饲料中粗蛋白测定
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
2、试剂2.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98％，无氮。
2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3—920）或硫酸钠（HG3—908），均为化学纯，磨碎混匀。
2.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。
2.4硼酸（GB628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。
2.5混合指示剂：甲基红（HG3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。
2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。
8.3mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。
2.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。
1.67mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。
2.7蔗糖（HG3—1001）：分析纯。
2.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
2.9硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
3、仪器设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵。
3.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。
3.3分析天平：感量0.0001g。
3.4消煮炉或电炉。
3.5滴定管：酸式，10、25mL。
3.6凯氏烧瓶：250mL。
3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。
饲料中粗蛋白的测定度-不确定度评估
饲料中粗蛋白测定不确定度评定一、摘要按GB/T6432—94《饲料中粗蛋白测定方法》测定了玉米（粗蛋白10%以下）、玉米颗粒粕（粗蛋白10%~25%）、玉米蛋白粉（粗蛋白25%以上）中粗蛋白含量，按JJF1059—1999《测量不确定度评定与表示》对测定结果的不确定度进行了评定。
二、目的用国家标准方法测定饲料样品中粗蛋白。
三、测定程序按图1所示程序进行测定。
图1 粗蛋白测量程序四、被测量粗蛋白含量以占样品质量的百分比表示式中：V 1—滴定试样时所需酸标准溶液体积，mL ； V 2—滴定空白时所需酸标准溶液体积，mL ； C — 酸标准溶液浓度，mol/L ； m — 试样质量，g ；V — 试样分解液总体积，mL ； V 3—试样分解液蒸馏用体积，mL ； 0.0140— 每毫摩尔质量氮的克数；6.25— 氮换算成蛋白质的平均系数。
五、不确定度来源分析不确定度来源见图2— 因果关系图图2 因果关系图10025.60140.0)(321⨯⨯⨯⨯⨯-=Vm C V V P称样m滴定试样（空白）用标液体积V 1、V 2重复性(r)摩尔质量M(N)六、不确定度分量的量化1、 标准溶液浓度标准溶液浓度不确定度是测量不确定度的主要分量之一，同时，标准溶液浓度不确定度也是由多个分量合成所得，按GB601—88《化学试剂 标准溶液制备方法》，使用的盐酸标准溶液是采用标定法配制而成，下面详细描述配制过程。
1.1目的以无水碳酸钠（Na 2CO 3）基准标定0.1mol/L （或0.02mol/L ）盐酸溶液。
1.2标定程序见图3，按GB601—88标准有标定程序框图图3 标定程序框图 1.3被测量按下式计算盐酸标准溶液的浓度（GB601-88）05299.0)V V (m C 21⨯=-式中：m —无水碳酸钠质量，g;V 1—滴定用盐酸溶液体积，mL;量取9mL 盐酸注入1000mL 水中V 2—空白试验用盐酸溶液体积，mL;0.05299—每1/2毫摩尔质量碳酸钠的克数。
饲料中粗蛋白的测定(精)(总6页)
饲料中粗蛋白的测定(精)(总6页)
饲料中粗蛋白的测定（精）主要是测量饲料中的蛋白质含量，以便更好地了解饲料的营养成分，为合理饲养和饲料配方提供基础数据。
本文将介绍几种常见的饲料中粗蛋白的测定方法，包括Kjeldahl法、Dumas法、Kjeltec自动消解仪法等。
一、Kjeldahl法
Kjeldahl法是测定饲料中粗蛋白含量的经典方法，该方法通过将饲料样品经过消解、蒸馏和滴定等步骤，测定其中的氨基含量，再计算得出粗蛋白含量。
具体步骤如下：
1. 取适量的饲料干样，加入适量的硫酸和氧化剂，进行消解，将其变为无机氮。
2. 在消解的样品中加入适量的碱液，使其中和，然后加入酚酞指示剂，在滴定时视颜色变化为终点，计算出氨基含量。
3. 将氨基含量乘以蛋白质的氮含量比例（通常为6.25），即可得到粗蛋白含量。
二、Dumas法
1. 取适量的饲料干样，放入Dumas燃烧管中，加入硼酸和催化剂等。
2. 将燃烧管加热，将样品完全燃烧，并将其中的氮转化成NO。
3. 将生成的NO经过固定，再经过电导检测器测定其含量，计算出氮含量。
三、Kjeltec自动消解仪法
2. 稍作冷却后，将消解液放入自动蒸馏装置中，进行蒸馏，将其中的氨基捕集在酸性溶液中。
综上所述，饲料中粗蛋白的测定方法有很多种，其中Kjeldahl法、Dumas法和Kjeltec自动消解仪法是较为常见的。
在测定时需严格按照操作步骤进行，确保测量结果的准确性和可靠性。
请写出完整的饲料粗蛋白测定流程
请写出完整的饲料粗蛋白测定流程
