血清学试验 PPT
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免疫学课件——第七章 血清学反应
免疫学原理与技术
5.血清学反应的影响因素 电解质:抗原与抗体的反应需要在适当浓 度的电解质参与下,才出现可见反应.血清学反 应一般用生理盐水作稀释液,但禽类血清需用 8-10%的高渗氯化钠溶液. 温度:通常用370C水浴中,有的补体结合反 应在冰箱低温结合效果更好. pH:血清学反应常用的pH为6-8,过高或过 低的pH可使抗原抗体复合物重新解离.如pH 降至抗原或抗体的等电点时,可引起非特异性 的酸凝集,造成假象.
免疫学原理与技术
2.结合力和离解力 抗原和抗体的结合为弱能量的非共价键结 合,是分子表面的结合,这一过程受物理化学,热 力学的法则所制约,结合的温度应在0-400C范 围内,pH在4-9范围内,如温度超过600C或pH降 到3以下时,则抗原抗体复合物又可重新解离. 3.抗原抗体的结合比例 抗原与抗体的结合常需要适当的比例才出 现可见的反应,在最适比例时,反应最明显. 带现象:如抗原过多或抗体过多,则抗原抗 体的结合不能形成大的复合物,抑制可见反应 的出现. “格子学说”
免疫学原理与技术
三.血清学反应的应用 1.抗原或抗体的快速检测 2.生物活性物质的超微量测定 3.抗原或抗体在细胞和亚细胞水平的定位 4.抗原组成的分析 5.微生物鉴定和抗原分型 6.血型鉴定
免疫学原理与技术
四.血清学试验的发展趋向 技术上要求高特异性,高敏感性,高分辨率, 精密定位,简易快速;在方法上要求微量化,自动 化,标准化;试剂上要求商品化.
免疫学原理与技术
二.血清学反应的一般特点 1.特异性和交叉性 如肠炎沙门氏菌与鼠伤寒沙门氏菌 Ab1 Ag1
Ab2 Ag2 交叉反应是区分血清型和亚型的重要依据 关系数R R=√r1 *r2 x 100%
免疫学原理与技术
【宠物微生物课件】血清学试验
一、血清学试验概述
2、犬瘟热病毒抗体检测卡
犬瘟热是宠物临床常见的传染病之一
一、血清学试验概述
犬瘟热是宠物临床常见的传染病之一
一、血清学试验概述
犬瘟热病毒抗体检测卡结果判定
感谢各位聆听
血清学试验
第二阶段：出现可见反应
➢ 特点：作用较慢，需几分钟、几十分钟或更久。
一、血清学试验概述
（三）血清学试验的种类
01
凝集试 验；
03
补体结合 试验；
05
免疫标记技 术；
07
电免疫反 应；
02
沉淀试 验；
04
中和试验；
06
免疫复合物 散射反应；
一、血清学试验概述
（四）影响血清学试验的因素
01
02
电解质
一、血清学试验概述
2、反应的可逆性
抗原抗体结合是分子表面的结合，这一结合受理化因素影响， 如当温度超过60℃或pH降至3以下时，抗原抗体复合物出现 分离。
一、血清学试验概述
3、最适比与带现象
一、血清学试验概述
4、反应的二阶段性 第一阶段：抗原抗体结合
➢ 特点：作用快，只需几秒至几分钟即可，但无可见反应；Biblioteka ②可逆性④
阶段性:（1）特异性结合阶段。 (2）可见反应阶段。
一、血清学试验概述
1、特异性与交叉性
A抗原
表位1 表位2
免疫动物产生Ab1、Ab2。 Ab1、Ab2 + AgA 特异性反应 Ab1+AgB 交叉反应
B抗原
表位3 表位1
免疫动物产生Ab1、Ab3。 Ab1、Ab3 + AgB 特异性反应 Ab1+AgA 交叉反应
血清学诊断技术PPT课件
集,此孔稀释倍数为1个工作单位
12
中国农大动物医学院
鸡新城疫红细胞凝集试验（HA试验） (过程图)
孔号
1
稀释倍数
5
生理盐水（毫升） 4*
病毒液（毫升）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
10
20
40 80 160 320 640 1280
对照
25
25
25 25 25 25
25
25
25
25
25
25 25 25 25
3
中国农大动物医学院
三 器材 1.血凝板、 2.微量移液器 3.标准抗原 4.1%红细胞悬浮液 5.被检血清 6.稀释液
4
中国农大动物医学院
四 操作程序 （一）0.5％――１％红细胞的准备
1.阿氏液(抗凝剂)的配制
葡萄糖
1.866ｇ
柠檬酸钠 0.8ｇ
柠檬酸
0.055ｇ
氯化钠 0.418g
蒸馏水 100ml
15
中国农大动物医学院
2 操作步骤 (1) 每孔加25ul的稀释液: (2) 第1孔加25ul待检血清，反复吸吹10次; 吸取25ul于第 (3) 2孔，以此类推倍比稀释至第11孔; 最后从第11孔取2 (4) 5ul弃去,第12孔为抗原对照; (3) 每孔加4单位抗原;室温下( 18-22℃)作用30分 (4) 取1％红细胞25ul加于各孔中 (5) 将血凝板振荡1分钟 (6) 室温作用30-45分钟（禽流感 37℃）观察结果 (7) 结果判定 将血凝板呈45°竖起观察
