心得安对大鼠离体子宫平滑肌收缩性的影响(初稿)

机能自主设计实验
心得安对大鼠离体子宫平滑肌
收缩性的影响
班级：17临床教改
组别： 4
组长：刘亚伟
组员：刘佳琦王萍苏航
王成祺徐可
心得安对大鼠离体子宫平滑肌
收缩性的影响
【摘要】目的：研究心得安对大鼠离体子宫收缩的影响和机制。

方法：制作大鼠离体子宫肌条，观察心得安和缩宫素对大鼠离体子宫平滑肌条自发收缩振幅的影响。

建立大鼠离体子宫平滑肌收缩模型，分为缩宫素、心得安低剂量、心得安中剂量、心得安大剂量组，观察给药前后子宫平滑肌收缩幅度及舒张幅度变化。

结果：结果心得安和缩宫素均有效地诱导子宫平滑肌条的收缩，且两组效果无显著性差异(P>0.05)；心得安各组对大鼠离体子宫平滑肌的收缩值和舒张值均有显著的增强作用(P<0.01)，并且发现其对子宫平滑肌条的收缩作用与缩宫素相当(P>0.05)。

结论：本试验旨在研究心得安对大鼠离体子宫平滑肌收缩性的影响，并与缩宫素的作用进行比较，初步了解心得安与流产可能存在的关系。

【关键词】心得安；子宫平滑肌；收缩
【实验目的】
离体大鼠子宫模型的制备
研究不同剂量β-受体阻断剂对子宫的节律性收缩和强直性收缩的作用【实验原理】
缩宫素（催产素）是子宫平滑肌兴奋药，它可直接兴奋子宫平滑肌，使子宫收缩力增强和收缩频率增快，在临床上主要用于引产及流产。

它是垂体后叶素分泌，通过作用于子宫上的缩宫素特异性受体，活化偶联的G蛋白而起作用。

在正常生理情况下，随着妊娠期的进展雌激素水平不断升高，子宫平滑肌对缩宫素的敏感性也随之逐渐增强，到妊娠晚期达到最高峰。

将妊娠中期的小鼠、大鼠或家兔离体子宫，置于含有缩宫素的合适营养液环境中培养，以观察其自主张力活动。

妊娠期，在垂体促甲状腺激素（TSH）和胎盘分泌的促甲状腺激素释放激素(TRH)及促促甲状腺激素（HCT）作用下，甲状腺组织增生，母体可出现甲状腺功能亢进的表现（如多汗、怕热、食欲亢进及心率增快等）。

β-受体阻断剂——
心得安（普奈洛尔）对甲亢孕妇是一种有效的治疗药物。

在大鼠子宫平滑肌细胞上存在有β-肾上腺素受体（主要为β2受体）。

阻断β－受体后可使子宫平滑肌紧张性增加。

这对于妊娠合并甲状腺功能亢进的妇女来说，应用心得安这一β-受体阻断剂来治疗甲亢症状，可能会存在流产的危险。

【实验材料】
（1）实验对象妊娠中期（8～12天）wistar雌性大鼠（300～350g）
（2)实验器材BL－410生物机能实验系统，超级恒温水浴，肌力换能器，浴管，L－型钩，哺乳动物手术器械一套，万能支架，大铁架，螺旋夹，双凹夹，增氧泵，烧杯，移液器，培养皿等。

（3）试剂与药品0.05U/ml缩宫素溶液，任洛氏液，0.2mg/ml、1mg/ml、5mg/ml、25mg/ml、125mg/ml盐酸普奈洛尔溶液。

（人－鼠之间用药量的具体换算关系见后附。

）[注：任洛氏液的主要组成（g/L）:NaCl9.0,KCl0.42,CaCl20.06,NaHCO30.3,Glucose1.0.]
【实验步骤】
1．取10只妊娠中期大鼠，备用。

2．从中取出大鼠一只，击头致死，迅速剖腹，取出子宫，置于盛有任—洛氏液的培养皿中，剔除子宫周围的结缔组织和脂肪组织，将胚胎处理干净，然后将子宫二角相连处剪开，取一角，剪取2cm。