饲料粗蛋白测定是一种常用的饲料分析方法，用于测定饲料中的粗蛋白含量。
它可以帮助我们更好地控制饲料的质量，以满足动物的营养需求。
饲料粗蛋白测定的流程如下：
1. 准备样品：将饲料样品经过研磨、筛选和称量，放入容器中，准备进行测定。
2. 水解：将样品加入硫酸铵溶液，经过加热水解，使蛋白质分解成氨基酸。
3. 测定：将水解后的样品加入硫氰酸钠溶液，经过加热，使氨基酸发生反应，形成一定的比例的硫氰酸钠，然后用硫氰酸钠溶液测定硫氰酸钠的浓度，从而计算出样品中粗蛋白的含量。
4. 数据处理：将测定结果进行数据处理，计算出样品中粗蛋白的含量。
饲料粗蛋白测定是一种简单、快速、准确的饲料分析方法，可以帮助我们更好
地控制饲料的质量，以满足动物的营养需求。
但是，在进行饲料粗蛋白测定时，应注意实验室的清洁卫生，以及样品的准备和处理，以确保测定结果的准确性。
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵.加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数,计算出粗蛋白含量.2、试剂硫酸GB625：化学纯,含量为98％,无氮.混合催化剂：硫酸铜,5个结晶水GB665,6g硫酸钾HG3—920或硫酸钠HG3—908,均为化学纯,磨碎混匀.氢氧化钠GB629：化学纯,40％水溶液m/V.硼酸GB628：化学纯,2％水溶液m/V.混合指示剂：甲基红HG3—958％乙醇溶液,溴甲酚绿HG3—1220％乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为三个月.盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定,按GB601制备. 2.6.1盐酸标准溶液：cHCl=L.盐酸GB622,分析纯,注入1000mL蒸馏水中.盐酸标准溶液：cHCl=L.盐酸GB622,分析纯,注入1000mL蒸馏水中.蔗糖HG3—1001：分析纯.硫酸铵GB6：分析纯,干燥.硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL,加入％溴甲酚绿乙醇溶液10mL,％甲基红乙醇溶液7mL,4％氢氧化钠水溶液,混合,置阴凉处保存期为一个月全自动程序用.3、仪器设备实验室用样品粉碎机或研钵.分样筛：孔径40目.分析天平：感量.消煮炉或电炉.滴定管：酸式,10、25mL.凯氏烧瓶：250mL.凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式.锥形瓶：150、250mL.容量瓶：100mL.消煮管：250mL.定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动.4、试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g,粉碎后全部通过40目筛,装于密封容器中,防止试样成分的变化.5分析步骤试样的消煮称取试样～1g含氮量5～80mg准确至,放入凯氏烧瓶中,加入混合催化剂,与试样混合均匀,再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠,将凯氏烧瓶置于电炉上加热,开始小火,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力360～410℃直至呈透明的蓝绿色,然后再继续加热,至少2h.氨的蒸馏：将试样消煮液冷却,加入20mL蒸馏水,转入100mL容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度,摇匀,做为试样分解液.将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内.蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则需补加硫酸.准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL氢氧化钠溶液,小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气.蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏.5.1.2.3蒸馏步骤的检验精确称取硫酸铵,代替试样,按步骤进行操作,测得硫酸铵含氮量为±％,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确.滴定用或法蒸馏后的吸收液立即用L或L盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点.6、空白测定称取蔗糖,代替试样,按第5章进行空白测定,消耗L 盐酸标准溶液的体积不得超过.消耗L盐酸标准溶液体积不得超过.7、分析结果的表述计算见下式：粗蛋白质％=V2-V1·c××m×V＇/V×100式中：V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积,mL；V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积,mL；c──盐酸标准溶液浓度,mol/L；m──试样质量,g；V──试样分解液总体积,mL；V──试样分解液蒸馏用体积,mL；──与盐酸标准溶液〔cHCl=L〕相当的、以克表示的氮的质量.──氮换算成蛋白质的平均系数.重复性每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果.当粗蛋白质含量在25％以上时,允许相对偏差为1％.当粗蛋白含量在10％～25％之间时,允许相对偏差为2％.当粗蛋白质含量在10％以下时,允许相对偏差为3％.。
饲料分析与检测实验：饲料中粗蛋白质的测定
