提取脂质的几种方法
食品脂质提取
一、如何提取食品中的总脂质?1.脂类的共同特点是在水中的溶解度非常小,能溶于有机溶剂中,因此可以根据相似相溶的原理选取合适的有机溶剂提取食品中的脂质。
常用来提取脂类的有机溶剂有乙醚、石油醚、氯仿-甲醇。
(1)乙醚-应用最多,国标采用。
①优点沸点低;溶解脂肪的能力强于石油醚。
②缺点能被2%水饱和,含水的乙醚抽提能力降低;非脂成分的溶解;易燃(2)石油醚-稳定性好,测定较准确①优点沸点高,不易燃;吸收水分少;没有胶溶现象②缺点溶解脂肪的能力弱于乙醚③适用于已烘干磨碎样品,不适用于潮解结块的样品④只能提取游离态脂肪(3)氯仿-甲醇优点一种有效的溶剂,获得的脂质提取物纯净,不仅能提取游离脂,对脂蛋白、磷脂等结合脂的提取效率较高。
2.下面介绍几种提取脂质的方法:(1)索氏提取法:适用于脂类含量较高,结合态脂类含量少或经水解处理过的,样品应能烘干、磨细、不易吸湿结块。
适用于肉制品、豆制品、坚果制品、谷物油炸制品、糕点等食品中粗脂肪的测定。
(2)酸水解法:酸水解法测定的是食品中的总脂肪, 包括游离脂肪和结合脂肪。
适用于各类、各种状态的食品中脂肪测定,不适于测定含磷脂高含糖高的食品。
(3)氯仿/甲醇法:提取效率高,获得的脂质提取物纯净,不仅能提取游离脂,对结合脂的提取也十分有效。
适用于含结合态脂类,特别是含磷脂多的样品。
(4)碱水解法:本法适用于各种液状乳、各种炼乳、奶粉、奶油及冰淇淋等能在碱性溶液中溶解的乳制品,也适用于豆乳或加水呈乳状的食品。
二、如何提取鸡肉、鱼肉中的总脂质,选用什么提取剂?采用氯仿-甲醇法,提取剂为氯仿-甲醇-水的配比为1∶2∶0.8的氯仿-甲醇提取剂。
具体实验步骤如下:➢样品→组织捣碎机捣碎成浆→取10 g →烧杯→加60 mL 甲醇→搅拌2 min→加氯仿30 mL搅拌(先后分两次)→静置2 min →布氏漏斗抽滤→残渣用氯仿抽提→搅拌后抽滤。
➢收集滤液,转移到分液漏斗中,加35 mLZn(AC)2(0.5%),振荡混合充分,放置24 h。
第8章 脂类化合物的提取分离
常用吸附剂有硅酸、氧化铝、氧化镁和硅酸镁等。
离子交换层析是常用的纯化方法。脂类分非离解的、 两性离子的和酸式离解的三种情况,对每一种情况,可 根据它们的极性和酸性的不同进行分离纯化,如 DEAE纤维素可对各种脂类进行一般分离,TEAE-纤维素则对 分离脂肪酸和胆汁酸等特别有用。
2021/10/6
12
H
OH
H
H
OH H
N
C
N
CH2 N
CH N
OC
C
C
C
C
C HC
CO
H3C C
C CH CH2
2021/10/6
CC
CC
CC
CH3 CH2 CH2 COOH
CH2 CH3 CH2 COOH
CH3 CH2 CH
C、肝脏中。其以乳牛及狗 胆汁中含量最高,猪胆汁次之,牛胆汁更次之,羊、兔 皮禽胆汁多含胆绿素。国内多选用猪胆汁为原料,且新 鲜者质量、收率均高。
3.尿素包合法
尿素通常呈四方晶形,当与某些脂肪簇化合时,会 形成包含一些脂肪族物质的六方晶型,许多直链脂肪酸 及其甲酯均易与尿素形成络合物而达到纯化的目的。
饱和脂肪酸比不饱和脂肪酸易与尿素化合,形成稳 定络合物。在实际操作时,将尿素和混合脂肪酸或其甲 酯混在一起,先溶于热的甲醇(或甲醇乙醇混合液)中, 冷却至室温或0℃以结晶,再将络合物和母液分别与水 混合,再按常规用乙醚或石油醚萃取,即可得成品。
脂肪酸分析报告
脂肪酸分析报告1. 引言脂肪酸是构成脂质的基本组成部分,对人体健康起着重要作用。
脂肪酸的种类和含量分布可以反映不同食品或生物样品的特征,因此脂肪酸分析在食品科学、营养学以及生物医学领域中具有广泛的应用价值。
本报告旨在通过脂肪酸分析方法,对某一食品样品的脂肪酸组成进行详细分析和描述。
2. 样品准备为了保证脂肪酸分析结果的准确性和可靠性,样品的准备是非常重要的。
首先,从食材中提取脂质,常用的方法有溶剂提取和胶束提取等。
其次,对提取的脂质进行酯化反应,将脂肪酸转化为甲酸脂肪酯,以便于后续的气相色谱分析。
最后,通过蒸发浓缩和纯化等步骤,得到适合于分析的样品。
3. 脂肪酸分析方法目前常用的脂肪酸分析方法主要有气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。
