月季的花药培养
课件5：3.2 月季的花药培养
3.接种和培养
(1)在 无菌条件下,从灭菌后的花蕾中取花药接种到培 养基上,在25 ℃下培养,此时不需要光照。此时可进行 转移培养,即将愈伤组织及时转移到分化培养基上,以便 进一步分化出再生植株。
(2)一般经过20~30 d培养后,会发现花药开裂,长出愈伤组 织或者胚状体。
(3)在花药培养中,特别是通过愈伤组织形成的花粉植株, 常常会出现 染色体倍性 的变化,主要是营养细胞的 细胞核和生殖细胞的细胞核融合造成的,因此还需要对 培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选。
④ 单核居中 期和单核靠边期两个时期。
4.双核期的双核包括花粉管细胞核和⑤ 生殖细胞核,
进而形成两个细胞,一个是营养细胞,一个是 ⑥生殖细胞 。 5.花粉粒形成精子还要经过⑦ 一次有丝分裂 过程
。
二、产生花粉植株的两种途径
一种是花粉通过⑧ 胚状体 阶段发育为植株,一种是花 粉在诱导培养基上先形成⑨ 愈伤组织 ,再将其诱导 分化成植株。
【答案】(1)这两条途径取决于培养基中激素的种类及 其浓度配比。(2)影响花药培养的主要因素:材料的选择 和培养基的组成等。(3)①花期:初花期的花蕾营养状态 及生理状态会比较好,比后期的更容易产生花粉植株,能 提高花粉的诱导成功率。一般,月季的花药培养时间选 在五月初到五月中旬,即月季的初花期。②合适的花粉 发育时期:选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功 率的重要因素。一般来说,在单核期,细胞核由中央移向 细胞一侧的时期,花药培养成功率最高。 为了挑选到单 核期的花药,通常选择完全未开放的花蕾。
4.据报道,花粉是一种很好的保健品,可以美容抗衰老,能 够增强体质,增强精神,还可以快速地消除身体疲劳。它 既可以外用也可以内服,是强身健体、美容养颜的佳品
。花粉产自各种植物的花朵。下图表示花粉的形成过 程,据图回答下列问题。
2021-2022学年高二生物人教版选修1教案：3.2月季的花药培养 Word版含答案
专题3 植物的组织培育技术课题3.2 月季的花药培育一、【课题目标】（一）学问与技能1、识记被子植物花粉发育的过程2、通过学习花药培育的基本技术，培育设计试验、动手操作、分析解释试验现象的力气（二）过程与方法1、列表比较花药培育与组织培育2、选择适宜的培育材料和培育基（三）情感、态度与价值观1、培育动手实践、勇于探究的科学探究素养2、通过争辩花药离体培育技术在生产实践中的应用，挂念同学确立理论联系实际的观点二、【课题重点】选取适宜的培育材料和培育基三、【课题难点】选取适宜的培育材料和培育基四、【教学方法】启发式教学五、【教学工具】多媒体课件六、【教学过程】（一）引入新课利用植物的茎可以经过组织培育得到新植株，但这种方法同时也存在着确定的缺陷，繁殖出来的新植株往往无法获得一些新的性状。
本节我们将学习花药离体培育技术，这是一种信的育种技术。
（二）进行新课1．基础学问活动2：阅读“被子植物的花粉发育”，回答下列问题：1．被子植物的花粉是在中由经过分裂形成的。
2．结合教材内容填下列示意图：〖思考2〗由此可见，被子植物的花粉的发育要经受四分体时期，单核期和双核期等阶段。
〖思考3〗在正常状况下，一个小孢子母细胞可以产生 4 个精子；在一枚花药中可以产生很多个花粉。
〖思考4〗养分细胞在花粉萌发过程中的作用是什么？把握花粉的萌发并供应养分。
活动3：阅读“产生花粉植株的两条途径”，争辩并回答下列问题：1．产生花粉植株（即单倍体植株）的两种途径：一是花粉通过胚状体阶段发育为植株，二是通过愈伤组织阶段发育为植株。
这两种途径的区分主要取决于培育基中激素的种类及其浓度的配比。
2．填写培育花粉植株的途径图解：3．胚状体的结构及其发育过程与种子相像，所以把胚状体到从芽的过程称为分化，而把从愈伤组织到从芽的过程称为再分化。
活动4：阅读“影响花药培育的因素”，回答下列问题：1．影响花粉植株的主要因素：材料的选择和培育基的组成等。
【人教版】高一生物选修一：3.2《月季的花药培养》学案(含答案)
课题2 月季的花药培养1．说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产生花粉植株的两种途径。
