生物化学实验课件课件
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3、实验时应严格按照实验步骤及试剂用量进行 操作，不能任意变更。不熟悉的仪器和设备，应先 请老师讲解后使用，切勿随意乱动。
4、实验进行时，必须随时把观察得到的现象和实验数 据，如实地记录在记录本上，不得记录在其他纸上，要养成 作原始记录的良好习惯。
5、实验时如有问题发生，应首先用自己学过的知识， 独立思考加以解决，培养独立分析问题和解决问题的能力， 如自己不能解决，可与指导老师共同讨论研究，提出解决问 题的办法。
8、验中所用得玻璃仪器及其它器皿，应 洗涤干净，桌面、地面要保持清洁有序，实 验完毕后，所用仪器设备应恢复原状。
9、必须遵守实验室规则：
（1）室内不得高声谈笑，保持安静的实验环境。 （2）爱护仪器，不得浪费药品，节省水电，遵守学生守则 及实验室安全、卫生等制度。
（3）公用仪器及试剂瓶用完后应及不要移动原有的位置。 注意瓶塞切勿盖错，以免污染试剂，用毕后立即放回原处。对 于有害药品，应按实验室规定取用。
本实验所用的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。它们都是Cu2＋的碱 性溶液，能使还原糖氧化而本身被还原成红色（颗粒大）或黄色（颗粒小） 的Cu2O沉淀。
本尼迪克特试剂是改良的斐林试剂。（见P100,101脚注）
三、器材及试剂
1、器材：试管、试管架、滴管、水浴锅（或电炉）
2、试剂： 1%葡萄糖溶液， 1%果糖溶液， 1%蔗糖溶液， 1%淀粉， 1%麦芽糖溶液， 0.1%糠醛溶液， 浓硫酸， 莫氏试剂， 塞氏试剂， 斐林试剂， 本尼迪克特试剂
1%果糖溶液
或 ＋ 1%蔗糖溶液 1%麦芽糖溶液
2ml本尼迪克特 1%淀粉溶液
（4）滤纸、火柴棒、碎玻璃等应投入废品袋，切勿丢入水 池，以保证下水道畅通。
（5）如用仪器有损坏，立即向指导老师报告，再行登记。
（6）保持实验室的整齐清洁，个人所带与实验无关的东西， 如书包等要放在实验室指定地方，不得乱放在实验桌上。
（7）由学生轮流值日，值日生要负责当天实验室的卫生、 安全和服务性的工作，特别注意打扫水槽中废弃物。
一、实验目的：
1、了解糖类某些颜色反应的原理； 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法； 3、学习几种常用的鉴定糖类还原性的方法及
其原理。
二、实验原理
(一)颜色反应
1. α-萘酚反应
糖在浓无机酸（硫酸或盐酸）作用下，脱水生
成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色 物质。
注意：因糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性， 不是糖类的特异反应。
生物化学实验课件
实验一 糖类的性质实验（实验一和二） 实验二 氨基酸的分离鉴定--纸层析法（7） 实验三 蛋白质及氨基酸的呈色反应（8） 实验四 酶的特性（18） 实验五 脂肪碘值的测定(5) 实验六 蛋白质的等电点测定和沉淀反应(9) 实验七 米氏常数的测定(20) 实验八 维生素C的定量测定(23)
实验室规则及安全、卫生教育
实验课是提高教学质量的重要环节。通过实验巩 固理论知识，训练基本操作，培养独立工作的能力， 为了保证实验顺利进行，实验前应注意以下几点：
1、每次实验前必须详细预习实验讲义，明确实 验原理及操作步骤，并在记录本上拟出操作时的注 意事项。
2、实验时自觉遵守课堂纪律，严格按操作规程 操作，既要独立操作又要与其他同学配合。
（8）最后一组实验人员，离开实验室时，检查水、电、门、 窗是否关闭，以保证实验室安全。
（9）如有突发事件（起火、试剂腐蚀伤人）发生，不要惊 慌失措，应妥善处置（使用灭火机、关闭电源等）。
实验一 糖类的性质实验
糖类的重要鉴别方法是 Ｍｏｌｉｓｈ反应和Ｓｅｌｉ ｗａｎｏｆｆ反应。糖类、苷类及其他含糖物质与α 萘酚和 浓硫酸呈紫红色的环的反应称为 Ｍｏｌｉｓｈ反应，该反应 可用于糖类和非糖物质的鉴别。酮糖糖加入间苯二酚和６ｍ ｏｌ／Ｌ盐酸能产生红色的反应称为Ｓｅｌｉｗａｎｏｆｆ 反应，该反应可用于酮糖和醛糖的鉴别。如己酮糖加入间苯 二酚和浓盐酸，加热后迅速产生红色，而同样条件下己醛糖 的反应速度要慢得多。
6、精心爱护各种仪器。实验所需的一般仪器按规定借 领，归还。完成实验后应将仪器洗净倒置于实验柜中并排列 整齐。如有损坏或遗失，需要说明原因，经指导教师签名后 方可补领，并按规定赔偿。
7、精密贵重仪器每次使用后应登记姓名 并记录仪器使用情况。要随时保持仪器的清 洁。如发生故障，应立即停止使用并报告指 导教师。
四、实验步骤
