PCR电泳实验步骤
实验2-PCR与琼脂糖凝胶电泳-New
1）吸取18µl水稻总DNA+3µl loading buffer, 混匀
Mark DNA: 5µl λDNA-HindⅢ
2） PCR产物+3µl loading buffer，混匀
Mark DNA : 5µl 100bp DNA 5、电泳：打开电源开关，调节电压至3-5 V/cm（约 100V），注意电极方向（可见到溴酚蓝条带 从负极向正极移动）；约30min后可观察 。
10× PCR buffer：
500mM KCl 200mM Tris-HCl（pH8.3）
0.01% 明胶 （ gelatin ）
15-20mM MgCl2
1×TBE缓冲液（1000ml）：电场中的导体 Tris 硼酸 EDTA 10.8 g 5.5 g 0.93 g
载样缓冲液（6×）：含指示剂溴芬蓝和二甲苯青，可在 可见光下指示样品的泳动过程 溴芬蓝 二甲苯青 甘油 0.25 % 0.25 % 30 %
0.2 µ l 引物R（10 µ M） :22179R
0.2 µ l Taq酶（5U/ µ l） 15.2 µ l ddH2O Total 18.0 µ l 模板DNA， 混匀，放入PCR仪中开始反应
最后加 2 µ l
PCR技术
PCR反应混合液（总体积20 µl）
成 份 ddH2O 1 15.2 n n × 15.2 10 152 25 380
72 ℃，延伸5 min PCR反应在带热盖的PCR仪上进行，大约
需要2小时。
电泳技术
3、制胶（浓度为2%）：
1）称取2.0g 琼脂糖，加入盛有200ml 1×TBE电泳缓冲 液的500ml蓝盖瓶中，摇匀，在微波炉上加热至琼脂 糖完全溶解，冷却到60 ℃，加入10µl Goldview并摇 匀。
PCR技术详细步骤-从RNA抽提到电泳鉴定
PCR技术详细步骤－从RNA抽提到电泳鉴定最近在做PCR，发点相关知识，大家共同学习。
RNA抽提一，准备工作1，实验器具与材料：（1）移液枪：1ml、200ul、10ul（2）吸头：1ml、200ul、20ul（3）吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个（4）EP管1.5ml、100ul（5）玻璃研磨器（6）容量瓶：1000ml（7）盐水瓶：100ml（8）15ml塑料管一个（配75％乙醇用）2，实验器具的处理与准备（1）塑料制品：（包括吸头、EP管等）将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中（必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水）37℃过夜，然后送至高压3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小时左右烘干），试验前将枪头放入吸头台。
（2）玻璃制品：（主要是玻璃研磨器）先泡酸过夜，冲洗干净后，在1‰DEPC水中泡8小时左右，37℃烘干，用蒙锡纸包裹送至干烤3次。
（3）金属制品：（镊子等）先洗干净，再送干烤3次。
（不需要泡DEPC水）3，试剂配制和准备：（1）DEPC水：泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml 容量瓶中静置4小时后备用。
配75％乙醇的DEPC水的配制：100ml盐水瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，送至高压。
（2）75％乙醇（要在抽提时现配）：用无水乙醇和DEPC水配制（DEPC水:无水乙醇＝1:3），然后放于-20℃备用。
（3）异丙醇：放入棕色瓶（4）氯仿：放入棕色瓶（5）Trizol：100ml/瓶存放于4℃二，抽提时注意事项：全程佩戴一次性手套和口罩，手套要勤换，避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。
三，抽提步骤1．匀浆化作用取约100mg鼠脑组织放于玻璃研磨器内，先加0.2ml的Trizol溶液，研磨组织后，倒入1.5mlEP 管中，再在研磨器内加入0.8ml的Trizol溶液洗，后全部再倒入EP管中。
PCR的基本步骤及注意
PCR的基本步骤及注意聚合酶链反应（PCR）是一种体外扩增特定DNA序列的技术，可以在短时间内生成大量目标DNA分子。
这项技术有助于分子生物学、基因工程、医学诊断和法医学等领域的研究。
1.临床分配试剂和试管：将PCR反应所需的试剂和试管按需求分配到不同的试管中。
要确保试剂处于适当的温度，避免暴露于高温和冷藏温度。
2.准备DNA样本：从所需样本中提取目标DNA序列。
此步骤可能需要使用DNA提取试剂和特定的样本处理方法。
3.DNA扩增：在PCR试管中，添加目标DNA序列的模板，然后加入DNA聚合酶、引物（前向和反向引物）和缓冲液。
