脂肪干细胞的体外培养PPT讲稿
脂肪干细胞培养2011-3-5
干细胞论坛脂肪干细胞培养吸脂术时用无菌针管从臀上方吸取深层脂肪组织20 mL. 在1 h内将其移至离心管内，加入等量PBS缓冲液，充分振荡后低速离心800 r/min×10 min. 反复冲洗3次后加入等量15 g/L I型胶原酶. 37℃水浴中充分振荡30 min，再加入等量胎牛血清（FBS）中止. 低速离心10 min后弃去上清. 将下层细胞用PBS悬浮后加入16 mmol/L NH4Cl 37℃水浴中10 min以裂解红细胞. 低速离心10 min后再用PBS冲洗3次. 最后将细胞用含100 mL/L FBS+10 g/L青霉素的DMEM悬浮后移入培养瓶中，37℃，50 mL/L CO2培养箱中孵育，48 h后首次换液，弃去悬浮细胞. 随后每3 d换液，1 wk后传代. 将第3代细胞用于流式细胞仪检测. 浓集细胞到109/L后进行流式细胞仪检测. 细胞传至第3代时将其以2×107/L 的细胞数分别转入各定向培养基中进行培养. 诱导培养2 wk后，对成脂诱导组进行油红Ｏ脂肪颗粒染色，另外：现在脂肪干细胞缺乏特异的表面标志鉴定，各类文献提到脂肪干细胞表达阳性的标志物有：cd13，cd29，cd59，cd49e，cd73，cd90，HLA-ABC等。
但表达阳性不代表具有特异性，所以要从标志物上鉴定脂肪干细胞还是很困难的，应该说不具有很强的说服能力。
按文献所说的步骤来提取脂肪干细胞，形态类似干细胞，并且具有多向分化的能力，这就足以说明提取的细胞是干细胞。
你要是想证明你养的就是干细胞，最好的办法我认为还是做个多向诱导分化。
干细胞传代吸出来以后，常速离心，用pbs洗两遍后，accutase管内消化5-10min，加入基础培养基离心洗去消化液，分瓶传代。
人脂肪干细胞的分离、体外培养及鉴定[摘要]目的: 进行人脂肪干细胞的分离、体外培养及鉴定, 为组织工程的进一步研究提供实验依据。
方法: 将剪碎的人脂肪组织加入Ⅰ型胶原酶消化, 离心。
人脂肪干细胞的体外培养鉴定及分化特性_赵建辉
自从２００１年Ｚｕｋ等［１］人从抽脂脂肪中发现脂肪干细胞（ａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍ／ｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，ＡＳＣｓ）以来，关于ＡＳＣｓ的研究迅速增多，现已成为整形美容外科研究热点之一。
ＡＳＣｓ是一群成纤维细胞样的基质干细胞，能分化为不同的细胞系［２］，包括脂肪细胞［３］、骨细胞［４］、软骨细胞［５］、骨骼肌细胞［６］、心肌细胞［７］、内皮细胞［８］、神经细胞［９］等等。
ＡＳＣｓ不仅在整形外科应用于自体脂肪移植、创面愈合等，而且在心肌缺血、神经系统疾病、组织工程等领域中也有着广泛的用途。
Ｋｏｔａｒｏ等［１０－１４］从２００３年就开始采用细胞辅助脂肪移植术（ｃｅｌｌ－ａｓｓｉｓｔｅｄｌｉｐｏｔｒａｎｓｆｅｒ，ＣＡＬ），将ＡＳＣｓ应用到自体脂肪移植隆胸和软组织填充中，取得了不错的临床效果。
随着研究的不断深入，ＡＳＣｓ将是很有临床应用前景的干细胞。
1材料和方法１．１实验材料１．１．１主要试剂：ＤＭＥＭ－ＨＧ培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ），胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ），胰酶消化液（碧云天），Ⅰ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ），青－链霉素（Ｈｙｃｌｏｎｅ），苏木精（上海蓝季科技公司），曙红Ｙ（Ｓｉｇｍａ，ｗｏｌｓｅｎ分装），牛胰岛素（Ｓｉｇｍａ），吲哚美辛（Ｓｉｇｍａ），地塞米松（Ｓｉｇｍａ），β－甘油磷酸钠（Ｓｉｇｍａ），左旋抗坏血酸（科昊生物），３－异丁基－１－甲基黄嘌呤（Ｓｉｇｍａ），茜素红（天津科密欧），Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（碧云天）。
