⽣物⼯程专业基本的实验技术训练，为今后独⽴从事科研和开展相关专业⼯作打下扎实的基础。
实验须知⽣物⼯程综合⼤实验教学是⽣物⼯程专业课程的重要组成部分，是使学⽣进⼀步理论联系实际，掌握⽣物⼯程专业学⽣所具备的基本操作技能，提⾼学⽣分析和解决问题能⼒，养成严密科学态度和良好⼯作作风必不可少的教学环节。
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GoldView II核酸染料说明书
货号：G8142
规格：0.5ml(5000×)
保存：-20℃，短期4℃保存。
注意：本产品属于微量核酸检测试剂，使用时请严格按照说明书操作。
第一次使用前请融化后离心再开封。
产品简介：
GoldView II是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型花青类核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldView II与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度比EB强5-10倍，使用方法与之完全相同。
GoldView II 与核酸结合后，最大吸收峰为497nm，另外，其在254nm处也有一强吸收峰，发射波长为520nm，在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而且也可用于染RNA。
通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。
因此用Goldview II代替EB不失为一种明智的选择。
本产品为DMSO溶解,低温时为固体状态,温度到达20℃以上即可融化。
使用方法:
胶染：
由于GoldView II敏感度比EB高数倍，使用时，请将商品化的Marker用1×DNA Loading Buffer作5-10倍的稀释，上样1-10µl,以得到较好的结果(通常稀释10倍后上样5ul)。
对于待检测样品，通常仅需1-2µl即可。
如果浓度较高，也须作一定倍数稀释，否则会造成条带不整，影响迁移速率。
凝胶回收请选择点染方法。
1.将50ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。
2.冷却至不烫手时加入10-15µl GoldView II(不能少于10ul)，轻轻摇匀，避免产生气泡。
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3.倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4.电泳完毕在紫外灯下观察。
若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰的照片。
点染：
染色效果不如胶染方法，但成本更低，同时适用于凝胶回收。
1.常规方法制备不含任何染料的琼脂糖凝胶。
2.用3×Loading Buffer将本产品稀释500-1000倍，现用现配。
3.取稀释后的染料2µl与5µl样本混匀后上样即可。
泡染:
1.常规方法制备不含任何染料的琼脂糖凝胶。
2.上样,电泳后将胶放入经TAE稀释2000倍的染料中浸泡30分钟即可
注意事项:
1.胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。
2.虽然未发现GoldView II有致癌作用，但其由DMSO溶解，对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。
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