去壁低渗法制备植物染色体标本及染色体组型分析
染色体标本的制备及组型观察实验报告
染色体标本的制备及组型观察实验报告细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。
染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。
（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。
（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。
②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。
我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。
在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。
③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。
PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。
与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。
可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。
玉米核型分析
4、实验原理植物细胞染色体的观察和分析, 对于染色体核型分析以及培养过程中细胞变异等遗传学现象的研究具有重要意义。
风油精法和去壁低渗法是常用的2 种方法,。
植物细胞去壁低渗火焰干燥法制片，不需要特殊的仪器设备，容易获得形态完整，比较分散的中前期染色体对染色体小而且多的植物进行染色体记数和组型分析更显示出其优越性。
本试验中所使用的风油精法制片，不但方法简便，而且也能和去壁低渗火焰干燥法制片取得同样的效果。
经风油精法制备的染色体标本，细胞的染色体形态清晰，分散性好，染色体周围无细胞质残留，特别是细胞的染色体数目完整，不会因制片的机械力造成染色体丢失，同一细胞的染色体分布在一个小范围里。
5、染色体制片本实验采用两种染色体制片方法，即去壁低渗火焰干燥法制片和风油精法制片。
5.1去壁低渗火焰干燥法[1,2]( 1) 催芽: 种子在75% 酒精中浸泡消毒然后清水冲洗, 浸泡10 h 以上使其吸水膨胀(中间换水1~ 2次)。
在培养皿中垫2~ 3层滤纸, 加水湿润, 然后将种子均匀地摆放在滤纸上, 种子间距约015 cm, 盖上盖, 25~ 28 ℃条件下培养。
( 2) 取材预处理:待根尖长到1 ~ 2 cm切取根尖015 cm, 投入青霉素瓶中(一个青霉素瓶投入100个左右) , 加入一定量(淹过根尖即可) 的0.1002M 8 - 羟基喹啉和与秋水仙素( 1: 1) 的混合液预处理在18℃，玉米根尖处理2 h。
( 3) 固定:将预处理过根尖用蒸馏水冲洗两次, 移入体积10倍于材料的卡诺氏固定液(乙醇: 冰醋酸= 3:1) 中, 固定24 h然后用95% 酒精冲洗, 再转入70% 酒精中, 于4℃冰箱内保存, 不超过2个月.( 4 ) 前低渗: 将固定后的根尖转入0.1075 mo l / L KC l中, 4 ℃前低渗4 h, 使细胞充分吸水, 细胞器崩解, 细胞质分散或部分溶解, 细胞壁易于解离消化, 染色体分散。
植物染色体技术-去壁低渗法
五、酶解去壁：倒去固定液，蒸馏 水漂洗2-3遍，加入2.5%纤维素酶 与果胶酶的混合酶液1ml.
目的：分离细胞和软化去壁。
六、低渗处理：倾去酶液，加入 0.075M KCl溶液，在20~25℃条件 下低渗处理30min。 目的：使细胞吸收水分而膨胀， 染色体分散到细胞质中，在制片 时便于染色体分散开。
七、去沉淀：静止片刻，去掉大 块沉淀物，倒取上层悬液。
目的：自然沉降。
八、离心：上层清液以200g离心1020min。
九、标本制备：将分离所得的 悬液滴至载玻片上，在酒精灯 火焰上微微加热烤干，用卡宝 品红染色5~10min，在光镜下观 察小麦根尖细胞中期染色体的 形态结构。
这个方法与传统的压片法相比具有若 干优： 用这个方法获得的染色体形态比较完整, 接近正常状态。染色体各组成 部分— 长臂、短臂、着丝点、随体、染色单 体显示的都比较清楚,有利于染色体的测 量 和分析这个方法不但可使 中期染色 体散开,而且也 可使前中期,甚至前期的 染色体散开。
一、材料培养：取约30粒种
子,加水浸润后置于培养皿中 于25℃恒温培养发芽。