１．１．２主要仪器：细胞培养孵箱（Ｔｈｅｒｍｏ），超净工作台（江苏苏净集团有限公司ＳＷ－ＣＪ－１ＦＢ），台式低速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司ＴＤＺ５－ＷＳ），空气恒温摇床（上海福玛实·基础研究··论著·人脂肪干细胞的体外培养鉴定及分化特性赵建辉１，李龙２，杨阳１，易成刚１，刁建升１，夏炜１，刘蓓１，郭树忠１（１．第四军医大学西京医院全军整形外科研究所陕西西安７１００３２；２．第四军医大学口腔医院口腔颌面外科）[摘要]目的：在体外从脂肪块中分离出脂肪干细胞（ａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍ／ｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，ＡＳＣｓ），对其进行形态观察、干细胞鉴定、增殖和分化能力检测。
脂肪干细胞抗衰老和美容演示文稿
干细胞抗衰老
干细胞抗衰老疗法也称“再 生医疗技术”，对医学界称 为“万用细胞”的干细胞进 行分离、体外培养、定向诱 导、甚至基因修饰过程，在 体外繁育出全新的细胞并最 终通过细胞移植，实现抗衰 老的目的，是目前国际上最 为有效的抗衰老治疗手段。
干细胞抗衰老技术最显著的特点就是：能 再造一种全新的、正常的甚至更年轻的细 胞、组织或器官，所以会产生返老还童效 2020果/4/30，去年40岁今年30岁已经成为现实。
◆延缓衰老，保持年轻状态 ◆改善神经系统功能，改变精神面貌 ◆改善生殖系统功能，增强性功能 ◆调节运动系统功能，增强机体活力 ◆调节免疫功能，改善内分泌 ◆改善消化系统功能，全面补充营养 ◆皮肤年轻化 ◆净化排毒 ◆预防疾病，综合治疗 ◆抗辐射、抗基因突变
2020/4/30
干细胞抗衰老--适用人群
3.KGF角质细胞生长因子 促进角质层细胞的新陈代谢，维持角质层的厚度，三 天到七天局部脱屑。
4.TGF β1 转化生长因子β 1 多功能的蛋白多肽，修复增加肌肤免疫力，双向调节， 促进凋亡，抑制细胞增殖效果：2次到3次有长胖的感 觉，4次以后明显紧实饱满。
2020/4/30
脂肪干细胞产生的活性物质和作用
2020/4/30
脂肪干细胞产生的活性物质和作用
9.IL-6白细胞介素-6 有造血功能，增加免疫力
10.纤维连接蛋白 伤口修复，促进伤口愈合
11.Type Ⅰ Collagen I型胶原蛋白，占全身胶原蛋白的30%，成年人含有3 公斤，支撑、修复、保护的作用。
2020/4/30
干细胞抗衰老主要功效
胞总量下降。 ➢ 外环境和基因的共同作用加速细胞老化。 ➢ 体内干细胞数量及活力均减少。
最新 人脂肪间充质干细胞体外分离培养方法-精品
人脂肪间充质干细胞体外分离培养方法间充质干细胞属于成体干细胞，广泛存在于骨髓、脂肪和脐带等组织，下面是小编搜集整理的一篇探究干细胞体外分离培养方法的，供大家阅读查看。
大面积皮肤缺损、重度烧伤的传统修复方法-自体或异体皮肤移植，因存在免疫排斥和供区不足等缺陷而限制了广泛临床应用。
近年来，干细胞相关机制及应用的研究为皮肤创伤的治疗带来了新突破。
研究显示，间充质干细胞能维持皮肤稳态和促进皮肤创面修复，其机制包括促进细胞分化、免疫调节和分泌生长因子来促进创面再上皮化和血管形成[1-2].人脂肪间充质干细胞(humanadipose-derivedmesenchymalstemcells,hAD-SCs)是由Zuk等[3]首次从抽脂术脂肪中分离出的一类具有多向分化能力的细胞群，因其具有来源丰富、容易获取和扩增快等优点，是组织工程的理想种子细胞。
本实验旨在提供一种有效的hADSCs体外分离培养方法，为以后临床细胞移植提供实验基础。
1材料与方法1.1材料成人腹部大网膜脂肪组织7例取自江苏大学附属医院产科剖宫产手术患者，年龄17~33岁，平均为26岁，健康状况良好，无系统性疾病。
低/高糖DMEM、Ⅰ型胶原酶(Gibco公司),胎牛血清(Hyclone公司),鼠抗人单克隆抗体CD29-FITC、CD44-FITC、CD45-FITC、CD73-FITC、CD90-PE、CD105-PE、CD166-PE、HLA-DR-PE及其相应同型对照(eBio-sciences公司),地塞米松、抗坏血酸磷酸盐、β-甘油磷酸钠、吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、胰岛素(Sigma公司).1.2方法1.2.1hADSCs细胞分离培养产科无菌条件下取出腹部大网膜脂肪组织约10ml,PBS清洗，剪碎，0.1%Ⅰ型胶原酶37℃消化45min,10%胎牛血清终止消化，离心，沉淀重悬，200目细胞筛过滤，再离心。
加入完全培养液(含10%胎牛血清、1×双抗的低糖DMEM)重悬，以5×104/ml接种于6孔板，置于37℃,5%CO2培养箱中培养，48h后首次换液，之后每周换液2次，待细胞生长至80%融合时，0.25%胰酶-0.02%EDTA消化传代。
