实验四甲醛滴定法测定氨基氮含量
氨基氮含量的测定—甲醛滴定法
氨基氮含量的测定—甲醛滴定法中性甲醛制备：量取200ml甲醛溶液至400ml烧杯中，用磁力搅拌器搅拌，边搅边用0.1mol/LNaOH溶液滴定至pH8.1。
取样品处理液1.0mL置于200mL烧杯中，加64mL去CO2水，开动磁力搅拌器，用0.1mol／L氢氧化钠标准溶液滴定至pH8.2；加入20.0mL中性甲醛溶液，摇匀。
再用0.1mol／L氢氧化钠标准溶液继续滴定至pH9.2，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积V l；取65ml水先用0.1mol／L氢氧化钠溶液调至pH 8.2，再加入20.0mL中性甲醛溶液，用0.1mol／L氢氧化钠标准溶液滴定至pH 9.2，作为试剂空白试验。
按照下列公式计算：氨基酸态氮(g／L) =(V1-V0)×C×1.4/V式中：V1——测定样品加入甲醛后消耗0.1mol／L Na0H溶液的体积(m1)；V o——测定空白加入甲醛后消耗Na0H标准溶液的体积(m1)；C——标定的氢氧化钠标准溶液物质的量浓度[C(NaOH)](mol／L)；V——样品体积(m1)；0.014——C(NaOH)=lmol／L氢氧化钠标准溶液lmL相当的氮克数。
方法来自：赵新淮，冯志彪。
蛋白质水解物水解度的测定。
食品科学，1994,11公式来自：徐鑫，何佳易。
小黄鱼抗氧化肽制备条件的响应面优化。
食品科学，2011,32（21）：165—170。
标准NaOH溶液的配制：称取110克氢氧化钠，溶于100毫升去二氧化碳的水中，置于300毫升锥形瓶中，不时振荡，溶解后用橡皮塞塞紧并静置数日直到碳酸钠全部沉到底部时，倾出上面清澈液备用。
取以上氢氧化钠浓溶液5.5毫升，加水至1000毫升，混匀，制成0.1mol/l氢氧化钠溶液。
标准氢氧化钠浓溶液的标定：准确称取水解度=游离氨基酸/总氮×100﹪。
氨基酸总量(氨态氮)的测定(甲醛滴定法)
氨基酸总量(氨态氮)的测定（甲醛滴定法）一、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH 基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(4) 0.1%中性红(50%乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴定至淡蓝色。
氨基氮检测甲醛滴定法
氨基氮检测甲醛滴定法氨基氮化验方法（甲醛滴定法）1 原理氨基与中性甲醛反应，生成中强酸，可用氢氧化钠标准溶液滴定。
反应式：4NH4 ＋+ 6HCHO = (CH2)6N4H＋+ 6H2O + 3H＋RCHNH2CH2 + HCHO+ = RCH(NCH2)COOH + H2OOH- + H＋= H2O2 试剂配制2.1 18％中性甲醛溶液：量取分析纯甲醛溶液2000ml于2000ml 试剂瓶中，加入2000ml 纯化水，摇匀。
临用前倒入1000ml的试剂瓶中，以酚酞为指示剂，用0.03569mol/l的Na OH溶液滴定至微红色。
2.2 甲基红指示剂：称取0.1g甲基红，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。
2.3 酚酞指示剂：称取1.0g酚酞，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。
2.4 盐酸(0.1mol/l)、氢氧化钠(0.03569mol/l)标准溶液：略。
3 测定精密量取样品2.50ml至250ml锥形瓶中，加入20ml纯化水，甲基红指示剂3滴，用0.1m ol/l盐酸滴定至红色，放置3min，用0.03569mol/l氢氧化钠溶液滴定至黄色。
加入18%中性甲醛5 ml，摇匀放置3～5min。
加入3滴酚酞指示剂，用0.03569mol/l氢氧化钠标准溶液滴定，到达滴定终点时溶液由黄色变为微红色，记录消耗的氢氧化钠标准溶液体积。
4 计算N(μg/ml)＝M×VNaOH÷V样品×m×1000 ≈ 100VNaOH式中： M 为氢氧化钠标准溶液浓度，mol/l；VNaOH 为滴定时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；V样品为量取样品的体积，ml； m 为氮原子摩尔质量，14。
铵盐中氮含量的测定
2.
