干扰和回收实验
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
样本中的异常物质：溶血、黄疸、脂血。
药物：常见处方与非处方药，接受某项目检测的特定病人群体中常用的药物。
代谢物：在特定病人群体中可能出现的异常生化代谢物与药物代谢物。 样品添加剂及在样品采集与处理过程中可与之接触的物质：抗凝剂（肝素、EDTA、 柠檬酸盐、草酸盐等）与防腐剂（NaF、HCl、碘醋酸盐等），血清分离胶，样品采集 容器及胶塞、导管、导管冲冼液、皮肤消毒剂、手部清洁剂、玻璃清洗液、手套粉未 等。 文献中提及的对与被评价方法类似的其他方法有干扰作用的物质。
10.7
6.8 5.2 3.7 6 1.8 0.3 0.5 0.8
28
13.6 11.1 9.1 11.6 5.8 0.9 1.5 2.4
42
20.4 16.6 13.6 17.5 8.7 1.3 2.2 3.6
8.33%
10.0%
12.5%
15.0%
25%
30%
0.17mol/L 0.13mmol/L 1.67% 0.33mg/dl
6 样本本身的基质效应
如：化学和物理性质不同于理想的 新鲜样本。
临床实验室测量过程中，干扰物质可以是测量误 差的重要来源；
实验室测量的精密度可以通过室内质控进行监测， 准确度则可以通过回收实验、或与参考物质或方
法进行比较进行验证，
在实验室中对干扰物质引起的误差的判定却非易 事。任可一个测量程序都可能存在干扰物质。
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP7-A2 ;
张传宝 卫生部临床检验中心 zhangcbcn@hotmail.com
干扰实验 回收实验
试验：为了察看某事的结果或某物的性能而从事某种活动。 如：试验新机器。 实验：为了检验某种科学理论或假设而进行某种操作或从事 某种活动。如：做科学实验。 《现代汉语词典》
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP7-A2 ; 《临床检验方法确认与性能验证》P240； 中华人民共和国卫生行业标准《干扰实验准则》；
基于生物学变异的质量规范 分析 项目 ALT AST AMY LDH CK GGT ALP 允许CV% 12.2 6 4.8 4.3 11.4 6.9 3.2 允许的偏倚 （%） 2 5.4 7.8 4.3 11.5 10.8 6.4
CLIA’88中的质量规范 最低 48.1 22.8 23.5 14.2 45.5 33.3 17.5 10.0% 15.0% 30% 允许变异 6.67% 6.67% 10.0% 6.67% 10.0% 允许的偏倚 10.0% 10.0% 15.0% 10.0% 15.0% 允许总误差 20% 20% 30% 20% 30%
准备基础样本； 准备实验样本和对照 样本； 测量两种样本中分析 物浓度； 计算偏差。
备6个不同的患者样本(1～6号)。每个患者样本制 成两个测试样本(对照，添加)。每个测试样本分析4 次。 对照样本使用0.1mL生理盐水稀释+0.9ml患者样 本制成。 干扰样本用0.9ml患者样本+0.1ml100mg/dL胆 红素标准混合而成。
异常标本：如溶血、黄疸、脂血，等
处方及非处方药； 异常生化代谢：糖尿病、多发性骨髓瘤、肾病 样本添加剂，如抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸盐、 草酸盐，等），防腐剂（氟化钠、碘乙酸、盐酸，
等）
instruments have been calibrated and maintained according to the manufacturer’s instructions; the analytical system is in control and performing as expected; all operators have been trained and demonstrate acceptable proficiency; and laboratory safety procedures are being followed。
干扰物对检测结果的影响可通过一些方法进行补偿或 修正，使干扰效果在特定病人群体中减小。对于常见 的内源性干扰物（如胆红素、血红蛋白、脂类等）， 可通过样品前处理、样品空白、血清基质校准或数学 修正等方法减少干扰效果。
从评价的角度看，干扰既可造成系统误差，也可造
成随机误差。 对于一个特定的病人群体，样本中干扰物的平均浓 度可以造成系统偏差，而对个体病人，干扰物带来