在本次分析中,我们选择了气相色谱法作为主要的分析手段。
首先,将样品中的甲酸脂肪酯注入气相色谱仪,然后通过温度升高和柱内气相的携带作用,将脂肪酸分离并进入检测器进行检测。
根据脂肪酸的特征保留时间和峰面积,可以定量分析各种脂肪酸的含量。
4. 结果与讨论经过脂肪酸分析,我们得到了样品中各种脂肪酸的含量和组成。
以蓝莓为例,我们发现其中主要的脂肪酸成分为亚油酸和油酸,占总脂肪酸含量的70%。
这与蓝莓富含不饱和脂肪酸的特点相符。
此外,还检测到少量的硬脂酸和棕榈酸。
在脂肪酸的相对含量分布方面,亚油酸占据了主导地位,其次是油酸。
这与蓝莓所具有的营养价值和保健功效密切相关。
亚油酸是一种多不饱和脂肪酸,具有降低胆固醇、保护心脏血管的作用。
5. 结论通过脂肪酸分析,我们详细了解了样品中各种脂肪酸的含量和组成。
脂肪酸分析在食品科学和营养学中具有重要的应用价值,可以帮助我们深入了解不同食品的营养成分和功能特点。
本报告以脂肪酸分析为例,介绍了样品准备、分析方法和结果分析等步骤,希望对脂肪酸分析的初学者有所帮助。
注意:本文档仅作为脂肪酸分析报告的模板,具体的实验步骤和结果分析应根据实际情况进行调整和描述。
气相二氧化硅除脂质-概述说明以及解释
气相二氧化硅除脂质-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述:脂质在我们的日常生活中扮演着重要的角色,但过量的脂质摄入却容易导致多种健康问题,如肥胖、高血压等。
而气相二氧化硅作为一种新型的除脂质技术,具有高效、低耗、环保等优点,可以有效去除食物中的脂质。
本文将重点介绍气相二氧化硅除脂质的原理、技术介绍以及应用前景展望,希望能为解决脂质相关问题提供新的思路和方法。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下几个方面:1. 文章概要:介绍整篇文章的主要内容和研究对象,概括性地说明气相二氧化硅除脂质技术的相关背景和意义。
2. 研究方法:介绍本文使用的研究方法和实验设计,包括实验步骤、数据采集和分析方法等,以确保实验结果的科学性和可靠性。
3. 文章框架:明确列出本文的章节结构和内容安排,为读者提供清晰的阅读导引,使他们能够更好地理解文章的逻辑思路和脉络。
4. 前瞻展望:简要说明本文的研究成果对未来相关领域的影响和意义,为读者呈现出本文研究的价值和未来发展方向。
在文章结构部分,可以通过以上几个方面的内容来展示文章的条理性和逻辑性,为读者提供清晰的认识和理解。
1.3 目的本文旨在探讨气相二氧化硅除脂质技术在脂质去除领域的应用情况和效果,从技术原理、问题挑战到实际效果评估,全面分析该技术在脂质去除过程中的作用和价值,展望其在未来在药物制备、食品加工等领域的应用前景,为相关领域的研究和应用提供参考和指导。
通过本文的研究,期望能够为提高脂质去除效率,改善产品质量和工艺流程,推动脂质去除技术的发展做出贡献。
2.正文2.1 气相二氧化硅技术介绍气相二氧化硅技术是一种利用气相反应在材料表面形成硅二氧化物薄膜的方法。
这种技术可以有效地改变材料的表面性质,提高其耐磨性、耐腐蚀性和光学性能。
气相二氧化硅技术通常包括化学气相沉积(CVD)和物理气相沉积(PVD)两种方法。
在CVD方法中,将一种或多种气体混合物通过化学反应沉积在基底表面上,形成硅二氧化物薄膜。
磷脂的提取与分析检测技术_王道营
磷脂的提取与分析检测技术王道营 徐幸莲 徐为民(南京农业大学食品科技学院) 【摘 要】磷脂的提取方法主要是萃取法;总含量的测定方法有称重法、比色法、紫外分光光度法等;磷脂不同组分的分离和测定方法有T LC、HPLC和31P-NM R等;利用RP-HPLC和GC可以对磷脂的脂肪酸的组成分析测定;使用HPLC、GC等和M S的联合使用可以对磷脂分子量及分子结构进行分析。
本文分别对上述5个方面进行综述,并对不同方法的特点进行了初步探讨。
【关键词】磷脂;组分;脂肪酸组成;分子结构;分析检测中图分类号:TS224.4 文献标识码:A 文章编号:1009-1807(2005)07-0051-04 磷脂是一类存在于生物界的含磷脂肪物质。
在植物的种子、动物血液和脏器、蛋黄及细菌中与油脂并存,是构成细胞基本结构的必需物质,对维持细胞的通透性和细胞内氧的传递起重要作用。