脂肪干细胞讲座课件
• 3、脂肪干细胞能够储存多少年？ • 我们采用先进的液氮深低温罐（-196℃）储存脂肪干细胞，现有的
程控降温，添加细胞内、外保护剂等技术。时时检测，每年初检测 报告，脂肪干细胞常规上是可以长期保存的。
• 三、储存脂肪干细胞为什么要选择天晴
• 1、最先进的干细胞储存技术 • （1）自动化、全封闭式分离技术和深低温气相储存技术，将交叉
• 2、
组织细胞修复
• 脂肪干细胞表现出了在组织修复中的强大威力，临床克隆氏症中瘘管修复 以及肠粘膜修复中脂肪干细胞具有巨大的潜力；另外，脂肪干细胞诱导后 可以向胰岛素分泌细胞分化，为广大的糖尿病患者治疗带来了光明和希望。
• 3、
器官替代
• 利用3D技术打印出人体肾脏、膀胱、肝脏已经成为现实，而3D技术的核 心就是细胞、工程材料和细胞因子。利用脂肪干细胞强大的分化能力分化 出同一组织中的不同细胞和细胞生长因子，再利用3D打印技术、结合工程 材料，获得人工器官，进行器官替代疗法，已经不是遥远的传说。
B、延续生命，生命的银行
• 脂肪干细胞可以分化成如下组织细胞，用于以下疾病的临床治疗。 • （1） 脂肪细胞： 各种烧伤手术、除皱填充、乳房填充手术等医
疗美容手术；
• （2） 成骨细胞: 股骨头缺血性坏死的股骨，骨折，接骨之后不愈 合；
• （3）软骨细胞: 骨关节疾病； • （4）心肌细胞：心肌病，心梗死，高血压； • （5） 肌腱， 韧带：各种韧带肌腱损伤； • （6） 神经元：中风，帕金森，脊髓损伤等； • （7） 肝脏细胞：肝脏疾病； • （8）胰腺的胰岛细胞： 糖尿病等疾病的治疗；
A、养生、抗衰老、保持年轻态
• 随着年龄的增长，机体细胞出现老化，于是人们从年轻开始逐渐的 衰老，从健康开始逐渐的出现各种疾病。脂肪干细胞，全面提高人 体机能，改善人体退变现状，使机体保持青春活力和年轻状态，逆 转衰老：
脂肪干细胞PPT课件
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24代细胞表面marker鉴定
CD105＋
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猪AMSC细胞系建立的初步研究
研究表明，脂肪细胞由中胚层间充质干细胞发育而 来，近30多年来对脂肪细胞的研究主要使用的是鼠源性前 体脂肪细胞系和原代前体脂肪细胞。但是这两者都是已经 定向的单能细胞，只能分化为成熟的脂肪细胞，因此这两 个体外培养体系的研究只能局限于前体脂肪分化为成熟脂 肪细胞这一阶段的细胞和分子事件。
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成肌诱导后的形态学观察
A
B
C
D
成肌诱导
成肌诱导第7天出现细胞球形变化(A)，诱导第14天开始出现接触、融合。部分出现伪 足，形态变长(B)，诱导第21天周围梭形细胞明显减少，形成巨大的球形细胞(C,D)。上 图为茜素红染色。
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免疫荧光染色
成肌诱导
成肌诱导后肌红蛋白(myoglobin)免疫荧光染色
脂肪间充质干细胞向不同细胞分化是在特异性诱导因子作用下进行的。 下面介绍常用的一些多向诱导分化因子及诱导后的细胞特性。
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细胞类型 脂肪细胞 成骨细胞 骨骼肌细胞 心肌细胞 神经元细胞 内皮细胞
诱导物
细胞特性
地塞米松,异丁基甲基黄 细胞中充满脂滴，油红o染色
嘌，胰岛素等
阳性
2-磷酸抗坏血酸, β-甘油 钙化性基质产物 ，茜素红染
结果：在成骨诱导分化的早期（第7天），可检测到成骨特异性基因Ⅰ型骨胶 原和骨钙素的表达，随着诱导时间的增加，2个基因的表达量呈上升趋势。
第24页/共48页
成骨诱导
上述结果说明：在合适诱导剂下，猪脂肪 间充质干细胞形态和排列均发生变化，成纤维 样的长梭形变为成骨样的方块形，细胞堆积呈 卵圆形或方形，茜素红染色和 RT-PCR均表明 可以诱导分化成骨细胞。
脂肪组织来源的干细胞体外培养随机恶性转化