回收实验
干扰实验 方法学对比
1 病理条件下产生的代谢物
如：糖尿病、多发性骨髓瘤，等
2 由治疗过程引入的化合物
3 病人本身原因引入的物质 4 标本处理过程中的添加物 5 操作过程对样本的污染
如：药物、非肠道营养物、血浆扩 充剂，抗凝剂，等。
如：饮酒、滥用药物、补品、不同 饮食习惯，等 如：抗凝剂、添加剂、稳定剂，等。 如：护手霜、手套粉、血清分离器、 采血管盖，等
0.2mmol/L 2mmol/L 2.5% 0.5mmol/L
0.5mmol/L 4mmol/L 5% 1.0mg/dl
Mg
P
1.8
4.3
1.8
3.2
4.8
10.2
7.2
15.3
8.33%
12.5%
25%
评价潜在干扰物加入样本引起的干扰作用 同时用（较高特异性）的(常规)比对方法同时进行实验。 −结果差异： −结果无差异：
的误差取决于它在标本中的浓度。
通过与检测试剂竞争或抑制指示反应；
干扰物具有与被测物相似的性质，（如荧光、颜色、
光散射、电极反应等；）
干扰物可以改变样本基质的物理性状，（如粘度、
表面张力、浊度、离子强度，等）
干扰物可通过屏蔽金属离子（激活剂）、结合活性 位点、氧化巯基等改变酶（被测物或试剂）的活性， 也可在竞争酶反应过程中的关键底物。 干扰物发生与被测物相似的反应。 在免疫化学反应过程中，干扰物结构与抗原类似， 而与相应抗体发生交叉反应。
干扰实验的目的是评估被分析样本中由其他物质引起的系 统误差，这些误差是恒定系统误差 特定浓度的干扰物质一般引起恒定数量的误差，而与被分 析物的浓度无关。 误差大小主要受样本中干扰物质浓度影响。
干扰：
在临床化学中，被测物浓度因样品特性或其它成分的影响而出现的临床显著 性偏差。这种影响可见于检测系统的非特异性、指示反应响应不佳、被测物 活性抑制等情况。
3.4
3.9 31.1 44.5 11.9 15.7 6.9 7.9 9
5.2
5.8 46.6 66.8 17.9 23.5 10.4 11.8 13.6
3.33%
3.33%
5.0%
5.0%
10%
10%
5.67% 0.33mg/dl或4.5% 0.1mg/dl或5% 2mg/dl或3.3% 3.33%
8.5% 1mg/dl或4.5% 0.15mg/dl或7.5% 3mg/dl或5% 5.0%
17% 2mg/dl或9% 0.3mg/dl 或15% 6mg/dl或10% 10%
TG
LDL-C HDL-C Apo A1 Apo B K Na Cl Ca
10.5
4.2 3.6 3.3 3.5 2.4 0.4 0.6 1
允许总误差（Tea，%）
期望 32.1 15.2 15.7 9.5 30.3 22.2 11.7
TP
ALB T-BIL D-BIL UA UREA CREA GLU T-C
1.4
1.6 12.8 18.4 4.3 6.2 2.2 3.3 3
1.2
1.3 10 14.2 4.8 5.5 3.4 2.3 4.1
对照样本 序号 1 2 3 4 0.9ml样本+ 0.1ml生理盐水 206 220 299 169 213 228 287 171 223 223 297 167 215 210 297 178
干扰样本 0.9ml样本+ 0.1ml 胆红素标准 结果4 229 237 296 183 221 233 306 186 222 241 304 184 230 228 302 181
建立被评价方法的干扰标准 确定被测量的实验浓度 列出可能干扰物清单 确定干扰物的实验浓度 仪器、试剂、人员的准备 干扰物筛查实验 干扰物剂量效应评价实验
患者样本(serum, plasma, whole blood, cerebrospinal fluid,urine, and most other body) 混合患者样本； 标准溶液或者其它制备物； 需确认测试样本同临床样本具有相似的反应性。 计算样本量：测量程序所需样本量、实验所需样本 数量、重复测定次数。 调整分析物浓度。
饮食：咖啡因、β-胡萝卜素、罂粟籽等。
干扰物的实验浓度确定原则
可能干扰物 样品类型 干扰物实验浓度 至少三倍于治疗药物浓度或最高预期浓 度
血清、血浆与全血
药物与代谢物
尿液 内源性干扰物
抗凝剂与防腐剂 尿液
至少三倍于24小时尿清除率 目标病人群体中预期最高浓度
五倍于添加浓度 五倍于24小时尿清除率
血清、血浆与全血
血清、血浆与全血
样品采集与处理设备
血清、血浆、全血、尿液
样品与设备接触24小时，样品体积应与 实际使用相同，需注意防止样品蒸发与 不稳定分析物的丢失，同时应准备一份 与实验样本相同的对比样本，此样本除 了不与实验设备接触外其余处理过程均 与实验样本相同。