将试管放入PCR热循环仪。
4.PCR循环条件：PCR循环通常包括三个步骤：变性、退火和延伸。
变性步骤将模板DNA变性为两条单链DNA；退火步骤允许引物与目标序列配对；延伸步骤将DNA聚合酶沿引物向目标DNA序列延伸，并在每个PCR循环中产生新的DNA分子。
5.PCR循环次数：PCR反应包含多个PCR循环，每个循环都由变性、退火和延伸步骤组成。
PCR循环次数的选择取决于所需扩增的目标DNA的数量。
6.凝胶电泳：将PCR反应产物进行凝胶电泳检测。
通过电泳可以将PCR产物分离出来，并根据其大小进行检测和分析。
PCR注意事项如下：1.PCR试剂的储存和使用：所有PCR试剂都应存储在适当的温度下，并且在使用之前应检查其有效期。
如果试剂过期，可能会对PCR反应产生不可预测的结果。
2.样本处理和DNA提取：样本处理和DNA提取步骤的准确性对PCR结果的可靠性至关重要。
应遵循标准样本处理和DNA提取的步骤，并确保使用无污染的试剂和材料。
3.引物的设计：引物是PCR反应中的重要组成部分，其设计应遵循一定的原则。
引物应具有与目标DNA序列特异性互补的序列，并且长度应适当，通常在20-30个碱基对之间。
4.反应混合物的准备：在混合PCR反应的试管中，应遵循正确的操作步骤，确保所有试剂都得到正确添加，并完成适当的混合。
PCR技术的基本原理和过程变性实验报告结果
PCR技术的基本原理和过程变性实验报告结果摘要本文旨在探讨PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理和过程，以及变性实验的报告结果。
PCR技术是一种常用于体外合成和扩增DNA片段的方法。
通过PCR技术的原理和步骤的介绍，我们可以更好地理解PCR技术的应用和局限性。
在实验报告结果中，我们描述了PCR过程中DNA的变性和变性试验结果的分析。
介绍PCR技术是一种体外扩增DNA片段的方法，它是由银行衍生的一种复制机制。
PCR 技术的发现和发展在分子生物学和基因工程领域起到了重要的推动作用。
PCR技术的基本原理是通过循环性反应在体外进行DNA片段的扩增，这种反应是由聚合酶催化的。
PCR技术的基本原理PCR技术主要包括三个步骤：变性（Denaturation）、退火（Annealing）和延伸（Extension）。
变性变性步骤是将DNA双链分离为两个单链的过程。
该步骤需要在较高的温度下进行，以确保DNA双链被完全分开。
分离的过程主要是由于高温对DNA的双键结构产生破坏作用。
退火退火步骤是将引物与已变性的DNA片段结合的过程。
引物是一段小的DNA序列，它是为了将扩增反应限制在特定的DNA片段上而设计的。
退火的温度要低于变性步骤的温度，以确保引物与目标DNA序列的互补结合。
延伸延伸步骤是在合成的引物的作用下，通过聚合酶催化的反应在DNA片段的末端合成新的DNA链。
在延伸的过程中，聚合酶利用游离的核苷酸以及DNA模板，合成与模板DNA相互补的新链。
变性实验报告结果实验方法我们选择了一个特定的DNA片段作为实验对象，并使用PCR技术进行扩增。
实验步骤如下：1.准备PCR反应体系，包括引物和DNA模板。
2.进行PCR反应，包括变性、退火和延伸步骤。
3.将PCR产物进行电泳分析。
4.分析电泳图像并得出结论。
实验结果我们的实验结果表明，经过PCR反应后，我们成功扩增了目标DNA片段。
电泳分析结果显示，在PCR反应后产生了一个清晰的DNA条带，该DNA条带的大小与我们预期的目标DNA片段大小相符。
实验4转基因植物PCR基因扩增及电泳检测
实验4转基因植物PCR检测四、转基因植物PCR基因扩增及电泳检测一、实验目的1.学习转基因植物PCR基因扩增的基本原理。
2.掌握转基因植物PCR基因扩增的基本操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术。
二、原理PCR检测技术的基本原理是根据食品中待检的外源基因核酸序列设计合适引物，经PCR反应使待检靶标DNA序列得以扩增放大，最后经凝胶电泳分析靶标PCR产物的有无，从而对食品中是否含有靶标转基因序列成分进行判定。
由于目前商品化的绝大多数转基因食品普遍含有CaMV35S启动子和NOS终止子这两种基因表达调控序列或其中之一，而CaMV35S启动子和NOS终止子的DNA序列早已公开。
故在对食品样品的转基因背景一无所知的情况下，根据CaMV35S启动子和NOS终止子的DNA序列设计合适引物，通过PCR反应检测食品中是否含有CaMV35S启动子和NOS终止子基因序列，来判定该食品是否为转基因食品。
三、试验材料提取的甘薯基因组DNA。
四、试剂4.1 PCR反应引物序列35S：5，-GCT CCT ACA AAT GCC ATC A-3，//5，-GAT AGT GGG ATT GTG CGT CA-3，；NOS：5，-GAA TCC TGT TGC CGG TCT TC-3，//5，-TTA TCC TAG TTT GCG CGC-3，。