熟练滴定操作和滴定终点的判断
实验原理： 实验原理： 4NH4+ + 6HCHO＝(CH2)6N4H+ + 3H+ + 6H2O ＝ 主要试剂： 主要试剂： 实验步骤： 实验步骤：
结果计算： 结果计算：
C V N a O H × 1 4 .0 1 × 100% N% = W × 1000
问题讨论： 问题讨论：
加水30毫升 加水 毫升 准确称取（ 准确称取（0.13～0.16克） 硫酸铵于锥形瓶 中 ～ 克 加 5 mL 中性甲醛 摇匀
2滴酚酞 滴酚酞
(Ka′＝7.1× (Ka′＝7.1×l0-6)
40Байду номын сангаас甲醛 甲醛
2 g.L-1 酚酞 乙醇溶液
0.1 mol/L NaOH标准溶液 标准溶液
溶解
用NaOH标液滴定至溶液淡红色 标
实验四 NaOH标准溶液浓度的标定、铵盐中铵态氮量的测定(甲醛法)
上一次实验（滴定分析基本操作练习）的问题：1.思考题：锥形瓶不需要先用该溶液润洗或烘干主要是因为它不会改变该溶液的物质的量。
2.讨论：应该就实验过程中出现的现象、情况和实验结果进行讨论。
讨论并不是思考题。
例如可对相对平均偏差过大进行讨论分析，对使用不同指示剂时导致V HCl / V NaOH的比值有点差别，等等。
3.不论是用NaOH溶液滴定HCl 还是HCl溶液滴定NaOH V HCl / V NaOH或V NaOH/ V HCl是一个不变的值，4.有效数字的保留。
（比值保留四位有效数字，相对平均偏差要求保留两位有效数字）5.数据处理时表格设计要科学合理。
6.实验步骤要简洁易懂。
实验三. NaOH 标准溶液浓度的标定 铵盐中氮含量的测定（甲醛法）一． 实验原理：1. 碱标准溶液常用NaOH 或KOH 来配制，由于固体NaOH 和KOH 易吸收空气中的CO 2和水分，因此常用间接法来配制，即先配制近似浓度，然后用基准物质（草酸H 2C 2O 4、邻苯二甲酸氢钾KHP ）来标定。
化学计量点：pH ＝9.1 指示剂：酚酞终点颜色：无色→ 微红色计算：C NaOH /mol L －1＝( )KHP /V NaOH ×10-3 其中：M KHP =204.22. （NH 4）2SO 4是一种氮肥，它和（NH 4）2CO 3，NH 4Cl 一样，肥效的高低重要取决于其含氮量，因此测定铵态肥的肥效，实际上就是测定以NH 4+的形式存在的氮。
（NH 4）2SO 4是强酸弱碱盐，由于NH 4+的酸性太弱（K a ＝5.6×10-10），不满足cK a ≥10-8故无法用NaOH 标准溶液直接滴定，必须进行强化。
生产和实验中广泛使用甲醛法测定铵盐中氮的含量。
4NH 4+＋6HCH O（CH 2）6N 4H +＋3H +＋6H 2O （4-1）生成的H +和（CH 2）6N 4H +（K a ＝7.1×10-6）可用NaOH 标准溶液直接滴定 （CH 2）6N 4H +＋3H +＋4OH －＝（CH 2）6N 4＋4H 2O （4-2） 化学计量点时，产物是（CH 2）6N 4（K b ＝10-9），其水溶液显微碱性（pK b ＝9），可选用酚酞作指示剂。
甲醛滴定法测定氨基氮
实验二甲醛滴定法测定氨基氮一、目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。
二、原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：-NH3是弱酸，完全解离时pH为11～12或更高，若用碱滴定-NH3所释放的H ＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH3释放H＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（pH9.0左右）。
因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。
如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。
但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。
三、仪器、试剂、材料1.仪器25mL锥形瓶；碱式滴定管；吸管。
2.试剂（1）0.1mol/L标准甘氨酸溶液准确称取7.5g 甘氨酸，溶解后定容至1000mL。
（2）0.02mol/L标准氢氧化钠溶液（3）酚酞指示剂(0.5%酚酞乙醇溶液)：取0.5g酚酞，用95％乙醇溶解，并稀释至100mL，无需加水。
（4）400 mL中性甲醛溶液在50mL36～37％分析纯甲醛溶液中加入1mL0.5％酚酞乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。
四、操作方法1.氢氧化钠溶液标定（1）准确称取0.08g邻苯二甲酸氢钾；（2）用量筒准确量取50mL纯净水，溶解完全；（3）加入2滴酚酞指示剂，（4）用氢氧化钠溶液滴定，记录体积；平行做2次。
（5）求消耗氢氧化钠溶液平均值，用公式计算氢氧化钠溶液浓度。
2.取3个25mL的锥形瓶，编号。
向1、2号瓶内各加入0.05mol/L标准甘氨酸溶液2mL和水5mL，混匀。
向3号瓶内加入7mL水。
然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2mL甲醛溶液再混匀，分别用0.02mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。
