月季的植物组织培养开题报告

月季的植物组织培养开题报告

一、实验目的意义

通过月季的植物组织培养实验，对植物组织培养技术进行初步了解，认识植物组织培养的重要性和发展潜能，并了解月季的特征及生长习性，锻炼自己独立做实验、独立思考的能力。

二、实验材料和方法

1.实验材料：月季（取材自天津师范大学主校区明理楼旁边）

2.实验步骤

①称取6.5g～12g琼脂，先用蒸馏水置1000ml搪瓷杯浸泡2小时后充分洗去杂质。弃去浸

液用无离子水再洗1～2次，并加入500ml无离子水在电炉上溶化。边搅拌边溶化，直至完全溶化备用。

②另取蔗糖30g于上述溶液中搅拌完全溶解备用。

③另按MS培养基用量量取无机大量微量元素及有机成分的母液于一烧杯中，并完全倒入

②液中搅拌溶解混匀备用。

④按目的要求用取样器加入各种激素并搅拌混匀，加稀碱或稀释酸调pH值应比目的要求

的pH值稍高0.1～0.2。定溶1000ml。

⑤趁热大于60℃分装于培养瓶中，应边搅拌边分装液体，根据要求的量分装。一般液体的

厚度掌握在1cm左右为宜。分装时不得将液体粘落至瓶口上。

⑥将培养瓶封口塞棉塞、包牛皮纸系线绳。

⑦另取Ф5cm的滤纸若干，置Ф9cm的培养皿中并用牛皮纸包好准备灭菌。

⑧另取无离子水若干不得超过瓶内总体积的70%，加棉塞包牛皮纸，灭菌制备无菌水。另

取清毒瓶包好备用。

⑵灭菌

①检查有无漏电漏水现象，加无离子水的3升，将要灭菌的物品平稳地放置高压锅套桶

内。

②盖上锅盖水平拧好螺栓，打开放气阀，接通电源加热，待放气阀处水汽充分溢出时盖

上放气阀，待压力升至0.05Mpa时打开放气阀放气至压力回到零位时盖上放气阀升压。

③待压力达0.12～0.15Mpa时，开始计时，使调压器自220V回调170～180V左右维持

30分钟断电。

④待压力回降至零位时，打开锅盖错开一缝隙使热蒸汽迅速溢出烘干包纸和瓶塞。

⑤趁热取出被灭菌之物，将培养瓶置平稳处使培养瓶中的培养基凝固。23小时后查有无

细菌，48小时后查有无霉菌，如有杂菌应及时处理，无杂菌备用。

⑶接种

①取材：将采集的月季茎段冲洗干净，分装到烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸

没并轻摇15s进行欲消毒；倒出酒精，加入0.1%二氯化汞浸没；倒净二氯化汞。用无菌水冲洗3次，将废液倒弃备用。

②解下培养瓶上包头纸的线绳，并将培养瓶整齐地排列在接种台的左侧，然后用70%的酒

精棉球从内向外擦接种台面。

③在酒精灯下用用镊子在消毒瓶内取出材料置于培养皿内的无菌滤纸上吸干水分，右手持

镊子左手拿灭过菌的解剖刀迅速地将茎段切成剪成每段2～3cm至少有1个侧芽，用镊子将外植体迅速地在酒精上接入培养瓶内。

④在酒精灯火焰上转动瓶口和棉塞进行灼热灭菌，迅速塞好棉塞、包好包头纸，系好线绳，

移出净化台或接种箱，写好标签，外植体的名称、种类、接种日期、接种人等，移入培养室进行培养。

⑷培养有愈伤组织的外植体

①配制分化培养基：MS+6BA2+NNA2培养基，灭菌后分装到三角瓶中。

②挑选有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。在超净工作台中，将培养瓶封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从培养瓶中取出，转移到分化培养瓶中并封口。

③标记好后，放入培养室培养。继续观察愈伤组织的生长情况。

三、已具备的条件：已对月季查阅相关文献作了综述；本人阅读关于月季材料，对月季较熟悉；有生物学基础知识，有能力购买所需要的材料；具备做植物组织培养的仪器设备包括空间条件。

四、流程安排

1 . 配制培养基母液

2. 配制培养基

3. 取材接种培养（随时观察生长情况）

4. 观察月季出芽情况

5. 观察愈伤组织情况（随时观察生长情况）