Ｎｅ ｕ ｒ ｏ ｓ ｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ ， Ｃｈ ａ ｏ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｃｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ， Ｃｈ ａ ｏ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ ２ １ ０ ２ １ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
Ｐ Ｃ ＮＡ、Ｋｉ ６ ７和 ＶＥ Ｇ Ｆ — Ｃ ， 不表达 ｐ ｌ ６ ； 染色体分析证 明为非整倍体 ， 有广泛 的易位 ； 透射 电镜 下可见细胞
表面微绒毛结构 ； 细胞 在软琼脂 中没有克隆形成能力 ； 裸 鼠皮下移植能够形成肿瘤组 织 ， 肿瘤组织的主体
成 分 为 肉瘤 。 结论 肉瘤。 脂 肪 组 织 来 源 的 干细 胞 在 体 外 长 期 培 养能 够 发 生 恶 性 转 化 ， 裸 鼠皮 下 移 植 能 够 形 成
刘 桂 英 杨 立 业 ’ ” 李 文 玉 郑 佳坤 陈辉 陈 强
【 摘
要】 目的
研 究脂肪来源干 细胞在体外能 否恶性转 化。 方法
从小 鼠脂肪组织培养 出脂肪
组 织来源干细胞 （ Ａ ＤＳ Ｃ ｓ ） ， 观察 细胞 是否发生恶性 转化 ， 应用免疫细胞化学方法检测转化 细胞 的相关标
Ｌ Ｉ Ｕ Ｇｕ ｉ ｙ ｉ ｎ ｇ ， Ｙ ＡＮＧ Ｌ ｉ ｙ ｅ ， ”
Ｌ Ｉ Ｗｅ ｎ ｙ ｕ ， Ｚ Ｈ Ｅ ＮＧ Ｊ ｉ ａ ｋ ｕ ｎ ， Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｈｕ ｉ ， Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｑｉ ａ ｎ ｇ （ １ ． Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｓ ｔ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｃ ｈ ａ ｏ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ， Ｃ ｈ ａ ｏ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ ２ １ ０ ２ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ
细胞体外培养的基本方法和过程培训课件
1/30/2021
细胞体外培养的基本方法和过程
8
二、体外培养的基本方法和过程
（一）原代培养（primary culture） １、取材及培养材料的制备 ２、分离（散）细胞的方法 ３、接种与培养过程 ４、更换培养液
课程安排及进度
1/30/2021
细胞体外培养的基本方法和过程
1
注意事项：
1.网上没有名字的
同学请不要填报实
验课名单。
2.现在不能确定
自己时间的同学
不要填报，可以
下次上课时再报。
3.一旦填报就不能
实验课时间：从第14周开始
实验课地点：104馆三楼东边
1/30/2021
细胞体外培养的基本方法和过程
再更改时间。
1/30/2021
• 培养分离的细胞
细胞体外培养的基本方法和过程
11
二、体外培养的基本方法和过程
（一）原代培养（primary culture）
１、取材及培养材料的制备：
关于取材：
（1)取材要准确：取材是体外培养工作的开端。如果在 这最初的实验过程中没有取到合格、理想的实验材料，整个 体外培养过程就很难达到预期的目的。
原代培养，通俗地讲，就是第一次培养。它是指将培养
物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培
养过程。
原代培养的概念包含以下几方面含义：
①原代培养的实质就是初次培养，即培养物一经接种到
培养器皿中就不再分割，任其生长繁殖而不更换培养物的生
长器皿；
②原代培养中的“代”并不是指细胞的“代”数，原代
人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化
人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化引言干细胞是一类具有自我更新和多能性的细胞，可以不断分化生成各种不同类型的细胞。
人体脂肪组织中存在一种特殊类型的干细胞，即人体脂肪干细胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs）。