磷脂可分为3大类:糖基甘油二酯、神经鞘磷脂(SM)和磷酸甘油酯(PL)。
磷酸甘油酯又可分为酯磷脂和醚磷脂,醚磷脂包括胆碱缩醛磷脂和乙醇胺缩醛磷脂,通常所说的磷脂就是指酯磷脂。
酯磷脂主要包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(PA)、二磷脂酰甘油(DPG)以及N-乙酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)等。
一种磷脂就是多种磷脂分子组成的混合物,这造成了磷脂分离和定量上的困难。
本文就磷脂的提取和分析检测技术作一综述。
1 磷脂提取常用的提取方法可归纳为两大类:一是物理萃取法,即用超临界流体技术(SFE-CO2),这是一种新型的分离技术,其操作简单,萃取纯度较高;二是化学萃取法,即用氯仿、甲醇、丙酮、乙醚、乙醇等有机溶剂反复萃取,其操作步骤较复杂。
原料不同,所采用的提取方法也不同。
对于一些粗磷脂产品可以直接取样进行分析;对于大豆油、菜籽油等植物油类样品可采用丙酮沉淀法获取磷脂;对于大豆、动物组织等固体类样品,要先提取样品中的粗脂肪,然后对其进行分离获取磷脂。
高密度脂蛋白的化学方法
高密度脂蛋白的化学方法高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein,HDL)是一种重要的脂质体,具有多种生物学功能,包括促进胆固醇外排和抗氧化作用等。
因此,研究和制备高密度脂蛋白对于进一步了解其生物功能以及开发相关的药物和疗法具有重要意义。
本文将介绍高密度脂蛋白的化学方法,包括制备、组装和功能化等方面。
一、高密度脂蛋白的制备方法:1.1 脂质提取:首先,从含有高密度脂蛋白的生物组织或细胞中提取脂质。
可以使用有机溶剂如氯仿、甲醇和丙酮等,通过浸泡、超声处理和离心等操作来使细胞破裂并释放脂质。
1.2 脂质分级:将提取得到的脂质通过硅胶柱层析或超高速离心等方法进行分级,以获得高密度脂蛋白富集的组分。
1.3 超滤法:利用超滤膜或凝胶渗透层析进行高密度脂蛋白的分离和纯化。
通过控制膜孔的大小,将较大分子量的低密度脂蛋白等组分滤除,而保留高密度脂蛋白。
二、高密度脂蛋白的组装和修饰方法:2.1 脂蛋白复合物的组装:通过将脂质与蛋白质复合体结合,可以制备高密度脂蛋白类似分子。
常见的组装方法包括共溶剂法、薄膜法和乳化法等。
2.2 磷脂蛋白的修饰:通过化学修饰的方法,可以改变磷脂蛋白的特性和功能。
例如,使用磷脂蛋白交联剂使磷脂蛋白之间发生交联反应,形成更稳定的高密度脂蛋白颗粒。
2.3 蛋白质的动态修饰:高密度脂蛋白表面的蛋白质可以通过酶法修饰,如使用磷脂酰肌醇3激酶将磷脂酰肌醇3磷酸酯引入到蛋白质分子内。
三、高密度脂蛋白的功能化方法:3.1 载药功能化:通过将药物与高密度脂蛋白进行结合,可以实现药物的定向输送和减少毒副作用。
例如,将抗肿瘤药物乙酰盐与高密度脂蛋白结合,能够提高药物的溶解度和肿瘤细胞的摄取。
3.2 靶向识别功能化:通过修饰高密度脂蛋白表面的蛋白质或磷脂蛋白,使高密度脂蛋白能够识别和结合特定的受体或分子。
例如,通过修饰载体蛋白质使其能够与肿瘤细胞上过表达的受体结合,实现对肿瘤部位的特异性识别。
三种海洋源副产物磷脂提取与新型脂质组学方法分析
三种海洋源副产物磷脂提取与新型脂质组学方法分析摘要磷脂是生物体膜的组成成分之一,在生命活动中扮演着重要的角色。
海洋源副产物可以作为磷脂的新型来源。
本文分别介绍了海洋源副产物中磷脂的三种提取方式,并介绍了新型脂质组学方法的应用,对提取的磷脂进行分析。
研究表明,三种提取方式均能提取到磷脂,而pH调节-无机盐共析法提取出的磷脂量最多。
新型脂质组学方法可以用于海洋源副产物中磷脂的定性、定量和构型分析,为进一步研究海洋源磷脂提供了重要的技术支持。
