实验高效液相色谱法(2015年)

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高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片中防腐剂含量

高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片中防腐剂含量摘要目的：建立对乙酰氨基酚片中防腐剂（羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯）的含量测定方法并检测防腐剂含量。

方法：采用高效液相色谱法同时测定对乙酰氨基酚片成品中三种防腐剂的含量，色谱柱为Venusil，MP C18（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-1%冰醋酸（60:40）为流动相，流速为 1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长：254nm。

结果：HPLC法可同时测定对乙酰氨基酚片中羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯的含量。

对乙酰氨基酚片中羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯的进样体积为20μl时，羟苯甲酯在27.2250μg/ml~81.6750μg/ml的浓度范围内线性关系好（相关系数r=0.9999），线性方程为y=115793.4993x+61202.9655；羟苯乙酯在5.2448μg/ml~15.7343μg/ml的浓度范围内线性关系好（相关系数r=0.9998），线性方程为y =105821.2400x-304.0966；羟苯丙酯在2.6070μg/ml~7.8411μg/ml的浓度范围内线性关系好（相关系数r=0.9999），线性方程为y=96999.2343x+893.1724。

羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯平均加样回收率分别为99.8%、100.2%和102.2%，RSD分别为0.47%，2.16%和1.82%。

结论：本法采用一个高效液相色谱条件同时检测三种防腐剂成份，方法专属性强、准确度高，重复性好，节约检测时间，可作为对乙酰氨基酚片中防腐剂质量控制方法。

关键词对乙酰氨基酚片；高效液相色谱分析法；羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯；含量对乙酰氨基酚片主要用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，也用于缓解轻至中度疼痛如头痛、关节痛、偏头痛、牙痛、肌肉痛、神经痛、痛经。

属于要求一致评价的品种，我公司在该品的一致性评价过程中，对该品原研处方进行了剖析，该品种加入3种防腐剂，其目的是为了产品在生产线上能连续生产，防止生产环境微生物超标，而节约清场时间。

苹果酸含量的测定苹果酸含量

学生姓名：学号：专业：应用化学年级班级：12级C班课程名称：现代仪器分析实验实验时间：2015年4月24日0.02mo l/L KH2PO4溶液的配制：磷酸二氢钾（KH2PO4，M=136）将磷酸二氢钾溶液用蒸馏水稀释到1000ml的容量瓶中，是其浓度变为0.02mol／L，PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4溶液。

计算：有公式m=cv*M=(0.02mol／L*1000ml/1000)*136需要磷酸二氢钾的质量m=2.72g苹果酸样品的配制：将果实样品破碎除籽后研磨成粉状，之后准确称取1.000g样品，加入含0.008mol／L磷酸的蒸馏水25ml,在25摄氏度的水浴中震荡浸泡10min，然后在800r／min、4摄氏度的条件下离心20min，取上清液，用0.45pm的水系滤膜过滤后用与HPLC分析。

纯甲醇CH3OH(M=34)2实验所得高效液相谱图：高效液相图特殊实验条件泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐）泵A浓度5.0%（纯甲醇）标准谱图山西谱图山东谱图甘肃谱图浓度泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），泵A浓度10.0%（纯甲醇）高效液相图特殊实验条件标准图谱山西谱图山东图谱甘肃图谱3苹果酸含量计算实验1：实验2：苹果产地：山西样品称取量：1.0903g容量瓶体积：25ml苹果产地：山西样品称取量：1.0903g容量瓶体积：25ml实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力17.0MPa最小压力0.0MPa。

LC停止时间10min，PDA停止时间10min，模式为二元高压梯度。

实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力17.0MPa最小压力0.0MPa。

2015年版《中国药典》通则0721 维生素A测定法通则

0721维生素A测定法本法是用紫外-可见分光光度法（通则0401）或高效液相色谱法（通则0512）测定维生素A 及其制剂中维生素A的含量，以单位表示,每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344μg或全反式维生素A醇0.300μgo测定应在半暗室中尽快进行。

第一法（紫外-可见分光光度法）由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料药中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素A独有的吸收。

在以下规定的条件下，非维生素A物质的无关吸收所引人的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。

校正公式采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测得外，其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器波长应准确，在测定前，应对仪器波长进行校正。

测定法取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每ImI中含9〜15单位的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）,测定其吸收峰的波长，并在下表所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长328nm处吸光度的比值和波长328nm处的（E陵）值。