4.2 PCR反应试剂：无菌去离子水；模板DNA；20 μmol / LPCR 引物；5U/μL Taq DNA 聚合酶；2.5 mmol / L dNTPs；10×PCR 缓冲液；25 mmol / L MgCl2，25 mmol / L KCl , 20 μg / mL 灭菌无核酸酶的牛血清白蛋白4.2 核酸电泳相关试剂（见实验6）五、仪器5.1 PCR扩增仪。
5.2 微量移液器。
5.3 吸头。
5.4 电泳仪。
5.5 电泳槽。
5.6 凝胶成像仪。
5.7 PCR管。
六、实验步骤6.1 转基因植物PCR基因扩增6.1.1.1 按待检样品数（每一个样品分设35S和NOS两个检测反应）并加空白对照、阴性对照、阳性对照，取一定数量的无菌无污染的洁净干燥PCR管，按下表用记号笔在管壁上编号：6.1.1.2 之后按上述顺序依次加入各PCR反应液。
PCR实验操作程序
PCR实验操作程序点击次数：679 作者：佚名发表于：2009-03-27 16:39转载请注明来自丁香园来源：丁香园一、实验步骤1. 在无菌的0.5ml或0.2ml离心管中按下列操作程序加样：2. 用微量可调加样器和一次性Tip向每一管中加50μl矿物油。
每加一管换一次Tip。
3. 振荡每只管，然后短暂离心。
4. 将管放到预热的热循环中，按下列程序开始循环：5. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，分析结果。
电泳条件：60-80V，15-20分钟。
6. 紫外分析仪检查电泳结果。
二、讨论1. 假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量，④PCR循环条件。
寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板：①模板中含有Taq酶抑制剂，②在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。
③模板核酸变性不彻底。
在酶和引物质量好时，不出现扩增带，有可能是模板核酸提取过程出了毛病，可使用阳性对照的D NA模板配合检查模板质量。
酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。
引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。
有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。
②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。
如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。
③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏，导致引物变质降解失效。
④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。
Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
pcr操作流程和步骤
pcr操作流程和步骤PCR（聚合酶链式反应）是一种用于复制DNA片段的技术，它在分子生物学和遗传学研究中被广泛应用。
PCR操作流程包括DNA模板的变性、引物的结合、DNA合成和扩增等步骤。
下面将详细介绍PCR的操作流程和步骤。
首先，准备PCR反应体系。
PCR反应体系包括DNA模板、引物、dNTPs（四种脱氧核苷酸）、聚合酶、缓冲液和水。
将这些试剂按照一定比例混合在一起，制备PCR反应混合液。
第二步是变性。
将PCR反应混合液加热至94-98摄氏度，使DNA双链解旋成两条单链。
这一步称为变性，它使DNA变性，使得引物可以结合到DNA模板上。
第三步是引物的结合。
将PCR反应混合液冷却至50-65摄氏度，使引物与DNA模板结合。
引物是一种短的DNA片段，它可以识别并结合到DNA模板的特定区域。
第四步是DNA合成和扩增。
将PCR反应混合液加热至72摄氏度，使聚合酶开始合成新的DNA链。
聚合酶是一种酶，它能够在引物的引导下合成新的DNA链。
通过多轮循环，可以扩增目标DNA片段。
最后，进行PCR产物的分析。
将PCR反应产物进行电泳分析，可以检测扩增的DNA片段是否符合预期。
通过PCR反应，可以快速、高效地复制目标DNA片段，为分子生物学和遗传学研究提供了重要的工具。
总的来说，PCR操作流程包括准备PCR反应体系、变性、引物结合、DNA合成和扩增等步骤。
掌握PCR技术可以帮助科研人员在实验室中快速、准确地复制DNA片段，为科学研究提供了重要的支持。