二、取材：待根长到1.0-2.0cm时， 在上午9：00剪取种子跟约0.51.0cm。
三、预处理：0.1%的秋水仙素处 理3-4小时，或冰水混合物浸泡24 小时。 目的：是染色体分裂滞留在中期。
四、固定：将经过预处理的根尖清 洗后用镊子将细胞夹碎，定液4-5ml 目的：使小麦根尖细胞固定在原来 的分裂状态，病史构成染色体的核 蛋白变性成沉淀，保持染色体的固 有形态。
植物染色体制片技术—— 去壁低渗法
近年来,有人试图将人类染色体标本 制备方法引用到植物材料上来，取得 一些进展。我们参照人类染色体标本 制备技术,开展了对植物细胞去壁、 低渗、火焰干燥方法的研究。
去壁低渗法制备植物染色体标本实验
去壁低渗法制备植物染色体标本实验方法步骤：1、材料培养：将高粱的种子充分浸种后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温箱发芽培养2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有0.2%秋水仙素和0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液等量混合液的小瓶中预处理2-3小时3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，在25℃条件下处理30分钟。
以下可分两种方法进行处理4、（1）吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定不少于1h。
（2）水洗：将固定好的材料用蒸馏水洗三次，除去材料中的固定液，在1mol/L 的HCl于60℃处理15分钟。
（3）酶解去壁：在小瓶内加入混合酶液（酶液量以浸过材料为合适），在25℃下酶解30-60分钟（4）后低渗：吸去酶液，慢慢加入(25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸水中浸泡10分钟。
5、悬液法：（1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液（2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液时间在10分钟到数小时不等。
（3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。
（4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本(5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。
（6）染色：经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意
义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法是通过去除细胞壁，使得细胞内的染色体能够在液态介质（通常是醋酸或者醋酸-乙醇混合液）中自由展开，并与染色剂染色，从而得到适合观察和分析的染色体标本。
这种制备方法在植物细胞遗传学中得到广泛应用。
首先，通过去除细胞壁，可使得染色体得以展开成线性或环形的形式，方便进行观察和分析。
其次，在去壁液中低渗透压下染色质水肿膨胀，使染色体的结构更加明晰，染色效果更佳。
同时，去壁液中还含有某些成分，如乙酸和染色剂，可促进染色体的凝聚和染色，从而也有助于染色体的分析和研究。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法在植物细胞遗传学中有着重要的应用价值，可用于染色体数目和形态的分析、基因定位和标记、染色体变异的检测和研究等。
特别是在遗传改良中，该方法也被广泛应用于植物杂交和基因转移等研究领域。
实验七 植物染色体标本的制备与观察
解离：取出根尖放入1mol/L HCl（58-60 ℃解离 对比）解离14-15min，软化去除细胞壁及果胶物 质，使细胞易于分散。 染色：倒去热HCl后，用改良苯酚品红染色液染 色5～10min。 漂洗：吸去染色液，用漂洗液换洗2-3次，每次12分钟。
酶解：在载玻片上切取根尖着色深的部分，浸入 小酒杯内1-2第混合酶液中，室温下酶解40min左 右或在28 ℃温箱中酶解20min左右。
取材：将小麦放在25℃温箱中发芽，待根长到 1~2cm左右，窃取0.5cm长的根尖部分。
前处理：剪下根尖用0.1％秋水仙素溶液处理3～ 4h。也可将剪下的根尖放在0～3℃蒸馏水中，置 冰箱中24小时，使分裂的细胞尽可能集中于分裂 中期。