甲醛滴定法测定氨基酸含量
实验4 甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、0.5%酚酞酒精溶液称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%甘氨酸溶液取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。
4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液5、中性甲本醛溶液取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管1、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤3、结果计算每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为12() 1.40082V V mg -⨯= 式中：V 1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml ）；V 2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml ）；1.4008 为1ml 0.1mol/L 氢氧化溶液相当的氮量（mg ）五、注意事项利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。
六、实验报告根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。
，七、思考题1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么/2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N +H 3基上的H +，不能用一般的酸碱指示剂？教你如何用WORD文档(2012-06-27 192246)转载▼标签：杂谈1. 问：WORD 里边怎样设置每页不同的页眉？如何使不同的章节显示的页眉不同？答：分节，每节可以设置不同的页眉。
甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量.docx
甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的一N%3结合，形成一NH —CH Q OH、一N （CH2—0H）2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+,测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称Ig酚酞溶于IOOmI 95%酒精中。
2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液取0.5溴麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、氨基酸溶液4、标准0.100mol∕L氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml ,加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol∕L NaoH 溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和 （二）实验器具 1、锥形瓶 3、移液管洗耳球 5、容量瓶 7、量筒 四、操作步骤1、取3只50ml 锥形瓶，按下表加入试剂(pH8.7~9.0)2、碱式滴定管 4、天平 6、试剂瓶 8玻棒与烧杯3、结果计算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为式中：C=（V1-V2）× C0×氨基酸分子量/（10× V样）C:总酸含量（g∕100ml）V i为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）; V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；C o :标准氢氧化钠准确浓度（mol∕L）V样：样品体积（ml）4、氢氧化钠标准溶液的标定4 1 κm标准is定落液4.1.1配制⅛⅛ no g⅛S'⅛钠需于IOQmL无二敦化晞⅛水中滞匀琏人聚乙烯容界中•密闭放置至溶液清氐按表1倾定佣酬管量取上翩孰用无二輸斛水解至IQ伽L,齣.表1标定按表2的规定称取于105Γ-110t电烘箱中十煥至国重的工作基准试剂命苯二屮酸爼銅厠无二水溶絹加2⅛≡ao示椒10 XLh用吃制⅛τ⅛s¾⅛⅛溶發滴定至酒液呈粉虹色供保痔30S4同时做零白试蜃。
实验四甲醛滴定法测定氨基氮
实验四甲醛滴定法测定氨基氮一.目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。
二.原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：－NH3是弱酸，完全解离时PH为11－12或更高，若用碱滴定－NH3所释放的H＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3释放H＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。