如果吸收峰波长在326〜329nm之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02,可用下式计算含量：每Ig供试品中含有的维生素A的单位=（E怂）（328nm）×1900如果吸收波长在326〜329nm之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的±0.02,应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：4328（校正）=3.52（2A321-A3K-A340）如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3.0%,则不用校正，仍以未经校正的吸光度计算含量。

如果校正吸光度与未校正吸光度相差在一15%至一3%之间，则以校正吸光度计算含量。

如果校正吸光度超出未校正吸光度的一15%至一3%的范围，或者吸收峰波长不在326〜329nm 之间，则供试品须按下述方法测定。

高效液相色谱测定法标准操作规程

标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。

2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。

3责任：QC人员对本SOP实施负责。

4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。

色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。

超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。

常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。

离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。

有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。

为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。

残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。

高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片的含量

高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片的含量作者：孙鑫磊张灵文来源：《科学与财富》2015年第35期摘要：本文采用高校液相测定了对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠二水合物15.04g、磷酸氢二钠0.0627g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至4.5）一甲醇（80：20）为流动相，检测波长为254nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。

对乙酰氨基酚在50～350μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

对乙酰氨基酚的平均回收率为99.5%，RSD为0.73%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量测定。

关键词：对乙酰氨基酚片；对乙酰氨基酚；含量对乙酰氨基酚片是目前临床中常用的一种解热镇痛药。

对乙酰氨基酚片适应症为用于普通感冒或流行性感冒引起的发热，也用于缓解轻至中度疼痛如头痛、关节痛、牙痛、肌肉痛、痛经等。

对乙酰氨基酚片每片含主要成份为对乙酰氨基酚0.5克。

本文采用高校液相测定了对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量。

1 仪器与试药HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；LC600B液相色谱仪（北京朝阳华洋分析仪器有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；中扬EDI高纯水系统一体机（北京中扬永康环保科技有限公司）；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司）；PHB-3型笔式pH计（上海三信仪表厂）；博翔兴旺80KHZ高频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）。

对乙酰氨基酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。

乙腈（天津市康科德科技有限公司）、冰醋酸（天津威赛诺科技发展有限公司）、磷酸（淄博丰仓化工有限公司）、甲醇（天津威赛诺科技发展有限公司）、磷酸氢二钠（淄博丰仓化工有限公司）、三乙胺（济南金恒大化工有限公司）、磷酸二氢铵（济南金恒大化工有限公司）。

2015年版中国药典四部色谱法概况

合肥市食品药品检验中心
0512液相色谱法
系统适用性试验
（1）色谱柱理论板数（n）
具体品种要求不同
用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR （以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和峰宽（W）或半高峰宽（Wh/2），按n= 16（ tR /W）2或n=5.54（tR／Wh∕2）2计算色谱柱的理论板数。
应的光学、电学、电化学和或其他相关检测手段，对各组分进
行定性和定量分析的方法。
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色谱法的分类
•气相色谱法 •柱色谱法
•GSC
（GC）
•GLC •纸色谱法 •平面色谱法 •薄层色谱法 •LLC •LLC
（TLC） •LLC 色谱法
中国药典2015年版四部色谱法概述
郑正
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主要内容
2015年版药典四部色谱法目录及修订情况色谱法的基本概念色谱法在中国药典中的沿革中国药典2015年版色谱法内容概况
Байду номын сангаас
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2015版四部色谱法目录
编号通则名称 2010年版二部原附录名称
将旧版药典“对照物”修订为“对照标准物质”
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0502薄层色谱法
新版药典规范了市售薄层板的要求：市售薄层板按固定相种类分为硅胶薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等；按固定相粒径大小分为普通薄层板（10～40um）和高效薄层板（5～10um）；按硅胶板是否含有荧光剂分为硅胶G 板和硅胶GF254板。操作方法:点样点直径限值由3mm修改为4mm。其他变化：基本整合旧版药典一部和二部。

激素测定方法

激素的测定方法参考王学奎（2015）《植物生理生化实验原理与技术》一书中的高效液相色谱法，以2016年采自尚志市水稻田的野慈姑球茎为材料，6-12月每个月测定一次野慈姑球茎内CA3和ABA的含量。