固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定2～ 24小时。换入70%的酒精，使细胞的分裂活动处 于停滞状态。 制片：有多种方法——切片、压片、滴片等。
洗涤：吸去酶液，加蒸馏水，用吸管换洗几次， 吸去残留的煤业后加入45%的醋酸。 压片：用吸管从醋酸中吸去材料，置于干净的载 玻片上，保留少许醋酸，盖上盖玻片，覆以吸水 纸，轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 镜检
四：实验观察结果
1．分裂细胞观察 低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形 态。估计染色体数目。
染色体组在细胞分裂中期的表型称为染色体组型 或称核型，包括染色体数目、形态、大小、着丝 点位置及副缢痕及随体的有无等特征。 染色体组型分析就是通过对染色体标本或其照片 进行测量、对比分析、配对、分组、排列，对组 内各染色体的形态进行测量、描述，从而阐明生 物染色体组成的过程。
三、实验材料
器具：恒温培养箱，显微镜
试剂：0.1％秋水仙素溶液，Carnoy固定液， 1mol/L HCL, 亚硫酸水溶液（漂洗液），纤维素酶 ，果胶酶，改良苯酚品红染色液（Carbor fuchsin ，）
大麦和玉米染色体去壁低渗法制片及其核型分析
１３ １ 去壁低 渗火焰 干燥 法制备 染色体 标本 。 ．． 根 尖染 色体 制片步 骤是 ：
催芽一根尖取样 预处理 一固定 一前底渗一解
离一后 低渗 一再 固定 一涂 片一染 色一制 片 。 具体 染色体 制 片方法 是 ：
究具有重要 意义。以往作为简便 的染 色体 制片技
维普资讯
８
大麦与谷类科学
Ｂ Ｒ Ｅ Ｎ Ｅ Ｅ ＬＳ Ｉ Ｎ Ｅ Ａ Ｌ Ｙ Ａ Ｄ Ｃ Ｒ Ａ ＣＥ Ｃ Ｓ
大麦和玉米染色体去壁低渗法制片及其核型分析
虢 国成 向 洋
（ 长沙理工大学生物与食 品工程学院 ，湖南 长沙 ４ ０７ ） １０ ６
摘要 运用去壁低渗火焰干燥法制备大麦和玉米染 色体 片 ，然后对玉 米 、大麦的染色体 核型进行研究 。结果表 明 ：该 法使 细胞质残 留较少和染色体更分散 ，为细胞 学研究提供清 晰度高 的染色体制 片 ；通过核型分析得 到 ，大 麦根尖细胞染 色体数 目为 ２ ｎ＝１ ４，核型公式为 ２ ２ ｎ＝ ｘ＝１ ２ （ Ｓ Ｔ ＋ ｓ （ Ｓ Ｔ ，玉米 根尖细胞染色体 数 目为 ２ ４＝１ｍ ２ Ａ ） ２ｍ ２ Ａ ） ｎ＝２ ，其核 型公 式为 ０
湿 润 ，然 后将 种子 均匀地 摆放 在滤纸 上 ，种 子 间距
约 ０５ ｅ ． ｍ，盖上 盖 ，２ ２ ℃ 条件下 培养 。 ５— ８
（ ） 取 材预处 理 ：处 在 细胞 分 裂 中期 的染 色 ２
体最易观察 ，但细胞分裂中期持续时间很短，一般
只有 １ ３ ｎ ０～ ０ ｍｉ，因此 固定 材 料 的 中期 分裂 相 较 少 ，而且染 色体 紧密排 列在 赤道 面上 ，很 难将 染色
２ ２ ｎ＝ ０＝１ ｍ ＋ ｓ （ ｅｔ） ２ ８ｍ ２ａ 。 ｓ
植物染色体标本制备
用Hcl是使得用作制片的组织材料，细胞疏散而解离，有利于压片。
实验9、植物染色体标本制备及核型分析目前，国内外常用的植物染色体制片技术可以分为两种，即压片技术和去壁低渗技术。
Belling(1921)提出植物染色体压片技术后，压片已成为植物染色体研究中最广泛应用的常规技术；但是由于植物细胞有坚实的细胞壁，染色体很难象动物染色体那样平整地贴在载玻片上，Omura 和Kurata(1978)把植物原生质体技术应用到水稻染色体研究之中，用纤维素酶、果胶酶和0.075mol.L-1氯化钾处理取得了一定的进展，陈瑞阳等人（1979、1982）提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗技术，并在多种植物上得到广泛应用，成为当今植物染色体研究中的重要方法。
压片技术和去壁低渗技术在取材和预处理要求及其操作都是相同的，即两者的材料基础条件是相同的，但它们所采用的染色体分散方法是不同的。
压片法是以人工外加机械压力使染色体分散，而去壁低渗法是用酶分解细胞壁，低渗液使细胞膜吸胀、水表面张力使染色体分开。
两种技术各有其优缺点，前者操作快速简便、省材省时，后者染色体易于展开、且真实不变形，尤其是对成熟细胞多的植物组织，如芽、愈伤组织等材料有独到效果，本实验主要介绍去壁低渗染色体制片技术。
