Rh血型鉴定操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3受检者血清。
1.4受检者5%红细胞盐水悬液。
2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。
2.25%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
ABO和RH血型鉴定操作规程4
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH(D)血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D)血型鉴定三、所需材料和设备:1、材料：抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞,生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜.四、操作规程1、试管法:（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D,分别加入抗A、抗B及IgM抗D 单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴,轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴,轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血）现象。
如肉眼不见凝集,应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度，有助于A、B亚型,类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。
(2）标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴,再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.（3）轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀,连续15分钟以肉眼观察有无凝集(溶血)反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果.(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断:4、凝集强度判断:4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰;2+ 红细胞凝块分散成许多小块,背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+—镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-阴性镜下未见凝集，红细胞均匀分布.5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6。
ABO、RH血型检测(试管法)标准操作规程
ABO、RH血型检测（试管法）标准操作规程【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】双目显微镜、普通离心机。
【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】ABO、RH血型检测的手工操作。
【标本采集和处理】由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。
检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。
确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号，并按日期索引进行登记。
将标本置于台式离心机内，放置保证平衡，以1500转/min离心10分钟。
保证血浆于血球有效分离。
溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。
【检查项目】一、ABO血型（一）原理根据红细胞上有或无A抗原或（和）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O 型四种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B 分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B 抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B 红细胞来测定血清中有无相应的抗-A 或（和）抗-B。
（二）试剂和材料1．抗-A（B 型血）、抗-B（A 型血）。
2．5％A 、B 试剂红细胞盐水悬液。
3．受检者血浆。
4．受检者5％红细胞悬液。
试剂可在室温2～8℃下避光保存至有效期。
（三）操作步骤1．试管法(1)正向定型a．取试管2支，分别标上A、B字样。
b．向A管滴加抗A分型试剂1滴，向B管滴加抗B分型试剂1滴。
c．向A、B管各滴加5％的待检红细胞悬液各1滴。
d．混匀（天冷时试管架置370C水浴箱15分钟）后配平衡，在离心机内1000转/min离心1分钟。
将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜检查。