5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白 细胞薄膜，将沉淀的细胞加稀释液（生理盐水）洗 涤，再用离心机3000转/分钟离心5-10分钟，充 去上清液，再加稀释液洗涤，
《临床输血检验技术》课件——新生儿血清学“三项试验”
想一想
简述新生儿溶血“三项试验” 的试验原理？
强弱是区别
ABO和Rh-HDN 的主要标志。
• 结果阳性还需 区别直抗类型。
• 设立阴性、阳 性对照
血浆游离抗体试验
用新生儿血清加上A、B型红细胞悬液，做酶法及间接抗人 球蛋白试验，并以此试验来验证新生儿血清中是否存在与其红 细胞不配合的IgG抗A或抗B，这些来自于母亲的IgG抗体可与新 生儿红细胞结合，婴儿可能受害，引起新生儿溶血病。
职业教育医学检验技术专业教学资源库
新生儿血清学“三项试验”
学习目标
掌握新生儿血清学“三项试验” 试验原理、操作方法及临床意义
直接抗人球蛋白试验
【直接检测新生儿红细胞上是否被不完全抗体所致敏】
在盐水介质中，不完全抗体可以致敏人红细胞，但不能让红细胞 凝集。加入抗人球蛋白试剂后，抗人球蛋白分子Fab段能与包被在红 细胞上球蛋白分子的Fc段结合，借助其桥梁作用，从而使已被不完全 抗体致敏的红细胞出现凝集，而未被抗体包被的红细胞则不出现凝集。
直接抗人球蛋白试验
洗涤 三次
50ul
待检全血 0.8%红细胞悬液
孵育 离心
判断结果
阳性：表示待检RBC已致敏 IgG不完全抗体或补体
阴性：表示待检RBC未致敏 IgG不完全抗体
直接抗人球蛋白试验
质量控制
标本
• 抗凝标本要立 即试验
• 冷抗体标本注 意保温
试验结果
其他
• Rh-HDN结果 一般大于2， 因此直抗结果
血浆游离抗体试验
阳性：表示待检血清或血浆中含 有试剂RBC相应抗原的抗体
阴性：表示待离心 判读结果
血浆游离抗体试验
检测意义
指示红细胞
实验七 血清学试验
④结果判定 判定结果时用“+”表示反应的强度。 判定结果时用“+”表示反应的强度 表示反应的强度。 液体完全透明， ﹟：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于 管底，振荡时，沉淀物呈片状、 管底，振荡时，沉淀物呈片状、块状或颗粒状 100％的菌体被凝集）。 （即100％的菌体被凝集）。 +++：液体略呈混浊， +++：液体略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管 振荡时情况如上（75％菌体被凝集）。 底，振荡时情况如上（75％菌体被凝集）。 ++：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀，振 ++：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀， 荡时有块状或小片絮状物（50％菌体被凝集）。 荡时有块状或小片絮状物（50％菌体被凝集）。 +：液体透明度不明显或不透明，有不甚显著的 液体透明度不明显或不透明， 沉淀或仅有沉淀的痕迹（25％菌体被凝集）。 沉淀或仅有沉淀的痕迹（25％菌体被凝集）。 液体不透明，管底无凝集， －：液体不透明，管底无凝集，有时管底可见有 一部分沉淀，但振荡后立即散开呈均匀混匀。 一部分沉淀，但振荡后立即散开呈均匀混匀。
2、琼脂扩散试验 称取1g琼脂粉 加至100ml 琼脂粉， ①琼脂板制备 称取1g琼脂粉，加至100ml 0.5% 石炭酸生理盐水中，煮沸使之溶解。 石炭酸生理盐水中，煮沸使之溶解。待温度降 55℃左右时浇玻板，厚约2 3mm左右 左右。 至55℃左右时浇玻板，厚约2～3mm左右。 在琼脂凝胶上打梅花孔，孔径为2mm， ②打孔 在琼脂凝胶上打梅花孔，孔径为2mm， 中间孔和周围孔间的距离大约为3mm。 中间孔和周围孔间的距离大约为3mm。 中间孔加炭疽沉淀血清， ③加样 中间孔加炭疽沉淀血清，周围孔中分别 加，炭疽沉淀抗原、待检抗原及盐水。 炭疽沉淀抗原、待检抗原及盐水。 将琼脂凝胶板放置湿盒中， 37℃ ④作用 将琼脂凝胶板放置湿盒中，于37℃扩散 24～72h，每天观察结果，观察三天。 24～72h，每天观察结果，观察三天。 抗原抗体扩散时， ⑤结果观察 抗原抗体扩散时，在两孔间比例最合 适的位置出现白色沉淀线， 适的位置出现白色沉淀线，出现白色沉淀线即 为反应阳性，不出现白色沉淀线为反应阴性。 为反应阳性，不出现白色沉淀线为反应阴性。
梅毒检测PPT课件
24
非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义
非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、 敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。
早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗
效观察、判愈、复发或再感染的指征。
编辑版ppt
25