PCR技术的发展不仅在基础研究中发挥着重要作用，还在医学诊断、法医学和生物工程等领域有着广泛的应用前景。
PCR技术的不断完善和发展将进一步推动生命科学领域的发展。
简述PCR的实验原理和步骤
简述PCR的实验原理和步骤PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是一种在实验室中广泛使用的分子生物学技术，用于在体外扩增特定的DNA片段。
PCR的原理基于DNA的复制过程，通过使用特定的引物和DNA聚合酶，可以在几小时内从微小的DNA片段扩增出大量的目标序列。
以下是PCR实验的基本原理和步骤。
实验原理PCR实验的原理基于DNA复制的自然过程，其中涉及三个关键步骤：变性、退火和延伸。
1.变性（Denaturation）：将DNA样本加热至高温（通常为95°C），使DNA双链解离成两个单链。
这个步骤破坏了氢键，使DNA解开。
2.退火（Annealing）：将温度降低至适宜引物结合的温度，引物（一对短的DNA序列）与目标序列的两端互补结合。
这个步骤使引物定位在目标序列上。
3.延伸（Extension）：在退火温度下，加入DNA聚合酶和四种核苷酸（dNTPs），在引物的引导下，DNA聚合酶开始合成新的DNA链。
这个步骤使目标序列的DNA链得以扩增。
完成一个PCR周期后，复制的DNA数量翻倍。
每个PCR周期以变性步骤开始，完成三个步骤后，一个新的PCR周期开始，复制数量继续增加，直到达到所需的DNA扩增倍数。
实验步骤PCR实验的步骤通常包括以下几个主要步骤：1. 样本处理首先，需要从包含目标DNA的样本中提取DNA。
这可以通过常用的DNA提取方法来实现，例如酚/氯仿提取或商用DNA提取试剂盒。
2. PCR反应体系准备准备PCR反应液，其中包括引物、DNA模板、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液和辅助试剂。
确保反应液的成分和浓度符合实验要求。
3. PCR程序设置根据所需扩增的DNA片段大小和实验要求，设置PCR的温度程序。
通常，PCR程序包括变性、退火和延伸的温度和时间参数。
4. PCR反应将PCR反应液分装到反应管中，并在PCR仪中进行PCR反应。
按照设置的程序进行变性、退火和延伸的温度变化，并保持所需的PCR周期数。
凝胶电泳和PCR实验
实验二凝胶电泳和PCR实验一．凝胶电泳实验器材：电泳槽，电泳仪，制胶板，胶带，微波炉，凝胶成像系统，移液枪实验试剂：琼脂糖，Tris.base，冰乙酸，EDTA，DNA MAKER（D2000 PLUS），实验步骤：1.配电泳液（TAE缓冲液）：称量Tris 24.2g，Na2EDTA.2H2O 1.86g于烧杯中；向烧杯中加入约80ml去离子水，充分搅拌均匀；加入5.71ml的冰乙酸，充分溶解；用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至100mL后，室温保存。
使用时稀释50倍即1×TAE Buffer。
2. 配胶：先用胶带将制胶板两头封严，称量0.9%琼脂糖（即30ml胶加0.27g琼脂糖）凝胶（用电泳液配），一个制胶板约30ml凝胶。
用微波炉溶胶，待冷却一阵加入荧光染料2ul混匀，倒胶，立即插上梳子。
约20分钟后即可用，轻轻拔出梳子，将板放入电泳槽。
3. 点样：将待跑样品加1ul loading buffer点入点样孔，最后点2ul DNA Marker4. 跑胶：连接电泳槽，注意正负极，DNA从负极向正极跑，110V跑30分钟.5. 成像：将胶小心从胶版上拿起，放在紫外灯下照射拍照二．PCR实验PCR体系（20ul）：模板：0.5ul引物：上下游各0.3uldNTP: 2ulbuffer: 2ulrTaq酶：0.25ulddH20：14.7ulPCR条件：94°3min94°30s60°30s 30次72°45s72°10min4°forever实验三. PCR产物纯化：实验试剂：TE缓冲液( 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0) 1 mmol/L EDTA(pH 8.0))，酚氯仿异戊醇，NaAc，无水乙醇实验步骤：1. 加约5倍体积的TE缓冲液，混匀2. 加等体积酚氯仿异戊醇，混匀，室温12000rpm离心5min3. 取上清，加1/10体积的3mol/L的NaAc(PH5.2)和2.5倍的冰冷无水乙醇4. -20°冰箱，放置30min以上5. 4°，12000rpm离心5min6. 弃上清，加1ml冰冷的70%乙醇。
pcr实验室流程
pcr实验室流程PCR实验室流程PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，用于扩增特定DNA片段。
PCR实验室流程是进行PCR实验的一系列步骤，下面将详细介绍。
1. 设计引物PCR实验的第一步是设计引物。