胆红素：标准溶液； 溶血：血红蛋白溶液； 脂血： Vit C： 样本管添加剂干扰：
实验样本：基础样本+干扰物储备液（体积不超过5%）；一般加入的 浓度接近病人样本中可能出现的最大浓度水平； 对照样本：基础样本+与实验样本加入量相等的溶剂；以保证样本基 质的一致性。 所有样本应该进行双份测定。
源自文库
临床可接受标准 基于生物学变异的标准； 基于分析变异的标准； 基于临床实验的标准； 统计学标准
―准确度(accuracy)
―精密度(precision)
―可报范围(reportable range) ―参考区间(reference interval) 对非配套系统，验证更为广泛，除上述指标外： ―分析特异性 ―分析灵敏度 ―任何其他必要指标
---陈文祥
[The U.S. CLIA]
干扰物：
不是被测量，但对测量结果有影响的量。
干扰标准：
被测物浓度与真值间可产生的最大允许干扰偏差，此偏差可能影响医生的医 疗决定。
总分析误差：
测定值与参考值间的差异。
关于“确认” (Validation)
方法学研究或方法产品性能研究
由方法建立者或产品生产者完成
给出主要方法性能： ―准确度(accuracy)
不准确度（inaccuracy）又称分析总误差（total analytical error）主要受三个因素影响：不精密度、 方法学系统误差和样本误差。 实验室可以通过对测量程序的评估，对不精密度和方法 学系统误差进行分析，但通常把样本误差（干扰）看成 是个别样本的问题，而不是测量程序的问题。
获取纯的干扰物质；物质能够实现准确定量，如称重、使用标准物质 或标准液； 选择能获得足够溶解度的溶剂；且溶剂本身不能是干扰物质。 为避免稀释样本基质，储备液的浓度至少应该是干扰浓度的20倍， 即加入体积不能超过总样本的5%（10%）。
根据被评价方法的检测原理和预期用途列出可能引起干扰 效果的物质清单。 常见的可能产生干扰作用的物质：
―精密度(precision)
―特异性(specificity) ―检测限和定量限(LOD and LOQ, "灵敏度")
―线性(linearity)
―耐变性(robustness) ... ...
---陈文祥
关于验证 (Verification)
对主要方法性能的证实
在引入新方法时进行
对配套系统，一般验证下列指标：
药物：常见处方与非处方药，接受某项目检测的特定病人群体中常用的药物。
代谢物：在特定病人群体中可能出现的异常生化代谢物与药物代谢物。 样品添加剂及在样品采集与处理过程中可与之接触的物质：抗凝剂（肝素、EDTA、 柠檬酸盐、草酸盐等）与防腐剂（NaF、HCl、碘醋酸盐等），血清分离胶，样品采集 容器及胶塞、导管、导管冲冼液、皮肤消毒剂、手部清洁剂、玻璃清洗液、手套粉未 等。 文献中提及的对与被评价方法类似的其他方法有干扰作用的物质。
10.7
6.8 5.2 3.7 6 1.8 0.3 0.5 0.8
28
13.6 11.1 9.1 11.6 5.8 0.9 1.5 2.4
42
20.4 16.6 13.6 17.5 8.7 1.3 2.2 3.6
8.33%
10.0%
12.5%
15.0%
25%
30%
0.17mol/L 0.13mmol/L 1.67% 0.33mg/dl
6 样本本身的基质效应
如：化学和物理性质不同于理想的 新鲜样本。
临床实验室测量过程中，干扰物质可以是测量误 差的重要来源；
实验室测量的精密度可以通过室内质控进行监测， 准确度则可以通过回收实验、或与参考物质或方
法进行比较进行验证，
在实验室中对干扰物质引起的误差的判定却非易 事。任可一个测量程序都可能存在干扰物质。
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP7-A2 ;
张传宝 卫生部临床检验中心 zhangcbcn@hotmail.com
干扰实验 回收实验
试验：为了察看某事的结果或某物的性能而从事某种活动。 如：试验新机器。 实验：为了检验某种科学理论或假设而进行某种操作或从事 某种活动。如：做科学实验。 《现代汉语词典》
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP7-A2 ; 《临床检验方法确认与性能验证》P240； 中华人民共和国卫生行业标准《干扰实验准则》；
基于生物学变异的质量规范 分析 项目 ALT AST AMY LDH CK GGT ALP 允许CV% 12.2 6 4.8 4.3 11.4 6.9 3.2 允许的偏倚 （%） 2 5.4 7.8 4.3 11.5 10.8 6.4