与其他干细胞相比，hADSCs具有较高的抽取和培养效率，而且可以从自身脂肪组织中获得，不需要侵入性手术。
因此，hADSCs成为研究人体再生医学和组织工程领域的热门课题之一。
本文将介绍人体脂肪干细胞的培养方法以及成骨诱导分化的研究进展。
人体脂肪干细胞培养1. 来源和提取人体脂肪组织富含脂肪干细胞，因此从脂肪组织中提取hADSCs是最常用的方式之一。
提取过程通常通过脂肪抽吸或手术操作完成。
在脂肪抽吸中，通过低压吸引脂肪组织，并用特殊工具将其收集。
手术操作则需要进行小切口，直接收集脂肪组织。
提取得到的脂肪组织需要经过一系列处理，如洗涤、消化、离心等，以获得单个细胞悬浮液。
2. 培养条件提取得到的hADSCs需要在适宜的培养条件下进行扩增。
通常，使用营养丰富的培养基，如DMEM/F12，加入适量的胎牛血清和抗生素，以提供必需的生长因子和营养物质。
细胞培养的环境需要保持在37℃，5% CO2的恒温恒湿条件下。
培养过程中，需要定期更换培养基以保持细胞的生长和代谢活性。
3. 鉴定和鉴定为了确认提取得到的细胞为hADSCs，需要进行鉴定和鉴定。
常用的方法包括油红O染色、免疫细胞化学染色和流式细胞术分析。
油红O染色可用于检测细胞中脂滴的积累情况，免疫细胞化学染色可检测特定表面标记物的表达水平，流式细胞术则可对细胞表型进行全面的分析。
人体脂肪干细胞成骨诱导分化人体脂肪干细胞具有向多个细胞系分化的潜力，其中包括成骨细胞。
为了将hADSCs诱导分化为成骨细胞，需要在体外提供特定的诱导因子。
1. 前处理在进行成骨诱导前，需要对hADSCs进行适当的前处理。
脂肪干细胞分离培养操作方法
脂肪干细胞分离培养操作方法
大鼠脂肪干细胞的分离
将手术切取的大鼠脂肪组织尽量剪碎后移至离心管，其余步骤与人脂肪干细胞的分离一致。
经手术切除获得的大鼠皮下脂肪组织消化后原代培养24 h，肉眼观察会发现培养瓶底部贴附着一层网状薄膜，轻轻摇晃培养瓶可使这层网状薄膜从瓶壁上脱落，镜下观察发现大部分细胞都附着于这层膜上，通过吸脂术获取的人脂肪组织消化后则无此现象。
增加胶原酶的量和消化时间也无法避免，取材时的毛细血管或脂肪间结缔组织未被完全消化，穿过细胞筛进入了培养瓶并沉淀于瓶底部形成的。
胶原蛋白酶虽然可以特异性水解胶原蛋白的三维螺旋结构，但不会损伤其他蛋白质。
处理方法是37 ℃下用胰蛋白酶消化5 min。
然后利用40 μm 的细胞筛过滤后传代。
根据作者的经验，每毫升手术切除的大鼠脂肪可分离基质血管成分细胞约1.81×106个。
原代培养2.24×10^7个大鼠基质血管成分细胞，40 h后传代时约剩余6.2×10^6个细胞，细胞剩余率27%。
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脂肪干细胞成脂分化
ASC在特定促进因素下可分化为脂肪细胞，长期培养仍可维持此种分化能力。 脂肪细胞分化过程大致如下：
（1）脂肪干细胞向脂肪细胞定向分化，形成脂肪母细胞（一种尚未出现脂滴的 梭形细胞）；（2）脂肪母细胞经过生长抑制、克隆性增殖，形成前体脂肪细胞 （此时细胞刚开始出现脂滴）；（3）前体脂肪细胞经过生长抑制、克隆性增殖 和一系列基因表达的变化，形成不成熟脂肪细胞或多室脂肪细胞（内含大量小脂 滴）；（4）多室脂肪细胞随着脂肪在细胞中的沉积，小脂滴逐渐汇集成一个大 脂滴充满脂肪细胞的大部分，形成成熟脂肪细胞或单室脂肪细胞，成为成熟的脂 肪细胞。
Zuk等认为，ASC可能由多种异源性细胞构成，其中包括内皮细胞、成纤维细
胞、平滑肌细胞以及前体脂肪细胞等。现有ASC主要由成纤维细胞以及来自间 叶组织的细胞构成，仅伴有少量内皮细胞与平滑肌细胞。上述细胞在ASC中的 含量甚低，不可能定向培养分化为其他组织细胞，但进一步确认和识别真正的 ASC的表面蛋白及其基因仍是必要的。
间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检
测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好 方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。
脂肪干细胞的表面标记