试验材料的处理称取1-2g样品，在冰浴下研磨匀浆，加入80%的预冷甲醇20ml，保鲜膜密封，在4℃冰箱里冷浸过夜。

浸提液抽滤，10ml甲醇润洗研钵2次，过滤后与浸提液合并，40℃下减压蒸发至没有甲醇残余。

剩余水相完全转移到三角瓶中，用30ml石油醚萃取脱色2次，弃去醚相。

加0.01gPVPP（交联聚乙烯吡咯烷酮，crosslinked polyvinylpyrrolidone），超声30mim，抽滤用30ml，乙酸乙酯萃取3次，合并酯相，40℃下减压蒸干。

用甲醇（色谱纯）溶解残留物并定容至2ml，经0.45μm微孔滤膜过滤得待测液，保存于4℃冰箱中。

测定（1）标准曲线的绘制取一定量GA3和ABA标准品，用甲醇（色谱纯）溶解，配制成不同浓度的溶液，点击“运行控制”菜单，再选择“运行方法”，手动或自动进样器进样10-30μL，进行液相检测分析。

在一定浓度范围内，4种激素峰面积与浓度呈良好线性关系时，即可绘制标准曲线。

（2）取同样体积的待测样品，进样。

待样品峰全部出完，冲洗30min待基线平直后，即可分析下一个样品。

（3）定性根据标准品的保留时间判断样品中的对应激素峰。

选择与已知标样具有相同保留时间的样品的峰面积，并根据对应的标准曲线查出对应激素的浓度ρ（μg/mL），然后根据下式计算鲜样（FW）中各激素的含量：样品中激素含量（μg/kg FW）=ρ·V Tm·V S式中：ρ为根据样品峰面积从标准曲线查得的对应激素浓度（μg/mL）；V T为待测样总体积（mL）；V S为进样量（μL）；m为样品鲜质量（g）。

2015年版药典高效液相色谱法、质谱法(DOC)

2015年版药典高效液相色谱法、质谱法(DOC)D正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。

品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。

调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变范围为0.7X～1.3X；当X大于33%时，允许改变范围为X-10%～X+10%。

若需使用小粒径（约2μm）填充剂，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也应作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。

当必须使用特定牌号的色谱柱方能满足分离要求时，可在该品种正文项下注明。

2.系统适用性试验色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等五个参数。

按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。

（1）色谱柱的理论板数（n）用于评价色谱柱的分离效能。

由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量色谱柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测物质或内标物质的理论板数。

在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分色谱峰或内标物质色谱峰的保留时间t R和峰宽（W）或半高峰宽（W h/2），按n=16（t R/W）2或 n=5.54（t R/W h/2）2计算色谱柱的理论板数。

t R、W、W h/2可用时间或长度计（下同），但应取相同单位。

（2）分离度（R）用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。

可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测物质与某一指标性成分（内标物质或其他难分离物质）的分离度，或将供试品或对照品用适当的方法降解，通过测定待测物质与某一降解产物的分离度，对色谱系统分离效能进行评价与调整。

2015版药典黄曲霉毒素测定法

2351 黄曲霉毒素测定法第一法1 本法系用高效液相色谱法(通则 0512)测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1 和黄曲霉毒素 G2 总量计)，除另有规定外，按下列方法测定。

当测定结果不符合规定时，以第二法测定结果为准。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇 - 乙腈 - 水(40∶18∶42)为流动相；采用柱后衍生法检测，（1）碘衍生法：衍生溶液为 0.05％的碘溶液 (取碘 0.5g，加入甲醇 100ml 使溶解，用水稀释至 1000ml 制成)，衍生化泵流速每分钟 0.3ml，衍生化温度 70℃；（2）光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长 λex=360nm(或 365nm)，发射波长 λem=450nm。

两个相邻色谱峰的分离度应大于 1.5。

混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素 G2 标示浓度分别为 1.0μg／ml、0.3μg／ml、1.0μg／ml、 0.3μg／m1)0.5ml，置 10ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。

精密量取储备液 1ml，置 25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

供试品溶液的制备取供试品粉末约 15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠 3g，置于均质瓶中，精密加入 70％甲醇溶液 75ml，高速搅拌 2 分钟(搅拌速度大于 11000 转／分钟)，离心 5 分钟(离心速度 2500 转／分钟)，精密量取上清液 15ml，置 50ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取续滤液 20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟 3ml，用水 20ml 洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置 2ml 量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

高效液相色谱法测定市售自制饮料中多种色素、防腐剂及甜味剂

高效液相色谱法测定市售自制饮料中多种色素、防腐剂及甜味剂陈洁（宁德市食品药品检验检测中心，宁德 352100）摘要：建立同时测定市售自制饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸、柠檬黄、日落黄、胭脂红及苋菜红8种添加剂的高效液相色谱法。