实验三、饲料中粗蛋白质的测定【学习目标】掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并能用此方法测定饲料中粗蛋白质的含量。
一、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都转变为 (NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红、溴甲酚绿作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据氮含量再乘以系数(通常为 6.25)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：催化剂1.2CH3CHNH2COOH+13H2SO (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O加热2.(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3↑+2H2O+Na2SO43.4H3BO3+NH3 NH4HB4O7+5H2O4.NH4HB4O7+5H2O+HCL NH4CL+4H3BO3系数6.25是根据饲料蛋白质平均含氮量为16.0%而来的，而实际上，各种样本的蛋白质种类不同，含氮量有差异，变动为14.7～19.5%之间，故一般饲料换算系数用6.25，已确定的最好用实际系数。
为方便使用，将已知几种饲料的系数介绍如下：肉类6.25，玉米6.00，小麦、燕麦、黑麦、大豆、箭舌豌豆、蚕豆5.70，牛奶及制品6.28，坚果及油饼类5.30。
二、仪器设备1.样品粉碎机 40目分样筛；2.分析天平感量0.0001g；3.电子天平感量0.0001g；4.工业天平感量0.01g；5.六联电炉 6×800-1000W；6.半微量凯氏定氮仪或改良式半微量凯氏定氮仪(图1、图2)；7.酸式滴定管 25.0ml或50.0ml；8.凯氏烧瓶 100.0ml；9.烧杯 250.0ml；10.三角瓶 150.0ml；11.容量瓶 100.0ml；12.移液管 10.0ml；13.量筒 10.0ml、25.0ml。
饲料粗蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握饲料粗蛋白测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解饲料粗蛋白含量的重要性及其对动物营养的影响。
二、实验原理饲料粗蛋白是指饲料样品中含氮物质的总量，包括蛋白质和非蛋白质含氮化合物。
测定饲料粗蛋白含量，可以了解饲料的营养价值，为动物饲料配方提供依据。
凯氏定氮法是测定饲料粗蛋白的常用方法，其原理如下：1. 将饲料样品与浓硫酸、无水碳酸钠混合，加热消化，使蛋白质和氨态氮转化为硫酸铵；2. 消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的氨随汽水顺着冷凝管流入硼酸吸收液中，并与其结合成硼酸铵；3. 用盐酸标准溶液滴定，求出氨的含量，再乘以一定的换算系数（6.25），即得出试样中粗蛋白的含量。
三、实验材料1. 饲料样品：玉米粉、豆粕、鱼粉等；2. 试剂：浓硫酸、无水碳酸钠、氢氧化钠、硼酸、盐酸标准溶液、甲基红-溴甲酚绿指示剂等；3. 仪器：凯氏瓶、消化炉、冷凝管、滴定管、分析天平等。
四、实验步骤1. 样品消化（1）称取0.5-1g饲料样品，置于凯氏瓶中；（2）加入0.4g无水硫酸铜、6g无水碳酸钠，与试样混合均匀；（3）加入10ml浓硫酸，摇匀；（4）将凯氏瓶置于消化炉上，加热消化，直至溶液呈透明蓝绿色。
2. 滴定（1）将消化液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容；（2）取25ml消化液于锥形瓶中，加入5ml氢氧化钠溶液、5ml硼酸溶液、1滴甲基红-溴甲酚绿指示剂；（3）用盐酸标准溶液滴定至溶液由蓝绿色变为灰绿色；（4）记录盐酸标准溶液的消耗体积。
3. 计算（1）根据滴定结果，计算氨的物质的量；（2）乘以换算系数（6.25），得出饲料样品中粗蛋白的含量。
五、实验结果与分析1. 实验数据样品名称 | 样品质量（g） | 盐酸标准溶液消耗体积（ml） | 粗蛋白含量（%）------- | -------- | ------------------- | --------玉米粉 | 0.5 | 25.00 | 9.20豆粕 | 0.5 | 30.00 | 38.40鱼粉 | 0.5 | 35.00 | 58.002. 结果分析通过实验，我们得到了玉米粉、豆粕、鱼粉的粗蛋白含量分别为9.20%、38.40%、58.00%。
饲料中粗蛋白的测定方法
• 蒸馏：样液中的硫酸铵在碱性条件下释放出氨
（NH4）2SO4+2NaOH→2NH3↑+Na2SO4+2H2O
• 滴定：用硼酸溶液吸收氨后，再用标准盐酸溶液滴定
2NH3+4H3BO3 ＝(NH4)2B4O7+5H2O (NH4)2B4O7+HCL +5H2O ＝2NH4CL+4H3BO3
三、消化过程
1:消化过程： 样品中的有机物和含N有机化合物，经浓H2SO4加 热消化， H2SO4使有机物脱水，炭化为碳、氢、氮； 碳将H2SO4还原为SO2，而本身则变为CO2； SO2 使N还原为NH3，而本身则氧化为SO3，消化过程中 所产生的新生态氢，加速了氨的行成。在反应中生 成物CO2、H2O和SO2、 SO3逸出，而NH3与H2SO4 结合生成（NH4)2SO4留在消化液中。 蛋白质+ H2SO4 C C+ H2SO4 SO2+ CO2 SO2+[N] NH3+ SO3 NH3+ H2SO4 （NH4)2SO4
混合指示剂
标准盐酸溶液滴定吸收液中的氨的PH值突跃 范围为6.3-4.3
指示剂名称 溴甲酚绿
甲基红 甲基红+溴甲酚绿
PH＜5.1 黄色
红色 酒红色