02 Rh血型鉴定试管法操作规程---作业指导书
操作人员
3.1.1负责对检测标本进行Rh(D)血型鉴定的具体操作和编写实验报告单
仪器管理人员
3.2.1负责相关仪器的日常保养
3.2.2负责相关仪器的维护
质量监督员
负责操作过程监督，仪器室内质量控制。
科室主任或授权者负责检测报告审核
实验原理
在临床输血中，Rh血型一般只做D抗原的鉴定，凡被检红细胞和抗D血清凝集者为
阳性，不凝集者为Rh(D)阴性。
Du(弱D)型红细胞与各批或几批抗D血清在盐水介质及酶实验中不发生凝集，但在间接抗人球蛋白实验中均发生凝集。
因此，当用盐水介质实验发现与抗D不凝集时，不应轻率地定为Rh阴性，需进一步排除Du型的可能。
6.2.3轻摇玻片，观察凝集结果，判读结果应在2分钟内进行，否则会因为样本干固而引起假阳性。
试管法
6.3.1用等渗盐水配制3%-5%待检红细胞悬液。
6.3.2取小试管1支，加1滴抗D试剂，再加1滴红细胞悬液。
6.3.3 1000g离心15秒。
6.3.4轻轻振荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果。
6.4 Rh阴性确认实验
如果使用血清单克隆抗-D经20℃孵育后，反应仍为阴性，那么就需要检测弱D抗原或不完全D抗原的存在。
6.4.1同时使用抗-D（IgM）和抗-D（IgG）两种试剂分别用盐水法和聚凝胺法进行检测，观察凝集结果。
该实验应同时做阳性及阴性对照实验。
Rh血型鉴定
Rh血型鉴定1.原理根据与Rh血型系统中的D抗原发生的凝集反应，通过直接凝集法对Rh血型系统中的D抗原进行体外检测和鉴定。
2.试剂组成分泌抗DIgM 人/小鼠杂交瘤细胞培养上清液、EDTA、叠氮钠。
3.试剂保存和稳定性存放2℃—8℃，有效期内使用。
4.标本收集和制备无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将样品贮存于2℃—8℃。
5.检验方法1.玻片法：干净玻片上加1滴抗D试剂，再加入1滴30%-45%的被检红细胞生理盐水悬液，缓慢摇动玻片；2-5分钟左右肉眼观察结果，可借助弥漫光源观察；如结果呈阴性，需用试管法重复做一次试验。
2.试管法：向试管中加1滴抗D试剂，再加入2%-3%的被检红细胞生理盐水悬液，混匀；3400rpm离心10秒；轻轻摇动试管以悬浮底部细胞，肉眼观察可见的凝集；如结果是阴性，需在37℃孵育15-30分钟，然后再离心观察结果，结果仍呈阴性请按有关规定做进一步的确认试验。
6.结果判断凝集=阳性检测结果无凝集=阴性检测结果7.质量控制与附注1.抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
2.由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
3.Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
4.对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
5.其它附注参见ABO血型鉴定。
8. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编. 全国临床检验操作规程（第三版）.Rh血型鉴定[原理]红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。
[试剂组成] 抗D试剂广谱抗人球蛋白[试剂保存和稳定性]存放2—8℃，有效期内使用。
[标本收集和制备]无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。
Rh血型定型操作规程
Rh血型定型操作规程1.原理1.1单克隆混合试剂测定法：根据凝集反应原理，当被检测行红细胞上有D抗原存在时，可与抗D混合型血型定型试剂产生特异性的抗原反应，出现红细胞凝集现象。
1.2酶介质测定法：当IgG类小分子特异性血型抗体与具有相应抗原的红细胞相遇时，虽能与红细胞上的特异性抗原结合，却因IgG分子间两个抗原决定簇的跨度小于红细胞间斥力而产生的距离（250nm），不能将相邻的红细胞彼此连接起来。
酶介质可破坏红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，减少细胞间斥力，使红细胞间的距离缩小，有利于IgG类抗体在两个抗原位点间的连接，使抗原抗体间的反应成为肉眼可见的凝集。
2.操作步骤2.1玻片法（IgM+IgG型）2.1.1在玻片方格中加1滴抗D（IgM+IgG）混合试剂。
2.1.2再加2滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于抗D混合试剂中。
2.1.3用干净的玻棒完全搅拌上述红细胞与抗D混合液。
2.1.4前后左右倾斜玻片且同时观察凝集现象。
2.1.5如出现凝集，则判断为Rh（D）阳性，反之为Rh（D）阴性。
2.2试管法（IgM+IgG型）2.2.1在试管中加1滴抗D混合试剂。
2.2.2再加1滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于上述试管中，混匀。
2.2.3以3200~3400r/min离心15~30秒。
2.2.4轻轻振摇试管使红细胞重悬，肉眼或显微镜观察有无凝集现象。
2.2.5记录结果，凝集者为阳性反应，反之为阴性反应。
2.3微柱凝胶法：按ABO血型鉴定中微柱凝胶法进行检测，结果判断见ABO血型鉴定操作规程图3-1。