8种添加剂在1.0～50.0μg/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系，r2≥0.99996，回收率为90.2%～105.0%，RSD为0.87%～1.6%，方法的检出限为0.005g/kg，定量限为0.015g/kg。

该方法简单、准确、重复性好，可适用于自制饮料中8种添加剂的检测。

关键词：高效液相色谱法；自制饮料；防腐剂；甜味剂；色素中图分类号：TS202.3/O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）01-0092-04 doi：10.19804/j.issn1006-2513.2021.01.015Simultaneous determination of various pigments，preservatives and sweeteners in vendor-made beverages by HPLCCHEN Jie（Ningde Center for Food and Drug Control，Ningde 352100）Abstract：A method was established for simultaneous determination of benzoic acid，sorbic acid，saccharin sodium，dehydroacetic acid，tartrazine，sunset yellow，carmine and amaranth in vendor self-made beverages by High-performance liquid chromatography（HPLC）. Eight kinds of additives showed good linear relationship over the concentration range of 1.0 ～ 50.0 μg/mL with r2 not less than 0.99996. The recoveries varied from 90.2% to 105.0%，and the relative standard deviations（RSDs）varied from 0.87% to 1.6%. The limit of determination（LOD）was 0.005 g/kg，and the limit of quantitative（LOP）analysis was 0.015 g/kg. The method is simple，accurate and reproducible，and can be applied to the determination of eight additives in vendor self-made beverages.Key words：high-performance liquid chromatography；self-made beverage；preservatives；sweeteners；pigments食品添加剂是指为改善食品色、香、味等品质，以及为防腐和加工工艺需要而加入食品中的人工合成或者天然物质，包括酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、着色剂、护色剂、酶制剂、增味剂、营养强化剂、防腐剂、甜味剂、增稠剂、香料等23个类别，2000多个品种［1-3］。

高效液相色谱法测定木通属植物苯乙醇苷B含量

高效液相色谱法测定木通属植物苯乙醇苷B含量高伟;幸伟年;敖婉初;徐林初;龚春;彭以元【摘要】以江西、湖南、四川、安徽4省的38份木通植物为试材,采用高效液相色谱法建立木通属植物苯乙醇苷B含量的测定方法,并测定木通藤茎中苯乙醇苷B的含量。

结果表明：1）采用85%甲醇回流提取1 h,可以完整提取木通苯乙醇苷B;木通苯乙醇苷B在0.04~1μg呈良好的线性关系,R2=0.9991,平均回收率99.44%。

2）木通苯乙醇苷B在三叶木通、五叶木通、白木通藤中均含有,含量0.01%~1.194%,其中在三叶木通中的成熟藤中含量最大。

【期刊名称】《南方林业科学》【年(卷),期】2015(043)005【总页数】4页(P48-51)【关键词】木通苯乙醇苷B;三叶木通;江西【作者】高伟;幸伟年;敖婉初;徐林初;龚春;彭以元【作者单位】[1]江西省林业科学院,江西南昌330013;[2]江西师范大学,江西南昌330029;;;;;【正文语种】中文【中图分类】S567双子叶植物白木通或三叶木通、木通（五叶木通）的木质藤是中药木通的原料来源。

中医药理论认为，木通味苦，性寒，具有清热利尿，活血通脉，抗菌消炎之功效，主治小便短赤，淋浊，水肿，风湿痹痛，乳汁不通，痛经等症［1］。

木通的这些药用价值与其所含的化学成分密切相关。

木通皂苷的结构单元苷元主要是从齐墩果酸的结构基础上氧化为去甲常春藤皂苷元、常春藤皂苷元、去甲阿江榄仁酸、阿江榄仁酸等4种皂苷元［2］。

目前从木通的干燥藤茎中除了分离得到齐墩果烷型三萜皂苷类成分，还分离到苯乙醇苷类成分，这类成分也是首次从木通属植物中发现。

苯乙醇苷类化合物（phenylethanoid glycosides）是一类含有羟基、甲氧基取代苯乙基和羟基、甲氧基取代肉桂酰基，通常以B-葡萄糖为母核的含有酯键及氧苷键的天然糖，广泛存在于双子叶植物中［3］。