一、实验目的1、掌握植物根尖、茎尖及叶片去壁低渗染色体制片技术，通过3周开放性实验教学，进行植物染色体制片技能训练；2、掌握植物染色体显微照象技术及组型分析技术，通过大量的制片观察，能获得图象清晰、完整、高度分散的染色体典型制片；通过显微摄影，获得某植物染色体自然核型图，并能用国内外通用的植物核型分析标准，确定该植物染色体模型图、核式公式及类型；3、掌握植物有丝分裂制片技术，通过大量的制片观察，能比较快速准确地判断细胞有丝分裂前、中、后、末期的染色体图象，并对其典型制片照像，收集核型分析及有丝分裂过程观察的染色体制片素材；4、结合实验，对某一新资源植物进行染色体组型分析，获得该物种染色体组型公式、类型、核型图及核型模式图。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义植物染色体是进行细胞有丝分裂和有性生殖的关键结构，因此其研究对于揭示植物遗传学的基本原理至关重要。
而植物染色体的标本制备是进行细胞遗传学研究的重要前提。
本文将介绍植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义。
1. 去壁法去壁是制备植物染色体标本的一种重要方法。
在该方法中，通过化学物质的去壁作用，将细胞质与胞壁分离，使得染色体自身单独显示在显微镜下。
实际操作中，可以选择使用酸性酶、酶解剂、酸、碱等化学物质进行去壁处理。
其中，常用的去壁剂包括5%酸性酶、10%酶解剂、0.2M HCl、0.5M NaOH等。
去壁法的优点是使用简便快速，并且对大多数植物都适用。
但对于一些富含淀粉或黏性胶质的细胞来说，由于某些因素，如低温、压力等的作用，有可能导致壁面突出，造成染色体复杂度上升，影响染色体的观察和解析。
2. 低渗法低渗法是制备植物染色体标本的另一种重要方法。
在该方法中，通常采用甘油、尿素、EDTA等化学剂对细胞进行胞浆溶解，使得染色体在细胞浸润后，以单独的形式出现。
此外，低渗法的操作步骤相对简单，且对于密封度较高的细胞比较适用。
低渗法的优点是可以在不破坏细胞形态结构的前提下，使得染色体以单独的形式显示出来，使得对于染色体结构、染色体数量、染色体结构异变等方面的分析更具可靠性。
缺点则是较容易出现染色体陷入一些黏性物质中，难以单独显示，从而影响观察。
3. 在细胞遗传学中的意义制备植物染色体标本是进行细胞遗传学研究的关键步骤。
通过观察染色体特征，可以判断染色体数量、形态、结构等信息，从而更深入地研究植物生物学的机制，深入探究其遗传变异的规律。
同时，标本制备方法的选择和处理也会影响到对遗传信息的解析。
因此，在进行植物细胞遗传学研究时，需要根据具体情况进行合理的标本制备方法选择和处理，以确保研究结果的准确性和可靠性。
此外，植物染色体标本制备的去壁、低渗法也可以应用到其他生物的细胞遗传学研究中，为后续的研究提供基础和参考。
遗传学实验操作规程：染色体标本制备与观察实验操作规程染色体制片
遗传学实验操作规程：染色体标本制备与观察实验操作规程染色体制片技术显示染色体一般的形态和结构,成功的关键是获得大量染色体缩短适宜的分裂细胞。
1. 压片法1.1 取材在适当的时间选取细胞分裂旺盛的组织。
1.2 预处理秋水仙素进行活体或离体处理。
1.3 固定卡诺固定液固定，迅速杀死生活细胞使染色体的组成蛋白变性，保持染色体形态和结构。
1.4 解离1mol/L HCl60℃进行酸解，不同的材料的酸解时间不同。
1.5 染色改良石炭酸品红染色。
1.6 压片染色后盖上盖片，用大拇指按压有材料的部位，粗滤纸吸干多余染液，再用铅笔头轻敲，使重叠细胞分散，得到理想的分裂相。
1.7 观察低倍镜找到分散良好的分裂相后换高倍镜或油镜。
1.8 绘图会制分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。
2. 去壁低渗法2.1 前低渗经预处理的材料转入0.075mol/L或蒸馏水中室温下30min。
2.2 酶解去壁纤维素酶和果胶酶混合液处理2～4h。
2.3 后低渗洗去酶液，蒸馏水处理10～30min。
2.4 固定制备细胞悬液倒去蒸馏水将材料充分夹碎，加入固定液。
2.5 制片用吸管吸取细胞悬液，高度30～40cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干。
2.6 染色10% Giemsa染液染色。
2.7 观察低倍找到分散良好的分裂向后换高倍镜观察。
2.8 绘制分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。
3. 注意事项显微镜使用完毕后须对油镜头进行清洁，并将电源关闭，罩上防尘罩。
