实验四离体蛙心灌流

【方法与步骤】 1、离体蛙心的制备（斯氏蛙心插管法） 取一只蛙或蟾蜍，双毁髓后背位置于蛙板上，暴露心脏。仔细识别心脏周围的大 血管。在主动脉干下方穿双线，一条在左主动脉上wenku.baidu.com结扎作插管时牵引用；另一 根在动脉球上方打一活结备用（用以结扎和固定插管）。左手提起左主动脉上方 的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择 大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2－3cm高度)任氏液(内加一滴肝素 溶液)的斯氏蛙心套管，由开口处插入动脉圆锥，当套管尖端到达动脉圆锥基部时， 应将插管稍向后退(因主动脉内有螺旋瓣会阻碍插管前进)，并将插管尾端稍向右主 动脉方向及腹侧面倾斜，使插管尖端向动脉球的背部后下方及心尖方向推进，在 心室收缩时经主动脉瓣进入心室（图10）。注意插管不可插得过深，插管的斜面 应朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。此时可见血液冲入套管，并使液面 随心脏搏动而上下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)，用滴管吸去套管 中的血液，换新鲜任氏液；稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连 同插入的套管用双结扎紧(不得翻液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪 断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，着清静脉窦的位置，于静脉窦下方 剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)， 用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液 面高度一致(1.5－2cm)，即可进行实验。





【注意事项】 1、制备离体心脏标本时，勿伤及静脉窦。 2、蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖，避免因夹伤心脏而导致漏液。 3、每一观察项目都应先描记一段正常曲线，然后再加药并记录其效应。 加药时应在心跳曲线上予以标记，以便观察分析。 4、各种滴管应分开，不可混用。 5、在实验过程中，插管内灌流液面高度应保持恒定；仪器的各种参数一 经调好，应不再变动。 6、给药后若效果不明显，可再适量滴加，并密切注意药物剂量添加后的 实验结果。给药量必须适度，加药出现变化后，就应立即更换任氏液， 否则会造成不可挽回的后果，尤其是K＋稍有过量，即可导致难以恢复的 心脏停跳。 7、标本制备好后，若心脏功能状态不好（不搏动），可向插管内滴加 1～2滴2%CaCl2或1：10000肾上腺素，以促进（起动）心脏搏动。在实 验程序安排上也可考虑促进和抑制心脏搏动的药物交换使用。 8、谨防灌流液沿丝线流入张力传感器内而损坏其电子元件。



【思考题】 1、心脏灌流说明心肌的哪些生理特性？ 2、用实验说明内环境相对恒定的重要意义。 3、试分析任氏液中适量的钠离子、钙离子与 钾离子对心肌的作用。 4、为何强调实验中保持灌流液面的恒定?灌流 量对心脏活动会有什么影响？ 5、试想，活的机体在心交感神经兴奋或心迷 走神经兴奋时对心脏会有什么影响？


【动物、器材与试剂】（以下是每组所需的种类和数 量） 蛙或蟾蜍1只、纱布1块、毁髓针1支、眼科镊1把、手 术剪1把、眼科剪1把、蛙板1块、蛙钉4只、玻璃分针 1支、滴管7支、尖嘴滴管2支、细棉线2段30cm、解 剖盘1只、任氏液至少150mL、蛙心夹1只、张力换能 器（50g）1个、二道生理纪录仪1台、铁支架1个、 双凹夹1个、万能滑轮1个、小烧杯1个、斯氏蛙心套 管1个、套管夹1个、0.65% NaCl 5mL、2% CaCl2 1mL、1% KCl 1mL、1/10000肾上腺素2滴、1/10000 乙酰胆碱2滴、300U/ml肝素2滴。



(3)向套管内加1－2滴2% CaCl2溶液（较细的套管需 少加）溶液，作好加药记号，观察心搏曲线的频率及 振幅变化。当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管 中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清 洗2－3次，待心搏恢复正常。 (4)同法向套管内加入1－2滴1% KCl溶液，记录心搏 曲线的变化。当心搏曲线变化时，同法更换灌流液， 待心搏恢复正常公 (5)同法记录套管中加入1－2滴肾上腺素溶液(1/10000) 后心搏曲线的变化。 (7)同法记录套管中加入1－2滴乙酰胆碱溶液(1/10000) 后心搏曲线的变化。



2、插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹 住少许心尖部肌肉(不要夹过多，以免因夹破心室而 漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑枪与张力传 感器相连。注：勿便灌流液滴到传感器上。调节记录 仪上的收缩曲线的幅度适中。 3、实验观察（图11） (1)记录正常心搏曲线。 (2)改用0.65% NaCl溶液灌流，并作好加药标记，观 察心搏变化。待曲线出现明显变化时，立即吸去套管 中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清 洗2－3次，待心搏恢复正常，注意：换液时切勿碰套 管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一 致(以下同)。
实验四：离体蛙心灌流

【目的要求】 1、学习斯氏离体蛙心灌流法。 2、观察Na＋，K＋，Ca2＋及肾上腺素、乙 酰胆碱等对离体心脏活动的影响。


【基本原理】 心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na＋，K＋， Ca2＋等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接 影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神 经的双重支配，交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力 加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱， 使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经 支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定 时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。而改变任氏液的组成成 分，离体心脏的活动就会受到影响。因此可用人工灌流的方法， 研究心胜活动的规律及特点；还可观察灌流液成分的改变对离体 心脏活动的影响。