目前对木通化学成分的研究主要集中在木通齐墩果酸、木通皂苷的药理作用及其结构的鉴定［4-9］，也有研究木通基因表达对各药用成分含量的影响［10-12］，而对木通中苯乙醇苷类化合物的研究鲜见报道。

高效液相色谱法操作规程(2015版药典)

范围：原料、中间体、成品检验。

责任：检验员、QA监控员、化验室主任、质保科科长、质量部负责人。

内容：高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。

色谱柱内径一般3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。

超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

1.1色谱柱反向色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常用的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。

常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。

常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可作反向色谱。

离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。

有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多空微球等填充剂；对应异构体的分离通常使用手性填充剂。

色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。

为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但不宜超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2~8之间。

残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。

高效液相色谱法测定地西泮的西药浓度

高效液相色谱法测定地西泮的西药浓度作者：高爽来源：《中国科技博览》2015年第31期[摘要]目的：本文采用高效液相色谱法对地西泮的西药浓度进行了测定。

方法：以甲醇：乙腈：水=20：40：40为流动相，流速为1.0ml/min，以Ywgc18（4.6mm×250mm，10μm）为色谱柱，检测波长为254nm，灵敏度为0.01AUFS。

结果：地西泮在0.125-16μg/ml的范围内有着良好的线性，不同质量的地西泮浓度回收率有着一定差异，地西泮的最低检测浓度为0.05μg/ml。

结论：采用高效液相色谱法检测地西泮的西药浓度具有可行性，这种方法操作简单，测定的结果准确性高，可以大力推广。

[关键词]高效液相色谱法测定地西泮西药浓度中图分类号：P122 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）31-0387-01地西泮属于镇静药物，其在临床治疗中应用比较广，可以发挥出催眠的作用，但是这种药物也有一定毒性，不能滥用或者用量过大，否则会引起中毒现象。

在对中毒患者进行抢救时，首先需要采用常规的抢救措施，然后需要对地西泮西药浓度进行测定，这可以了解药物的特性，还可以了解患者的中毒程度，采用高效液相色谱法测定地西泮的西药浓度有利于掌握患者的病情，还可以制定出有效的治疗方案，对疗效评价提供重要的参考依据。

本文对高效液相色谱法在地西泮西药浓度测定的应用情况进行了分析，对这种测定方法的优缺点进行了介绍，希望可以提高临床检测的效率。

1、材料与方法1.1 仪器Kontron322型高效液相色谱仪与Kontron332型可变紫外检测器（意大利康强公司）；Hs 色谱数据工作站V4.0（杭州英谱科技公司）TCI一16G台式高速离心机（上海医用分析仪器厂）；H一92微型混合器（西巴斯生物技术开发公司）。

1.2 试药地西泮（化学对照品，国家麻醉品实验室）；氯硝西泮（化学对照品，中国药品生物制品检定所）；甲醇和乙腈为色谱纯；乙醚、冰醋酸、正丁胺、氢氧化钠为分析纯；水为重蒸馏水。

高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯片的含量

高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯片的含量陈燕，郭琪，刘虹（潍坊市食品药品检验检测中心，山东潍坊261061）摘要：目的建立克林霉素磷酸酯片的含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法，以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，磷酸盐缓冲液－乙腈（73ʒ27）为流动相，检测波长为210nm，用外标法计算克林霉素磷酸酯片的含量。

结果含量测定在0．060 0．60mg·mL－1（Ｒ2=0．9979）浓度范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98．98%（ＲSD=0．46%）。

结论该方法简便、准确，重复性好、灵敏度高，适用于克林霉素磷酸酯片含量的测定。

关键词：克林霉素磷酸酯片；高效液相色谱法；含量中图分类号：Ｒ927．2文献标识码：A文章编号：2095－5375（2015）02－0078－002Determination of Clindamycin Phosphate Tablets by HPLCCHEN Yan，GUO Qi，LIU Hong（Weifang Institute for Food and Drug Control，Weifang261061，China）Abstract：Objective To establish a method for the determination of Clindamycin Phosphate Tablets．Methods The HPLC method was performed on C8column with a mobile phase of phosphate buffer－acetonitrile（73ʒ27）and the detection wavelength was set at210nm．The contents were determined by external standard．Ｒesults The calibration curve was line-ar in the range of0．060 0．60mg·mL－1（Ｒ2=0．9979）．The average recovery was98．98%withＲSD of0．46%．Con-clusion The method was simple，rapid and accurate．It can be used for the determination of Clindamycin Phosphate Tab-lets．Key words：Clindamycin Phosphate Tablets；HPLC；Content克林霉素磷酸酯为化学半合成的克林霉素衍生物，在体外无活性，进入体内后水解为克林霉素而发挥其药理活性［1，2］。