染色体组型分析实验操作规程染色体组型分析是对染色体组中处于有丝分裂中期时染色体的数目、大小、形态、着丝点的位置以及次缢痕、随体的有无等形态特征作一描述.将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像就称为该细胞的组型。
1. 染色体制片→显微照相→放大。
2. 测量测量染色体的长短臂长度，并记录。
3. 计算臂比值、相对长度，根据臂比值确定染色体类型。
植物染色体标本的制备和观察
植物染色体标本的制备和观察摘要：目的1、掌握常规压片法制备植物染色体标本的基本原理和方法；2、学会观察和统计植物细胞的染色体数目；3、了解和学习去壁低渗法进行植物染色体制片的基本原理和方法。
方法大蒜的根尖是分裂比较旺盛的，我们可以利用秋水仙素处理根尖使得大蒜根尖的细胞分裂处于分裂中期，然后经固定染色等处理将染色体染色固定，以便观察。
结果大蒜的染色体有16条，都被染色成红色的条状或细丝状物质。
结论大蒜染色体有16条。
关键词：植物染色体；大蒜；秋水仙素前言染色体是遗传物质的载体，本实验便是观察染色体的形态和数目。
植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法。
其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，即可观察到较多的、处于有丝分裂中期的细胞和染色体。
由于现在洋葱发根较难，我们采用的是大蒜根尖进行相关实验。
材料与方法1.实验材料大蒜根尖、白姜花的根尖、野百合的根尖等。
2.实验试剂：0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸，浓盐酸：95%乙醇（1:1）解离液。
3. 实验用具显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、吸水纸、滴管、载玻片、盖玻片。
4.实验植物和试剂大蒜根尖、 0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸；70%酒精；95％乙醇；85％乙醇；蒸馏水5.实验方法和步骤5.1 取材先将大蒜浸泡若干小时，然后转入一个垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1~2cm时，于上午9~11时剪下根尖。
5.2 预处理将剪下的根尖放进装有0.02%秋水仙素溶液的烧杯中，浸泡处理3～4小时。
5.3 固定将经过预处理或没有预处理的材料，放到卡诺氏固定液中固定（固定液的量约为材料的10倍，要求一个容器中所装的材料不能太多，温度不能太高）。
固定2～24h后分别在95％和85％乙醇中各30min ，再转入70%酒精中，于4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月。
植物染色体制片技术的比较研究
植物染色体制片技术的比较研究摘要本文以韭兰为材料，对植物染色体常规压片、去壁低渗法制片技术染色效果进行了比较。
实验表明：去壁低渗法获得细胞和染色体都较分散，Giemsa 染色使得背景与材料的对比度较大，便与观察。
不足之处在于去壁低渗过程中，时间特别不易掌握，耗材多，且成功率较低，染色体容易丢失、形态也不太理想。
常规压片耗材少，成功率较高，但不易做分带制片。
关键词植物染色体；常规压片；去壁低渗一、材料与方法1.供试材料试验用植株由校园内采集2.根尖制片（1）常规压片。
首先在早上9：00—10：00采集韭兰的根，在室温下放入0.1%秋水仙素溶液中进行预处理处理8h。
然后在常温下把材料放在卡诺氏固定液下固定10min，接下来就在1 mol/L盐酸溶液中解离到松软刚合适为止。
最后用蒸馏水将韭兰根冲洗干净，这样前处理就结束。
处理完后就可以用醋酸洋红染色或改良苯酚品红染色。
压片/涂片后选取典型的染色体，在40倍物镜及油镜下显微照相。
（2）去壁低渗法。
首先把材料放0.1%秋水仙素溶液中进行预处理处理8h。
然后前低渗，即将根尖放在0.075tool/LKCI低渗液中，在20-25℃条件下处理0.5h。
接下来就是最关键的去壁，倒去KCI溶液，加入2.5%混合酶液，在25-30℃温度下处理2-5h左右。
去壁后要进行后低渗，使细胞完全膨胀，即是用20-30℃蒸馏水慢慢冲洗2-3次后，再将根尖放在0.075tool/LKCI低渗液中处理。
将后低渗后的材料先经固定液固定后，就可以把去壁固定的根尖放在清洁的载片上，将材料夹碎，加1滴固定液。
放于酒精灯上微微加热烤干。
最后用Giemsa染色，后选取典型的染色体，在40倍物镜及油镜下显微照相。