1、α-萘酚反应
1%葡萄溶液
观
1%果糖溶液 各加1ml
★各加2滴
★各加1ml
察
5
记
1%蔗糖溶液
支
莫氏试剂 混
浓硫酸
录
试
各
1%淀粉溶液
管
匀
管
0.1%糠醛溶液
颜 色
Molisch反应（-萘酚反应）
界面：显色------鉴定：所有的糖类均可显色
浓H2SO4
糖 α -萘酚+酒精
2. 间苯二酚反应
1%葡萄糖溶液 1%果糖溶液 1%蔗糖溶液
各加0.5ml
3 支
试 管
各加5ml
赛氏试剂
混
均源自文库
同时 置沸 水浴 中
观察 记录 各管 颜色
3、糖与斐林试剂的反应
1）检验试剂：
1ml 斐 林试剂
或
1ml 本
＋ 4ml 蒸 馏 水
1 支 试 管
加 热 煮 沸
观 察 现 象
尼迪克
特试剂
2）实验过程
2ml斐林试剂 1%葡萄糖溶液
非还原性糖在酸存在下，加热水解后产生还原性 的单糖。淀粉的水解是逐步发生的，先水解成紫糊 精，再水解成红糊精、无色糊精、麦芽糖，最终水 解成葡萄糖。用碘液可以检查这种水解过程。完全 水解后，可用Ｂｅｎｅｄｉｃｔ试剂加以证实。
多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱 水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存在下与α萘 酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。
CHO
O
-CH2OH
2. 间苯二酚反应
在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛， 后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮糖的特异反应。因为醛糖在同 样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高 或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
(二) 还原作用
许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在的醛基 或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等金属离 子还原，同时糖类本身被氧化成糖酸及其他产物。糖 类这种性质常被利用于检测糖的还原性及还原糖的定 量测定。
4、实验进行时，必须随时把观察得到的现象和实验数 据，如实地记录在记录本上，不得记录在其他纸上，要养成 作原始记录的良好习惯。
5、实验时如有问题发生，应首先用自己学过的知识， 独立思考加以解决，培养独立分析问题和解决问题的能力， 如自己不能解决，可与指导老师共同讨论研究，提出解决问 题的办法。
8、验中所用得玻璃仪器及其它器皿，应 洗涤干净，桌面、地面要保持清洁有序，实 验完毕后，所用仪器设备应恢复原状。
9、必须遵守实验室规则：
（1）室内不得高声谈笑，保持安静的实验环境。 （2）爱护仪器，不得浪费药品，节省水电，遵守学生守则 及实验室安全、卫生等制度。
（3）公用仪器及试剂瓶用完后应及不要移动原有的位置。 注意瓶塞切勿盖错，以免污染试剂，用毕后立即放回原处。对 于有害药品，应按实验室规定取用。
本实验所用的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。它们都是Cu2＋的碱 性溶液，能使还原糖氧化而本身被还原成红色（颗粒大）或黄色（颗粒小） 的Cu2O沉淀。
本尼迪克特试剂是改良的斐林试剂。（见P100,101脚注）
三、器材及试剂
1、器材：试管、试管架、滴管、水浴锅（或电炉）
2、试剂： 1%葡萄糖溶液， 1%果糖溶液， 1%蔗糖溶液， 1%淀粉， 1%麦芽糖溶液， 0.1%糠醛溶液， 浓硫酸， 莫氏试剂， 塞氏试剂， 斐林试剂， 本尼迪克特试剂
1%果糖溶液
或 ＋ 1%蔗糖溶液 1%麦芽糖溶液
2ml本尼迪克特 1%淀粉溶液
（4）滤纸、火柴棒、碎玻璃等应投入废品袋，切勿丢入水 池，以保证下水道畅通。
（5）如用仪器有损坏，立即向指导老师报告，再行登记。
（6）保持实验室的整齐清洁，个人所带与实验无关的东西， 如书包等要放在实验室指定地方，不得乱放在实验桌上。
（7）由学生轮流值日，值日生要负责当天实验室的卫生、 安全和服务性的工作，特别注意打扫水槽中废弃物。
一、实验目的：
1、了解糖类某些颜色反应的原理； 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法； 3、学习几种常用的鉴定糖类还原性的方法及
其原理。
二、实验原理
(一)颜色反应