非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点
非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性，此现象称为梅 毒血清反应假阳性。
编辑版ppt
40
TP—ELISA试验原理
TP—ELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原 包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗 体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标 记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反 应。本法可用于大规模血清检测。
编辑版ppt
41
梅毒免疫层析快速检测方法
编辑版ppt
42
梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义
梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT)
荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）
化学发光免疫分析法（CLIA）
梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
编辑版ppt
32
TPPA/TPHA
TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试 验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致 敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋 体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏 感性。明胶粒子为洋红色，在操作上也较为方便， 出结果较快。
方法：
暗视显微镜检查
镀银染色法：梅毒螺旋体具有亲银性，可
编辑版ppt
13
被银溶液染色
病原学检查的临床意义
病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体， 在临床可确诊梅毒，且具有快速、 方便、易操作的特点。
血清学试验
2、胶乳凝集试验
3、协同凝集反应
抗体致敏载体，载体为金黄色葡萄球 菌A蛋白（SPA） SPA具有与IgG的Fc段结合的特性。
第三节 沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、菌体 裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出 液等）与相应的抗体结合，在适量电介质存在 下，形成肉眼可见的细微的白色沉淀。
第一节 血清学试验概述
二、特点
特异性与交叉性 敏感性 反应的可逆性 反应的二阶段性 最适比与带现象 用已知测未知
第一节 血清学试验概述
三、影响血清学试验的因素 电解质 温度 酸碱度 震荡 杂质和异物
第一节 血清学试验概述
四、应用及发展趋向
血清学试验在医学和兽医学领域已广泛应用，可 直接或间接从传染病、寄生虫病检出相应的抗原 或抗体。 血清学试验还广泛应用于生物活性物质的超微定 量、物种及微生物鉴定和分型等方面。 血清学试验也用于基因分离，克隆筛选，表达产 物的定性、定量分析和纯化等，已经成为现代分 子生物学研究的重要手段。
酶联免疫吸附试验（简称ELISA ）
将抗原或抗体吸附于固相载体的表面，酶标 记物与相应的抗体或抗原反应后，形成酶标 记抗原抗体复合物，在遇到相应底物时，结 合物上的酶催化底物产生水解、氧化或还原 等反应，从而生成可溶性或不溶性的有色物 质，可用肉眼或酶标测定仪判定结果。颜色 的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因此， 可根据颜色的深浅来定量抗体或抗原。
第三节 沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀
第三节 沉淀反应 沉淀反应 （precipitation reaction)
输血前血型血清学检验PPT参考幻灯片
26
处理方法
获得性“B”现象
• 将抗B试剂酸化到pH6.0，就可区别“真B”和获 得性“B”。
• 酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。
2+ 表示部分RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
1+ 表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
± 表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底。