关键词:海洋源副产物、磷脂、提取、脂质组学方法AbstractPhospholipids are one of the components of biological membranes and play an important role in life activities. Marine by-products can be used as a new source of phospholipids. This paper introduces three methods for extracting phospholipids from marine by-products and introduces the application of new lipidomics methods to analyze the extracted phospholipids. The study showed thatall three extraction methods could extract phospholipids, with pH adjustment - inorganic salt co-precipitation method extracting the most phospholipids. The new lipidomics method can be used for qualitative, quantitative, and conformational analysis of phospholipids in marine by-products, providing important technical support for further research on marine phospholipids.Keywords: Marine by-products, phospholipids, extraction,lipidomics method1.引言海洋生物是一种重要的生物资源,其中不仅有食用海产品,还包括一些副产物,如残骸、鱼皮、贝壳等。
生化分离 藻类细胞中脂类物质的提取
破碎的方法从原理上分为物理、 化学和生物三类。其中物理法主要包 括高压匀浆、珠磨、超声波破碎、喷 雾撞击破碎、研磨、旋刀式匀浆(机 械破碎)、冻融、低渗裂解等;化学 法主要分为酸碱处理、有机溶剂处理、 表面活性剂处理;而生物法主要以酶 法和自溶法为基础。
结论:无论是萃取脂质或类胡萝卜素都是采用完全破 碎的细胞效果较好
微藻生长到指数生长期末期, 微藻密度达 到最高, 根据微藻的特性选择不同的方法和试剂 将其从培养液中分离出来。同时也要考虑到经济 因素,所以一般采用化学絮凝法、离心法和气浮法 3种方法采收微藻。
微藻中含有大量的水分,而活性物质的含量很 小,因此、收获藻体后应立即进行干燥处理。 对分离和提取不同的活性物质,应选择不同的 干燥方法,通常适用于微藻的方法有喷雾干燥、冷 冻干燥、鼓风干燥、自然风干。 对于性质较稳定的活性物质,通常的干燥方法 都适用; 而对于热敏性的不稳定的活性物质,某些干燥 方法如鼓风干燥很难以保持活性,应采取冻干等低 温干燥方法。
微藻的分离、纯化方法主要有以下几 种: (1) 微吸管分离法
(2) 水滴分离法
(3) 稀释分离法 (4) 平板分离法
关键词: 规模放大
目前微藻的大规模培养主要有3种 方式: 传统的敞开式跑道式培养,封闭 式的光生物反应器培养和封闭式的发 酵罐生产。
微藻生物量的采收过程是生产过程的一个限 制因素,因为正常生产中的藻浓度相对较低, 约为 011~110 g/L ,并且藻细胞很小, 很脆弱, 易受到 损伤破裂。因此, 用常规的动力离心、过滤及自 然沉淀法不能有效地收集藻体。
物理压榨法
萃取
有机溶剂提取法
超临界萃取
超高压提取 生物质解法
油脂药品
化妆品
*
[1] 刘圣臣,邹宁,孙杰,孙东红,梁妍 .小球藻中海藻油的提取工艺研究,食品科学,10026630(2009)08-0120-04 [2] 王 蒙, 李纯厚, 戴 明 .以海洋微藻为原料提取生物燃料的研究进展与发展趋势,南方水产, 1673-2227-(2009)02-0074-07 [3] 胡蓓娟,王雪青,姚领,胡 萍,陈庆森 .从微藻中分离提取生物活性物质,食品科学,10026630(2006)07-0264-07 [4] 徐继林,严小军 .脂类分析在海洋微藻化学分类学上的研究进展,海洋通报,10016392(2004)02-0065-08 [5] 缪晓玲,吴庆余 .微藻油脂制备生物柴油的研究,太阳能学报,0254-0096(2007)-02-0219-04 [6] 童牧,周志刚 .新一代生物柴油原料——微藻,2009全国可再生能源一生物质能利用技术研讨会论 文集 [7] 赵国志,刘喜亮,刘智锋.油脂工业技术的进步——油脂精炼工艺技术.粮油加工与食品机 械.2004(11) [8] 冯普凌.藻类生物柴油研究进展.石油化工.2010(39) [9] 郭文晶,张守勤,张 格.超高压提取雨生红藻中虾青素的工艺优化.农业机械学报.2008.05,39-5