因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。
如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。
但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。
三.仪器、试剂、材料1.仪器25ml锥形瓶；3ml微量滴定管；吸管；研钵。
2.试剂(1)300ml 0.05mol/L标准甘氨酸溶液准确称取375mg 甘氨酸，溶解后定容至100ml。
(2)500ml 0.02mol/L标准氢氧化钠溶液(3)20ml酚酞指示剂0.5 ％酚酞的50 ％乙醇溶液(4)400 ml中性甲醛溶液在50ml 36－37 ％分析纯甲醛溶液中加入1ml 0.5％酚酞乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。
四.操作方法1.取3个25 ml的锥形瓶，编号。
向1、2号瓶内各加入0.05mol/L标准甘氨酸溶液2ml和水5ml，混匀。
向3号瓶内加入7 ml水。
然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 ml甲醛溶液再混匀，分别用0.02mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。
重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数。
取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。
2.取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。
实验四 甲醛滴定
将3只100ml锥形瓶标以０、1、2号。 1、2号瓶内加甘氨酸（约1%）2.0ml及水5.0ml； ０号瓶内加水7.0ml。 再向3只锥形瓶中各加中性甲醛溶液 5.0ml、0.5% 酚酞乙醇溶液4滴． 然后用标准0.100mol/lNaOH滴定至微红色。 （pH=8.7~9.0）。
三、数据记录及处理：
+
CH 2 Gly
+
CH 2 Gly
+ -
-
用甲醛处理氨基酸，甲醛与氨基结Байду номын сангаас，形成羟 甲基衍生物，不仅相对增强了NH3＋的酸性解离， 而且降低了氨基的碱性。 NH3＋上的H＋游离出来，就可用碱来滴定，测 出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
当溶液中存在1mol/l甲醛时，滴定终点由pH12左右，降至pH9附近，即酚酞指示
五、注意事项
利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。 随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质 水解完成后，滴定值不再增加。 六、实验报告
根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺 点。 七、思考题 为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—NH3+基上的H+， 不能用一般的酸碱指示剂？
实验九 甲醛滴定法
COO
H
一、原理：
H 3N
+
C R
α
水溶液中的氨基酸为两性离子，不能直接用酸、碱滴定。因 为氨基酸的酸、碱滴定的终点pH值或过高（12-13）或过低 （1-2），没有合适的指示剂可被选用。
COOH H 3N
+ H K1
COO H 3N
K2
H
+
COO H 2N Gly CH 2
甲醛法测定铵盐中氮含量实验报告
甲醛法测定铵盐中氮含量实验报告甲醛法是一种实验室常用的测定有机物中氮含量的方法，本文以实验室测定铵盐中氮含量为例，描述了甲醛法的实验原理和实验方法，以及测得的结果。
1.甲醛法原理甲醛法（硝酸甲醛法）是一种测量有机物中氮含量的常用实验方法，其原理是用硝酸甲醛将有机物中的氮转化为氨，再用酸性分光光度法测定氨的浓度，从而得出有机物的氮含量。
2.实验材料和试剂从实验室储存室取出硝酸甲醛试剂（400毫克/毫升）、石蕊红试剂（250毫克/毫升）、甲醇（分析级）和氢氧化钠（分析级），并从外购获得本实验所用的铵盐样品。
3.实验流程（1）将铵盐样品（约20克）称入盖有重量标示的100毫升量瓶中，并加入50毫升纯甲醇和2毫升氢氧化钠溶液，然后摇匀，让样品完全溶解；（2）将所得溶液滴定至50毫升标定点，然后向滴定液中加入酸性石蕊红溶液2毫升；（3）将加入石蕊红溶液后的溶液滴定至100毫升，然后快速有序地加入硝酸甲醛溶液。
（4）当溶液发生反色时，按照实验程序，用分光光度计测定溶液的光度。
4.实验结果用甲醛法测定铵盐样品中氮含量结果如下：初始光度：1.055最终光度：3.674样品中氮含量：1.919%5.实验总结本实验证明，甲醛法可以用于测定铵盐样品中的氮含量，测得的结果为1.919%，结果比预期的结果稍低，说明实验方法正确，甲醛法是一种有效的测定有机物中氮含量的方法。
此外，在进行本实验的过程中，要注意严格控制溶液的温度，以及滴定时注意不要滴出被测液，以免误差偏大。
