大鲵皮肤分泌液中抗菌肽的鉴定及生物活性研究

大鲵皮肤分泌液中抗菌肽的鉴定及生物活性研究

王利锋;李学英;王大忠

【摘要】目的:鉴定大鲵皮肤分泌液中抗菌肽,研究其部分生物活性.方法:5%醋酸浸提和Sephadex G-50、G-25凝胶过滤色谱等方法分离纯化抗菌肤;采用抑菌圈法检测抗菌活性,Tricine-SDS-PAGE电泳和等电聚焦电泳鉴定其抗菌活性成份.结果:大鲵皮肤分泌液中舍有抗菌活性物质.对革兰阴性菌、革兰阳性菌和真菌均具有较强的抗菌活性;电泳检测显示该小分子多肽相对分子质量约为4300,具有较强的碱性.结论:首次从大鲵皮肤分泌液中分离纯化到一种抗菌肽,此抗菌肽可能是一个具有较强阳离子特征的碱性肽.%Purpose To characterize the antimicrobial peptides from the skin secretions of the Andrias davidianus and to study its bioactivity. Methods This antimicrobial peptide was purified by 5％acetic acid extraction and Sephadex G-50, G-25 gel filtration chromatography. The antimicrobial ability was characterized by inhibiting zone determination. The antimicrobial active substance was identified by tricineSDS-PAGE electrophoresis and isoelectric focusing(IEF) electrophoresis. Results The skin secretions of the Andrias davidianus contain antibiotic active substance. It strongly inhibited Gram-negative, Gram-positive bacteria and fungus. The electrophoresis results showed that its molecular weight was about 4 300 with a strong alkaline property. Conclusion An antibacterial peptide was isolated from the skin secretions of the Andrias davidianus for the first time and this antimicrobial peptide may be a strong feature of the basic peptide cation.

【期刊名称】《中国生化药物杂志》

【年(卷),期】2011(032)004

【总页数】4页(P269-272)

【关键词】大鲵;皮肤;抗菌肽;分离纯化

【作者】王利锋;李学英;王大忠

【作者单位】遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室,贵州遵义,563003;遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室,贵州遵义,563003;遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室,贵州遵义,563003;铜仁学院,贵州铜仁,554300

【正文语种】中文

【中图分类】R282.74;R961

两栖类皮肤湿润、裸露，无疑给外界微生物的侵入提供了便利条件，为了自身生存和适应栖息地多样化生态环境的需要，它们依靠皮肤腺体分泌出一系列抗菌肽，防御外界病原菌的侵袭[1]。相关研究结果显示，两栖类皮肤抗菌肽呈现出超乎想象的分子和功能的多样性[2-3]。国内外对于两栖类皮肤抗菌肽的研究主要集中在无尾目两栖类，例如最广泛分布的蛙科(Ranidae)，它们皮肤抗菌肽在种类和数量等方面，都是极其惊人的[4]。而对于有尾目两栖类，除红瘰疣螈[5](Tylototriton verrucosus)和山溪鲵[6](Batrachuperus)外，目前尚未见文献报道其皮肤分泌液存在抗菌活性物质。

大鲵(Megalobatrachus japonicus daridianus Blanchard)属大型两栖纲有尾目隐鳃鲵科，是我国二级保护动物，有活化石之称。人们在欧洲、东亚和北美地区发

现的大约距今300万至7000万年的大鲵化石暗示其在地球上曾广泛分布[7]。

目前我国大鲵的人工养殖已经实现产业化，为从大鲵皮肤分泌液中提取抗菌肽提供了丰富的资源。作为现存个体最大的两栖类动物，其皮肤腺发达，在试验中观察到大鲵皮肤在受到理化刺激时能分泌大量白色状黏液，最初呈白浆状，后渐变为黏稠胶状物，具浓涩气味。本实验对大鲵皮肤分泌液中是否含有抗菌活性物质进行了检测，并鉴定其部分性质，为进一步的研究工作奠定基础。

1 材料

1.1 动物和菌种

成年大鲵雌雄各一尾，购于贵州锦江娃娃鱼有限公司。

菌种:大肠埃希菌(Escherichia coli)No.ATCC 25922、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)No.ATCC 29213、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)No.ATCC 35984、铜绿假单胞菌(Pseudomonas

aeruginosa)No.ATCC 27853、白色念珠菌(canidia Albicans)No.ATCC 10213、溶血性链球菌(Hemolytic streptococcus)No.CMCC(B)32264，遵义医学院微生

物学教研室保藏。

1.2 试剂

葡聚糖凝胶SephadexG-50和SephadexG-25，GE Healthcare公司;低相对分

子质量(Mr)标准蛋白，北京经科宏达生物技术有限公司;TEMED、Tris、Tricine、丙烯酰胺、过硫酸铵、考马斯亮蓝R-250，美国Sigma公司;BCA法蛋白定量试

剂盒，上海碧云天生物公司;营养肉汤培养基、MH(A)培养基，北京奥博星生物技

术有限责任公司。

2 方法

2.1 皮肤分泌液的粗提

采用电刺激法诱导大鲵皮肤分泌黏液。按体积比1∶1将收集到的皮肤分泌液用5%