PH=5.1 绿色
橙色 灰色
PH＞5.1 蓝色
黄色 蓝绿色
甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：pH 5.0 以下为酒 红色，pH 5.1 为灰色，pH 5.2 以上为蓝绿色。 变色域很窄
消化过程注意点
1:加入的催化剂要适量，硫酸钾加入量不能太大，否则温
饲料中粗蛋白的测定(精)
饲料中粗蛋白的测定一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方法。
二、适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
三、实验原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白含量。
四、试剂（1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。
（2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。
（3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。
（4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。
（5）混合指标剂：甲基红%乙醇溶液，溴甲酚绿%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。
（6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定；① L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
② L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
（7）蔗糖：分析纯。
（8）硫酸铵：分析纯，干燥。
（9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。
五、仪器设备（1）实验室用样品粉碎机或研钵。
（2）分样筛：孔径0.45mm（40目）。
（3）分析天平：感量0.0001g。
（4）消煮炉或电炉。
（5）滴定管：酸式，10、25mL。
（6）凯氏烧瓶：250mL。
（7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。
（8）锥形瓶：150、250mL。
（9）容量瓶：100mL。
（10）消煮管：250mL。
（11）定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。
六、分析步骤试样的选取和制备: 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
（1）仲裁法①试样的消煮称取试样～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
凯氏定氮仪测定步骤
影响因素分析
1.取样
试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充 分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。
2.催化剂及其用量
国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。若 添加量大，消化液容易结晶； 添加量减少，会延长消化时间或消化不完全。
饲料中粗蛋白质含量的测定
凯氏定氮法
目录
1. 适用范围
2. 测定原理 3. 仪器设备及试剂
4. 测定步骤
5. 影响因素分析
适用范围
蛋白氮 （真蛋白质提供氮源 ）
粗蛋白质
非蛋白氮（氨基酸、酰胺、铵盐 ）
测定原理
凯氏法测定试样中含氮量，即在催 化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含 氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏 使氨逸出，用硼酸吸收后，在用标准浓 度的酸滴定，测出氮含量，将结果乘以 换算系数6.25，计算出粗蛋白质含量。
3.消化温度
刚开始时以低温(200 ～ 300℃ ) 加热，待试样焦化泡沫消失后，逐步缓慢提高温度 (360～410℃ )。起初低温加热是为防止试样起泡沫，而溢出烧瓶外或碳化后的颗粒 附于烧瓶壁，导致消化不完全，所测结果偏低。
4.消化时间
可根据试样的重量、蛋白含量的多少以及消化的难易程度而适当调整消化液澄清后的 消化时间。对于所称试样质量较多、蛋白含量高于蚕蛹或者难消化的试样，消化液澄 清后继续消化的时间可控制在45m i n ～ 2h 不等，具体时间化验工作者可根据自己的 工作经验而自行定夺。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装臵 滴定管
98%浓硫酸 硫酸钾 硫酸铜 硼酸溶液 标准盐酸溶液 混合指示剂
饲料中粗蛋白的测定
饲料中粗蛋白的测定-定氮仪法参照GB/T 6432－941 适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料及单一饲料。
2 测定原理在催化剂（如硫酸铜、硫酸钾、硫酸钠或硒粉）作用下，试样中有机物质被浓硫酸消化分解，使含氮物质（蛋白质，氨态氮等）转化为硫酸铵，而非含氮物质则以二氧化碳、水蒸气、二氧化硫等气态逸出。
消化液在强碱作用下蒸馏，释放出氨气，氨气冷凝后被硼酸吸收，并与其结合成硼酸铵，然后以甲基红-溴甲酚绿作混合指示剂，用盐酸标准滴定溶液滴定，求出氮的含量，再乘以一定的换算系数（通常用6.25计算），即得出试样中粗蛋白质的含量。
3 试剂和材料未特殊标注的试剂均为分析纯。