提取脂质的几种方法
Folch法提取脂质
1.组织称重。
2.剪碎组织,按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇(2:1)
混合溶液。
混匀15-20min后1500-2000r/min离心5min收集溶液。
3.溶液加入0.2体积的水(20ml溶液加4ml水)或0.9%NaCl溶液清
洗,涡旋几秒钟,以2000rpm离心10min得到两相液面。
吸取上清液,用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。
如果有必要(为移除标记分子),用甲醇和水(1:1)清洗两相液交界面1至2次,注意不要冲洗到下层液体内。
4.收集的下层液即氯仿层含有脂质,用N2吹干氯仿即得脂质。
文献采用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按Folch法,以氯仿和甲醇(2:1,1:1,1:2)三个不同比例来提取脂质,每种混合溶液提取2小时。
Bligh和Dyer的方法(也是我们之前用的方法)
1.皮肤组织称重,胰酶37℃消化1h,用镊子分离表皮和真皮,弃去
真皮。
2.剪碎表皮组织,加入
3.75ml氯仿和甲醇(1:2)混合溶液。
匀浆
15min。
加氯仿1.25ml,混匀30s。
再加水1.25ml,混匀30s。
3.1500r/min离心15min,吸取下层氯仿层,收集在棕色小瓶中,N2
挥干溶剂,即得总脂质。
注:
本次试验Forch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样,B&D法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。
预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管(离心管最好用玻璃的)。
豆粕中残余脂质的提取与分析
豆粕中残余脂质的提取与分析王浩冉;孔祥珍;华欲飞【摘要】豆粕中含有部分正己烷未能去除的残余脂质,采用体积比为2∶1的氯仿-甲醇溶液及水饱和正丁醇从豆粕中提取残余脂质,并对残余脂质成分进行了分析.传统的氯仿-甲醇溶液法可以将豆粕中大部分脂质提取出来,而与蛋白结合能力较强的极性脂需要进一步通过强极性的水饱和正丁醇提取.研究结果显示,豆粕中总脂质含量为2.10%,其中中性脂占25.24%,极性脂占74.76%,中性脂主要包括甘油三酯、FFA、甘油二酯;极性脂主要包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA).%Soybean meal has residual lipids which can not be extracted by n - hexane. The meal was extracted consecutively by two solvents of chloroform - methanol (2:1 of volume ratio) and water - saturated butanol, and the obtained lipids were analyzed. Chloroform - methanol regarded as conventional solvent could extract most of lipid from the meal, and the polar lipid interacted with protein more closely should be extracted by water - saturated butanol. The results indicated that the soybean meal contained 2. 