CLIA’88中的质量规范 最低 48.1 22.8 23.5 14.2 45.5 33.3 17.5 10.0% 15.0% 30% 允许变异 6.67% 6.67% 10.0% 6.67% 10.0% 允许的偏倚 10.0% 10.0% 15.0% 10.0% 15.0% 允许总误差 20% 20% 30% 20% 30%
准备基础样本； 准备实验样本和对照 样本； 测量两种样本中分析 物浓度； 计算偏差。
备6个不同的患者样本(1～6号)。每个患者样本制 成两个测试样本(对照，添加)。每个测试样本分析4 次。 对照样本使用0.1mL生理盐水稀释+0.9ml患者样 本制成。 干扰样本用0.9ml患者样本+0.1ml100mg/dL胆 红素标准混合而成。
异常标本：如溶血、黄疸、脂血，等
处方及非处方药； 异常生化代谢：糖尿病、多发性骨髓瘤、肾病 样本添加剂，如抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸盐、 草酸盐，等），防腐剂（氟化钠、碘乙酸、盐酸，
等）
instruments have been calibrated and maintained according to the manufacturer’s instructions; the analytical system is in control and performing as expected; all operators have been trained and demonstrate acceptable proficiency; and laboratory safety procedures are being followed。
干扰物对检测结果的影响可通过一些方法进行补偿或 修正，使干扰效果在特定病人群体中减小。对于常见 的内源性干扰物（如胆红素、血红蛋白、脂类等）， 可通过样品前处理、样品空白、血清基质校准或数学 修正等方法减少干扰效果。
从评价的角度看，干扰既可造成系统误差，也可造
成随机误差。 对于一个特定的病人群体，样本中干扰物的平均浓 度可以造成系统偏差，而对个体病人，干扰物带来
回收实验
干扰实验 方法学对比
1 病理条件下产生的代谢物
如：糖尿病、多发性骨髓瘤，等
2 由治疗过程引入的化合物
3 病人本身原因引入的物质 4 标本处理过程中的添加物 5 操作过程对样本的污染
如：药物、非肠道营养物、血浆扩 充剂，抗凝剂，等。
如：饮酒、滥用药物、补品、不同 饮食习惯，等 如：抗凝剂、添加剂、稳定剂，等。 如：护手霜、手套粉、血清分离器、 采血管盖，等
0.2mmol/L 2mmol/L 2.5% 0.5mmol/L
0.5mmol/L 4mmol/L 5% 1.0mg/dl
Mg
P
1.8
4.3
1.8
3.2
4.8
10.2
7.2
15.3
8.33%
12.5%
25%
评价潜在干扰物加入样本引起的干扰作用 同时用（较高特异性）的(常规)比对方法同时进行实验。 −结果差异： −结果无差异：
的误差取决于它在标本中的浓度。
通过与检测试剂竞争或抑制指示反应；
干扰物具有与被测物相似的性质，（如荧光、颜色、
光散射、电极反应等；）
干扰物可以改变样本基质的物理性状，（如粘度、
表面张力、浊度、离子强度，等）
干扰物可通过屏蔽金属离子（激活剂）、结合活性 位点、氧化巯基等改变酶（被测物或试剂）的活性， 也可在竞争酶反应过程中的关键底物。 干扰物发生与被测物相似的反应。 在免疫化学反应过程中，干扰物结构与抗原类似， 而与相应抗体发生交叉反应。
干扰实验的目的是评估被分析样本中由其他物质引起的系 统误差，这些误差是恒定系统误差 特定浓度的干扰物质一般引起恒定数量的误差，而与被分 析物的浓度无关。 误差大小主要受样本中干扰物质浓度影响。
干扰：
在临床化学中，被测物浓度因样品特性或其它成分的影响而出现的临床显著 性偏差。这种影响可见于检测系统的非特异性、指示反应响应不佳、被测物 活性抑制等情况。
3.4
3.9 31.1 44.5 11.9 15.7 6.9 7.9 9
5.2
5.8 46.6 66.8 17.9 23.5 10.4 11.8 13.6
3.33%
3.33%
5.0%
5.0%
10%
10%
5.67% 0.33mg/dl或4.5% 0.1mg/dl或5% 2mg/dl或3.3% 3.33%
8.5% 1mg/dl或4.5% 0.15mg/dl或7.5% 3mg/dl或5% 5.0%
17% 2mg/dl或9% 0.3mg/dl 或15% 6mg/dl或10% 10%