水至少应为GB/T 6682-1992规定的3级3.1 浓硫酸：化学纯。
3.2 400g/L氢氧化钠溶液：400 g氢氧化钠(化学纯)，溶于1000 mL水中。
3.3 混合催化剂：取质量比为1:9的五水合硫酸铜(预处理：研磨至粉末状)和无水硫酸钾混合并研磨混匀，装入试剂瓶中密封备用。
3.4 1 g/L甲基红乙醇溶液：称取0.10g甲基红溶于100 mL乙醇中，棕色瓶中保存3个月。
3.5 1 g/L溴甲酚绿乙醇溶液：称取0.10g溴甲酚绿溶于100 mL乙醇中，棕色瓶中保存3个月。
3.6 硼酸吸收液：称取40 g硼酸溶于1 L水中，缓慢加热搅拌溶解，注意加热时不能将溶液加热沸腾，加入溴甲酚绿乙醇溶液（1 g/L）10 ml和甲基红乙醇溶液（1 g/L）6.8 mL，充分混匀。
向其中加入2%的氢氧化钠溶液，直到达到以下要求：取30mL上液于锥形瓶中，加入100 mL水，观察溶液颜色，应为接近盐酸滴定终点的暗灰绿色，以利于蛋白测定中空白的滴定（每10升硼酸溶液约加2%的氢氧化钠溶液3.8mL）。
混合均匀后置阴凉处保存，保存期为1个月。
3.7 0.1 mol/L或0.05mol/L盐酸标准滴定溶液：8.3 ml（或4.15ml）盐酸注入1000 mL水中，用无水碳酸钠法标定。
4.7饲料中粗蛋白质含量测定 课件(共23张PPT)《动物营养与饲料》同步教学(中国农业出版社)
饲料中粗蛋白质含量测定
1 检测分析依据 2 检测分析原理 3 检测试剂材料 4 检测仪器设备 5 检测分析步骤 6 检测数据处理 7 检测清场工作
规定了测定饲料中粗蛋白质的凯氏定氮法
GB/T 6432-2018
适用范围
适用于饲料原料及饲料产品中粗蛋白质 的测定
方法广泛应用于粗蛋白质的检测
试样在催化剂的作用下，经硫酸消解，含氮 化合物转化成硫酸铵，加碱蒸馏使氨逸出，用硼 酸吸收，再用盐酸标准滴定溶液滴定，测出氮含 量，乘以6.25，计算出粗蛋白质含量。
硫酸铜的作用
（1）催化作用：加速有机物的氧化分解。 硫酸铜的作用机理如下： C+ 2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+CO2↑ Cu2SO4+2Ｈ2SO4 =2CuSO4 +SO2+2H2O
（2）消化终点指示剂：蓝绿色澄清透明 （3）做蒸馏时碱性指示剂
分析纯试剂 水：符合GB/T6682中规定的三级水
粉碎机
0.42mm孔径分析筛
吸量管 移液管
容量瓶
烧杯
1ml 3支
2ml 1支
5ml 2支
10ml 1支
20ml 1支
10ml 大肚移液管 1支
50ml 8个
100ml 2个
1000ml 2个 （透明棕色各一）
50ml 1个 500ml 4个 2000ml 1个
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
测定原理
凯氏法测定试样中含氮量，即在催 化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含 氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏 使氨逸出，用硼酸吸收后，在用标准浓 度的酸滴定，测出氮含量，将结果乘以 换算系数6.25，计算出粗蛋白质含量。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装置 滴定管
注意事项
每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值 作为结果。 本方法不能区别蛋白氮和非蛋白氮。 每次蒸馏结束后，应用蒸汽将蒸馏装置反应腔中 残液洗净。
W
凯氏定氮仪测定步骤
1.试样的消化 称取0.5~1g试样，准确至0.0001g，无损地 放入消化管中，加入硫酸铜0.4g，硫酸钾6g， 与试样混合均匀，再加浓硫酸12ml，将消化管 放置在消化炉上加热（此装置需安装在通风 橱内），待样品焦化，泡沫消失，加大火力 至410℃ ，直至溶液呈透明的蓝绿色，此溶液 为试样分解液。 2.试样的蒸馏 将试样分解液消化管安装在凯氏定氮仪上， 在250ml锥形瓶中加入2滴溴甲酚绿-甲基红 混合指示剂。按仪器操作程序蒸馏。 3.滴定 同上。
蛋白氮 （真蛋白质提供氮源 ）
粗蛋白质
非蛋白氮（氨基酸、酰胺、铵盐 ）
测定意义
蛋白质是生命的基础，是细胞组成、酶、 激素免疫抗体等的主要成分，是组织更新、 修补的原料。 饲料中蛋白质的质和量直接关系到动物生 命生长、发育、繁殖和生产，因此，测定 饲料中粗蛋白质含量对动物生活和生产有 重要作用。 测定饲料原料和成品料中粗蛋白质的含量， 为科学配置饲料提供可靠依据。
测定步骤
2.试样的蒸馏 取2%硼酸溶液 20ml至锥形瓶中作为反应吸收液，并加混合指示剂 2滴， 将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入该液面下。准确移取试样分解液 10ml注入蒸馏装置的反应腔中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好玻 璃塞，并在入口处加水密封好。再在碱液入口缓慢加入10～20ml 40% 氢氧化钠溶液，亦使之流入反应腔中，并把碱液入口封存好。进行蒸 馏。以锥形瓶中溶液变蓝绿色开始计时3min，然后将冷凝管末端离开 锥形瓶液面，再蒸馏1min，用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液亦流 入吸收液中。
粗蛋白测定国标
粗蛋白测定国标
粗蛋白是指食品、饲料等样品中含有的蛋白质总量，不考虑其中各种不同蛋白质的含量和比例。
在中国，粗蛋白的测定主要依据的是GB/T 5009.5-2010《食品安全国家标准食品中粗蛋白质的测定》。
该标准规定了采用凯氏定氮法测定食品、饲料等样品中的粗蛋白含量。
具体步骤如下：
1. 取样：从不同位置和时间采集样品，并在室温下稍加搅拌混合均匀。