3．向浴槽内加入15ml任—洛氏液，使水浴温度保持在35°C。

4．取其中一条，用线结扎其两端，一端固定于L－型钩上，放入任—洛氏液的浴槽内，另一端与肌力换能器相连，通氧，调节静息张力1g左右，待稳定后描记一段子宫平滑肌的正常活动曲线。

5．向浴管中加入0.05U/ml缩宫素溶液0.1ml，观察并记录子宫平滑肌的反应情况。

6．待上述反应达峰值后，用新鲜任—洛氏液反复冲洗浴管3～5次，待稳定后按浓度由低到高分别向其中加入0.2mg/ml、1mg/ml、5mg/ml、25mg/ml、125mg/ml 盐酸普奈洛尔溶液各0.1ml，观察平滑肌的反应情况，并记录曲线。

每次加药前都要反复冲洗浴管3～5次。

7．重复上述2～6的步骤，直至将10只大鼠全部试验完毕。

8．将上述实验结果用统计学方法进行处理。

【观察项目】
1. 收缩张力以各次收缩之间的最低点表示（正常的和加药之后的）；
2. 收缩强度即收缩的幅度，以每次收缩所达到的最高点表示；
3. 频率单位时间（每分钟）内收缩的次数；
4. 子宫的活动力以强度与频率的乘积表示。

5.检测指标:观察给药前后子宫收缩幅度变化。

心得安和缩宫素引起的子宫平滑肌条的收缩反应由收缩振幅(%)衡量。

收缩振幅(%)=给药后的子宫平滑肌条收缩振幅/给药前的子宫平滑肌条收缩振幅×100%
6.统计分析
釆用SPSS13.0统计分析软件进行数据处理。

计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用独立样本t检验进行组间差异分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

【实验结果】
经统计学分析，缩宫素对大鼠离体子宫平滑肌的收缩值和舒张值均有一定的增强作用，给药前后比较，有显著性差异(P<0.01);芫花素各组对大鼠离体子宫平滑肌的收缩值和舒张值均有一定的增强作用，给药前后比较，有显著性差异(P<0.01);芫花素小剂量组对大鼠离体子宫平滑肌的收缩值、舒张值的增强作用较缩宫素弱，与缩宫素比较，有显著性差异(P<0.01);芫花素中、大剂量组对大鼠离体子宫平滑肌的收缩值、舒张值的增强作用与缩宫素相当，均无显著性差异
(P>0.05)。

1. 在治疗量的缩宫素作用下，子宫平滑肌可能会出现较强烈的收缩。

2. 在一般情况下，随着药物浓度的增加，子宫平滑肌对药物的反应性也会随之增强。

因此，在加入不同浓度的盐酸普奈洛尔溶液后，平滑肌的收缩性可能会不断增强（收缩幅度和药物剂量在一定范围内成正比）。

也可能在这其间的某一浓度时（可能是治疗量，也可能比它小或大于这一浓度），收缩曲线已达最高峰，此后的一系列浓度的药物可能会与此曲线平行或略有降低。

3. 加入盐酸普奈洛尔溶液后所记录的收缩曲线的最高峰与加入缩宫素后所记录的收缩曲线相比较，可能会存在以下两种情况：
（1）前者与后者接近甚至大于后者。

这说明普奈洛尔也有明显的致流产作用，临床副作用较大，不宜在妊娠期服用来治疗甲状腺功能亢进。

（2）前者小于后者。

这说明普奈洛尔的确可以引起子宫平滑肌收缩，但是它与致流产作用的关系还需做进一步的研究。

【结果分析】
M型受体广泛分布于中枢及周围神经组织、心肌、平滑肌和各种腺体，属于G蛋白偶联受体，通过与不同的鸟苷酸调节蛋白(G蛋白)结合，引起不同的生理生化效应[17]。

平滑肌对某些化学物质有较高的敏感性，可以通过这些物质刺激M、催产素受体等而使平滑肌收缩。

其中，乙酰胆碱为M胆碱受体激动药，
它的作用机制是与M受体具有强大的内在活性，结合后产生强烈的收缩作用。

实验结果表明:心得安能够使正常大鼠离体子宫平滑肌的自发收缩频率显著减慢、张力显著减小、子宫活力显著减弱；同时，也可以使大鼠离体子宫平滑肌催产素及乙酰胆碱的诱发收缩频率显著减慢、张力显著减小、子宫活力显著减弱。