3.注意事项3.1 Rh血型系统的抗体多由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作反定型试验。
3.2阳性对照，取3人O型红细胞混合配血。
阴性对照不易得到，一般配置方法为正常人AB型血清1滴，5%RhD阳性红细胞悬液1滴和菠萝蛋白酶试剂1滴混匀，与受检管一同置于37℃水浴1小时。
3.3 Rh血型鉴定要严格控制温度与时间。
rh血型操作规程
rh血型操作规程RH血型操作规程一、背景介绍RH血型是血型系统中的一个重要组成部分，它是由D抗原的有无决定的。
人们通常将有D抗原的血型称为RH阳性血型，没有D抗原的血型称为RH阴性血型。
RH血型在输血和妊娠管理中起到了重要的作用，因此，在临床操作过程中必须严格遵守RH血型操作规程，确保安全和准确性。
二、操作规程1. 输血操作（1）献血者的血液抗凝后，经离心制备成全血和血小板浓缩物。
对于血小板输注，应选择和受血者血型相同的RH血型，以防止发生不良输血反应。
（2）在输血前，护士必须仔细核对受血者的血型信息，包括ABO血型和RH血型，确保与输血样本中的信息一致。
（3）如果受血者是RH阴性血型，应尽量选择RH阴性血型的供血者进行输血。
如果没有RH阴性血型的供血者，必须进行特殊处理，避免RH阴性受血者产生抗RH抗体。
（4）在输血过程中，护士应仔细观察受血者的反应，如出现发热、寒战、皮肤瘙痒等不适症状，应立即停止输血并报告给医生。
2. 妊娠管理操作（1）在孕妇第一次产前检查中，必须进行血型鉴定，包括ABO血型和RH血型。
如果孕妇是RH阴性血型，需要进一步检测是否有产生RH抗体。
（2）如果孕妇是RH阴性血型且未产生抗体，需要在孕妇20周左右注射RH免疫球蛋白。
该注射可以避免孕妇在分娩时产生抗RH抗体，保护胎儿的健康。
（3）对于孕妇已经产生抗RH抗体的情况，需要进行更加细致的监测和干预。
医生会根据不同的情况制定个体化的治疗方案，以保护胎儿的健康。
3. 实验室操作（1）实验室人员在操作前需要进行严格的消毒和无菌操作，以确保实验结果的准确性。
（2）实验室人员在进行血型鉴定时，必须使用高敏感性的试剂，以确保准确测定受血者的RH血型。
（3）实验室人员必须遵守操作规程，准确记录实验结果，并及时报告异常情况。
（4）实验室人员应定期进行技术培训和继续教育，提高操作的准确性和可靠性。
三、安全措施1. 输血过程中，护士应随时观察受血者的反应，如有不适症状，应立即停止输血并报告医生。
鉴定rh血型的流程
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RH血型鉴定操作规程
RH血型鉴定操作规程目的：1、为准确鉴定RH血型及了解基因型2. 要求：要求全科人员熟练掌握原理及其操作，对有疑问的结果能够做出解释及妥善解决。
3. 原理：该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。
.用五种抗Rh分型血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。
在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh.阳性，不凝集者为Rh阴性。
其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。
其鉴定方法，由抗血清的性质而定。
如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。
4.试剂与材料4.1 抗D、抗C、抗c、抗E、抗e分型血清。
4.2 受检者血样。
4.3含有相应抗原2%~5%红细胞悬液（从谱细胞中选取）。
5.操作：5.1取清洁白瓷板一块,滴加lgM抗D血清一滴，再用竹签分别蘸取被检红细胞混匀;阴性对照蘸取已知RH阴性红细胞混匀。
将白瓷板不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，2~3分钟后观察结果，连续观察10分钟，以肉眼观察,阴性对照不凝集,被检者凝集者为阳性，不凝集者为阴性5.2 瓷板结果阴性者,再用试管法复查.( lgM抗D血清1滴+2%~5%红细胞悬液1滴,1000g离心15秒),凝集者为阳性,不凝集者为阴性,5.3 试管法阴性者进行确认实验Rh血型确认实验取3支试管，分别标记“1”、“2”、“3”，分别加入3批IgG 或（lgM+ IgG）抗D血清试剂各1滴，再各加入2%~5%受检者红细胞悬液一滴，1000g离心15秒,凝集者为阳性，不凝集者放置于37℃水浴箱水浴30分钟，取出三洗后用滤纸吸取加入抗球蛋白试剂2滴，以1000g离心15秒，肉眼观察结果，若均无凝集，可确认为Rh阴性，任何一管有凝集者可怀疑为Rh变异型。
另对此血清做抗筛实验，方法详见抗体筛选实验。
6.RH基因型检侧.6.1 取小试管五支，标记抗D、抗C、抗E、和抗c,按标记分别加上述五种抗血清各1滴，再分别加2%~5%受检者红细胞1滴，混匀。
Rh(D)血型鉴定标准操作程序
SOP_10-2 Rh(D)血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1. 原理：1.1 Rh血型系统：Rh血型是一个极为复杂的血型系统，其重要性仅次于ABO血型系统。
ISBT现已确定Rh血型系统中共有46个血型抗原。
其中主要的抗原D、C、c、E、e分别表示为RH1、RH2、RH3、RH4、RH5或004001、04002、004003、004004、004005。
其抗原中包括了五个抗原之间的复合体以及弱表达等等，但在临床中主要的问题大都出自这五个抗原:抗E、抗e、抗C、抗c、抗D。