- 表示RBC全部沉积于胶底。
PH 表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留红细胞。
H 表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无红细胞。
红细胞)； b.撕开检测卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管
反应腔中加入1%待检RBC悬液各50ul； c.将检测卡置离心机，1800r/min 2min，
2500r/min 1min离心；
6
ABO、RhD血型抗原检测卡
4+ 表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。
3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层。
10
ABO正反定型不符结果分 析
• 假阳性结果 a.试剂、红细胞或盐水受到细菌污染； b.加样时交叉污染； c.加错样本; d.离心时间、速度过大; e.实验容器不洁; f.记录或结果判读错误。
11
ABO正反定型矛盾
抗体问题
正定型
反定型
抗A 抗B 抗AB
Ac Bc
-- -
--
12
抗体减弱或不产生原因
• 由肠梗阻、结肠或直肠癌和其他低位肠道有关的 疾病引起。
• 肠壁渗透性增加，细菌多糖吸附到红细胞上产生 B特异性。
• 也见于普通变形杆菌引起的败血症。
处理方法
获得性“B”现象
• 将抗B试剂酸化到pH6.0，就可区别“真B”和获 得性“B”。
• 酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。
2+ 表示部分RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
1+ 表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
± 表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底。
- 表示RBC全部沉积于胶底。
PH 表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留红细胞。
H 表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无红细胞。
红细胞)； b.撕开检测卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管
反应腔中加入1%待检RBC悬液各50ul； c.将检测卡置离心机，1800r/min 2min，
2500r/min 1min离心；
6
ABO、RhD血型抗原检测卡
4+ 表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。
3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层。
10
ABO正反定型不符结果分 析
• 假阳性结果 a.试剂、红细胞或盐水受到细菌污染； b.加样时交叉污染； c.加错样本; d.离心时间、速度过大; e.实验容器不洁; f.记录或结果判读错误。
11
ABO正反定型矛盾
抗体问题
正定型
反定型
抗A 抗B 抗AB
Ac Bc
-- -
--
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抗体减弱或不产生原因
• 由肠梗阻、结肠或直肠癌和其他低位肠道有关的 疾病引起。
• 肠壁渗透性增加，细菌多糖吸附到红细胞上产生 B特异性。
• 也见于普通变形杆菌引起的败血症。
医学检验实验课ppt课件
：
• 定量加样器 • 微量吸头 • 滤纸 • 37℃恒温水浴箱 • 洗板机 • 酶标仪
ppt课件.
19
实验准备：
• 取出试剂盒，室温平衡30分钟 • 配制洗涤液（1：25倍稀释） • 样本血清制备：用真空采血管
抽取空腹静脉血5mL，静置15分 钟后，以3500转/分, 离心5分钟, 分离血清备用。
ppt课件.
16
实验材料：
• 乙型肝炎病毒检测试剂盒
ppt课件.
17
试剂盒:
• 微孔反应板（48人份） • 酶结合物（6.2 mL *1瓶） • 阳性对照（1.0 mL *1瓶） • 阴性对照（1.0 mL *1瓶） • 洗涤液（40 mL *1瓶） • 显色剂A（8.0 mL *1瓶） • 显色剂B（8.0 mL *1瓶） • 终止液（7.0 mL *1瓶） • 封片（2张） • 说明书（1份）
2.是检测抗原最常用的方法。
ppt课件.
10
ppt课件.
11
二）间接法
• 标本中的待检抗体与固相抗原结合后，利
用酶标记抗抗体（抗人Ig）进行检测。
• 是检测抗体的最常用方法
ppt课件.
12
ppt课件.