二、结果与分析1.常规压片法常规压片法操作简单，醋酸洋红对于染色体染色均匀，由于它对RNA也有染色效果，以此种方法染色的染色体十分饱满，倘若制片操作合适，加上脱色、沉淀等步骤，能够制出背景清晰、效果良好的装片，可供染色体核型分析。
去壁低渗制备水仙花根尖染色体标本实验条件的优化
为 了让学生加深认识染色体行为变化特征，观察植物细胞有丝分裂及各个时相的染色体变化特征，制 备染色体分散均匀、整洁的标本非常重要，同时优 良的染色体制备技术为倍性研究和核型分析等提供 了有 力的技术支持，去壁低渗制备染色体标本是 目前研究细胞分裂和染色体动态变化的首选方法，采用该方法 制备的标本染色体分散性好，背景清爽，并且大部分 可用于核型分析． 【因此，去壁低渗法在染色体的研究 ｌ 工作中愈发重要． 传统的去壁地渗法采用酶解法去壁， 酶解时间长， 一般需要 ９ — ０ ｉ，而且纤维素酶和 ０１ ｍ ｎ ２
２１ ０ ２年第 ３期 （ 总第 ７ ） ７期
漳州师范学院学报 （ 自然科学版） Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ Ｎ ｒ ｌ ｖ ｒｉ ｏＺ Ｕｎ ｙ（ ｔＳ ｉ ）
Ｎ ． ． ０ ２年 ｏ３２１
Ｇｅ ｅ ａ ｎ ｒ ｌＮｏ ７ ．７
ａ ｄ ｏ ｎ ｌ ｗ ｐ ｒ ａ ｉ ｔ ｔｍｅ ｎ ｔ ｅｒ ｏ －ｉ ｃ ｒ ｍｏ ｏ ｐ ｃ ｍｅ ｓ ｐ ｅ ａ ａ ｉ ｎ ｉ ｉ ｅ ｅＮａ ｓｓ ｕ ｗｅ ｅ ｍｅ ｂ ｌ ｙ ｉ ｏ ｈ ｏ ｔｔ ｉ ｐ ｈｏ ｓ ｍｅｓ ｅ ｉ ｎ ｒ ｐ ｒ ｔｏ ｎ Ｃｈ ｎ ｓ ｒ ｉｓ ｓ ｅ ｒ
果胶酶的价格较高，且易失活，制片条件不好掌握，所以开发实验费用低、观察效果好 、 学生易掌握的水
文章编号 ：０８７ ２ （０２０ —０ ５０ １０ ・８ ６２ １ ）３０ ８ －５
去壁低渗制备水仙花根尖染色体标本实验条件 的优化
曹 芳 ，王 伟
（ 漳州师范学院 生物科学与技术系，福建 漳州 ３３０ ） ６００ 摘 要： 用去壁低渗法制备水仙花根尖染色体标本， 采用 ２ ４型析因实验设计， ｘ 探讨酸解时闻和后低渗时间 对水仙花根尖染 色体标本制备 的影响． 结果表 明酸解时间为 １ｍ ｎ ４ ｉ、后低渗时 间为 ８ ｉ ｍ ｎ时，中期分裂指数最 高
去壁低渗法制备植物染色体标本及染色体组型分析
去壁低渗法制备植物染色体标本及染色体组型分析植物染色体的常规压片技术在植物细胞遗传学研究中发挥了重要作用，特别是许多植物的染色体计数和组型分析都是用这种方法完成的，但这种方法也存在一定缺陷，如染色体很难完全散开，容易产生重叠、变形、断裂，影响显带结果等，给核型分析增加了不少困难。
另外，在当前植物染色体Giemsa分带研究中，由于压片法很难完全除掉细胞质及细胞壁对染色体的覆盖，因而常常造成Giemsa带可重复性较低，使植物染色体Giemsa分带研究受到一定的影响。
其次，由于植物染色体处理方法尚不理想，影响到亚显微结构的研究。
因此改革植物染色体压片法是促进植物染色体的研究，特别是植物染色体Giemsa分带和亚显微结构研究的重要关键。
20世纪70年代以来，一些从事植物染色体研究的学者，参照动物及人类染色体标本制备技术，开展了对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法的研究，取得了很好的结果，目前这种方法已广泛用于染色体计数、组型分析、显带、显微操作、原位杂交等分子细胞遗传学研究领域。
染色组通常是指生物体细胞染色体所有可测定的表型特征的总称，包括染色体的总数，染色体组的数目，组内染色体基数、每条染色体大小、形态等。
它是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。
染色组型分析是对染色体进行分组，对核型的各种特征进行定量和定性的描述，如对染色体长度、着丝点位置、臂比和随体有无等。
为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。
【实验用品】1．材料：蚕豆（Viciafaba）2．器材和仪器：恒温培养箱，显微摄影设备，载玻片，酒精灯，冰箱，恒温水浴锅、135胶卷，剪刀，镊子，解剖针，刀片及毫米尺。
3．试剂：对二氯苯饱和溶液，甲醇，冰醋酸，70%酒精，纤维素酶，果胶酶，Giemsa原液，1/15mol/L(pH6.8—7.2)磷酸缓冲液，0.075mol/LKCl。
【方法步骤】1．制片(1)．取材：先将种子浸泡若干小时，然后转人一垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1—2cm取材。