用这五种抗血清检查红细胞抗原可以有18种表现型，在临床输血中一般只做D抗原的鉴定。
1.2 D抗原：含有D（正常D抗原）；弱D（weak D）；不完全D（partial D）；不完全弱D；增强性D（elevated D）；正常D抗原。
由于红细胞上的D抗原较少，弱D抗原不能与盐水抗体（IgM）凝集，只能通过与不完全抗体的结合用抗球蛋白试验检出Del。
一些非常弱的D型抗原，只能被吸收放散试验（如三氯乙烯和三氯甲烷放散法）检测出来。
1.3 Rh 抗体：Rh血型的免疫原性强度可能仅次于ABO血型，其中以D抗原最强，其次为E、c、C、e。
绝大部分Rh抗体为免疫抗体，但少部分可能为自然发生的抗体。
2 试剂：（1）抗D试剂，包括完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体及改性IgG抗体等低蛋白试剂；（2）Rh对照试剂（通常可用自身血清或抗A、B管代替）；（3）Rh阳性和阴性5%红细胞悬液；（4）待检2~5%红细胞悬液。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 操作：3.2.1 玻片法：使用完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体等低蛋白试剂。
不适合于输血前献血者和病人的血型鉴定，仅适合于临床体检时的RH血型鉴定。
2.Rh(D)血型鉴定操作规程
4.1RhD血型定型试剂、0.9%生理盐水
4.2血型血清学离心机、显微镜、恒温水浴箱
5.样本的采集与处理:
5.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。
5.2标本要求：
5.2.1抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。
5.2.2手指血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。
10.3RH新生儿溶血病（HDN）患儿输血或换血的原则：பைடு நூலகம்BO血型同患儿血型相同，RH血型同母亲血型相同。
10.5RH弱D型妇女与RH阳性丈夫生育的婴儿可能产生新生儿溶血病。
10.6RHD抗原阴性患者血小板输注原则:尽管血小板表面无RH抗原但制品中含有一定量的红细胞,可使患者致敏,故RHD抗原阴性生育期的女患者(包括女童)应输RHD阴性血小板。
8.2.3某种特定的抗血清不能和与其相对应抗原的变异型起反应。
8.2.4如某种抗血清含有主要对抗Rh复合抗原的抗体则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。
8.2.5遵照抗血清使用说明书进行操作，如抗血清和红细胞悬液间比例以及反应温度和时间不准确。
8.2.6抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。
9.质量控制;
9.1抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
9.2由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
9.3Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
9.4对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
6.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。
Rh血型鉴定操作规程
抗D血型鉴定操作规程1.目的：定性鉴定患者Rh（D）血型2.适用范围：适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测。
3.方法及原理;该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。
.用五种抗Rh标准血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。
在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。
其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。
其鉴定方法，由抗血清的性质而定。
如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。
4.试剂及设备:4.1 RhD血型定型试剂、0.9%氯化钠4.2 离心机、显微镜、恒温水浴箱5.样本的采集与处理:5.1标本种类：新抽取的EDTA-K2抗凝血2ml。
5.2标本储存：2℃-8℃保存。
5.3标本运输：室温运输5.4.标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定。
6.操作步骤：6.1试管法6.1.1取1支标记的干净试管，加入2滴抗D定型试剂。
6.1.2再加1滴3-5%的被检红细胞悬液于试管中，摇匀。
6.1.3离心，3000-3400r/min15秒。
6.1.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。
6.1.5观察凝集状况，并立即记录，必要时可借助显微镜。
6.1.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟，然后再离心观察结果，结果若呈阴性需进一步确认是否为弱D。