13
三）竞争法
• 将待检抗原和酶标抗原与相应固相抗体竞
争结合，标本中抗原越多，与固相抗体结 合的酶标抗原越少，与底物反应生成的颜 色越浅，根据颜色深浅可定性或定量测定。
• 每次洗板要甩干微孔里的残液，避免残余
游离酶标记物显色干扰读数。
ppt课件.
22
实验第三步：
• 每孔先加入显色剂A液1滴（50微
升），再加入B液1滴（50微升）， 充分混匀
• 封板，置37℃水浴箱孵育15分钟。
• 定量加样器 • 微量吸头 • 滤纸 • 37℃恒温水浴箱 • 洗板机 • 酶标仪
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19
实验准备：
• 取出试剂盒，室温平衡30分钟 • 配制洗涤液（1：25倍稀释） • 样本血清制备：用真空采血管
抽取空腹静脉血5mL，静置15分 钟后，以3500转/分, 离心5分钟, 分离血清备用。
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实验材料：
• 乙型肝炎病毒检测试剂盒
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试剂盒:
• 微孔反应板（48人份） • 酶结合物（6.2 mL *1瓶） • 阳性对照（1.0 mL *1瓶） • 阴性对照（1.0 mL *1瓶） • 洗涤液（40 mL *1瓶） • 显色剂A（8.0 mL *1瓶） • 显色剂B（8.0 mL *1瓶） • 终止液（7.0 mL *1瓶） • 封片（2张） • 说明书（1份）
2.是检测抗原最常用的方法。
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10
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11
二）间接法
• 标本中的待检抗体与固相抗原结合后，利
用酶标记抗抗体（抗人Ig）进行检测。
• 是检测抗体的最常用方法
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三）竞争法
• 将待检抗原和酶标抗原与相应固相抗体竞
争结合，标本中抗原越多，与固相抗体结 合的酶标抗原越少，与底物反应生成的颜 色越浅，根据颜色深浅可定性或定量测定。
• 每次洗板要甩干微孔里的残液，避免残余
游离酶标记物显色干扰读数。
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22
实验第三步：
• 每孔先加入显色剂A液1滴（50微
升），再加入B液1滴（50微升）， 充分混匀
• 封板，置37℃水浴箱孵育15分钟。
梅毒实验检查ppt课件
一期与二期梅毒发病率：12.72/10万 ，增长8.4% 胎传梅毒发病率：66.55/10万活产数
2021精选ppt
11
2010年全国梅毒疫情地区分布
2021精选ppt
发病率位于前5位： 浙江：97.13/10万 广西：82.58/10万 上海：75.93/10万 福建：58.23/10万 新疆：52.97/10万
2021精选ppt
13
年龄组
梅毒实验室诊断
2021精选ppt
14
溃疡渗出物 ①
血清或血浆 ②
2021精选ppt
15
2021精选ppt
16
梅毒暗视野采样
标本采集部位：
皮肤或粘膜损害
有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净， 轻压皮损至渗液（避免出血）。然后用载玻片印取渗液，立即 检查，未破溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。
运动规律（旋转、伸缩或蛇行运动）
2021精选ppt
19
2021精选ppt
20
暗视野显微镜检查
结果解释—阳性
暗视野显微镜查阳性，临床上可确诊梅毒 特别对一期梅毒硬下疳，肿大淋巴结，二期梅 毒皮肤粘膜损害的诊断有重要价值，尤其使用 于早期梅毒血清学阴性时
2021精选ppt
21
暗视野显微镜检查
结果解释—阴性 阴性结果不能排除梅毒
性病研究实验室玻片试验（VDRL） 血清不需加热的反应素玻片试验（USR） 快速血浆反应素环状卡片试验（RPR） 甲苯胺红血清不需加热试验（TRUST）
2021精选ppt
26
RPR/TRUST
原理:
RPR:以黑色的炭颗粒作为指示标记物 TRUST:以红色的甲苯胺红颗粒作为指示标记物
2021精选ppt
11
2010年全国梅毒疫情地区分布
2021精选ppt
发病率位于前5位： 浙江：97.13/10万 广西：82.58/10万 上海：75.93/10万 福建：58.23/10万 新疆：52.97/10万
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年龄组
梅毒实验室诊断
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14
溃疡渗出物 ①
血清或血浆 ②
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16
梅毒暗视野采样
标本采集部位：
皮肤或粘膜损害
有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净， 轻压皮损至渗液（避免出血）。然后用载玻片印取渗液，立即 检查，未破溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。