同时，也要注意样品量、试剂称量以及器具清洁度，以保证实验结果的准确性与可信度。
通过本次实验，我们可以熟练掌握甲醛法测定铵盐样品中氮含量的实验程序，并对实验方法有更深入的了解，从而为未来工作打下坚实基础。
氨基酸总量(氨态氮)的测定(甲醛滴定法)
氨基酸总量(氨态氮)的测定（甲醛滴定法）一、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.100NNaOH溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH 值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(4) 0.1%中性红(50%乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴定至淡蓝色。
实验四甲醛滴定法测定氨基氮含量
实验八 甲醛滴定法测定氨基氮含量
一、目的
掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和方法
二、原理
水溶液中的氨基酸为两性离子，因而不能直 接用碱滴定氨基酸的羧基。用甲醛处理氨基酸, 甲醛与氨基结合,可形成羟甲基衍生物，使 NH3+上的H+游离出来，这样就可用碱滴定 NH3+放出的H+，从而计算出氨基氮含量。
试剂和器材
1．试剂： （1）0.1mol/L 标准甘氨酸溶液 准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。 （2）0.1mol/L 标准氢氧化钠溶液 （3）0.5%酚酞指示剂 称0.5g酚酞溶于100mL50%乙醇。 （4）中性甲醛溶液 甲醛溶液（36～37％，分析纯） 50mL，加入0.5％ 酚酞指示剂1 mL ，用0.1 mol/L的氢氧化钠溶液滴定至 微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。
四、结果计算
1、回收率计算：
实际测得量 甘氨酸氨基氮回收率 % 100 理论加入量
公式中: 实际测得量(mg)为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化 钠溶液毫升数的平均值与3号瓶耗用的标准氢氧化 钠溶液毫升数之差乘以1.4008。 理论加入量(mg)等于2 乘以1.4008。
※1.4008
为1mL 0.1mol/L标准氢氧化钠溶液相当于氮的毫克数。
试剂和器材 1．试剂：
（5）待测样品 未知浓度的甘氨酸溶液。
甲醛法测定铵盐中氮含量的原理
甲醛法测定铵盐中氮含量的原理
甲醛法是一种常用的测定铵盐中氮含量的方法。
该方法通过在酸性条件下，将铵盐与甲醛反应生成胺，然后用酸作用下的氯仿萃取胺，再在碱性条件下蒸发干燥得到氨基甲酸，最后用滴定法测定氨基甲酸的浓度，从而计算出铵盐中的氮含量。
1.样品的制备和处理：将称量好的样品加入足量的浓硫酸中，使样品溶解，并使反应液保持酸性。
2.生成胺：向上述反应溶液中加入甲醛，甲醛与铵盐反应生成胺。
反应方程式：CH2O+NH4+→RNH2+H2O
3.萃取胺：将产生的胺用氯仿进行萃取。
氯仿为有机溶剂，它能够将胺从水相中萃取出来。
4.蒸发干燥：将有机相的胺溶液在碱性条件下加热蒸发，使其中的胺转化为氨基甲酸。
反应方程式：RNH2+NaOH→HCONH2+NaOH
5.滴定测定：将干燥后的氨基甲酸溶解在酸性介质中，然后用硝酸钠标准溶液进行滴定，以测定氨基甲酸的浓度。
通过滴定后消耗的硝酸钠溶液的体积，可以计算出样品中氮的含量。
计算公式如下：
样品中氮的含量（%）=W*0.14/V*X*100
其中，W为干燥后的样品重量（克），V为滴定所用的硝酸钠标准溶液的体积（毫升），X为硝酸钠标准溶液的浓度（摩尔/升）。
甲醛法测定铵盐中氮含量的原理是基于铵盐中氮转化为胺化合物，再经过萃取、蒸发和滴定等步骤，最终测得氨基甲酸的浓度，从而得到样品
中氮的含量。
该方法操作简单、快速，广泛应用于农业、环境和医学等领域的氮含量测定中。
氨基酸含量的测定
五、计算
标准甘氨酸氨基氮的回收率=
VNaoH*0.0500mol/L *14.008 理论计算值
理论计算值:取用氨基酸的体积乘以浓度,再乘以14.008 VNaoH 两次测定所用氨基酸的体积的平均值
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）； V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；
氨基酸的定量分析 —甲醛滴定法
一、目的：
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
二、实验原理
水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱 滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合， 形成 — NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物 ，使 N+H3 上的 H+ 游离出来，这样就可以用碱滴定 N+H3 放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的按下表加入试剂。
锥形瓶编号 试剂
1
2
3
4
5
0.1mol/L甘氨酸溶液 /mL