10% total lipids which was composed of 25. 24% neutral lipids and 74. 76% polar lipids, the polar lipids were mainly consisted of phosphatidylcholine, phosphatidylinositol, phosphatidylethanolamine, and phosphatidic acid, while the neutral lipids mainly included triglycerides, FFA and diglycerides.【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2012(037)002【总页数】4页(P84-87)【关键词】豆粕;残余脂质;氯仿-甲醇【作者】王浩冉;孔祥珍;华欲飞【作者单位】江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】TS229;TQ646豆粕是大豆油加工的副产物,正己烷浸出大豆油时并不能将大豆中全部脂质尤其是与蛋白质结合的极性脂质除去,这部分残留在豆粕中的脂质对豆粕的进一步加工有一定的影响。
脂类提取法
脂肪在食品中的作用: 脂肪是食品中重要的营养成分之一,脂肪 可为人体提供必需脂肪酸; 脂肪是一种富含热能营养素,是人体热能 的主要来源; 脂肪是脂溶性维生素的良好溶剂,有助于 脂溶性维生素的吸收; 脂肪与蛋白质结合生成脂蛋白,在调节人 体生理机能和完成体内生化反应方面都起 着十分重要的作用。
索氏抽提取器的准备 索氏抽提取器是由回流冷凝管、提 脂管、提脂烧瓶三部分所组成,抽 提脂肪之前应将各部分洗涤干净并 干燥,提脂烧瓶需烘干并称至恒量
3. 抽提
将装有试样的滤纸筒放入带有虹吸管的提脂 管中,由冷凝管上端倒入乙醚或石油醚,使 提脂烧瓶中乙醚量约为烧瓶体积2/3。在恒 温水浴中抽提,控制每分钟滴下乙醚80滴左 右(夏天约控制650C,冬天约控制800C), 抽提3~4h至抽提完全(视含油量高低,或 8~12h,甚至24h)。可用滤纸或毛玻璃检查, 由提脂管下口滴下的乙醚滴在滤纸或毛玻璃 上,挥发后不留下痕迹。
1. 滤纸筒的制备
滤纸裁成8cm×15cm大小,以直径位2.0cm的大试 管为模型,将滤纸紧靠试管壁卷成 圆筒型,把底端封口,内放一小片 脱脂棉,用白细线扎好定型,在 100~1050C烘箱中烘至恒量(准确至 0.0002g)。
2. 样品处理
固体样品:精密称取干燥并研细的样品 2~5g(可取测定水分后的样品),必要 时拌以海砂,无损地移入滤纸筒内。 半固体或液体样品:称取5.0一10.0g于蒸发 皿中,加入海砂约20g于沸水浴上蒸干后, 再于95—105℃烘干、研细,全部移入滤 纸筒内,蒸发皿及粘附有样品的玻璃棒 都用沾有乙醚的脱脂棉擦净,将棉花一 同放进滤纸筒内。
脂类的测定
脂类的测定食品中的脂类主要包括脂肪(甘油三酸脂)和一些类脂质如脂肪酸、磷脂、糖脂、甾醇、固醇等,大多数动物性食品及某些植物性食品(如种子,果实,果仁)都含有天然脂肪或类脂化合物。
各种食品含脂量各不相同,其中植物性或动物性油脂中脂肪含量最高,而水果蔬菜中脂肪含量很低。
几种食物100g中脂肪含量(g)如下:猪肉(肥)90.3,核桃66.6,花生仁39.2,黄豆20.2,青菜0.2,柠檬0.9,苹果3以上,全脂炼乳8以上,全脂乳粉25~30。
脂类的提取①脂类不溶于水,易溶于有机溶剂。
测定脂类大多采用低沸点的有机溶剂萃取方法。
常用的溶剂:乙醚、石油醚、氯仿—甲醇混合溶剂等。
乙醚:溶解脂肪的能力强,应用最多。
但沸点低(34.60C),易燃,且可含约2%的水分,含水乙醚会同时抽出糖分等非脂成分,所以使用时必须采用无水乙醚作提取剂,且要求样品无水分。
石油醚:溶解脂肪能力比乙醚弱些,但吸收水分比乙醚少,没有乙醚易燃,使用时允许样品含有微量水分.注:乙醚和石油醚只能直接提取游离的脂肪,对于结合态脂类,必须预先用酸或碱破坏脂类和非脂成分的结合后才能提取。
氯仿—甲醇:是一种有效的溶剂,它对于脂蛋白、磷脂的提取效率较高,特别适用于水产品、家禽、蛋制品等食品脂肪的提取。