引物是用于扩增目标DNA片段的短序列，通常由20-30个碱基组成。
引物应具有高度特异性，能够与目标DNA片段的两端互补结合。
此外，引物的长度、GC含量和熔解温度也需要考虑，以确保PCR反应的特异性和效率。
2. DNA模板提取接下来，需要从样品中提取DNA模板。
DNA模板可以来自各种生物样品，如细胞、组织、血液等。
提取方法通常包括裂解细胞膜、蛋白酶处理和有机溶剂萃取等步骤。
提取的DNA应具有高纯度和完整性，以保证PCR反应的准确性和可靠性。
3. PCR反应体系准备准备PCR反应体系是PCR实验的关键步骤。
PCR反应体系包含DNA 模板、引物、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）、聚合酶（如Taq聚合酶）、缓冲液和Mg2+等组分。
这些组分的浓度和配比需要根据实验要求进行调整，并保持反应体系的稳定性和特异性。
4. PCR反应条件设定PCR反应的条件设定是为了使PCR反应在最佳温度和时间下进行。
PCR反应通常包括三个步骤：变性、退火和延伸。
变性步骤将DNA 双链解开，退火步骤使引物与目标DNA片段互补结合，延伸步骤用于合成新的DNA链。
PCR反应的温度和时间应根据引物的特性和目标DNA片段的长度进行优化。
5. PCR反应程序设置PCR反应程序的设置是为了控制PCR反应的温度和时间变化。
常用的PCR反应程序包括常规PCR、逐渐升温PCR和快速PCR等。
不同的PCR反应程序适用于不同的实验目的，可以提高PCR反应的特异性和效率。
6. PCR反应进行将PCR反应体系加入PCR反应管中，放入PCR仪中开始PCR反应。
PCR反应的时间通常在数十分钟到数小时之间，具体时间取决于目标DNA片段的长度和引物的特性。
PCR的实验步骤
总RNA的抽提1.匀浆 1份样本+3份抽提剂，加样枪吹打几次，剧烈涡旋混匀至少1分钟，在15-30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
2.样品可在-60℃~-70℃保存至少1个月。
3.分离15份抽提剂+4份氯仿，用力摇晃试管15秒，在30℃条件下孵育2-15分钟，2-8℃下以不超过12000*g的离心力高速冷冻离心15分钟。
4.沉淀将水样层转移到一干净的试管中，3份抽提剂+2份异丙醇，在15 -30°C条件下孵育10分钟并在2~8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心10分钟。
5.漂洗移去上层悬液。
3份抽提剂+至少4份75%乙醇。
溶于75%的乙醇在2~8°C至少可以保存一周，在–5~–20°C下至少可保存一年。
旋涡振荡混合样品并在2~8°C下以不超过7,500×g的离心力高速冷冻离心5分钟。
6.再溶解空气干燥或真空干燥5~10分钟，分几次移取无RNA酶的水来溶解RNA，并在55~60°C下孵育10分钟。
RNA完整性检测1.电泳缓冲液Tris 242g+乙酸57.1ml+0.5M EDTA200ml→→dH2O 补足至1000ml （贮存液），使用时按1：49的比例稀释成工作液。
2.制胶②(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,④将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液加入溴化乙锭，充分摇匀（即成1.0%琼脂糖凝胶液）。
3.制板①取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干；③放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在距离底板0.5～1.0mm的位置上放置梳子；④将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上（凝胶的厚度在3～5mm之间）,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层；⑤室温下静置（30min左右）直至凝胶完全凝固,当胶正凝固时，准备RNA 样品并取适量（如5μl）加1μl加样缓冲液混合，加样液中包含染料溴酚蓝BPB；⑥垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中，加样孔一侧靠近阴极（黑末端），注入适量的TAE缓冲液，通常缓冲液高于胶面1cm。
琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物
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7