运动规律（旋转、伸缩或蛇行运动）
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暗视野显微镜检查
结果解释—阳性
暗视野显微镜查阳性，临床上可确诊梅毒 特别对一期梅毒硬下疳，肿大淋巴结，二期梅 毒皮肤粘膜损害的诊断有重要价值，尤其使用 于早期梅毒血清学阴性时
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暗视野显微镜检查
结果解释—阴性 阴性结果不能排除梅毒
性病研究实验室玻片试验（VDRL） 血清不需加热的反应素玻片试验（USR） 快速血浆反应素环状卡片试验（RPR） 甲苯胺红血清不需加热试验（TRUST）
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RPR/TRUST
原理:
RPR:以黑色的炭颗粒作为指示标记物 TRUST:以红色的甲苯胺红颗粒作为指示标记物
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直接凝集试验 间接凝集试验
直接凝集试验
概念：颗粒性抗原与相应抗体在电解质的 参与下，直接结合，凝集成团的现象， 称直接凝集试验。
类型：按其操作方法可分为玻片法和试管 法。
1．玻片凝集试验
方法：在玻璃板或瓷 片上进行。
特点：简单、快速。 用途：定性试验，如
细菌鉴定、血型鉴定 等。
2．试管凝集试验
方法：在试管中进行。 特点：准确、耗时。 用途：定量试验，如
诊断布氏杆菌病，测 定抗体的凝集价。
结果判定 结果用“+”表示反应强度。 ++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底。 +++ ：液体透明，菌体基本被凝集沉于管底。 ++ ：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀。 + ：液体透明度不明显或不透明，有不明显的沉淀或有沉淀的痕迹。 — ：液体不透明，呈均匀混浊，管底无凝集。有时有少量菌体集中于管底中
交叉性 两种不同的抗原之间 含有共同的抗原决定 簇，则发生交叉反应 。
反应的二阶段性
第一阶段
第二阶段
抗原与抗体的特异性结 抗原抗体复合物出现可
Байду номын сангаас
合阶段，此阶段反应快、 见反应阶段。此阶段反
仅数秒至数分钟，但不 应慢、需数分钟、数十
出现可见反应。
分钟或更久。
敏感性
抗原抗体的结合还具有高度敏感 性的特点，不仅可检测定性，还 可以定量检测微量、极微量的抗 原或抗体。
上层沉淀原在液界面应形成白 色沉淀环。 用途：主要用于抗原的定性试 验，如炭疽杆菌的Ascoli试验、 链球菌的血清型鉴定、血迹鉴 定等。
沉淀原 白色沉淀环 沉淀素
琼脂凝胶扩散试验
原理
1%琼脂凝胶孔径为85nm，能使许多可溶性抗 原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝 胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成 沉淀线。
酸碱度：血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使 复合物解离，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。
振荡：适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞， 加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体 复合物解离。
杂质和异物：试验介质中如有与反应无关的杂质、异物 存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应。
用已知测未知
所有的血清学试验都 是用已知抗原测定未 知抗体，或用已知抗 体测定未知抗原。
影响血清学试验的因素
电解质：血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，
才出现可见反应。0.9%氯化钠溶液。8-10%
温度：在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体
分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速 抗原抗体结合和反应现象的出现 。
最适比例与带现象 抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现肉眼可见反应。抗体
除IgM是5价，SIgA 4价外，一般抗体都含有两个结合位点（二 价）；抗原则根据分子大小，有10～50个不等的结合点。当抗 原抗体比例适当时，两者结合后，尚有未饱和的结合点，可以 继续与游离的抗体、抗原或与抗原抗体结合物的未饱和点相联 结，逐渐形成愈来愈大的复合物，出现了肉眼可见反应。比例 最适合，出现反应最快，反应产物愈多。
心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。 以出现“++”的最高血清稀释倍数即为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物