2. 提取：将样品加入适量的水或其他溶剂中，进行加热煮沸、冷却、过滤等处理，得到样品提取液。
3. 凯氏定氮：将样品提取液放入凯氏定氮仪中，进行反应和蒸馏，得到蒸馏液。
4. 测定：将蒸馏液中的氨气吸收在硫酸钠溶液中，然后用氢氧化钠溶液滴定过量的硫酸钠，根据消耗的氢氧化钠溶液的体积计算出粗蛋白含量。
需要注意的是，该标准仅适用于食品、饲料等样品中的粗蛋白含量测定，不适用于其他领域的粗蛋白测定。
同时，在实际操作过程中，需要严格按照标准要求进行样品采集、提取、凯氏定氮等步骤，以保证测定结果的准确性和可靠性。
粗蛋白测定国标
粗蛋白测定国标摘要：一、引言二、粗蛋白测定国标的方法1.样品处理2.测定原理3.测定步骤4.结果计算与表示三、国标中粗蛋白测定的注意事项四、总结与展望正文：【一、引言】在饲料、食品、农业等领域，粗蛋白测定是一项重要的工作。
为了保证测定结果的准确性和可靠性，我国制定了一系列国家标准。
本文将详细介绍粗蛋白测定的国标方法，以期为相关领域的工作者提供参考。
【二、粗蛋白测定国标的方法】1.样品处理样品处理是粗蛋白测定过程中的关键环节。
首先，对样品进行粉碎，使其达到一定的细度。
然后，将粉碎后的样品在规定的温度和时间内进行干燥，以去除样品中的水分。
最后，将干燥后的样品进行研磨，使其均匀。
2.测定原理粗蛋白测定主要采用凯氏定氮法。
该方法基于氮元素与蛋白质的定量关系，通过测定样品中的氮含量来推算蛋白质含量。
3.测定步骤（1）将处理好的样品放入消化管中，加入适量的硫酸铜和硫酸钾混合液，进行消化。
（2）将消化后的样品溶液过滤，去除杂质。
（3）将过滤后的溶液加入碱性溶液中，使其中的氨气挥发。
（4）收集挥发的氨气，通过滴定法测定氨气的体积。
（5）根据氮元素与蛋白质的换算系数，计算出样品中的蛋白质含量。
4.结果计算与表示粗蛋白含量计算公式为：蛋白质含量（%）=（氮含量（mg/kg）×6.25）/样品质量（kg）×100%。
结果保留两位小数。
【三、国标中粗蛋白测定的注意事项】1.样品处理过程中，要确保干燥温度和时间的准确性，以免影响测定结果。
2.消化过程中，要控制硫酸铜和硫酸钾的用量，避免过量导致环境污染。
3.测定过程中，要注意氨气的收集与测定，确保数据的准确性。
4.结果计算时，要准确使用氮元素与蛋白质的换算系数。
【四、总结与展望】粗蛋白测定国标方法为相关领域的工作者提供了一种准确、可靠的手段。
在实际应用中，我们要严格按照国标要求进行操作，以确保测定结果的准确性。
饲料中粗蛋白的测定
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含 量
3. 测定步骤 第一步 样品消化
注意事项：总氮测定时，消化至关重要。 ① 消化在通风橱中进行（若无通风
橱......）。
空白试验：取与处理 样品相同量的硫酸铜， 硫酸钾，硫酸按同一 方法作试剂空白试验。
12/15/2020
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含 量
3. 测定步骤 第一步 样品消化
硫酸铜/无水硫酸钾（或无水硫酸钠）的作用？（大家想想！）
（1）K2SO4或Na2SO4的作用：提高溶液的沸点而加快有机物的分解；
K2SO4+H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3
但硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系温度过高，又会引起 已生成的铵盐发生热分解而造成损失。
12/15/2020
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含 量
3. 测定步骤 第一步 样品消化
硫酸铜/无水硫酸钾（或无水硫酸钠）的作用？（大家想想！）
（2）CuSO4的作用 ① 催化剂，加速氧化分解；
2CuSO4=CuSO4+SO2↑+O2 C+2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+O2↑ Cu2SO4+2H2SO4=2CuSO4+2H2O+SO2↑ 此反应不断进行，待有机物被消化完后，不再有硫酸亚铜（褐色）生成，溶 液呈现清澈的蓝绿色。 ② 可以指示消化终点的到达； ③ 下一步蒸馏时作为碱性反应（加入碱量）的指示剂。
4.3 饲料中粗蛋白的测定
蛋白质是畜禽日粮中最主要的物质之一，蛋白 质是生命的物质基础。测定饲料中蛋白质的含量， 对于初步评价饲料的营养价值、合理开发利用饲料 蛋白资源、提高产品质量、优化饲料配方、指导经 济核算及生产过程控制均具有极重要的意义。饲料 中蛋白质的检测十分重要！
如何准确测定饲料中的粗蛋白质含量
６ 质 控 实验
国家 标 准规 定 称 取 试 样 ０ ． ５ — １ ｇ ，浓 缩 饲 料 可
凯 氏定 氮 的质 控 实 验是 测 定 分 析 纯 硫 酸 铵 的
称取０ ． ５ ＋ － ０ ． ０ ５ ｇ ，配合饲料可称取 ０ ． ７ ＋ － ０ ． ０ ５ ｇ ，这样 能 保证 滴定 时消 耗盐 酸标 准 溶液 的体积 较 为一
作 简 单 ，但 过 程 比较 复杂 ，如果 不 注 意 细 节 ，往 往会 导致 结果 准 确度 不高 。
１ 采样 及 制备
盐 酸 标 准 滴 定 溶 液 的浓 度 直 接 影 响 结 果 的准 确 度 ，配 制 和 标 定 一 定 要 严 格 按 照 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ６ ０ １ 的规
国 家标 准 规 定 用 消 煮 炉 或 电 炉 ，建 议 选 择 带
程 序 升 温 的 凯 氏专 用 消 煮 炉 ， 能 保 证 升 温 均 匀 ，
重 复性好 ，准确度高。 国家标准规定使用 五水硫 酸铜 和无水硫酸钾 ，消煮液容易结 晶 ，建议使用 商 品化硫 酸钾 和硒粉 ，产品为 片状 ，使 用方便 ，