❖ 溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当 DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动 时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化 乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物， 使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在溴化 乙锭足够的情况下，荧光的强度正比于DNA 的含量，这样就可以检测DNA的浓度。
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5
❖ 琼脂糖是一种线性多糖聚合物。 ❖ 浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。
琼脂糖浓度(%)
0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 12.0
线型DNA分子的分离范围 (Kb)
5～60
1～20
0.8～10
0.5～7
0.9～6
0.2～3
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0.1～2
6
➢ DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分 子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同， 电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。
❖ 12. 取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果。
❖ 13.. 根据需要切下DNA条带，放入1.5ml Ep管中， 放于4℃保存，以备下实验用。
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22
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PCR产物的 琼脂糖凝胶电泳
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使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带）进行1% 的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb， 750bp，500bp，250bp，100bp。
实验二 琼脂糖凝 胶电泳检测PCR产物
PCR具体操作步骤
PCR具体操作步骤引言聚合酶链式反应（PCR）是一种在分子生物学领域广泛使用的技术，用于扩增特定的DNA片段。
PCR基于重复的温度循环，通过DNA引物和DNA聚合酶的作用，以指数级别增加目标DNA的数量。
本文将详细介绍PCR的具体操作步骤。
实验材料•目标DNA样本•PCR引物•DNA聚合酶•反应缓冲液•MgCl2•dNTP混合物•蒸馏水•PCR试管•PCR仪操作步骤1.制备PCR反应体系根据所需扩增片段的DNA序列，设计引物序列。
引物的浓度通常为10-100pmol/μL。
将引物和其他PCR反应物（聚合酶、反应缓冲液、MgCl2和dNTP混合物）按照配方比例加入PCR试管，并加入足够的蒸馏水使总体积达到适当的浓度。
2.样本DNA的加入取一小部分目标DNA样本（如基因组DNA或cDNA）加入PCR试管中。
要确保样本DNA的数量不过多，以免抑制PCR反应的进行。
3.混合反应溶液使用微量移液器或移液枪轻轻混合试管内容物，使所有反应物均匀混合。
4.设置PCR仪参数根据所需的扩增循环数和目标DNA片段的长度，设置PCR仪的参数。
一般而言，PCR反应的典型参数为：初步变性（94-98°C，3-5分钟），循环：变性（94-98°C，30秒），退火（30-68°C，30秒），延伸（68-72°C，30-60秒），最终延伸（68-72°C，5-10分钟）。
5.进行PCR反应将PCR试管放入PCR仪中，运行设定的PCR程序。
6.分离扩增产物完成PCR反应后，可通过凝胶电泳等方法分离扩增产物。
将PCR反应液加入凝胶孔中，施加电压进行电泳。
根据目标DNA片段的预期长度，较长的片段迁移速度较慢，较短的片段迁移速度较快。
7.结果分析使用凝胶电泳成像系统或其他相关设备观察PCR产物的带状图案。
如果PCR反应成功，预期的目标DNA片段将出现在相应的位置上。
结论PCR是一种强大的分子生物学技术，通过反复的温度循环，可以在短时间内扩增目标DNA片段。
PCR-SSCP实验操作详细步骤
PCR-SSCP实验步骤一．样品制备1．PCR扩增并检测。