去壁低渗法在黄瓜染色体核型分析中的应用
１３ 前 低 渗 低 渗 液 的作 用 是 利 用 细 胞 内 处 溶 液 的 ． 渗 透 压 力 加 大 ， 使 细 胞 膜 充 分 膨 胀 ， 而 利 于 染 色 促 从 体 的 自由铺 展 （ 高翼 之 ，０ ２ 。用 滴 管 吸 去 预 处 理 液 ， ２０ ）
加 入 蒸 馏 水 清 洗 ３ ５次 ， 后 转 入 ００ ５ ｍ ｌ ～ 然 ．７ ｏ／ Ｌ的 Ｋ １ Ｃ
壁 低 渗 法 获 得 的 染 色 体 形 态 比较 完 整 ， 利 于 染 色 体 有 的 测 量 和 分 析 。 ３ 方 法 比较 简 便 ， 需 特 殊 设 备 。 第 ， 不 去 壁 低 渗 法 可 直 接 通 过 涂 片 法 来 制 片 ， 而省 去 了压 片 、 因 揭 盖 片 等 步 骤 ， 且 用 Ｇｅ ｓ 并 ｉｍ ａ染 色后 ， 用 树 胶 封 片 ， 不 就 可 以 在 显 微 镜 下 直 接 观 察 ． 且 ． 经 树 胶 封 片 的 而 不 标 本 ， ｉｍ ａ染 色 后 可 长期 保 存 而 不 褪 色 。 Ｇｅ ｓ ２ １ 取 材 是 关 键 核 型 分 析 用 的染 色 体 制 片 要 求 比 ．
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去壁低渗法制备植物染色体标本及染色体组型分析
植物染色体的常规压片技术在植物细胞遗传学研究中发挥了重要作用，特别是许多植物的染色体计数和组型分析都是用这种方法完成的，但这种方法也存在一定缺陷，如染色体很难完全散开，容易产生重叠、变形、断裂，影响显带结果等，给核型分析增加了不少困难。
另外，在当前植物染色体Giemsa分带研究中，由于压片法很难完全除掉细胞质及细胞壁对染色体的覆盖，因而常常造成Giemsa带可重复性较低，使植物染色体Giemsa分带研究受到一定的影响。
其次，由于植物染色体处理方法尚不理想，影响到亚显微结构的研究。
因此改革植物染色体压片法是促进植物染色体的研究，特别是植物染色体Giemsa分带和亚显微结构研究的重要关键。
20世纪70年代以来，一些从事植物染色体研究的学者，参照动物及人类染色体标本制备技术，开展了对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法的研究，取得了很好的结果，目前这种方法已广泛用于染色体计数、组型分析、显带、显微操作、原位杂交等分子细胞遗传学研究领域。
染色组通常是指生物体细胞染色体所有可测定的表型特征的总称，包括染色体的总数，染色体组的数目，组内染色体基数、每条染色体大小、形态等。
它是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。
染色组型分析是对染色体进行分组，对核型的各种特征进行定量和定性的描述，如对染色体长度、着丝点位置、臂比和随体有无等。
为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。
【实验用品】
1．材料：蚕豆（Viciafaba）
2．器材和仪器：恒温培养箱，显微摄影设备，载玻片，酒精灯，冰箱，恒温水浴锅、135胶卷，剪刀，镊子，解剖针，刀片及毫米尺。
3．试剂：对二氯苯饱和溶液，甲醇，冰醋酸，70%酒精，纤维素酶，果胶酶，Giemsa原液，1/15mol/L(pH6.8—7.2)磷酸缓冲液，0.075mol/LKCl。
【方法步骤】
1．制片
(1)．取材：先将种子浸泡若干小时，然后转人一垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1—2cm取材。
(2)．预处理：将取下的根尖置于盛有对二氯苯饱和水溶液或1mL0.2%秋水仙素的小瓶中预处理2—3小时。
(3)．前低渗：将根尖，放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，在25℃条件下处理30分钟。
(4)．酶解去壁：倒去KCI溶液，用蒸馏水充分洗净。
加人混合酶液（纤维素酶与果胶酶各占2.5%），25—30℃下酶解2h左右，在酶解过程中最好轻轻摇动瓶子，促使酶解反应更加充分。
(5)．后低渗：倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2—3次，然后在蒸馏水中停留10—30min进行后低渗处理。
(6)．固定：甲醇：冰酸酸(3：1)固定液固定30min。