试样采集必须 具有代表性 ，这是 准确测定饲
料 粗 蛋 白质 的基 础 。样 品 制备 也 很 关 键 ，粉 碎 后 要 能全 部通 过 ４ ０目分样 筛并 立 即放入 密 封容 器 。
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试剂与溶液：
• 浓硫酸：化学纯 • 混合催化剂：0.4g硫酸铜 （CuSO4·5H2O），6g无水硫酸钾或无 水硫酸钠，磨碎混匀。 • 400g/L氢氧化钠溶液：400g氢氧化钠 （化学纯）溶于1000mL水中。 • c（HCl）=0.02mol/L:1.67mL浓盐酸， 注入1000mL水中（用于半微量定氮法）
实验步骤：
（2）氨的蒸馏 ①半微量蒸馏法
防止水中氨态氮 的逸失而影响测 定值。
半微量蒸馏法使用凯氏定氮法定氮装置。将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水， 转入100mL容量瓶中。冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。取 20mL/g硼酸溶液35mL于锥形瓶中，加2~3滴混合指示剂，使半微量蒸馏装置 的冷凝管末端浸入此溶液。蒸汽发生器中的水应加入甲基红指示剂数滴、硫酸 数滴，在蒸馏过程中保持此溶液为橙红色，否则需补加浓硫酸。准确移取试样 分解液10~20mL，注入蒸馏装置的反应室内，用少量蒸馏水冲洗进样入口， 塞好入口玻璃塞，再加400g/L氢氧化钠溶液10mL，小心拉起玻璃塞使之进入 反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏4min，使冷 凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥 形瓶内，然后停止蒸馏。 使NH3全部
（V2 -V0） *c*0.014*6.25 （CP） = m
式中:c为盐酸标准滴定溶液浓度，mol/L；m为试样质量，g;V2为滴定试样时 所消耗盐酸标准滴定溶液体积，mL; V0为试样分解液蒸馏用移取体积， mL;0.014为与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCL)=1.000mol/L]相当的、以克 表示的氮的质量;6.25为氮换算成蛋白质的平均系数。 • 每个试样取两平行样进行测定，以其算数平均值为结果。结果保留小数点后两 位。
使NH3全部 吸收进硼酸 开始半自动定氮仪
实验步骤：
• （3）滴定。半微量蒸馏法或常量定氮法蒸馏后的吸收液，分别立即用 0.02mol/L或0.1mol/L盐酸标准滴定溶液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终 点。 • （4）空白测定。称取蔗糖0.5g，以代替试样，按（1）试样的消化测定步骤进 行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准滴定溶液的体积不超过0.2mL。消耗 0.02mol/L盐酸标准滴定溶液的体积不超过0.3mL。 • （5）蒸馏步骤的检验。精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按以上（1）和（2） 测定步骤操作，测得硫酸铵含氮量为（21.19±0.2）%，否则应检查加碱、蒸 馏和滴定各步骤是否正确。
• 9 标准滴定溶液的浓度小于或等于0.02mol/L时(除0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠、 氯化锌标准滴定溶液外),应于临用前将浓度高的标准滴定溶液用煮沸并冷却的水稀释 (不含非水溶剂的标准滴定溶液),必要时重新标定。当需用本标准规定浓度以外的标 准滴定溶液时,可参考本标准中相应标准滴定溶液的制备方法进行配制和标定。 • 10 贮存: • a) 除另有规定外,标准滴定溶液在10℃~30 ℃下,密封保存时间一般不超过6个月;碘 标准滴定溶液、亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]密封保存时间为4个 月;高氯酸标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液、硫酸铁(Ⅲ)铵标准滴定溶液 密封保存时间为2个月。超过保存时间的标准滴定溶液进行复标定后可以继续使用。 • b) 标准滴定溶液在10℃~30℃下,开封使用过的标准滴定溶液保存时间一般不超过2 个月(倾出溶液后立即盖紧);碘标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液一般不超 过1个月;亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]一般不超过15d;高氯酸标准 滴定溶液开封后当天使用。
实验二 饲料粗蛋白的测定
饲料粗蛋白测定的意义：
• 蛋饲料中含氮物质包括蛋白质和非蛋白质含氮化合物，两者 总称为粗蛋白。 • 蛋白质是畜禽日粮中最主要的物质之一，蛋白质是生命的物 质基础。测定饲料中蛋白质的含量，对于初步评价饲料的营 养价值、合理开发利用饲料蛋白资源、提高产品质量、优化 饲料配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极重要的意 义。
• NH4H2BO3+HCl=NH4Cl+H3BO3
仪器设备：
• 分析天平：感量0.0001g
• 消煮炉或电炉
• 酸式或通用滴定管：25mL，50mL
• 消化管或者凯氏烧瓶：250mL
• 开始蒸馏装置：常量直接蒸馏或半微量蒸馏式 • 三角瓶：150mL，250mL • 容量瓶：100mL • 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动和全自动蛋白质测 定仪。