根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。
扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测，上样量3-5ul。
PCR产物为10ng/nl左右为最佳。
2．PCR产物与变性buffer混合。
在干净的PCR管底部加入5ul SSCP上样缓冲液（变性缓冲液，同《分子克隆》中的测序缓冲液），然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。
按照经验，扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul，效果很好加0.5ul，如果不太好就适当增加1.5、2或3不等，同时加大上样缓冲液的量，比如加3ul的PCR产物，缓冲液加到8ul变性效果更好。
3．PCR产物变性。
加好的样品进行离心，使样品集中在管底。
PCR仪上95℃变性10分钟，立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min，以免变性的产物复性。
注：3和4步可以在制SSCP胶第四步后，等胶凝的过程中进行。
二．制胶1．装板。
在所要进行实验的每一副玻璃板先用自来水冲洗，然后使用ddH2O冲洗，然后使用吸水纸将玻璃板擦拭干，然后再玻璃板上涂抹无水酒精，待2-3min酒精挥发。
将玻璃板组装好放入凝胶架子中，两边及底部固定好，两玻璃板保持水平，然后将发条拧紧。
（可用无水乙醇测试是否漏胶）。
2．配胶。
甘油浓度50%的几种浓度大板胶（10ml下层胶，5ml 浓缩胶）配方（两块胶1.0mm）：甘油浓度50%的几种浓度小板胶（15ml下层胶，10ml 浓缩胶）配方（两块胶1.5mm）3．灌胶。
配好胶后搅匀，灌入装好的玻璃板中，注意不能产生气泡，如果产生气泡把板立起，轻轻敲打可使气泡升出胶面，胶面与凹板上沿大约差0.5cm时插上梳子，要保证梳子齿和液面接触处没有气泡，一旦产生要拔出重插。
4．静置。
灌好的胶平放或与水平成一比较小的角度（10o以下）静置水平桌面上30min左右使之充分聚合。
注：此时可以进行PCR样品变性，即第一部分的3、4步。
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水稻DNA提取，扩增与电泳实验
一、1掌握DNA的提取技术2掌握PCR的相关操作3掌握了解电泳操作方法和步骤
二、实验原理：1、提取DNA一般用水稻幼叶，先用机械方法液氮研磨植物组织使组织细胞破碎，然后加TPS抽提液水浴提取DNA，最后用无水乙醇沉淀DNA即可。
（DNA提取原理）2、DNA在高温时可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。
（PCR原理）3、琼脂糖凝胶电泳：借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离。
三、实验仪器和药品
液氮、镊子、手套、移液枪、枪头2ML和1.5ML离心管、水稻幼叶、研磨棒、琼脂糖、天平、PCR仪、Loading Buffer染色剂、灭菌双蒸水、摇床、离心仪、Taq酶、Mg2+Buffer、dNTP 溶液、引物、TPS抽提液、无水乙醇、电泳槽、GoldView、TBE溶液、微波炉、锥形瓶、量筒、PCR板、PCR盖、水浴箱、Marker
四、实验步骤
1、DNA提取
（1）取水稻叶子少量置于2ML离心管内，加入液氮研磨，带磨成粉状后，加1MLTPS抽提液，然后将离心管放入75℃恒温水浴箱中至少半小时。
同时将无水乙醇放入-40℃下冷冻（2）水域结束后，取出离心管放入离心仪中，13600r/min离心12min，然后小心的取出离心管，将上清液转移到1.5ml离心管中0.5ml，加入600ul冷冻的无水乙醇，放入-80℃下冻10min，拿出放入离心仪13600r/min离心5min
（3）到处上清液，倒置，晾干约3h
（4）加入双灭菌水60ml，放入摇床中振荡一夜。
2、PCR
（1）按所需配料表，向PCR板中加入双蒸水,mix,前引物，后引物，然后加入提取的DNA，混匀
（2）将PCR板放入PCR仪中运行SSR程序
3、电泳
（1）称取0.3g琼脂糖和30mlTBE溶液。
混匀倒入锥形瓶中，加热溶解混匀。
待冷却至不烫手时加入GoldView，混匀，倒入已经插好梳子的配胶槽中，冷却30min至1h
（2）将冷却好的凝胶拔掉梳子后放入电泳槽中（将有点样孔的一端靠近负极）然后按照顺序点样，每个样的用来那个为4ul，在中间的空上点Marker溶液3ul
（3）打开电泳开关，电泳32min左右
（4）电泳结束后，将胶取出，放入透视镜下照射，拍照，读带
五注意事项
1、提取dna的时候用乙醇是沉淀时，必须将乙醇冰冻
2、在PCR之前加2ulDNA时要将枪头插入液面下。