2．说出影响花药培养的因素。
3．学习花药培养的基本技术。
4．尝试用月季或其他植物的花药进行培养。
一、被子植物的花粉发育1．被子植物的花粉是在______中由____________经过______分裂而形成的，花粉是单倍体的生殖细胞。
2．被子植物花粉的发育要经历______________时期、______期和______期等阶段。
二、产生花粉植株的两种途径 ⎭⎪⎬⎪⎫1.花药中的花粉 ――→脱分化――→分化丛芽2.花药中的花粉 ――→脱分化 ――→再分化丛芽――→诱导生根 ―→移栽 两种途径之间没有绝对的界限，主要取决于培养基中______的种类及其__________。
三、影响花药培养的因素1．诱导花粉植株成功率高低的主要影响因素是____________与______________。
2．材料的选择与不同植物、同种植物亲本的生理状况，以及花粉发育时期有关。
从花药来看，应当选择花期早期的花药；从花粉来看，应当选择______期的花粉；从花蕾来看，应当选择____________的花蕾。
此时期的营养状态及生理状态比较好，对离体刺激敏感。
思考：为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？3．亲本植株的生长条件、材料的____________以及__________等对诱导成功率都有一定影响。
四、实验操作1．材料的选取选择花药时，一般要通过______来确定花粉是否处于适宜的发育时期，此时需要对花粉________进行染色，最常用的方法有__________法和焙花青—铬矾法，它们分别可以将细胞核染成红色和蓝黑色。
2．材料的消毒通常先将花蕾用体积分数为____________浸泡大约30 s ，立即取出，在无菌水中清洗。
取出后用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分，再用质量分数为______________溶液消毒，最后用无菌水冲洗3～5次。
月季的花药培养(经典)
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月季花药培养的未来发展前景
提高育种效率
随着花药培养技术的不断优化和成熟， 未来月季育种将更加高效，能够快速 获得具有优良性状的新品种。
满足市场需求
促进相关领域发展
月季花药培养技术的发展和应用，不 仅能够推动花卉产业的发展，还能够 促进植物生物技术、药用资源开发等 相关领域的发展。
随着人们对花卉需求的不断增加，通 过花药培养技术大量繁殖高品质月季， 能够满足市场的多样化需求。
目的
通过花药培养获得月季的纯系或无性 系，用于育种、品种改良、繁殖和遗 传研究等方面。
月季花药培养的历史背景
起始时间
月季花药培养的研究始于20世纪50 年代，中国、日本和欧美等国家的研 究者开始探索这一领域。
重要里程碑
70年代初，研究者成功诱导月季花药 产生单倍体植株，标志着月季花药培 养技术的突破。此后，该技术在月季 育种和繁殖中得到了广泛应用。
再生植株的遗传稳定性
经过花药培养获得的再生植株具有较高的遗传稳定性，能够保持亲本的优良性状，为月 季新品种的培育提供稳定的基础。
花药培养对月季产业的影响
加速新品种的培育
花药培养技术为月季品种的快 速培育提供了有效途径，缩短了 育种周期，提高了育种效率。
丰富月季品种资源
通过花药培养技术，可以获得大 量具有不同优良性状和基因型的 月季新品种，丰富月季品种资源 库。
详细描述
在接种前，需要对花药进行消毒处理，以减少微生物的污染。常用的消毒方法有表面消毒和浸泡消毒等。消毒后， 需要去除雄蕊，以便更好地进行花药培养。这一步可以通过显微操作仪来完成，也可以手动去除。
花药的接种与培养
总结词
将处理好的花药接种在培养基上，控制温度、湿度和光照等条件，促进花药的发育。
月季的花药培养
①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细 胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）