a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和 α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM 1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞 粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表 达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合 素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(E selectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin、 Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达 造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。
经过14d的诱导培养后, ASC虽然发生了形态变化，表现出成脂细胞、成软骨细
胞、成骨细胞等分化的特征，但表面蛋白的表达却大致与未分化前一致，这些 表面蛋白与BMSC的表面蛋白很相似。
ASC和BMSC均表达CD13、CD29、CD44、CD105，均不表达CD31、CD34、
CD45、HLA-DR。虽然从分子标识上看ASC和BMSC具有相同的表面粘附分子 和受体分子，但两者仍有区别。ASC表达CD49d，而不表达CD106，BMSC则相 反，造成这种区别的机制可能与细胞所处的微环境及具体功能有关。
体外培养条件下，ASC的培养不像BMSC对培养基中胎牛血清的来 源和质量有严格要求，DMEM、αMEM、RPMI1640是ASC的常用培 养基。一般只添加体积分数为10％的胎牛血清，并且血清无生产批号 限制。在传代培养中，平均倍增时间为60h。并表现低水平衰老，1代 时细胞没有出现衰老现象，10代时少于5％细胞出现衰老，15代时衰 老细胞比例仍低于15％，这表明脂肪ASC体外扩增能力很强，传代培 养易于获得大量有分化能力的细胞。
脂肪来源干细胞
脂肪来源干细胞
脂肪来源干细胞的命名
脂肪来源血管基质成分
(Stromal Vascular Fraction,SVF)
富含大量的CD34+细胞, 从脂肪组织直接获得
脂肪来源干细胞
(Adipose Derived Stem Cell, ADSC)
富含一定量的CD34+细 胞,SVF培养P0-P2
不同的试验结果结果有不同，但这种差异可能是在细胞分离、培养、纯正 化方法不同，以及免疫组化技术和流式细胞仪敏感性的不同而造成。总的 来说，PAL细胞的免疫表型与已经报道的骨髓间充质干细胞干细胞在脂肪组织中含量很低，要利用脂肪干细胞就必须进 行体外分离培养扩增。常用的方法是将剪碎的脂肪组织消化离心，倾 去上层脂肪及上清，获得基质血管层，将其收集到培养瓶中培养，除 去未贴壁的红细胞和残渣，剩余的细胞群体称为加工过的脂肪吸取物。 原代培养的细胞中贴壁的细胞较少，细胞生长至融合后传代，传代后 的细胞称为脂肪干细胞。平均每300mL脂肪组织可获得2×108～ 6×108 个这样的细胞。
目前普遍认为脂肪母细胞是脂肪干细胞接受相关刺激，如寒冷、激素、生物
活性因子、体外实验性诱导剂刺激后，由多能变为单能定向分化的起始阶段。
前脂肪细胞的增殖与分化的关系为：生长停顿—生长再续—细胞分化。其中
生长停顿是必要的第一步，由单层细胞形成产生的接触抑制或是药物的作用、 营养因子缺乏引起。
脂肪干细胞的体外培养课件
脂肪干细胞生物学特性
2001年，Zuk等首次从人抽脂术抽取的脂肪组织中分离出一种多向分化干细
胞，因其与骨髓间充质干细胞(BMSC)形态相似而称为脂肪间充质干细胞 （ASC）。
脂肪干细胞具有向脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮、造血、肝、胰岛和神经等
多种细胞方向分化的多分化潜能,是一种理想的种子细胞。因脂肪干细胞具有分 化为脂肪的潜能，且其具有易获得性、可迅速扩增、不易衰老等特点，目前脂 肪干细胞已成为脂肪组织工程中种子细胞的研究热点。
脂肪来源间充质干细胞 (Adipose Derived Msenchymal Stem Cell, AD-MSC(ASC))
不富含CD34+细 胞,SVF培养P2之后
脂肪干细胞的鉴定
在缺少分化刺激因子的条件下，ASC表面标志蛋白有HLA-ABC、CD9、CD10、
CD13、CD29、CD34、CD44、CD49、CD54、CD55、CD59、CD105、CD146、 CD166；