高效液相色谱法测定左炔诺孕酮片的溶出度

高效液相色谱法测定左炔诺孕酮片的溶出度目的建立高效液相色谱法测定左炔诺孕酮片的溶出度方法。

方法采用《中国药典》2015年版四部溶出度测定法第三法，以0.8%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液250 mL为溶出介质，转速为75 r/min，取样时间为45 min。

采用以Agilent ZORBAX 300-SCX C18为色谱柱，以乙腈-水（60∶40）为流动相，检测波长为240 nm的高效液相色谱法检测溶出量。

结果左炔诺孕酮在0.375～2.625 μg，范围内线性关系良好（r2=1.0）；平均回收率为99.53%，RSD 为0.85%（n = 9）；3批样品45 min内的溶出度依次为：100.6%、100.2%和100.5%。

结论该方法符合溶出度方法的建立原则，可控制左炔诺孕酮片的内在质量。

标签：左炔诺孕酮片；高效液相色谱；溶出度；测定High Efficiency Liquid Chromatography in Detecting the Dissolution Rate of Levonorgestrel TabeltsSUN Qiu1，SHANG Li-li1，SUN Jing-jing21.Baicheng Food and Drug Inspection Institute，Baicheng，Jilin Province，137000 China；2.Drug Inspection Institute of Jilin Province，Changchun，Jilin Province，130033 China[Abstract] Objective To establish the method of high efficiency liquid chromatography in detecting the dissolution rate of levonorgestrel tabelts. Methods 0.8% lauryl sodium sulfate solution （SDS）were used as the dissolution medium with 75r/min revolving speed and 45min sampling time according to the third law in the four dissolution spectrophotometry in Chinese pharmacopoeia in 2015，and the dissolution amount was detected by the high efficiency liquid chromatography with the Agilent ZORBAX 300-SCX C18 chromatographic column，acetonitrile-water （60：40）mobile phase and 240nm detection wavelength. Results The linear correlation of levonorgestrel between 0.375-2.625μg was good，r2= 1.0，the average recycle rate was 99.53% and RSD was 0.85%，（n=9），the dissolution rates of three batches of samples within 45min were in turn 100.6%，100.2% and 100.5%. Conclusion The method meets the establishment principle of the dissolution method，and it can control the inner quality of levonorgestrel tabelts.[Key words] Levonorgestrel tabelts；High efficiency liquid chromatography；Dissolution rate；Measurement左炔诺孕酮片为常用女性口服避孕药，具有较强抑制垂体分泌促性腺激素的作用而抑制排卵；它能使宫颈黏液变稠，阻碍精子穿透，并能使子宫内膜萎缩不利于孕卵着床，从而起到避孕作用。

高效液相色谱法标准操作规程

1.目的：规范高效液相色谱法检验操作，保证检验的质量。

2.范围：适于本公司原辅料、成品的高效液相色谱法操作。

3.责任：质量管理科、中心化验室、检验员。

4.检验依据：《中国药典》2015年版四部高效液相色谱法操作方法。

5.内容：5.1 简述◆高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。

由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。

◆高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。

有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。

常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。

◆高效液相色谱仪基本由泵，进样器，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。

检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器，其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。

色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。

梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。

◆高效液相色谱仪的使用要求◆按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705－90）”的规定作定期检定，应符合规定。

●仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。

◆具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

5.2 操作前的准备◆流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查．应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。

高效液相色谱法测定均苯四甲酸及杂质

高效液相色谱法测定均苯四甲酸及杂质吴永贵【摘要】通过优化了色谱工作条件建立了测定均苯四甲酸及杂质的高效液相色谱分析方法.结果表明:在柱温为35℃条件下,以pH为1.9的乙腈-0.1％(φ)磷酸溶液(25+75)混合液为流动相,1.0 mL·min-1流速下等度洗脱,于波长237 nm下测定,外标法定量,均苯四甲酸及杂质实现了基线分离,分离度＞2.峰面积与质量浓度间呈线性关系;检出限在0.03～0.08 mg·L-1之间;测定下限在0.07～0.22 mg·L-1之间,测定值的相对标准偏差(n=5)小于2％.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2015(051)007【总页数】4页(P934-937)【关键词】高效液相色谱法;均苯四甲酸;流动相【作者】吴永贵【作者单位】南京化工职业技术学院化学工程系,南京210048【正文语种】中文【中图分类】O652.63均苯四甲酸(PMA)可由均苯四甲酸二酐(简称均酐)水解生成,均苯四甲酸二酐遇水或置于湿空气中会变成均苯四甲酸。