②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生 殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样 的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。
③两个精子和一个营养核的基因型相同。
④ 小孢子 减数 4个小 有丝
母细胞
孢子
4个花粉管 细胞核
课题2 月季的花药培养
植物的花药培养在育种上有特殊的意义。育 种工作者可以采用花药培养的方法，使花粉粒发 育为单倍体植株，再经过人工诱导使染色体加倍， 重新恢复到正常植株的染色体数目。这样的植株 不仅能够正常生殖，而且每对染色体上成对的基 因都是纯合的，自交产生的后代不会产生性状分 离。
单倍体育种不仅缩短了育种周期，也为新品 种的培育开辟了新途径。
相同点
不同点
植物组织 离体的植物组 外植体为体细胞，染 培养技术 织经脱分化形 色体数无需加倍。
成愈伤组织， 单倍体育 再分化成丛芽，取材为花药，培养的
种技术 诱导出根，然 为单倍体幼苗，植株 后进行移栽。 弱小，高度不育，必 须用秋水仙素处理， 使染色体加倍，恢复 正常植株的染色体数， 而且为纯种。
不同之处在于：花药培养的选材非常重要，需 事先摸索时期适宜的花蕾，花药裂开后释放出的愈 伤组织或胚状体也要及时更换培养基，对培养基配 方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为 增加。
组织培养技术可用于花卉等的快速繁殖，培养 无病毒植株，制造人工种子等。
植物组织培养技术与单倍体育种技术的异同点
项目
基础知识：
一、被子植物的花粉发育 二、产生花粉植株的两条途径 三、影响花药培养的因素
一）被子植物的花粉发育
花丝
雄蕊：
月季的花药培养课件(上课用)
（2）在过程①中，常用的MS培养基主要成分包括大量 元素、微量元素和_有__机__物_，在配制好的培养基中，常常 需要添加_植__物__激_素__，有利于外植体启动细胞分裂形成愈
伤组织。接种后2~5d，若发现外植体边缘局部污染，原
因可能是__外__植__体__消__毒不彻底
。
（3）在过程②中，愈伤组织在诱导生根的培养基中未形
（一）材料的选取
阅读“（一）材料的选取”，回答下列问题：
1．选择花药时一般通过__镜__检___确定花粉 发育时期，此时需要对花粉细胞核进行染色， 最常用的染色剂是________醋__酸__洋__红和 __焙__花__青__-_铬__矾，它们分别可以将细胞核染成
__红__色和_蓝__黑__色。
（二）材料的消毒
D.花粉母细胞形成花粉粒中精子的过程是 一系列减数分裂的过程
（二）产生花粉植株的两种途径
1.产生花粉植株的两条途径
阅读P38教材内容，说出产生花粉植株
花粉 花粉
脱的两胚种状途体径及原分化因 从芽
分 化
诱
愈伤组织再分化 从芽 导
生根
移栽
2.产生花粉植株具有两条途径的原因： 主要取决于培养基中 激素的种类及其 浓度 的配
答案：（1）单倍体 AB、Ab、aB、ab （2）减数分裂和有丝分裂 有丝分裂 （3）秋水仙素 ③ AABB、AAbb、aaBB、aabb （4）A、B、D
8、基因型为AaBb的水稻（２４条染色体）的花药通过 无菌操作，接入试管后，在一定条件下培养成试管苗。
（１）愈伤组织是花粉细胞分裂形成的不规则的细胞 团，愈伤组织必须从培养基中获得（水 ）（无机盐） 和小分子有机物等营养物质。
阅读“（二）材料的消毒”，填写下列流程图：
《月季花药培养》课件
适宜的温度、光照和湿度 有利于花药分化和植株生 长。
常见问题及解决方法
花药变黑
可能是由于细菌或真菌感染，应立即更换无菌培养基。
花药不分化
可能是培养基配方不合适，尝试调整培养基成分。
植株生长缓慢
可能是环境条件不适宜，调整温度和光照条件。
培养花药的注意事项
• 进行花药培养前，确保所有实验器具和培养基无菌。 • 选择健康的花药，避免使用受伤或感染的花朵。 • 注意花药的培养温度和光照条件，保持适宜的湿度。
总结和展望
通过学习花药培养的方法和技巧，我们能够更好地繁殖月季植株并提高繁殖 效率。未来，我们可以进一步研究优化花药培养条件，以及利用花药培养技 术改良月季植株和育种。
1
收集花药
选择健康的花朵，剪下花药并放入无菌培养基。
2
培养花药