(7)．涂片：取2—3个根尖置于擦干的洁净载玻片上，切下顶端1—2mm，滴上1—2滴甲醇—冰醋酸(3：1)固定液，用镊子迅速捣碎根尖组织，均匀涂布于载玻片上，在酒精灯火焰上掠过3—4次。
(8)．染色：Giemsa原液与1/15M磷酸缓冲液以20：1混合，分装入染色
缸，将干燥的制片置于染液中，也可将染液直接滴在载玻片上，染色时间约30min，然后自来水冲洗载玻片，空气干燥后即可进行镜检。
2．结果观察
先在低倍物镜下进行观察，找到较好的中期分裂相后，直接加显微镜油并转换为油镜头进行观察（若使用香柏油，则需加盖玻片，因为在香柏油中染色体会褪色）。
选择较好的分裂相用显微镜上配备数码照相装置摄影。
3．摄影
选择较好的分裂相用显微镜上配备数码照相装置摄影（记下放大倍数）。
冲洗照片。
4．测量
对照片测量各条染色体的长臂（P）短臂（Q）的臂长（分别量到着丝点中部），特殊染色体的附加部分等的长度（毫米）。
5．计算有关指标的数值（指标指数）
5．1 染色体数目
在同一物种中染色体的数目一般是稳定的。
应该注意的是，染色体记数不应仅仅根据一个或少数结果细胞，一般要统计30个以上效果制片较好的细胞，然后取其众数确定。
5．2 染色体形态
分析染色体形态时，一般利用体细胞分裂中期的染色体，因为此时染色体已充分缩短而稳定。
而早中期或晚期的染色体正处于收缩过程中，各部分收缩程度不大一致误差较大。
分析染色体形态常用如下指标：
①染色体绝对长度（或实际长度）
均以微米（μm）表示。
一般在放大照片或描图上测量，按下列公式换算：放大的染色体长度（mm）÷放大倍数×100
绝对长度不是一个可靠的，可比较的数值，因为预处理条件不同，染色体缩短程度不同。
细胞分类学中，多用相对长度。
②相对长度（relativelength，RL）
均以百分比表示。
相对长度=染色体长度÷染色体组分总长度×100
③染色体长度比
指核型中最长染色体与最短染色体的比值。
即：
Lt/st=最长染色体÷最短染色体
可以简写成为Lt/st。
这一数值至今应用尚不普遍，但却很有价值。
④臂比（r）
指同一染色体长臂（q）与短臂（p）的比值。
r=长臂长度（q）÷短臂长度（p）
臂比是划分染色体类型的重要指标。
臂比为1.0～1.7的归为中间着丝粒染色体，用m表示；1.7～3.0的归为亚中间着丝粒染色体，用sm表示；3.0～7.0的归为亚端部着丝粒，用st表示；7.0～更大的归为端部着丝粒染色体，用T表示。
用SAT代表具体随体的染色体，计算染色体长度时，可以包括随体也可以不包括，但要注明。
⑤着丝点指数（centromereindex,CI）
指短臂占该条染色体全长的百分比，它决定着丝粒的相对位置。
CI=短臂长÷该条染色体全长×100
⑥臂指数或NF值（numberfundamental）
表示一个细胞染色体组型中所有染色体臂数的总和。
通常将着丝粒位于染色体端部或亚端部的一条染色体臂数记为1，把着丝粒位于染色体中部或亚中部的一条染色体臂数记为2。
⑦染色体编号
通常按染色体长度编号，如果两对染色体长度相等，则按短臂长度排列，长者在前，短者在后。
性染色体排在最后。
⑧染色体组式
指人为将染色体按相对长度，依大型（large,L）、中型（middle,M）、小型（small,S）及性染色体顺序记数并列成简式，以明了染色体的构成成分。
如3L+3M+2S，表示该物种具3对大型，3对中型，2对小型常染色体。
通常大型染色体是指相对长度在10.00以上的染色体，中型染色体指相对相对范围在5～10的染色体，而5.00以下的为小型染色体。
6．将照片剪分成各单个的染色体
按表型特征将全部染色体配同源对（或同源组），配对的根据是随体的有无及大小，臂比是否相等，染色体长度是否相等。
7．将染色体全部的同源对排列
①全部着丝点对齐在同一水平线上，②短臂朝上长臂在下，③按大小降序从左到右依次排队（等长的染色体，短臂长者排在前头），④具随体染色体、性染色体排放在最后（蚕豆染色体组型例外）；若有二对以上具随体染色体，则大随体染色体在前，小随体染色体在后。
8．编上序号
将排好的染色体对（组）按先后顺序粘贴在绘图纸上，编上序号
【实验结果】
统计30个以上制片效果较好的分裂相图片，然后取其众数确定该物种的染色体组型。
由图片可以看出豌豆根尖细胞染色体数目为2n=14，玉米根尖细胞染色体数目为2n=20，水稻根尖细胞染色体数目为2n=24。
豌豆根尖2n=14 玉米根尖2n=20水稻根尖2n=24
【注意事项】
1．火焰干燥是温度不要太高，不能将玻片固定在火焰上烤，此步骤也可用自然干燥代替。
2．对二氯苯饱和溶液处理时间应为3-4h,时间太长会损坏染色体外形，不利于观察，时间太短起不到效果。
【实验报告】
对大麦或蚕豆等物种的染色体进行组型分析。