药物制剂微生物检验

二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
1.平皿法
10g/ml 供试品
1.0ml 10-1
9.0ml 9.0ml
10倍递增稀释法
10-2
1.0ml
10-3
稀 释 液
9.0ml
对照
倒置培养3d
30~35℃ 营养琼脂 培养基
对照
1.0ml
对照
23~28℃
倒置培养5d
玫瑰红钠 琼脂培养 基
对照
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
二、药品微生物限度检测的基本条件
二、药品微生物限度检测的基本条件
检查 环境 和人 员要 求
环境要求:无菌室内进行。背景洁净度C级 下的局部A级(洁净操作台），单向流空气。 操作人员：卫生、着装符合要求。
操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。
二、药品微生物限度检测的基本条件
㈡
方 法
由于某些供试品具有抗菌活性，在建 立测定方法或原测定法的检验条件发生改 变时，可能影响检验结果的准确性，必须 对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性 进行验证。
三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查
胆盐乳糖培养基 十六烷三甲基 溴化铵琼脂
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
增 菌 培 养
18~24h
30-35℃
分 离 纯 化
灰白色、扁平、 周围有水溶性 蓝绿色素
18~24h
30-35℃
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
★铜绿假单胞菌检查流程图
2.为防止细菌增殖及产生菌苔，制 成供试液后，应尽快稀释，注皿。 一般稀释后应在1小时内操作完毕。
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
3.操作注意事项
3.使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不 用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附 的溶液混入其中。 4.注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往 往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落 少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情 况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操 作技术误差。
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
4.菌落计数及报告方法
宜选取细菌、酵母菌平均菌落数在30-300之间、霉菌 平均菌落数小于100 cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位 有效数字）的依据。 （1）当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的 平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数;当有2个或2个以上稀释 级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍 数的值报告之。 （2）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级 的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低 稀释倍数的值报告菌数。
无菌检查
凡直接进入人体血液循环系统、肌肉、皮
下组织或接触创伤、溃疡部位而发生作用 的制品或要求无菌的材料、灭菌器具都要 进行无菌检查。
• 注射用制剂：注射剂、输液、注射粉针等； • 眼用制剂：滴眼剂、眼用膜剂、凝胶剂、软膏剂
等； • 植入型制剂：植入片等； • 创面用制剂：溃疡、烧伤及外伤用溶剂、软膏剂 及气雾剂等 • 手术用制剂、止血海绵、骨蜡等
各稀释度菌落数
1 ∶102 295 1 ∶103 46 1.6 37750 38000
比值
菌落数
报告数
2
2890
271
60
2.2
27100
27000
细菌总数检查表
培养温度：30℃-35℃ 培养基名称：营养琼脂培养基（批号：14040901）
菌 落 数 （cfu) 稀释度 培养时间（h) 1 平皿号 2 3 24 10-1 48 72 24 10-2 48 72
三、控制菌检查－大肠埃希菌检查
胆盐乳糖M EMB琼脂/麦康 凯琼脂平板
配培 养基 和稀 释液
蓝白萤光 玫瑰红色液面
供试 液的 制备
增 菌 培 养
荧靛 光基 检质 查试 验
检查 结果 判断
一阴 一阳
分 离 纯 化
双阳或双阴性
书写检验 记录单
最终结 果判断
菌落特征→革兰染色、镜检 →生化试验:乳糖发酵 试验、IMViC试验
平均菌落 数
特殊药品微生物限度检验
品种
检测项
聚维酮碘溶液
氧氟沙星滴耳 盐酸利多卡因 脑得生袋泡茶 液 胶浆
细菌数
≤20cfu/ml
≤20cfu/ml
≤200cfu/g
≤200cfu/g
霉菌与酵母菌 数
≤20cfu/ml
≤2cfu/ml
≤20cfu/g
≤20cfu/g
其它
金黄色葡萄球 金黄色葡萄球 菌、铜绿假单 菌、铜绿假单 胞菌、白色念 胞菌不得检出 珠球菌不得检 /ml 出/ml
革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验 生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验