置于合适的温度和光照条件下，观察花药的生长和分化。
3
分化植株
将花药中的愈伤组织分离培养，培养出月季植株。
影响花药培养效果的因素
1 花药质量
健康的花药有更好的分化 和生长能力。
2 培养基配方
3 环境条件
合适的培养基成分和浓度 对花药培养效果至关重要。
《月季花药培养》PPT课 件
探讨月季花药培养的方法和技巧，介绍培养花药的重要性，步骤，影响培养 效果的因素，解决常见问题，以及花药培养的注意事项。
花药培养的重要性
花药培养是一种重要的植物繁殖方法，可以大大提高繁殖效率和遗传多样性。 通过花药培养，我们可以快速繁步骤
月季的花药培养教学用
对未来教学的建议和展望
针对不同专业背景的学生，教师 可以根据需求调整教学内容和深 度，以更好地满足学生的学习需
求。
在实验教学中，教师可以引入更 多的实际案例和实践操作，以提 高学生的实践能力和问题解决能
力。
学校可以加强与相关企业和实验 室的合作，为学生提供更多的实 践机会和就业导向，促进学生的
设计有关月季花药培养的游戏，使学 生在轻松愉快的氛围中掌握相关知识。
角色扮演
学生扮演不同的角色，模拟月季花药 培养的实际操作过程，增强学生的参 与感和体验感。
04
月季花药培养的教学实践和案例分析
实践教学的准备
教学目的明确
首先需明确花药培养的教学目的， 是为了让学生掌握花药培养的基 本原理和技术，以及了解其在育 种中的应用。
实验材料准备
根据教学目的，准备相应的实验材 料，包括月季花蕾、培养基、显微 镜、实验器材等。
教学计划制定
制定详细的教学计划，包括实验时 间、实验步骤、学生分组等内容。
实践教学过程
实验演示
学生实践
观察记录
教师首先进行实验演示， 包括花药取材、培养基 制备、接种、培养等步
骤。
学生分组进行实验操作， 教师从旁指导，纠正错
职业发展。
THANKS
感谢观看
建议。
互动交流
鼓励学生与老师进行交流，提出 问题、发表观点和分享经验，促
进师生互动和教学相长。
匿名反馈
通过匿名方式收集学生对花药培 养教学的意见和建议，以便更好
地改进教学方法和手段。
改进方案
教学方法优化
根据学生的反馈和评估结果， 不断优化教学方法和手段，提
《月季花药培养》课件
去除花药周围的残留花瓣和叶片 ，确保花药暴露在培养基上，以 便于后续操作。
花药的消毒与去雄
消毒方法
使用适宜的消毒剂对花蕾进行表面消毒，以去除表面微生物 。
去雄步骤
在显微镜下操作，用镊子小心去除花药中的雄蕊，确保雌蕊 不受损伤。
花药的接种与培养
接种技术
将处理好的花药移植到准备好的培养基上，确保花药与培养基紧密接触。
技术进步
随着生物技术的不断进步，未来月季花药 培养的成功率和技术难度有望得到进一步
改善。
经济效益提升
随着技术的成熟和成本的降低，月季花药 培养有望为花卉产业带来更大的经济效益
。
应用领域拓展
月季花药培养不仅可用于月季新品种的培 育，还可应用于其他花卉、果树、药用植 物等领域，具有广阔的应用前景。
社会效益增强
通过花药培养，可以繁殖大量优质月 季，保护和保存珍贵的花卉资源，避 免品种退化和消失。
月季花药培养的未来发展方向
优化培养条件
进一步研究月季花药培养的最优条件 ，提高花药培养的成功率和效率。
基因编辑技术的应用
结合基因编辑技术，定向改造月季的 性状，提高花药的再生能力和花苗的 质量。
拓展应用范围
将花药培养技术应用于其他花卉和农 作物，扩大其应用范围，为农业生产 提供更多帮助。
月季花药培养的原理
月季花药培养的基本原理是植物细胞的全能性。
月季花药中的单倍体细胞在适宜的培养条件下，能够诱导分化形成完整的植株。
通过花药培养获得单倍体植株后，再经秋水仙碱诱导加倍后筛选纯合二倍体植株， 可进行遗传转化和基因工程改良。
01
月季花药培养的过 程
花药的选择与处理
选择健康的花药
月季的花药培养图文详解
褐变是月季花药培养中常见的问题之一，主要是由于多酚氧化酶的活性引起的。为了防止褐变，可以 在培养基中加入适量的抗氧化剂或抑制剂，如维生素C、柠檬酸等。此外，保持适宜的温度和湿度也 能减少褐变的发生。
05
月季花药培养的应用与前景
在月季育种中的应用
创造新种质
通过花药培养，可以获得单倍体植株，进而通过染色体加倍技术 获得纯合二倍体，为月季育种提供新的种质资源。
克服远缘杂交不亲和性