用溶剂提取食品中的脂类时,要根据食品种类、性状及所选取的分析方法,在测定之前对样品进行预处理:⏹有时需将样品粉碎、切碎、碾磨等;⏹有时需将样品烘干;⏹有的样品易结块,可加入4-6倍量的海砂;⏹有的样品含水量较高,可加入适量无水硫酸钠,使样品成粒状。
⏹预处理目的:为了增加样品的表面积,减少样品含水量,使有机溶剂更有效的提取出脂类。
常用的测定脂类的方法常用的脂肪测定方法:索氏提取法、酸分解法、罗紫-哥特里法、巴布科克氏法、盖勃氏法和氯仿—甲醇提取法等。
•索氏提取法是最经典的方法。
•酸水解法能对包括结合态脂类在内的全部脂类进行定量。
•罗紫-哥特里法主要用于乳及乳制品中脂类的测定。
脂质的提取、分离与分析
脂质存在于细胞、细胞器和细胞外的体液如血浆、胆汁、乳和肠液中。
欲研究某一特定部分(例如红细胞、脂蛋白或线粒体)的脂质,首先须将这部分组织或细胞分离出来。
由于脂质不溶于水,从组织中提取和随后的分级分离都要求使用有机溶剂和某些特殊技术,这与纯化水溶性分子如蛋白质和糖是很不相同的。
一般说,脂质混合物的分离是根据它们的极性差别或在非极性溶剂中的溶解度差别进行的。
含酯键连接或酰胺键连接的脂肪酸可用酸或碱处理,水解成可用于分析的成分。
(一)脂质的有机溶剂提取非极性脂质(三酰甘油、蜡和色素等)用乙醚、氯仿或苯等很容易从组织中提取出来,在这些溶剂中不会发生因疏水作用引起的脂质聚集。
膜脂(磷脂、糖脂、固醇等)要用极性有机溶剂如乙醇或甲醇提取,这种溶剂既能降低脂质分子间的疏水作用,又能减弱膜脂与膜蛋白之间的氢键结合和静电相互作用。
常用的提取剂是氯仿、甲醇和水(1:2:0.8,V/V/V)的混合液。
此比例的混合液是混溶的,形成一个相。
组织(例如肝)在此混合液中被匀浆以提取所有脂质,匀浆后形成的不溶物包括蛋白质、核酸和多糖用离心或过滤方法除去。
向所得的提取液加入过量的水使之分成两个相,上相是甲醇/水,下相是氯仿。
脂质留在氯仿相,极性大的分子如蛋白质、多糖进入极性相。
取出氯仿相并蒸发浓缩,取一部分干燥,称重。
(二)脂质的色谱分离被提取的脂质混合物可采用色谱方法进行分级分离。
例如硅胶柱吸附层析可把脂质分成非极性、极性和荷电的多个组分。
硅胶是硅酸的一种形式,一种极性的不溶物。
当脂质混合物通过硅胶柱时,由于极性的荷电的脂质与硅胶结合紧密被留在柱上,非极性脂质则直接通过柱子,出现在最先的氯仿流出液中,不荷电的极性脂质(例如脑苷脂)可用丙酮洗脱,极性大的或荷电的脂质(如磷脂)可用甲醇洗脱。
分别收集各个组分,再在不同系统中层析,以分离单个脂质组分。
例如磷脂可分离成磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺等。
此外可采用更快速,分辨率更高的高效液相色谱HPLC和薄层层析TLC进行脂质分离。
提取脂质的几种方法
Folch法提取脂质
1.组织称重。
2.剪碎组织,按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇(2:1)
混合溶液。
混匀15-20min后1500-2000r/min离心5min收集溶液。
3.溶液加入0.2体积的水(20ml溶液加4ml水)或0.9%NaCl溶液清
洗,涡旋几秒钟,以2000rpm离心10min得到两相液面。
吸取上清液,用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。
如果有必要(为移除标记分子),用甲醇和水(1:1)清洗两相液交界面1至2次,注意不要冲洗到下层液体内。
4.收集的下层液即氯仿层含有脂质,用N2吹干氯仿即得脂质。
文献采用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按Folch法,以氯仿和甲醇(2:1,1:1,1:2)三个不同比例来提取脂质,每种混合溶液提取2小时。
Bligh和Dyer的方法(也是我们之前用的方法)
1.皮肤组织称重,胰酶37℃消化1h,用镊子分离表皮和真皮,弃去
真皮。
2.剪碎表皮组织,加入
3.75ml氯仿和甲醇(1:2)混合溶液。
匀浆
15min。
加氯仿1.25ml,混匀30s。
再加水1.25ml,混匀30s。
3.1500r/min离心15min,吸取下层氯仿层,收集在棕色小瓶中,N2