因此，可以认为心得安具有抑制子宫平滑肌的作用，且其抑制作用可能跟阻断催产素受体和M受体有关，其作用机制有待今后进一步研究
另外，甲亢症状是由于β-肾上腺素受体兴奋，使交感神经活动增强的结果，与儿茶酚胺在血流中的浓度增高或人体对儿茶酚胺的敏感性增高有密切的关系。

心得安是β-肾上腺素受体阻断剂，可阻断肾上腺素的效应，从而抑制甲亢症状。

缩宫素能直接兴奋子宫平滑肌，加强其收缩。

小剂量加强子宫（特别是妊娠末期的子宫）的节律性收缩，使收缩振幅加大，张力稍增加，其收缩的性质与正常分娩相似，即使子宫底部肌肉发生节律性收缩，又使子宫颈平滑肌松弛，以促进胚胎娩出。

随着剂量加大，将引起肌张力持续增高，最后可致强直性收缩，这对胚胎和母体都是不利的，临床上用于缓解子宫的大出血。

缩宫素使子宫平滑肌收缩力增强的机制。

⑴由实验数据可以看出，子宫平滑肌收缩的频率较慢，这是由平滑肌中的ATP分解速度较慢，Ca2+移至细胞外或被肌浆网摄回的过程都很慢所造成的。

⑵缩宫素能使Ca2+内流加强，然后使Ca2+充满肌浆网，同时触发触发肌浆网贮存部位Ca2+释放，从而激活平滑肌兴奋－收缩耦联，使平滑肌收缩加强。

高浓度缩宫素使子宫平滑肌产生强直收缩的机制。

高浓度缩宫素能显著增加Ca2+内流，触发肌浆网贮存部位Ca2+释放，使得细胞质内Ca2+显著增高，始终维持在平滑肌的兴奋阈值，肌小节始终处于收缩状态，平滑肌产生强直收缩。

缩宫素使得子宫平滑肌最大舒张力增高的制剂。

缩宫素能增加Ca2+内流，触发肌浆网贮存部位Ca2+释放，使得细胞质内Ca2+增高。

在舒张阶段，细胞质内的Ca2+被摄回肌浆网中，使得Ca2+浓度下降，但由于其能力有限，使得在舒张末期时，细胞质内的Ca2+浓度仍然维持在很高的水平，产生较强的舒张力。

缩宫素使得子宫自律性增高的机制。

子宫平滑肌的自律性的产生主要是钠-钙通道的开放，大量的Ca2+和少量Na+内流，引起去极化，形成动作电位。

缩宫素能加强Ca2+内流，故而能使子宫平滑肌的自律性增高。

人－大鼠之间用药量的具体换算关系：在临床上，缩宫素用于引产和流产的用药量是将2～5U的缩宫素溶解于500ml葡萄糖溶液中静脉滴注。

心得安治疗甲状腺功能亢进的用药量是10～40mg/每6小时一次，每日的剂量是160mg。

参考“人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表”（《医学机能学实验教程》P221页），可知人的用药量约是大鼠用药量的56倍。

根据这一关系我们可以进行一下计算。

对于缩宫素，我们取其最小量。

2U的药物进入人体后相当于溶解在5L的血液中，浓度为0.04U/100ml.则实验所用的0.05U/ml缩宫素溶液加入0.1ml至15ml 任—洛氏液中正好可使二者的血药浓度大致相当。

对于心得安，我们取其每次的最大量。

人用40mg，那么大鼠约用0.7mg。

为了减小剂量但保证效果，同时也出于方便的考虑，我们取0.5mg作为大鼠的用量。

如果同样加入0.1ml的药物至15ml任—洛氏液中，则心得安的药物浓度应配成5mg/ml。

为了使实验更加严谨，我们在这一浓度的两侧各按一定的倍数设定了另外四个浓度，分别是：0.2mg/ml、1mg/ml、25mg/ml、125mg/ml。

这样就可以观察治疗量以下和以上的药物浓度对子宫平滑肌收缩性的影响程度了，也可以用来比较。

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