中性甲醛溶液/mL 水/mL 0.5%酚酞酒精溶液 （滴） 未知浓度的 氨基酸混合溶液/mL
0
1 4 4 0
1
1 3 4 0
1
1 3 4 0
0
1 3 4 1
0
1 3 4 1
2、用0.0500mol/L NaOH溶液滴定至溶液变微红色 注意：滴定管中溶液的初始位置和滴定结束时的位置； 滴定管的使用方法 3、用0.0500mol/L NaOH溶液滴定至溶液变微红色 4、记录每次滴定所用的0.0500mol/L NaOH溶液的 体积
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴 定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨 基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基 酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致 滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结 果偏高。
生化实验合集
实验四甲醛滴定法测定氨基氮一.目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。
二.原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：－NH3是弱酸，完全解离时PH为11－12或更高，若用碱滴定－NH3所释放的H＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3释放H＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。
因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。
如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。
但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。
三.仪器、试剂、材料1.仪器25ml锥形瓶；3ml微量滴定管；吸管；研钵。
2.试剂(1)300ml 0.05mol/L标准甘氨酸溶液准确称取375mg 甘氨酸，溶解后定容至100ml。
(2)500ml 0.02mol/L标准氢氧化钠溶液(3)20ml酚酞指示剂0.5 ％酚酞的50 ％乙醇溶液(4)400 ml中性甲醛溶液在50ml 36－37 ％分析纯甲醛溶液中加入1ml 0.5％酚酞乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。
四.操作方法1.取3个25 ml的锥形瓶，编号。
向1、2号瓶内各加入0.05mol/L标准甘氨酸溶液2ml和水5ml，混匀。
向3号瓶内加入7 ml水。
然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 ml甲醛溶液再混匀，分别用0.02mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。
重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数。
取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。
2.取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。
氨基酸总量(氨态氮)的测定(甲醛滴定法)
氨基酸总量(氨态氮)的测定（甲醛滴定法）一、单指示剂甲醛滴定法：(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH 基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。
由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。
（二）试剂(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤：称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。
记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算计算：氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W式中：N：NaOH标准溶液当量浓渡。
V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)W：样品溶液相当样品重量(克)。
0.014：氮的毫克当量。
三、双指示剂甲醛滴定法：(一)原理：与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。
从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。
PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。