黄绿色 菌膜 灰白色 湿润
十六烷三甲基溴化铵平板
胆盐乳糖培养基
粉红/ 紫红色
氧化酶试验
盐酸层呈粉紫色 氯仿层呈蓝绿色
N2
绿脓菌素试验
硝酸盐还原产气试验
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
4.菌落计数及报告方法
例次各稀释级（供试液1ml/皿）平均菌落数（cfu） 原计 0 － 0 0 10-2 8 64 420 0.5 0 0 0 10-3 2 8 64 0 0 0 － 报告方式 (CFU/g,ml，10cm2） 640 6400 64000 ＜ 100 ＜ 100 ＜ 10 ＜ 1
二、药品微生物限度检测的基本条件
1.检测用量 ㈢
取 样 量 2.检测量
①所有剂型＞2个 最小包装 ②大蜜丸≥4丸 ③膜剂≥4片
①半/固体制剂：10g ②液体制剂：10ml ③膜剂：100cm
二、药品微生物限度检测的基本条件
检查菌
培养基 营养琼脂 玫瑰红钠琼脂
培养温度 30℃～35℃ 23℃～28℃ 23℃～28℃ 细菌：30℃～35℃ 真菌：23℃～28℃
MUG阳性:紫外光下 管内培养物呈现 蓝白色荧光
★大肠埃希菌检查结果报告
检出大肠 埃希菌
MUG阳性，靛基质阳性 MUG阳性，靛基质阴性，IMViC为－＋－－，GMUG阴性，靛基质阳性，IMViC为＋＋－－，G-
三、控制菌检查－大肠菌群检查
★大肠菌群检查意义
大肠菌群主要存在于温血动物粪便中， 随粪便排出体外后可直接污染药品，若产 品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污 染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，以 此作为粪便指示菌比大肠埃希菌更具广泛 卫生学意义。
＜1
0.01g或0.01ml
三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查
★铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌属于假 单胞菌属，为革兰氏阴性 杆菌，氧化酶阳性，能产 生绿脓菌素。此外还能液 化明胶，还原硝酸盐为亚 硝酸盐，在42℃±1℃条 件下能生长。
三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查
★铜绿假单胞菌检查意义
铜绿假单胞菌在特殊情 况下可引起皮肤化脓感染、 泌尿道感染、中耳炎等。外 伤及烧伤患者感染后最易引 起化脓，并引起败血症。为 保证消费者安全，化妆品中 不得检出铜绿假单胞菌。
2.薄膜过滤法
10g或10ml 供试品
10－1 供试液
取相当于1g或1ml 供试液用滤膜过滤、 冲洗 取下滤膜，菌面朝 上放培养基上培养 结果观察 与计数
书写检验 记录单
数据 处理
封闭式薄膜过滤器
传统开放式薄膜过滤器
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
3.操作注意事项
1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成 一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。
培养时间 3 days 5 days 5 days
㈣ 培 养 条 件
细菌数 真菌数
酵母浸出粉胨葡 酵母菌数 萄糖琼脂
控制菌
二、药品微生物限度检测的基本条件
㈤ 结 果 判 断
供试品检出控制菌或其它致病菌时，按一次检 出结果为准，不再复试。 供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一 项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品 中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均 值报告菌数。 供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项 检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品 符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下 的规定，判供试品不符合规定。
三、控制菌检查－检查流程
供试品
增菌培养
分离培养 纯培养
报告结果
生化反应试验
染色镜检
三、控制菌检查－检查流程
1.增菌培 养目的
使被检药物中的 被检菌增殖，避 免出现漏检。
三、控制菌检查－检查流程
2.分离培 养目的
经增殖培养后,被检菌大
量繁殖，同时其他一些
杂菌也出现增殖。因此
分离培养能使目的菌从 混合菌中分离出来。
1 2 3 4 5 6 7
细菌总数＝平均菌落数×稀释倍数
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
当有两个相邻稀释级的菌落数在30-300之间——比值＜＝
2时，则以2个稀释级的平均值报告。比值＞2时，则以低 稀释级的平板菌落数乘以稀释倍数报告。
比值=
编号
1∶10 2 2760
高稀释级的平板菌落数*稀释倍数 低稀释级的平板菌落数*稀释倍数
第三节 药品微生物限度检测方法
微生物检验基本流程
1、领取并配制培养基 2、擦拭工作台及墙壁 3、开启紫外灯灭菌1h 4、进行微生物实验 5、实验完成后再次擦拭工作台
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
1、平皿法
供试液 的制备 混合平板 的制备
细菌、真 菌的培养
书写检验 记录单
数据 处理
检查结果 、 观察与计数
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
3.操作注意事项
5.为检查和控制灭菌效果，应做空白对照， 以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过