6.2玻片法6.2.1取一标记的干净玻片，在其表面滴加1滴抗D血型定型试剂，在滴加1滴35-50%的待测红细胞悬液。
6.2.2持续地、轻柔地上下倾斜载玻片，使待测红细胞悬液与该试剂在约2cm直径范围内充分混匀2分钟。
6.2.3肉眼观察载玻片上是否出现红细胞凝集。
6.2.4记录结果6.2.5若是阴性结果，需用室温盐水试管法复核。
8.干扰因素:8.1假阳性因素8.1.1试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。
Rh血型分型试管法试验标准操作规程
Rh血型分型试管法试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面Rh血型系统C、c、D、E、e抗原表达情况，为输血相容性检测、Rh系统新生儿溶血病的诊断与预防等提供参考依据。
(二)检验原理Rh血型系统单克隆IgM类血型抗体可以使具有相应抗原的红细胞在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，利用单克隆IgM血型抗体可以鉴定出红细胞表面的Rh抗原。
(三)适用范围适用于受检者(受者、供者)红细胞表面C、c、D、E、e 抗原鉴定试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂生理盐水、市售单克隆IgM抗C、抗c、抗D、抗E、抗e及IgM+IgG抗D标准血清。
IgM抗D用于临床样本(受者)RhD血型的常规检测，不能与DIV细胞反应，不能检测出弱D。
IgM+IgG用于供者样本RhD血型的常规检测及确证试验，能与DIV细胞反应，检测出弱D抗原。
10系或16系谱细胞用于阴阳性对照。
(六)样本要求1.患者样本EDTA-K2；或EDTA-K3抗凝全血≥3ml，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。
2.供者标本枸橼酸盐抗凝，全血量≥3ml，经B600-A 型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。
(七)校准步骤参照KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机使用说明书中的校准要求执行。
(八)操作程序1.悬浮红细胞的配制取受检者适量红细胞，经生理盐水洗涤3次，取压积红细胞配成3％～5％的红细胞盐水悬液。
2.加样取4支洁净硬质试管，分别标记为受检者、阴性对照、阳性对照、自身对照，前3支试管内分别加入抗C(或抗c、或抗D、或抗E、或抗e)各1滴，第4支加自身血清(或血浆)2滴，在每支试管中再加配制好待用的3％～5％受检者红细胞悬液1滴，混匀。
Rh血型鉴定操作规程
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】已加入抗D试剂的细胞悬液.通常配制为0.8%～1.0%浓度。
（2）在专用微柱凝集卡的RhD检测管中加入样本红细胞悬液50ul
（3）在专用血型血清学用离心机内离心
（4）判读并记录凝集反应结果
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血为阳性，不凝集为阴性
【参考文献】
中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第四版）
（4）轻轻混匀，通常（900～100）×g离心15秒
（5）轻轻重悬细胞扣，检查凝集
（6）评价反应强度，记录试验管和对照管得试验结果
【结果判定】
（1）抗D管凝集，对照管不凝集表明红细胞是RhD阳性
（2）对照管和抗D管均阴性，说明待测红细胞是RhD阴性结果
（3）对照管凝集则试验无效
2.玻片法
【样本】用玻片法进行RhD定型时，待检红细胞悬液的浓度是40%～50%
Rh血型鉴定操作规程(总3页)
对象：全院职工
医疗药事制度
文件名称：Rh（D）血型鉴定
编写日期：2014.1
修订日期：2017.4
执行日期：2017.4
注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科
Rh（D）血型鉴定
【原理】Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统。Rh血型系统常见的抗原有D和C、c、E、e五种，分别由RHD基因和RHCE基因编码，RhD和RhCE蛋白均是反复穿膜的蛋白质。使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E、抗e五种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，一般只做D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
Rh(D)血型鉴定操作规程完整
医疗药事制度
文件名称：Rh（D）血型鉴定
编写日期：2014.1
修订日期：2017.4
执行日期：2017.4
注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科
Rh（D）血型鉴定
【原理】Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统。Rh血型系统常见的抗原有D和C、c、E、e五种，分别由RHD基因和RHCE基因编码，RhD和RhCE蛋白均是反复穿膜的蛋白质。使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E、抗e五种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，一般只做D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