（马，牛，骆驼等）以凝集价1：100以上判为阳性，1：50的凝集价判为可 疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1：50以上判为阳性，1：25的凝集 价判为可疑。 如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。
血清学试验的类型
凝集试验 沉淀试验 补体结合试验 中和试验 免疫标记技术
凝集试验的概念
细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附 在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的 可溶性抗原，与相应抗体结合后，在 有适量电解质存在下，经过一定时间， 复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集 团块，称为凝集试验。
凝集试验的类型
间接凝集试验
概念：
将可溶性抗原或抗体与载 体连接后，再与相应的抗 体或抗原作用，所出现的 特异性凝集反应为间接凝 集试验。
类型：
间接血凝试验 乳胶凝集试验 协同凝集试验
间接血凝试验原理
红细胞
抗原
致敏红细胞
被检抗体
致敏红细胞
红细胞凝集
凝集强度判定 ＋ （100%红细胞凝集）：边缘不整齐，有红色颗粒布满孔底） ± （50%红细胞凝集）V型孔：孔底可见红色颗粒，中央有少量
血清学诊断
血清学试验的概念
由于抗体主要存在于 血清中，所以将体外 发生的抗原抗体结合 反应称为血清学反应 或血清学试验。
血清学试验的特点
特异性和交叉性 敏感性 可逆性
反应的二阶段性 最适比例与带现象 用已知测未知
特异性和交叉性
特异性 抗原只能与相应抗 体结合，而不能与 其他抗体相结合。
琼脂凝胶扩散试验类型
如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达 到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合， 不出现可见反应，谓之带现象。
前
带
后
带
可逆性
抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这种 结 合 是 可 逆 的 ， 结 合 条 件 为 0℃ ～ 40℃ 、 pH4～9。如温度超过60℃或pH降到3以下， 或加入解离剂时，则抗原抗体复合物又可重 新解离，并且分离后抗原或抗体的性质仍不 改变。
以能使100%红细胞不发生凝集的血清最大稀释倍数为该血清的HI 滴度，以2的指数表示。
沉淀试验的概念
可溶性抗原与相应 的抗体结合，在适 量电解质存在下， 经过一定时间，形 成肉眼可见的白色 沉淀，称为沉淀试 验。
沉淀试验的类型
环状沉淀试验 琼脂凝胶扩散试验 免疫电泳
环状沉淀试验
方法：在小口径试管中进行。 原理：试管内，下层沉淀素与
红细胞沉淀 － 红细胞呈点状沉于孔底，无红色颗粒。
能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，为该病毒的红细胞 凝集滴度，即一个凝集单位。如表18-1-1的病毒血凝滴度为27， 即将病毒原液作27倍稀释，其中含一个血凝单位的病毒。
由于病毒血凝抑制试验中需要的病毒液应含4个血凝单位，因此， 需要对原病毒液进行25倍稀释。
直接凝集试验
概念：颗粒性抗原与相应抗体在电解质的 参与下，直接结合，凝集成团的现象， 称直接凝集试验。
类型：按其操作方法可分为玻片法和试管 法。
1．玻片凝集试验
方法：在玻璃板或瓷 片上进行。
特点：简单、快速。 用途：定性试验，如
细菌鉴定、血型鉴定 等。
2．试管凝集试验
方法：在试管中进行。 特点：准确、耗时。 用途：定量试验，如
诊断布氏杆菌病，测 定抗体的凝集价。
结果判定 结果用“+”表示反应强度。 ++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底。 +++ ：液体透明，菌体基本被凝集沉于管底。 ++ ：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀。 + ：液体透明度不明显或不透明，有不明显的沉淀或有沉淀的痕迹。 — ：液体不透明，呈均匀混浊，管底无凝集。有时有少量菌体集中于管底中
交叉性 两种不同的抗原之间 含有共同的抗原决定 簇，则发生交叉反应 。
反应的二阶段性
第一阶段
第二阶段
抗原与抗体的特异性结 抗原抗体复合物出现可
Байду номын сангаас
合阶段，此阶段反应快、 见反应阶段。此阶段反
仅数秒至数分钟，但不 应慢、需数分钟、数十
出现可见反应。
分钟或更久。
敏感性
抗原抗体的结合还具有高度敏感 性的特点，不仅可检测定性，还 可以定量检测微量、极微量的抗 原或抗体。
上层沉淀原在液界面应形成白 色沉淀环。 用途：主要用于抗原的定性试 验，如炭疽杆菌的Ascoli试验、 链球菌的血清型鉴定、血迹鉴 定等。
沉淀原 白色沉淀环 沉淀素
琼脂凝胶扩散试验
原理
1%琼脂凝胶孔径为85nm，能使许多可溶性抗 原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝 胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成 沉淀线。