利用花药培养技术，可以克服不同种、属间杂交的不亲和性，实现 远缘杂交育种。
缩短育种周期
通过花药培养获得单倍体植株后，经染色体加倍可迅速获得纯合品 系，大大缩短了育种周期。
在月季快繁中的应用
快速繁殖
利用花药培养技术，可以在短时间内 获得大量遗传背景一致的植株，实现 月季的快速繁殖。
月季花药培养的原理
月季花药培养是植物组织培养的一种，其原理是利用月季花 药中的花粉粒作为外植体，通过诱导其脱分化形成愈伤组织 ，再经过再分化形成完整植株。
在月季花药培养中，需要选择适宜的培养基和激素配比，以 诱导花粉粒的脱分化和再分化。同时，还需要控制培养条件 ，如温度、光照、湿度等，以保证培养的成功。
月季花药培养的重要性
01
02
03
获得纯合基因型
通过花药培养可以获得纯 合的基因型，为月季育种 提供重要的遗传材料。
加速育种进程
花药培养可以大大缩短育 种周期，提高育种效率。
创制新种质
通过花药培养可以创制新 的种质资源，丰富月季的 基因库，为月季育种提供 更多的选择。
02
月季花药培养的基本原理
植物组织培养概述
植物组织培养是一种利用植物细胞的全能性，通过无菌操作分离植物体的一部分 （如茎尖、根尖、花药、叶片、嫩芽、幼胚等），接种到培养基上，在人工控制 的条件下进行培养，使其长成完整的植株或生产具有经济价值的其他产品的技术 。
月季的花药培养教学设计
月季的花药培养教学设计.docx1.教学目标(一)知识与技能1、识记被子植物花粉发育的过程2、通过学习花药培养的基本技术，培养设计试验、动手操作、分析解释实验现象的能力(二)过程与方法1、列表比较花药培养与组织培养2、选择适宜的培养材料和培养基(三)情感、态度与价值观1）培养动手实践、勇于探索的科学探究素质2）通过讨论花药离体培养技术在生产实践中的应用，帮助学生确立理论联系实际的观占八、2.教学重点/难点1、课题重点：选取适宜的培养材料和培养基2、课题难点：选取适宜的培养材料和培养基3、教学用具：多媒体、板书、教材4、标签教学过程(一)引入新课利用植物的茎可以经过组织培养得到新植株但这种方法同时也存在着一定的缺陷殖出来的新植株往往无法获得一些新的性状。
本节我们将学习花药离体培养技术。
(二)进行新课1.基础知识活动1：阅读“被子植物的花粉发育”，回答下列问题1）被子植物的花粉是在花粉管中由生殖细胞经过减数分裂形成的。
2）结合教材内容填下列示意图HUni4J侍（JaniJ1Tmilled思考2由此可见，被子植物的花粉的发育要经历四分体时期，单核期和双核期等阶段。
思考3在正常情况下小孢子母细胞可以产生4个精子；在一枚花药中可以产生很多个花粉。
思考4营养细胞在花粉萌发过程中的作用是什么控制花粉的萌发并提供营养。
活动2:阅读“产生花粉植株的两条途径”，讨论并回答下列问题1）产生花粉植株（即单倍体植株）的两种途径：一是花粉通过胚状体阶段发育为植株；二是通过愈伤组织阶段发育为植株。
这两种途径的区别主要取决于培养基中激素的种类及其浓度的配比。
2）填写培育花粉植株的途径图解at0Ifn3）胚状体的结构及其发育过程与种子相似，所以把胚状体到从芽的过程称为分化,而把从愈伤组织到从芽的过程称为再分化活动3:阅读“影响花药培养的因素”，回答下列问题1）影响花粉植株的主要因素：材料的选择和培养基的组成等。
2）材料的选择从花药来看，应当选择（初花期、盛花期、晚花期）的花药从花粉来看，应当选择（四分体期、单核期、双核期、萌发期）的花粉从花蕾来看，应当选择（完全未开开放、略微开放、完全盛开）的花蕾。
月季的花药培养
花 粉 脱 分 化 花 粉 分化 从 胚状体 芽 愈伤 再分化 从 组织 芽 诱 导 生 根 移 栽
（三）影响花药培养的因素
（三）影响花药培养的因素 1. 材料的选择
（三）影响花药培养的因素 1. 材料的选择
不同植物
（三）影响花药培养的因素 1. 材料的选择
不同植物 同一植物的不同生理状况 花期早期－初花期） （花期早期－初花期）
5. 无菌水冲洗 无菌水冲洗3~5次 次 用于培养花药，实际上多数未熟， 用于培养花药，实际上多数未熟， 由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护， 由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护， 通常处于无菌状态， 通常处于无菌状态，所以只要将整个花 蕾或幼穗消毒即可。 蕾或幼穗消毒即可。