3.柱凝集法
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】已加入抗D试剂的柱凝集血型卡
【操作】
（1）配制好的检测样本的红细胞悬液和试剂红细胞悬液.通常配制为0.8%～1.0%浓度。
（2）在专用微柱凝集卡的RhD检测管中加入样本红细胞悬液50ul
（3）在专用血型血清学用离心机内离心
（4）判读并记录凝集反应结果
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血为阳性，不凝集为阴性
（5）不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板，持续大概2分钟
（6）读取，解释并记录所有玻片或白瓷板凹孔中的结果
【结果判定】
（1）抗D试剂与红细胞反应表现凝集，而对照为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阳性
（2）抗D试剂与对照均为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阴性
（3）对照管凝集则试验无效
【注意事项】玻片法可能存在感染性标本暴露的风险，需要注意防范；玻片法不适用于检测弱D表型
ABO和RH血型鉴定操作规程4
ABO和RH血型鉴定操作规程4ABO和RH血型鉴定操作规程4一、实验目的1.学习和掌握ABO和Rh血型的鉴定方法；2.学会正确操作相关试剂和仪器设备；3.提高实验操作的准确性和规范性。
二、实验原理ABO血型系统是血浆中存在的A抗原、B抗原和漏斗性E抗原在红细胞膜上的表达情况的不同所决定的。
Rh血型系统是Rh抗原在红细胞膜上的表达情况所决定的。
实验中采用“直接添加法”和“间接抗人球蛋白试剂法”进行ABO和Rh血型的鉴定。
ABO血型鉴定根据红细胞与抗A血清、抗B血清的凝集反应情况判断，Rh血型鉴定根据红细胞与抗D血清的凝集反应情况判断。
三、所需试剂及仪器设备1.10%的牛血清白蛋白溶液；2.抗A血清、抗B血清、抗D血清、抗人球蛋白试剂；3.输血细胞和被检血液样本；4.显微镜及玻璃制品。
四、实验步骤1.取一小号试管，用P3琼脂糖盐水洗涤试管内壁。
2.分别取少量被检血液样本和输血细胞加入试管中。
3.加入3滴抗A血清到试管1中，3滴抗B血清到试管2中。
4.试管1和试管2每个都加入一滴抗人球蛋白试剂。
5.用试管架将试管在室温下静置20分钟。
6.观察试管1和试管2的凝集情况，并比较。
7.根据凝集情况判断被检血液的ABO血型。
五、结果判断1.如果试管1发生凝集，试管2不发生凝集，即为A型血；2.如果试管2发生凝集，试管1不发生凝集，即为B型血；3.如果试管1和试管2都发生凝集，即为AB型血；4.如果试管1和试管2都不发生凝集，即为O型血。
六、Rh血型的鉴定1.取一小号试管，用P3琼脂糖盐水洗涤试管内壁。
2.分别取少量被检血液样本和输血细胞加入试管中。
3.加入1滴抗D血清到试管中。
4.用试管架将试管在室温下静置20分钟。
5.观察试管的凝集情况。
七、结果判断如果试管发生凝集，即为Rh阳性；如果试管不发生凝集，即为Rh阴性。
八、实验注意事项1.实验过程中，要注意操作规范，避免交叉感染；2.抗人球蛋白试剂需保存在2-8摄氏度，使用前应在室温下放置30分钟；3.实验前，应检查试剂的有效期和质量；4.实验完成后，及时清理实验台面和试管，做好垃圾分类处理。
ABO和Rh（D）血型鉴定操作规程（盐水法）
ABO和Rh（D）血型鉴定操作规程（盐水法）ABO和Rh (D) 血型鉴定操作规程（盐水法）一．目的规范ABO/Rh (D) 血型鉴定的操作流程；保证临床用血的安全性及有效性。
二．职责血库技术人员负责ABO和Rh (D) 血型鉴定。
三．适用范围适用于血库ABO和Rh（D）血型鉴定血标本。
四．所需材料和设备1.材料抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本。
2.设备普通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。
五．操作步骤1.将标本2000r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制3%悬液。
2.取小试管3支，分别标明-A、抗-B、抗-D，用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%红细胞悬液1滴，混匀。
3.另取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入3% A、B、O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。
页脚内容14.以1000r/分钟离心1分钟。
5.将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检查。
6. ABO血型结果判定（见下表）：ABO血型结果判断分型试剂+受检者红细胞（正定型）受检者血清+试剂红细胞（反定型）抗-A 抗-B A细胞B细胞O细胞血型注：“＋”凝集；“－”不凝集7.Rh（D）血型判定：红细胞与抗-D试剂凝集为Rh (D) 阳性无凝集为Rh阴性。
8.凝集强度判断标准：页脚内容2。
Rh(D)血型鉴定标准操作程序
SOP_10-2 Rh(D)血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1. 原理：1.1 Rh血型系统：Rh血型是一个极为复杂的血型系统，其重要性仅次于ABO血型系统。