挥干溶剂,即得总脂质。
注:
本次试验Forch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样,B&D法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。
预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管(离心管最好用玻璃的)。
提取脂质的几种方法
Folch法提取脂质
1.组织称重。
2.剪碎组织,按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇(2:1)
混合溶液。
混匀15-20min后1500-2000r/min离心5min收集溶液。
3.溶液加入0.2体积的水(20ml溶液加4ml水)或0.9%NaCl溶液清
洗,涡旋几秒钟,以2000rpm离心10min得到两相液面。
吸取上清液,用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。
如果有必要(为移除标记分子),用甲醇和水(1:1)清洗两相液交界面1至2次,注意不要冲洗到下层液体内。
4.收集的下层液即氯仿层含有脂质,用N2吹干氯仿即得脂质。
文献采用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按Folch法,以氯仿和甲醇(2:1,1:1,1:2)三个不同比例来提取脂质,每种混合溶液提取2小时。
Bligh和Dyer的方法(也是我们之前用的方法)
1.皮肤组织称重,胰酶37℃消化1h,用镊子分离表皮和真皮,弃去真
皮。
2.剪碎表皮组织,加入
3.75ml氯仿和甲醇(1:2)混合溶液。
匀浆15min。
加氯仿1
.25ml,混匀30s。
再加水1.25ml,混匀30s。
3.1500r/min离心15min,吸取下层氯仿层,收集在棕色小瓶中,N2
挥干溶剂,即得总脂质。
注:
本次试验Forch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样,B&D法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。
预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管(离心管最好用玻璃的)。
如有侵权请联系告知删除,感谢你们的配合!。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
Folch法提取脂质
1.组织称重。
2.剪碎组织,按照1g组织加入20ml溶剂比例加入氯仿和甲醇(2:1)
混合溶液。
混匀15-20min后1500-2000r/min离心5min收集溶液。
3.溶液加入0.2体积的水(20ml溶液加4ml水)或0.9%NaCl溶液清
洗,涡旋几秒钟,以2000rpm离心10min得到两相液面。
吸取上清液,用于分析检测神经节苷脂类或小的极性分子。
如果有必要(为移除标记分子),用甲醇和水(1:1)清洗两相液交界面1至2次,注意不要冲洗到下层液体内。
4.收集的下层液即氯仿层含有脂质,用N2吹干氯仿即得脂质。
文献采用正相液相色谱法和大气压化学电离质谱分析测定神经酰胺时说按Folch法,以氯仿和甲醇(2:1,1:1,1:2)三个不同比例来提取脂质,每种混合溶液提取2小时。
Bligh和Dyer的方法(也是我们之前用的方法)
1.皮肤组织称重,胰酶37℃消化1h,用镊子分离表皮和真皮,弃去
真皮。
2.剪碎表皮组织,加入
3.75ml氯仿和甲醇(1:2)混合溶液。
匀浆
15min。
加氯仿1
.25ml,混匀30s。
再加水1.25ml,混匀30s。
3.1500r/min离心15min,吸取下层氯仿层,收集在棕色小瓶中,N2
挥干溶剂,即得总脂质。
注:
本次试验Forch法取两只正常组的雌雄鼠制备两个样,B&D法也是取两只正常组的雌雄鼠制备两个样。
预先准备好需要的溶剂、移液管、棕色小瓶和离心管(离心管最好用玻璃的)。
(注:文档可能无法思考全面,请浏览后下载,供参考。
可复制、编制,期待你的好评与关注)。