1. α-萘酚反应
糖在浓无机酸（硫酸或盐酸）作用下，脱水生
成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色 物质。
注意：因糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性， 不是糖类的特异反应。
生物化学实验课件
实验一 糖类的性质实验（实验一和二） 实验二 氨基酸的分离鉴定--纸层析法（7） 实验三 蛋白质及氨基酸的呈色反应（8） 实验四 酶的特性（18） 实验五 脂肪碘值的测定(5) 实验六 蛋白质的等电点测定和沉淀反应(9) 实验七 米氏常数的测定(20) 实验八 维生素C的定量测定(23)
实验室规则及安全、卫生教育
实验课是提高教学质量的重要环节。通过实验巩 固理论知识，训练基本操作，培养独立工作的能力， 为了保证实验顺利进行，实验前应注意以下几点：
1、每次实验前必须详细预习实验讲义，明确实 验原理及操作步骤，并在记录本上拟出操作时的注 意事项。
2、实验时自觉遵守课堂纪律，严格按操作规程 操作，既要独立操作又要与其他同学配合。
（8）最后一组实验人员，离开实验室时，检查水、电、门、 窗是否关闭，以保证实验室安全。
（9）如有突发事件（起火、试剂腐蚀伤人）发生，不要惊 慌失措，应妥善处置（使用灭火机、关闭电源等）。
实验一 糖类的性质实验
糖类的重要鉴别方法是 Ｍｏｌｉｓｈ反应和Ｓｅｌｉ ｗａｎｏｆｆ反应。糖类、苷类及其他含糖物质与α 萘酚和 浓硫酸呈紫红色的环的反应称为 Ｍｏｌｉｓｈ反应，该反应 可用于糖类和非糖物质的鉴别。酮糖糖加入间苯二酚和６ｍ ｏｌ／Ｌ盐酸能产生红色的反应称为Ｓｅｌｉｗａｎｏｆｆ 反应，该反应可用于酮糖和醛糖的鉴别。如己酮糖加入间苯 二酚和浓盐酸，加热后迅速产生红色，而同样条件下己醛糖 的反应速度要慢得多。
6、精心爱护各种仪器。实验所需的一般仪器按规定借 领，归还。完成实验后应将仪器洗净倒置于实验柜中并排列 整齐。如有损坏或遗失，需要说明原因，经指导教师签名后 方可补领，并按规定赔偿。
7、精密贵重仪器每次使用后应登记姓名 并记录仪器使用情况。要随时保持仪器的清 洁。如发生故障，应立即停止使用并报告指 导教师。
四、实验步骤
1、α-萘酚反应
1%葡萄溶液
观
1%果糖溶液 各加1ml
★各加2滴
★各加1ml
察
5
记
1%蔗糖溶液
支
莫氏试剂 混
浓硫酸
录
试
各
1%淀粉溶液
管
匀
管
0.1%糠醛溶液
颜 色
Molisch反应（-萘酚反应）
界面：显色------鉴定：所有的糖类均可显色
浓H2SO4
糖 α -萘酚+酒精
2. 间苯二酚反应
1%葡萄糖溶液 1%果糖溶液 1%蔗糖溶液
各加0.5ml
3 支
试 管
各加5ml
赛氏试剂
混
均源自文库
同时 置沸 水浴 中
观察 记录 各管 颜色
3、糖与斐林试剂的反应
1）检验试剂：
1ml 斐 林试剂
或
1ml 本
＋ 4ml 蒸 馏 水
1 支 试 管
加 热 煮 沸
观 察 现 象
尼迪克
特试剂
2）实验过程
2ml斐林试剂 1%葡萄糖溶液
非还原性糖在酸存在下，加热水解后产生还原性 的单糖。淀粉的水解是逐步发生的，先水解成紫糊 精，再水解成红糊精、无色糊精、麦芽糖，最终水 解成葡萄糖。用碘液可以检查这种水解过程。完全 水解后，可用Ｂｅｎｅｄｉｃｔ试剂加以证实。
多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱 水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存在下与α萘 酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。
CHO
O
-CH2OH
2. 间苯二酚反应
在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛， 后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮糖的特异反应。因为醛糖在同 样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高 或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
(二) 还原作用
许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在的醛基 或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等金属离 子还原，同时糖类本身被氧化成糖酸及其他产物。糖 类这种性质常被利用于检测糖的还原性及还原糖的定 量测定。