酸碱度：血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使 复合物解离，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。
振荡：适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞， 加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体 复合物解离。
杂质和异物：试验介质中如有与反应无关的杂质、异物 存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应。
用已知测未知
所有的血清学试验都 是用已知抗原测定未 知抗体，或用已知抗 体测定未知抗原。
影响血清学试验的因素
电解质：血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，
才出现可见反应。0.9%氯化钠溶液。8-10%
温度：在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体
分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速 抗原抗体结合和反应现象的出现 。
最适比例与带现象 抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现肉眼可见反应。抗体
除IgM是5价，SIgA 4价外，一般抗体都含有两个结合位点（二 价）；抗原则根据分子大小，有10～50个不等的结合点。当抗 原抗体比例适当时，两者结合后，尚有未饱和的结合点，可以 继续与游离的抗体、抗原或与抗原抗体结合物的未饱和点相联 结，逐渐形成愈来愈大的复合物，出现了肉眼可见反应。比例 最适合，出现反应最快，反应产物愈多。
心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。 以出现“++”的最高血清稀释倍数即为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物
（马，牛，骆驼等）以凝集价1：100以上判为阳性，1：50的凝集价判为可 疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1：50以上判为阳性，1：25的凝集 价判为可疑。 如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。
血清学试验的类型
凝集试验 沉淀试验 补体结合试验 中和试验 免疫标记技术
凝集试验的概念
细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附 在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的 可溶性抗原，与相应抗体结合后，在 有适量电解质存在下，经过一定时间， 复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集 团块，称为凝集试验。
凝集试验的类型
间接凝集试验
概念：
将可溶性抗原或抗体与载 体连接后，再与相应的抗 体或抗原作用，所出现的 特异性凝集反应为间接凝 集试验。
类型：
间接血凝试验 乳胶凝集试验 协同凝集试验
间接血凝试验原理
红细胞
抗原
致敏红细胞
被检抗体
致敏红细胞
红细胞凝集
凝集强度判定 ＋ （100%红细胞凝集）：边缘不整齐，有红色颗粒布满孔底） ± （50%红细胞凝集）V型孔：孔底可见红色颗粒，中央有少量
血清学诊断
血清学试验的概念
由于抗体主要存在于 血清中，所以将体外 发生的抗原抗体结合 反应称为血清学反应 或血清学试验。
血清学试验的特点
特异性和交叉性 敏感性 可逆性
反应的二阶段性 最适比例与带现象 用已知测未知
特异性和交叉性
特异性 抗原只能与相应抗 体结合，而不能与 其他抗体相结合。
琼脂凝胶扩散试验类型
如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达 到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合， 不出现可见反应，谓之带现象。
前
带
后
带
可逆性
抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这种 结 合 是 可 逆 的 ， 结 合 条 件 为 0℃ ～ 40℃ 、 pH4～9。如温度超过60℃或pH降到3以下， 或加入解离剂时，则抗原抗体复合物又可重 新解离，并且分离后抗原或抗体的性质仍不 改变。
以能使100%红细胞不发生凝集的血清最大稀释倍数为该血清的HI 滴度，以2的指数表示。
沉淀试验的概念
可溶性抗原与相应 的抗体结合，在适 量电解质存在下， 经过一定时间，形 成肉眼可见的白色 沉淀，称为沉淀试 验。
沉淀试验的类型
环状沉淀试验 琼脂凝胶扩散试验 免疫电泳
环状沉淀试验
方法：在小口径试管中进行。 原理：试管内，下层沉淀素与
红细胞沉淀 － 红细胞呈点状沉于孔底，无红色颗粒。
能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，为该病毒的红细胞 凝集滴度，即一个凝集单位。如表18-1-1的病毒血凝滴度为27， 即将病毒原液作27倍稀释，其中含一个血凝单位的病毒。
由于病毒血凝抑制试验中需要的病毒液应含4个血凝单位，因此， 需要对原病毒液进行25倍稀释。