(二)试剂：(1) 40%中性甲醛溶液(2) 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3) 0.100N氢氧化钠标准溶液。
(4) 0.1%中性红(50%乙醇溶液)(三)操作步骤：取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴定至淡蓝色。
氨基氮检测 甲醛滴定法
氨基氮化验方法（甲醛滴定法）1 原理氨基与中性甲醛反应，生成中强酸，可用氢氧化钠标准溶液滴定。
反应式：4NH4 ＋+ 6HCHO = (CH2)6N4H＋+ 6H2O + 3H＋RCHNH2CH2 + HCHO+ = RCH(NCH2)COOH + H2OOH- + H＋= H2O2 试剂配制2.1 18％中性甲醛溶液：量取分析纯甲醛溶液2000ml于2000ml试剂瓶中，加入2000ml 纯化水，摇匀。
临用前倒入1000ml的试剂瓶中，以酚酞为指示剂，用0.03569mol/l的Na OH溶液滴定至微红色。
2.2 甲基红指示剂：称取0.1g甲基红，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。
2.3 酚酞指示剂：称取1.0g酚酞，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。
2.4 盐酸(0.1mol/l)、氢氧化钠(0.03569mol/l)标准溶液：略。
3 测定精密量取样品2.50ml至250ml锥形瓶中，加入20ml纯化水，甲基红指示剂3滴，用0.1m ol/l盐酸滴定至红色，放置3min，用0.03569mol/l氢氧化钠溶液滴定至黄色。
加入18%中性甲醛5 ml，摇匀放置3～5min。
加入3滴酚酞指示剂，用0.03569mol/l氢氧化钠标准溶液滴定，到达滴定终点时溶液由黄色变为微红色，记录消耗的氢氧化钠标准溶液体积。
4 计算N(μg/ml)＝M×VNaOH÷V样品×m×1000 ≈ 100VNaOH式中： M 为氢氧化钠标准溶液浓度，mol/l；VNaOH 为滴定时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；V样品为量取样品的体积，ml； m 为氮原子摩尔质量，14。
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一、目的
掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和方法
二、原理
水溶液中的氨基酸为两性离子，因而不能 直接用碱滴定氨基酸的羧基。用甲醛处理氨基 酸,甲醛与氨基结合,可形成羟甲基衍生物，使 NH3+上的H+游离出来，这样就可用碱滴定NH3+放 出的H+，从而计算出氨基氮含量。
2、氨基氮计算：
(V未 V对 ) 1.4008 氨基氮含量（mg / mL） 2
公式中： V未 为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。 V对 为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平 均毫升数。
※1.4008
为1mL 0.1mol/L标准氢氧化钠溶液相当于氮的毫克数。
试剂和器材
试剂和器材 1．试剂：
（5）待测样品 未知浓度的甘氨酸溶液。
2．器材 ：
100mL锥形瓶、25mL微量滴定管 、吸量管。
四、结果计算
1、回收率计算：
实际测得量 甘氨酸氨基氮回收率% 100 理论加入量
公式中: 实际测得量(mg)为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化 钠溶液毫升数的平均值与3号瓶耗用的标准氢氧化 钠溶液毫升数之差乘以1.4008。 理论加入量(mg)等于2 乘以1.4008。
※1.4008
为1mL 0.1mol/L标准氢氧化钠溶液相当于氮的毫克数。
1．试剂： （1）0.1mol/L 标准甘氨酸溶液 准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。 （2）0.1mol/L 标准氢氧化钠溶液 （3）0.5%酚酞指示剂 称0.5g酚酞溶于100mL50%乙醇。 （4）中性甲醛溶液 甲醛溶液（36～37％，分析纯） 50mL，加入0.5％ 酚酞指示剂1 mL ，用0.1 mol/L的氢氧化钠溶液滴定至 微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。
如样品中只含有某一种已知氨基酸，由甲醛滴定的结果即可算出氨基氮的含 量。如果样品是多种氨基酸的混合物（如蛋白质水解物），则滴定结果不能作 为氨基酸的定量依据。甲醛滴定法常用于测定蛋白质的水解程度，随着水解程 度的增加，滴定值增加，当水解完全后，滴定值保持恒定。
三、操作
1、 取3个100 mL的锥形瓶，编号。于1、2号瓶内各 加入0.1 mol/L的标准甘氨酸溶液2 mL和水5 mL，混 匀。于3号瓶内加入水7mL 。然后向3个瓶中各加酚酞 指示剂5滴，混匀后各加中性甲醛溶液2mL ，再混匀， 分别用0.1实验两次，记录每次每瓶消耗标准氢氧 化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的 回收率。 2、取未知浓度的甘氨酸溶液2mL，依上述方法进行 测定，平行做3份，取平均值。计算每毫升甘氨酸溶 液中含有氨基氮的毫克数。