均苯四甲酸具有4个对称的羧基,其杂质也具有2～3个羧基。

均苯四甲酸用于合成聚酰亚胺、均苯四酸辛酯等,是生产消光固化剂的主要原料。

工业上由均四甲苯气固相催化氧化生产均苯四甲酸二酐的过程是一个复杂的多相催化过程,其氧化产物是范围很宽的含氧化合物的混合物[1]。

均四甲苯氧化产物经水解精制成均苯四甲酸后,少量杂质会进入到均苯四甲酸中去,主要有邻苯二甲酸、偏苯三甲酸和均苯三甲酸。

因此生产企业须对均苯四甲酸产品进行全分析,以有利于企业的生产控制。

目前,测定均苯四甲酸的方法有气相色谱法、液相色谱法、滴定法、熔点法和光谱法等。

采用气相色谱分析均苯四甲酸比较麻烦,要自制重氮甲烷,然后经乙酯化或甲酯化处理,使均苯四甲酸及杂质转化为低沸点的酯类,赶走多余乙醚后用三氯甲烷作溶剂进样分析[2-4],该法十分繁琐,分析时间较长,误差也较大,而且重氮甲烷剧毒。

版药典高效液相色谱法质谱法

调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变范围为0.7X～1.3X；当X大于33%时，允许改变范围为X-10%～X+10%。

若需使用小粒径（约2μm）填充剂，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也应作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。

当必须使用特定牌号的色谱柱方能满足分离要求时，可在该品种正文项下注明。

2.系统适用性试验色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等五个参数。

（1）色谱柱的理论板数（n）用于评价色谱柱的分离效能。

t R、W、W h/2可用时间或长度计（下同），但应取相同单位。

（2）分离度（R）用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。

高效液相色谱法测定氮丙啶

高效液相色谱法测定氮丙啶范红伟;王国琴;江俊;汤玉训【摘要】提出了一种测定氮丙啶的高效液相色谱分析方法.将自制氮丙啶单体与福林试剂(1,2-萘醌4-磺酸钠盐)反应得到衍生物,通过NMR和IR表征验证衍生物结构.衍生物在Agilent ODB C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm)上分离,以乙腈0.04 mol·L-1磷酸氢二钠混合溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为258 nm.氮丙啶的线性范围为1.00～20.0 mg·L-1,检出限(3S/N)为0.05 mg·L-1,测定值的相对标准偏差(n=6)小于2％.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2015(051)009【总页数】4页(P1294-1297)【关键词】高效液相色谱法;氮丙啶;福林酚试剂【作者】范红伟;王国琴;江俊;汤玉训【作者单位】浙江省家具与五金研究所,杭州311112;浙江省家具与五金研究所,杭州311112;浙江省家具与五金研究所,杭州311112;浙江省家具与五金研究所,杭州311112【正文语种】中文【中图分类】O657.61氮丙啶化学名称为乙烯基亚胺,为三元氮杂环化合物,无色具有氨臭液体,其沸点为55 ℃,具有较强的挥发性。

美国劳工部职业安全健康委员会于1974年将氮丙啶作为潜在的致癌物,列为危害物质。

2009年12月5日,欧盟通过《欧盟委员会制定木制家具生态标签授予准则的决议-2009/894/EC》,正式将木制家具列入生态标签产品的范围,在2009/894/EC指令中第2款b条中明确规定:产品中不得含有卤化有机粘合剂、氮丙啶、聚氮丙啶及基于某些重金属添加剂的颜料。

有文献报道,将待测食品模拟物样品转化为溶液的状态,然后将氮丙啶与1,2-萘醌-4-磺酸钠等物质反应,经过分离后,采用分光光度法测定氮丙啶含量[1];也有报道利用此法测定人体尿液和工厂空气中的氮丙啶含量[2-3];文献[4-7]中使用气相-氮磷检测器分析模拟食物中的氮丙啶或采用高效液相色谱法对氮丙啶含量进行快速预估。

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