TG
LDL-C HDL-C Apo A1 Apo B K Na Cl Ca
10.5
4.2 3.6 3.3 3.5 2.4 0.4 0.6 1
允许总误差（Tea，%）
期望 32.1 15.2 15.7 9.5 30.3 22.2 11.7
TP
ALB T-BIL D-BIL UA UREA CREA GLU T-C
1.4
1.6 12.8 18.4 4.3 6.2 2.2 3.3 3
1.2
1.3 10 14.2 4.8 5.5 3.4 2.3 4.1
对照样本 序号 1 2 3 4 0.9ml样本+ 0.1ml生理盐水 206 220 299 169 213 228 287 171 223 223 297 167 215 210 297 178
干扰样本 0.9ml样本+ 0.1ml 胆红素标准 结果4 229 237 296 183 221 233 306 186 222 241 304 184 230 228 302 181
建立被评价方法的干扰标准 确定被测量的实验浓度 列出可能干扰物清单 确定干扰物的实验浓度 仪器、试剂、人员的准备 干扰物筛查实验 干扰物剂量效应评价实验
患者样本(serum, plasma, whole blood, cerebrospinal fluid,urine, and most other body) 混合患者样本； 标准溶液或者其它制备物； 需确认测试样本同临床样本具有相似的反应性。 计算样本量：测量程序所需样本量、实验所需样本 数量、重复测定次数。 调整分析物浓度。
饮食：咖啡因、β-胡萝卜素、罂粟籽等。
干扰物的实验浓度确定原则
可能干扰物 样品类型 干扰物实验浓度 至少三倍于治疗药物浓度或最高预期浓 度
血清、血浆与全血
药物与代谢物
尿液 内源性干扰物
抗凝剂与防腐剂 尿液
至少三倍于24小时尿清除率 目标病人群体中预期最高浓度
五倍于添加浓度 五倍于24小时尿清除率
血清、血浆与全血
血清、血浆与全血
样品采集与处理设备
血清、血浆、全血、尿液
样品与设备接触24小时，样品体积应与 实际使用相同，需注意防止样品蒸发与 不稳定分析物的丢失，同时应准备一份 与实验样本相同的对比样本，此样本除 了不与实验设备接触外其余处理过程均 与实验样本相同。
胆红素：标准溶液； 溶血：血红蛋白溶液； 脂血： Vit C： 样本管添加剂干扰：
实验样本：基础样本+干扰物储备液（体积不超过5%）；一般加入的 浓度接近病人样本中可能出现的最大浓度水平； 对照样本：基础样本+与实验样本加入量相等的溶剂；以保证样本基 质的一致性。 所有样本应该进行双份测定。
源自文库
临床可接受标准 基于生物学变异的标准； 基于分析变异的标准； 基于临床实验的标准； 统计学标准
―准确度(accuracy)
―精密度(precision)
―可报范围(reportable range) ―参考区间(reference interval) 对非配套系统，验证更为广泛，除上述指标外： ―分析特异性 ―分析灵敏度 ―任何其他必要指标
---陈文祥
[The U.S. CLIA]
干扰物：
不是被测量，但对测量结果有影响的量。
干扰标准：
被测物浓度与真值间可产生的最大允许干扰偏差，此偏差可能影响医生的医 疗决定。
总分析误差：
测定值与参考值间的差异。
关于“确认” (Validation)
方法学研究或方法产品性能研究
由方法建立者或产品生产者完成
给出主要方法性能： ―准确度(accuracy)
不准确度（inaccuracy）又称分析总误差（total analytical error）主要受三个因素影响：不精密度、 方法学系统误差和样本误差。 实验室可以通过对测量程序的评估，对不精密度和方法 学系统误差进行分析，但通常把样本误差（干扰）看成 是个别样本的问题，而不是测量程序的问题。
获取纯的干扰物质；物质能够实现准确定量，如称重、使用标准物质 或标准液； 选择能获得足够溶解度的溶剂；且溶剂本身不能是干扰物质。 为避免稀释样本基质，储备液的浓度至少应该是干扰浓度的20倍， 即加入体积不能超过总样本的5%（10%）。
根据被评价方法的检测原理和预期用途列出可能引起干扰 效果的物质清单。 常见的可能产生干扰作用的物质：
―精密度(precision)
―特异性(specificity) ―检测限和定量限(LOD and LOQ, "灵敏度")
―线性(linearity)
―耐变性(robustness) ... ...
---陈文祥
关于验证 (Verification)
对主要方法性能的证实
在引入新方法时进行
对配套系统，一般验证下列指标：