为什么花瓣松动会给 材料的消毒带来困难？ 材料的消毒带来困难？
通常每瓶接种花药7-10个，温度控 个 通常每瓶接种花药 制在25℃左右，不需要光照。 制在 ℃左右，不需要光照。幼小植株 形成后才需要光照。 形成后才需要光照。 一般经过20-30天培养后，会发现花 天培养后， 一般经过 天培养后 药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。 药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。 将愈伤组织及时转移到分化培养基上， 将愈伤组织及时转移到分化培养基上， 以便进一步分化出再生植株。 以便进一步分化出再生植株。
相同点
不同点
离体的植 外植体为体细胞，染 外植体为体细胞， 物组织经 色体数无需加倍。 色体数无需加倍。 脱分化形 成愈伤组 织，再分 化成丛芽， 化成丛芽， 花药培 诱导出根， 诱导出根， 养技术 然后进行 移栽。 移栽。
项目 植物组 织培养 技术
相同点
不同点
离体的植 外植体为体细胞，染 外植体为体细胞， 物组织经 色体数无需加倍。 色体数无需加倍。 脱分化形 成愈伤组 取材为花药，培养的 取材为花药， 织，再分 为单倍体幼苗，植株 为单倍体幼苗， 化成丛芽， 弱小，高度不育， 化成丛芽， 弱小，高度不育，必 花药培 诱导出根， 须用秋水仙素处理， 诱导出根， 须用秋水仙素处理， 养技术 然后进行 使染色体加倍， 使染色体加倍，恢复 移栽。 移栽。 正常植株的染色体数， 正常植株的染色体数， 而且为纯种。 而且为纯种。
月季花药培养
4、鉴定和筛选
在花药培养中，尤其是经过愈伤组织形成旳花 粉植株，经常会出现染色体倍性旳变化（主要 原因是营养核和生殖核融合造成旳）
5、植物组织培养技术与花药培养技术旳异同点：
项目
相同点
不同点
植物组织 培养技术
花药培养 技术
• 离体旳植物组 外植体为体细胞，染色体数
织经脱分化形
无需加倍。
成愈伤组织，
③从花蕾来看，应该选择（完全未开放、略微开放、完全盛开） 旳花蕾。 〖思索5〗为何选择合适旳花粉发育期是诱导花药培养成功旳 主要原因？
这是因为并不是任何时期旳花粉都能够经过培养产生愈伤组 织或胚状体，在花粉发育旳过程中，只有某一种时期对离体刺激 敏感。
2、培养基旳构成：
花药培养所采用旳培养基各成份中植物生长调整 剂旳水平和配比起决定作用。 ⑴诱导愈伤组织或胚状体产生旳培养基：广泛使用 2， 4-D、IAA； ⑵诱导分化旳培养基常除去2，4-D而以IBA代之。
3、其他原因：
亲本植株旳生长条件、材料旳低温预处理、接种 密度、培养旳环境条件等对诱导旳成功率都有一定旳 影响。
为何花瓣松动会给材料旳消毒带来困难？
花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材 料旳消毒带来困难。
月季花药培养时旳花粉粒最佳是（ C ） A、四分体时期 B、单核居中期 C、单核靠边期 D、二核或三核花粉粒
4、花旳作用 被子植物旳有性生殖是在花里进行旳，雌蕊 和雄蕊是进行有性生殖旳主要部分
二、被子植物花粉粒旳形成 1、雄蕊旳构造
花丝 雄蕊：
花药：囊状构造，内有诸多花粉粒
2、花药旳构造
花药
药隔：花药中部，由薄壁细胞构成， 内有维管束
花粉粒
花粉囊（4或2） 囊壁
月季的花药培养
月季的花药培养一、理论基础：花粉细胞具有全能性。
二、花粉发育过程花粉是由花粉母细胞经过减数分裂而形成的。
因此，花粉是单倍体的生殖细胞。
被子植物花粉的发育要经过四分体时期、单核期和双核期等阶段。
在四分体时期，4个单倍体细胞连在一起，进入单核时期，四分体的4个单倍体细胞彼此分离，形成4个具有单细胞核的花粉粒。
这时的细胞含浓厚的原生质，核位于细胞中央(单核居中期)。
随着细胞不断长大，细胞核由中央移向细胞一侧(单核靠边期)，并分裂成1个生殖细胞核和1 个花粉管细胞核，进而形成两个细胞，一个是营养细胞，一个是生殖细胞。
生殖细胞再分裂一次，形成两个精子。