溴甲酚绿—甲基红指示剂变 色范围为5.0-5.2，pH5.0以 下为暗红色，pH5.1为灰绿 色，5.2以上为绿色
校正药品不纯 带来的误差
实验步骤：
• （6）结果计算与表示
• 半微量定氮法和常量定氮法试样中粗蛋白质质量分数分别按式下面两式计算。
（V2 -V0） *c*0.014*6.25 V （CP） = * m V1
实验步骤：
②常量蒸馏法。 常量法蒸馏法使用凯氏半自动定氮仪。将试样消煮液 冷却加入60-100mL水，摇匀，冷却。将蒸馏装置冷 凝管的末端浸入盛有35mL硼酸吸收液和加2滴混合指 示剂的锥形瓶内。然后小心地将消化管装入仪器中， 然后向消化管中加入400g/L氢氧化钠溶液40mL(或至 溶液颜色变黑，再加少许)使溶液混匀后再加热蒸馏 5min,或至蒸馏出液体积约为150mL。降下锥形瓶， 使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1min,并用水冲洗 冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
最后关闭电源，绝不能先 关闭电源，否则吸收液将 发生倒吸！
吸收进硼酸
冷凝管的水流 方向？
1———电炉;
凯 氏 半 微 量 定 氮 装 置
2———水蒸气发生器(2L 烧瓶); 3———螺旋夹; 4———小玻杯及棒状玻 塞;
5———反应室;
6———反应室外层; 7———橡皮管及螺旋夹; 8———冷凝管; 9———蒸馏液接收瓶。
实验步骤：
• 7.重复性
• 当粗蛋白质含量在25%以上，允许相对偏差为1%;当粗蛋白质含量在 10%~25%，允许相对偏差为2%；当粗蛋白质含量在10%以下时，允许 相对偏差为3%。
注意事项：
• 消化时应经常转动凯氏烧瓶，以使消化得以快速而完全。
• 凯氏定氮蒸馏过程中，要求整套装置呈密闭状态，蒸馏前应检查定氮仪 各导管间的连接处是否密闭，以免产生泄露。
• 3 在标定和使用标准滴定溶液时,滴定速度一般应保持在6mL/min~8mL/min。 • 4 称量工作基准试剂的质量小于或等于0.5g时,按精确至0.01mg称量;大于0.5g时,按 精确至0.1mg称量。 • 5 制备标准滴定溶液的浓度应在规定浓度的±5%范围以内。 • 6 除另有规定外,标定标准滴定溶液的浓度时,需两人进行实验,分别做四平行,每人四 平行标定结果相对极差不得大于相对重复性临界极差[CR0.95(4)r=0.15%],两人共八 平行标定结果相对极差不得大于相对重复性临界极差[CR0.95(8)r=0.18%]。在运算 过程中保留5位有效数字,取两人八平行标定结果的平均值为标定结果,报出结果取4 位有效数字。需要时,可采用比较法对部分标准滴定溶液的浓度进行验证。
饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法
凯氏定氮法是9世纪建立的经典方法，结果可靠但操作费时。在经典 法基础上选择催化剂，加快分析速度，改进仪器装置。是目前饲料中 粗蛋白分析最常用的方法。
适应范围：
本方法适用于配合饲料、浓缩饲料精料补充料和单一饲料。
测定原理：
饲料的有机物质在催化剂（如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉） 的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和氨态氮（在 一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成氨，并被浓硫酸吸收 成为硫酸铵；而非含氮物质，则以CO2，H2O，SO2状态逸出。 消化液在浓碱的作用下释放出氨，通过蒸馏，氨随汽水顺着 冷凝管流入硼酸吸收液中，并与其结合成硼酸铵，然后以甲 基红—溴甲酚绿作混合指示剂，用盐酸标准溶液滴定，求出 氨的含量，再乘以一定的换算系数，即得出试样中粗蛋白的 含量。
实验结果的讨论与分析：
根据测得的实验数据，计算该样本饲料中粗蛋白含量。
标准滴定溶液的配制及标定
一般规定
• 1 除另有规定外,本标准所用试剂的级别应在分析纯(含分析纯)以上,所用制 剂及制品,应按GB/T603的规定制备,实验用水应符合GB/T6682中三级水的 规格。 • 2 本标准制备标准滴定溶液的浓度,除高氯酸标准滴定溶液、盐酸-乙醇标准 滴定溶液、亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.5mol/L]外,均指20℃时的 浓度。在标准滴定溶液标定、直接制备和使用时若温度不为20℃时,应对标 准滴定溶液体积进行补正(见附录A)。规定“临用前标定”的标准滴定溶液, 若标定和使用时的温度差异不大时,可以不进行补正。标准滴定溶液标定、 直接制备和使用时所用分析天平、滴定管、单标线容量瓶、单标线吸管等 按相关检定规程定期进行检定或校准,其中滴定管的容量测定方法按附录B进 行。单标线容量瓶、单标线吸管应有容量校正因子。
测定原理：
• ① 样品消化 • ② 氮的蒸馏
浓硫酸的脱水 性与强氧化性
• 2NH2(CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O
• 2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3↓＋ Na2SO4 ＋ 2H2O • NH3 + H3BO3=NH4H2BO3 • ③滴定
• 7 本标准中标准滴定溶液浓度的相对扩展不确定度不大于0.2%(k=2)。
• 8 本标准使用工作基准试剂标定标准滴定溶液的浓度。当对标准滴定溶液浓 度的准确度有更高要求时,可使用标准物质(扩展不确定度应小于0.05%)代替 工作基准试剂进行标定或直接制备,并在计算标准滴定溶液浓度时,将其质量分 数代入计算式中。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