ISBT现已确定Rh血型系统中共有46个血型抗原。
其中主要的抗原D、C、c、E、e分别表示为RH1、RH2、RH3、RH4、RH5或004001、04002、004003、004004、004005。
其抗原中包括了五个抗原之间的复合体以及弱表达等等，但在临床中主要的问题大都出自这五个抗原:抗E、抗e、抗C、抗c、抗D。
用这五种抗血清检查红细胞抗原可以有18种表现型，在临床输血中一般只做D抗原的鉴定。
1.2 D抗原：含有D（正常D抗原）；弱D（weak D）；不完全D（partial D）；不完全弱D；增强性D（elevated D）；正常D抗原。
由于红细胞上的D抗原较少，弱D抗原不能与盐水抗体（IgM）凝集，只能通过与不完全抗体的结合用抗球蛋白试验检出Del。
一些非常弱的D型抗原，只能被吸收放散试验（如三氯乙烯和三氯甲烷放散法）检测出来。
1.3 Rh 抗体：Rh血型的免疫原性强度可能仅次于ABO血型，其中以D抗原最强，其次为E、c、C、e。
绝大部分Rh抗体为免疫抗体，但少部分可能为自然发生的抗体。
2 试剂：（1）抗D试剂，包括完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体及改性IgG抗体等低蛋白试剂；（2）Rh对照试剂（通常可用自身血清或抗A、B管代替）；（3）Rh阳性和阴性5%红细胞悬液；（4）待检2~5%红细胞悬液。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 操作：3.2.1 玻片法：使用完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体等低蛋白试剂。
不适合于输血前献血者和病人的血型鉴定，仅适合于临床体检时的RH血型鉴定。
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（5）轻轻重悬细胞扣，检查凝集
（6）评价反应强度，记录试验管和对照管得试验结果
【结果判定】
（1）抗D管凝集，对照管不凝集表明红细胞是RhD阳性
（2）对照管和抗D管均阴性，说明待测红细胞是RhD阴性结果
（3）对照管凝集则试验无效
2.玻片法
【样本】用玻片法进行RhD定型时，待检红细胞悬液的浓度是40%～50%
3.柱凝集法
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】已加入抗D试剂的柱凝集血型卡
【操作】
（1）配制好的检测样本的红细胞悬液和试剂红细胞悬液.通常配制为0.8%～1.0%浓度。
（2）在专用微柱凝集卡的RhD检测管中加入样本红细胞悬液50ul
（3）在专用血型血清学用离心机内离心
（4）判读并记录凝集反应结果
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血为阳性，不凝集为阴性
（5）不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板，持续大概2分钟
（6）读取，解释并记录所有玻片或白瓷板凹孔中的结果
【结果判定】
（1）抗D试剂与红细胞反应表现凝集，而对照为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阳性
（2）抗D试剂与对照均为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阴性
（3）对照管凝集则试验无效
【注意事项】玻片法可能存在感染性标本暴露的风险，需要注意防范；玻片法不适用于检测弱D表型
【参考文献】
中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第四版）
【试剂】适合用于玻片法的低蛋白抗D试剂
【操作】
（1）加1滴抗D到一洁净的玻璃片或白瓷板凹孔中，并做好标记
（2）加1滴适合的对照试剂到另一洁净的玻璃片或白瓷板凹孔中，并做好标记
（3）向以上玻片或白瓷板凹孔中的每一种试剂中分别加1滴混匀的40%～50%待检红细胞悬液
（4）充分混合抗体试剂和细胞，用搅拌棒将混合物均匀分散
对象：全院职工
医疗药事制度
文件名称：Rh（D）血型鉴定
编写日期：2014.1
修订日期：2017.4
执行日期：2017.4
注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科
Rh（D）血型鉴定
【原理】Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统。Rh血型系统常见的抗原有D和C、c、E、e五种，分别由RHD基因和RHCE基因编码，RhD和RhCE蛋白均是反复穿膜的蛋白质。使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E、抗e五种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，一般只做D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
1.试管法
【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于Rh鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。
【试剂】
（1）IgM抗D试剂
（2）Rh对照试剂
【操作】
（1）加1滴抗D到一洁净试管，并做好标记
（2～5%红细胞悬液到每支试管中