被子植物的花粉发育可概括为：花粉母细胞花粉粒个精子三、产生花粉植株的两种途径通过花药培养产生花粉植株即单倍体植株一般有两种途径，一种是花粉通过胚状体阶段发育为植株，另一种是花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。
这两种途径之间没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。
产生花粉植株的两种途径图示如下：四、操作过程中的关键点拨(一)材料的选择1．要选择初花期、完全未开放的花蕾，一方面保证花粉处于单核期；另一方面，若选取盛开或略开放的花，花辨就有所松动，微生物就有可能侵入到花药，给材料消毒带来困难。
若选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎。
2．花粉最好处于单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。
3．确定花粉发育时期最常用的方法是醋酸洋红法和焙花青——铬矾法，可以将细胞核分别染成红色和蓝黑色。
(二) 材料的消毒选取花蕾后一般要先将其用体积分数为70%的酒精浸泡约30s ，立即取出，在无菌水中清洗。
用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分，放入质量分数为0．1%的氯化汞溶液中2~4分钟(也可以用质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液)，取出后再用无菌水冲洗3~5次，以去除吸附的氯化汞，避免危及花药。
(三)接种1．灭菌后的花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣2．剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织；同时要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。
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（三）接种和培养 1、剥取花药
在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出 花药 注意：
①勿损伤花药，以免诱导出 非花粉愈伤组织 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的 花药不利于愈伤组织或胚状体的形成
2、接种 立即将花药接种于培养基上， 通常每瓶接种花药7-10个。
3、培养 ①培养条件：温度控制在25℃左右，不 需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 ②培养：一般经过20-30天培养后，会发 现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状 体 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移 到分化培养基上，以便进一步分化出再生 植株
①卡诺氏固定液的配制方法 将无水酒精与冰醋酸按体积 比为3 ：1的比例混匀
②焙花青—铬钒溶液的配制方法 将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)〃24H2O] 加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙 花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后 冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至 100ml。
③染色操作 花药应该在卡诺氏固定液中固定 20min，然后取出放在载玻片上，加 焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片 后在显微镜下检查。
2、醋酸洋红法 ①醋酸洋红法染色机理 醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细 胞内有染色体，染色体主要成分是DNA 和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色 。 ②醋酸洋红的配置
将体积分数45％的醋酸 100ml煮沸，缓缓加入1g洋 红，在加热回流8h，冷却至 50℃，过滤即可。
③染色操作 将花药放在载玻片上，加一滴 质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄 将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜 下检查。 3、焙花青—铬钒法
营养细胞 花粉管细胞核 生殖细胞核 有丝 生殖细胞 分裂 精子
双核期
精子
两个精子和一个营养细胞的基因型相同
1个 4个花粉管细胞核 减分 4个 有分 花粉 小孢 4个生殖细胞核 母细 子 胞 有分 8个精子
(二)、产生花粉植株的两条途径
（三）、影响花药培养的因素 1、材料的选择 ①时期－－－初花期 ②选择合适的花粉发育时期是
－－提高诱导成功率的重要因素
只有某一个时期对离体刺激敏感。
最适合花药培养的小孢 子发育时期为单核靠边期
措施？？
2、培养基的组成 花药培养所采用的培养基因 植物的不同而有所变化
3、其他因素 亲本植株的生长条件、材料的 低温预处理以及接种的密度等对诱 导成功都有一定的影响
六、实验操作 （一）材料的选取 1、方法 ①最常用的方法有醋酸洋红法 ②某些植物的花粉细胞核不易着色， 需采用焙花青-铬矾法，这种方法能 将花粉细胞核染成蓝黑色。
药隔：由薄壁细胞构成，内有维管束
花药
花粉囊（4或2）
花粉粒
囊壁
药隔
花 粉 囊 囊壁
药隔
花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成 的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞 ①经历时期：
四分体时期、单核期、双核期
②花粉粒的形成
花粉母细胞 （小孢子母细胞） 减数分裂
四分体时期(小孢子) 单核居中期(小孢子) 单核靠边期(小孢子) 有丝 分裂
5、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点 外植体为体细胞，染色 培养技术 织经脱分化形 体数无需加倍。 成愈伤组织， 花药培养 再分化成丛芽， 取材为花药，培养的为 诱导出根，然 单倍体幼苗，植株弱小， 技术 后进行移栽。 高度不育，必须用秋水 仙素处理，使染色体加 倍，恢复正常植株的染 色体数，而且为纯种。
③注意：如果花药开裂释放出胚 状体，则一个花药内就会产生大 量幼小植株，必须在花药开裂后 尽快将幼小植株分开，分别移植 到新的培养基上，否则这些植株 将很难分开。
4、鉴定和筛选 在花药培养中，特别是通过愈伤组织 形成的花粉植株，常常会出现染色体倍 性的变化（主要原因是营养核和生殖核 融合造成的）
被子植物
种子有 果皮包 被着， （胚珠 有子房 壁包被 着）
裸子植物
种子无 果皮包 被着， （胚珠 无子房 壁包被 着）
种子
花的结构
被子植物的有性生殖是在花 里进行的，雌蕊和雄蕊是进 行有性生殖的主要部分。
雌 蕊 雄 蕊
花粉粒
雌蕊的结构
花粉管 极核 精子
(2个)
卵细胞
一、基础知识 （一）、被子植物的花粉发育 花丝 雄蕊： 花药：囊状结构，内有很多花粉粒
（二）材料的消毒 1、酒精处理
①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡 30秒，立即取出。 ②无菌水清洗 ③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分
2、消毒液处理 ① 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液 中2~4分钟（也可质量分数为1%的次 氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） ② 无菌水冲洗3~5次
用于培养花药，实际上多数未熟，由 于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护， 通常处于无菌状态，所以只要将整个花 蕾或幼穗消毒即可。